化學藥品中雜質控制及測定方法李莉318

1、化學藥品中雜質控制及測定方法 2010年3月1內(nèi)容提要一、雜質控制的方法二、雜質對照品的使用三、藥品質量標準中雜質的命名四、復方制劑雜質控制2一、雜質控制的方法1、雜質的檢測方法2、雜質限度的確定31、雜質的檢測方法一般的物理或化學方法、光譜法、生物檢定法、色譜法。檢測方法需要做到專屬、靈敏、準確、簡捷。由于各種分析方法均具有一定的局限性，因此在進行雜質分析時，應注意不同原理的分析方法間的相互驗證。單一方法不能滿足多個雜質的檢測時，可采用兩種或兩種以上的方法互為補充，控制雜質。4HPLC法具有專屬、靈敏、準確、簡捷優(yōu)點峰面積歸一法 簡便、快捷、重現(xiàn)（可產(chǎn)生較大誤差）：全部出峰、完全分離、響應一

2、致；各雜質響應因子不一定相同；雜質量與主成分量不一定在同一線性范圍內(nèi)；儀器對微量雜質和常量主成分的積分精度及準確度不相同等因素；在質量標準中采用有一定的局限性 不加校正因子的主成分自身對照法 可用于未知雜質（有一定誤差） 加校正因子的主成分自身對照法 定量準確（已知雜質，定位） 雜質對照法 定位、定量準確（已知雜質，需用雜質對照品） 52、雜質限度的確定完全除去雜質既不可能也沒必要，而是控制在安全、合理的范圍內(nèi)，這個允許的范圍就是雜質限度。通過系統(tǒng)、全面的研究，最終確定雜質限度的基本原則是：盡可能的低，行得通的低。考慮的基本因素：雜質的特性（毒性、生物活性）；安全性實驗和臨床研究用樣品的雜質情

3、況及其表現(xiàn)；藥品本身的穩(wěn)定性；適當考慮大生產(chǎn)的可行性及批間的正常波動（GMP控制）；檢測方法的重現(xiàn)性。來源于原料藥的雜質，如果不是其降解產(chǎn)物，且限度已在原料藥標準中控制，則制劑中可不作控制，重點控制降解產(chǎn)物。具體國家標準參見雜質研究的技術指導原則中的規(guī)定。（報告限度、鑒定限度和質控限度）62、雜質限度的確定仿制藥仿制已有國家標準（仿國外的也一樣）的藥品：在進行仿制藥品雜質研究時，要對已上市的同品種產(chǎn)品的質量進行詳細研究（首選原發(fā)廠效期內(nèi)產(chǎn)品），分析其雜質的種類與含量，與在研產(chǎn)品進行全面的質量對比。如果雜質譜一致根據(jù)已有國家標準制訂相應的雜質限度，或適當提高標準；如果雜質譜不一致，新雜質的含量高

4、于表中規(guī)定的合理限度，或在研產(chǎn)品的雜質含量高于已上市的同品種產(chǎn)品的雜質實測值應考慮優(yōu)化產(chǎn)品的處方與制備工藝，將雜質的含量降到規(guī)定的限度以內(nèi)，不能達到要求，則應做必要的安全性研究。 7雜質研究具有階段性雜質研究是藥物研究的重要環(huán)節(jié)，貫穿于整個藥物研究的始終。在申報臨床研究前，應對已有批次產(chǎn)品的雜質進行比較全面的檢測，根據(jù)安全性研究用樣品的雜質含量情況，來證明臨床研究用藥品是安全的。隨著研究的深入，可對雜質分析方法做相應的改進。創(chuàng)新藥物雜質限度的最終確定需要根據(jù)臨床研究結果綜合權衡，申報臨床研究時，只能對雜質限度做一初步規(guī)定如因生產(chǎn)規(guī)模放大產(chǎn)生了新的雜質，或已有雜質含量超出原有限度時，應根據(jù)ICH

5、中對原料藥和制劑的雜質限度規(guī)定來判斷該雜質含量是否合理，如不合理，應考慮進一步的研究工作。8雜質控制的方法重點：關注雜質檢測方法的選擇與驗證。注意研究過程中所有批次樣品（包括各種生產(chǎn)規(guī)模）中的雜質進行完整的記錄，為制訂雜質限度提供重要的依據(jù)。確定雜質限度時，要綜合考慮雜質的安全性、生產(chǎn)的可行性、合理性與產(chǎn)品的穩(wěn)定性。確定仿制藥品雜質限度時，要注意與已上市產(chǎn)品的質量對比研究，以充分保證安全性。 9二、雜質對照品的使用 貫穿研發(fā)整個過程，涵蓋注冊標準、統(tǒng)一標準和藥典標準。質量標準中是否采用已知雜質對照品應慎重選擇，并不是在標準中引入已知雜質對照品就意味著標準質量的提高。在國家藥品標準中引入雜質對照

6、品應滿足下述條件之一。1、色譜系統(tǒng)適用性試驗需要，即分離度需要。可彌補只規(guī)定理論板數(shù)的不足，既可以是已知的“有關物質”，也可以是與主成分或“已知雜質”結構相近的指示性物質。2、該雜質與主成分的相對響應因子差異較大（超出0.52.0）時，加校正因子自身對照法怕不夠準確反映雜質的真實含量。特別是響應因子較小的雜質，怕低估其雜質含量。3、該雜質的毒性較大，需要專門嚴格控制。4、雜質定位需要。 10三、藥品質量標準中雜質的命名 1.存在需要：雜質檢查HPLC法、TLC法和GC等各種色譜方法，過去采用主成分自身對照法，現(xiàn)在越來越多的標準中采用已知結構的化學。或用于系統(tǒng)適用性試驗、或用于雜質定位、或用于外

7、標法測定該雜質的含量。需要對藥品標準中涉及到的結構已知的雜質進行命名。11三、藥品質量標準中雜質的命名2、命名原則通用名稱，如果該雜質也是一個藥物，可能已有藥品通用名稱，應直接采用該藥品的通用名稱（比如氯乙酰左卡尼汀的一個已知雜質為左卡尼汀，在質量標準中該雜質名稱即為“左卡尼汀”）化學名稱，一般情況，雜質沒有藥品通用名稱，但如果化學名稱比較簡單，可根據(jù)有機化學命名原則直接采用化學名稱。（如鹽酸乙胺丁醇中的雜質（）-2-氨基丁醇）“某某雜質A、某某雜質B”的命名方式 （如格列本脲的兩個雜質在質量標準中分別命名為格列本脲雜質A、格列本脲雜質B，這種命名方式需要在標準后提供詳細結構式和化學名稱）12

8、三、藥品質量標準中雜質的命名注意：當只有一個已知雜質時，需要特別強調(diào)的是當只有一個已知雜質時，仍然應該以“某某雜質A”命名，不能只是“某某雜質”，否則，當將來標準中需要增加已知雜質時，命名會出現(xiàn)困難或混亂 ?！澳衬常ù郎y藥品的活性組分）雜質*（如A）對照品格列本脲雜質A”給出雜質對照品的全稱，在同一質量標準中 再次提到該雜質名稱時可簡稱雜質A。某某（待測藥品的活性組分）雜質*（如A）對照品：以鹽酸比哌立登為例，在其質量標準中，其雜質對照品的名稱是“比哌立登雜質A對照品，而不是 “鹽酸比哌立登雜質A對照品”。酸基亦然 。13三、藥品質量標準中雜質的命名注意：如果B品種中采用的化學對照品在A品種中

9、已經(jīng)出現(xiàn)，應使用A品種中已經(jīng)出現(xiàn)的對照品全稱，同時，還應在括號中給出該雜質在B品種中的命名 。如甲氧氯普胺雜質E和硫必利雜質C是同一物質，在鹽酸硫必利雜質C檢查項下“取20.0mg甲氧氯普胺雜質E對照品（硫必利雜質C），用溶解 ”如果一個品種項下有多個雜質，而且除了取代基團的差異外，這些雜質都有共同的母核或化學結構，可以用一個通用的化學結構表述，取代基用R1、R2 表示 如果該雜質有CAS號的話，可給出CAS 號。 14四、復方制劑雜質控制目前現(xiàn)有國家質量標準中多數(shù)復方制劑沒有相應有關物質控制。或者雖有控制，但沒有考慮復方制劑的特點，研究思路 與單方制劑一般沒有明顯區(qū)別。此外存在方法專屬性欠佳

10、，雜質歸屬控制少，籠統(tǒng)控制為主的現(xiàn)象。 2010年版藥典的起草修訂工作過程中注重了雜質研究和控制方法的制定。因此今后研制新的復方制劑時必須注重雜質的研究和控制。難題：在已公布的國內(nèi)外雜質研究技術指導原則中沒有關于復方制劑雜質研究的專門說明。15復方制劑雜質控制主要內(nèi)容一、復方制劑雜質控制的主要難點 二、復方制劑雜質控制的思考 三、質量標準中雜質控制的具體方法 16一、復方制劑雜質控制的主要難點1、相對復雜。2、準確定量困難。建立簡單有效的分析方法，同時分離、檢出所有的雜質并準確定量更加困難。3、更要使用雜質對照品。由于歸屬和定量方面的復雜性，不可避免的要用到較多的雜質對照品。17二、復方制劑雜

11、質控制的思考 復方制劑雜質研究與單方制劑一樣，它包括選擇合適的分析方法、雜質的定性和定量、方法驗證并綜合藥學、毒理及臨床研究的結果確定雜質的合理限度。復方制劑進行雜質研究，可以根據(jù)制劑的實際情況，確定首要研究對象，然后采用適當?shù)姆椒ǎ治龃_定相應雜質的來源，對雜質進行定性研究和歸屬確定。 18復方制劑雜質控制的思考內(nèi)容（一）首要研究對象的確定（二） 復方制劑雜質來源歸屬研究19（一）首要研究對象的確定1、復方制劑中各藥物穩(wěn)定性均較好，但含量相差較大，可主要針對含量較大的藥物進行雜質研究（不推薦采用） 。采用該方法研究應有明確文獻支持小組分不會產(chǎn)生毒 性的雜質，如產(chǎn)生毒性雜質，應對該毒性雜質進行

12、定性研 究并制定合理的限度予以控制。2、復方制劑中各藥物結構差異可能較大，其穩(wěn)定性亦不盡相同，穩(wěn)定性相差較大時，在經(jīng)過嚴格的實驗驗證或有明確的文獻資料支持下，可主要針對不穩(wěn)定藥物的雜質進行研究。3、復方制劑中各藥物的穩(wěn)定性均較差，或者各藥物含量相近、穩(wěn)定性亦相近的復方制劑，建議均進行相應雜質的研究。20（一）首要研究對象的確定4、對組分較多的復方制劑，如復方氨基酸，多種維生素等復方制劑，應詳細分析各組分的穩(wěn)定性情況，有針對性地進行雜質研究。5、其他情況，如對雙層或多層片但不同片層僅含單一組分的復方片劑，或多種色澤/形狀顆粒且不同色澤/形狀顆粒僅含單一組分的膠囊/顆粒劑等固體復方制劑，如能采用物

13、理手段 （如小心切開、分揀等）將不同藥物組分簡單地分離，可參照各藥物單方制劑的雜質檢查方法分別進行研究。這些特殊劑型采用該方法時應注意藥物之間有無遷移現(xiàn)象。21（二） 復方制劑雜質來源歸屬研究 復方制劑的雜質研究，肯定是在對相應原料藥及各自單方制劑研究的已有基礎上的，因此，自然要借鑒已有的雜質研究成果。如果已有的雜質研究結果不充分，那么首先應研究其各自雜質的來源和特點。復方中雜質結構差異較大時，應注意不同原理的分析方法間的相互補充與驗證 由于復方制劑雜質數(shù)目多及來源的多樣性，HPLC法應該是最常用或者說是首選的雜質檢查方法。在采用紫外檢測器時，使用二極管陣列檢測器有著重要的意義，通過該檢測器可

14、獲得各雜質的紫外光譜信息，有助于判斷雜質檢測波長選擇的合理性，避免雜質的漏檢，同時還可以進行峰純度的檢查。22（二） 復方制劑雜質來源歸屬研究建立了初步的色譜方法，對復方制劑中各藥物、雜質、輔料能夠有效分離檢出之后，可采用以下方法對雜質進行分步歸屬研究：1、確定各自原料帶入雜質在復方制劑測定方法中的歸屬，方法為分別測定各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑樣品在確定的雜質檢查色譜條件下的HPLC圖譜，對上述圖譜進行對比研究，以確定制劑色譜圖中輔料峰、由各原料藥引入的雜質峰。另外，可通過比較各原料藥的HPLC圖譜與原料藥混合物的HPLC圖譜初步確定原料藥之間是否有相互作用；通

15、過比較原料藥混合物的HPLC圖譜、輔料的HPLC圖譜以及原輔料混合物的HPLC圖譜，可初步確定原輔料之間是否有相互作用；通過比較原輔料混合物的HPLC圖譜與制劑的HPLC圖譜，可初步確定制劑過程是否引起主藥的降解和雜質的增加。（電子刊物，化學藥物復方制劑雜質來源歸屬研究的基本思路，張玉琥） 23（二） 復方制劑雜質來源歸屬研究2、確定制劑工藝中新增雜質的歸屬，確定是輔料峰還是制劑過程的分解產(chǎn)物，方法為對各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進行光、熱、濕影響因素試驗，測定試驗前后樣品的HPLC圖譜并進行比較分析，可明確制劑中各藥物在強光、高溫、高濕條件下的主要降解產(chǎn)物，

16、對復方制劑中的降解產(chǎn)物進行歸屬，并可通過上述比較研究，基本確定藥物與藥物之間、藥物與輔料之間在劇烈條件下是否存在相互作用，是否產(chǎn)生新的雜質。 24（二） 復方制劑雜質來源歸屬研究3、貯藏期（或加速實驗）新增雜質的歸屬。方法為對各原料藥、原料藥混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進行穩(wěn)定性加速試驗，測定不同時間樣品的HPLC圖譜并進行比較分析，并與制劑長期留樣試驗樣品的測定結果進行比較。通過這些研究工作，可進一步明確復方制劑中各雜質的歸屬，明確各藥物在加速試驗條件下及一般貯藏條件下的主要降解產(chǎn)物，為確定貯藏條件及質量控制重點建立基礎。4、多種分析方法（幾種色譜方式）、多種檢測手段（包括多種檢測器

17、、多波長），特別是HPLC-MS聯(lián)用技術在雜質研究和歸屬方面以及色譜峰中有無疊加方面能起重要作用。 25三、質量標準中雜質控制的具體方法 對復方中雜質的充分、全面研究，最終要科學、合理地體現(xiàn)到質量控制中，應落實到質量標準中，方法建立包括：（一）分離和檢測方法的確定 （二）雜質定量方法 （三）方法學驗證 （四）雜質限度的確定 26（一）分離和檢測方法的確定 質量標準中，今后采用的雜質檢測方法主要為：高效液相色譜法。國家局現(xiàn)在的審評標準是有單位采用梯度洗脫檢測的，不再批準采用等度方法檢測的申請。薄層色譜法。HPLC法不是萬能的，歐洲藥典、美國藥典或者日本藥典如采用薄層色譜法的，不建議更改，并要作充

18、分的對比試驗。氣相色譜法。毛細管電泳法 。27（二）雜質定量方法 以HPLC法為例，其他色譜方法也基本相同。與單方制劑的有關物質一樣，一般采用峰面積法，具體定量方法有外標法（雜質對照品法）、加校正因子的主成分自身對照法、不加校正因子的主成分自身對照法。具體可以按如下層次分步考慮：（1）復方制劑中的已知毒性雜質和易于獲得對照品的雜質適于采用雜質對照品法。（2）若采用加或不加校正因子的某主成分自身對照法，應考察不同色譜柱、色譜條件的一定變化對相對保留時間的波動，一般只有色譜條件耐用并雜質個數(shù)較少時，方可適用。（3）采用一個系統(tǒng)適用性溶液或混合雜質對照品溶液，外加對照圖譜，標明雜質位置，然后采用加或不加校正因子的相應主成分自身對照法。28（二）雜質定量方法 （4）對于未能明確指定歸屬的，同時量又較少的雜質，建議與含量較少（或者響應較弱）的主成分進行對照。（5）藥物含量（或響應）和所有雜質響應均接近時，雜質定量可與復方制劑中藥物峰面積之和的平均值比較。 （6）藥物含量相近、雜質響應相差較大，或藥物含量相差較大、雜質響應相差較小，或藥物含量和雜質響應均相差較大，又沒有建立成上述的質控方法時，或無法建