小麥萌發(fā)前后淀粉酶活性的比較

1、實(shí) 驗(yàn) 報(bào) 告實(shí)驗(yàn)課程： 小麥萌發(fā)前后淀粉酶活性的比較 學(xué)生姓名： xxx 學(xué) 號： xxx 專業(yè)班級： xxx 2017年 4 月 25 日實(shí)驗(yàn)背景:淀粉是植物最主要的儲(chǔ)藏多糖，也是人和動(dòng)物的重要食物和發(fā)酵工業(yè)的基本原料。淀粉經(jīng)淀粉酶作用生成麥芽糖、葡萄糖等小分子物質(zhì)而被機(jī)體利用。淀粉酶是水解淀粉的糖苷鍵的一類酶的總稱。按照其水解淀粉的作用方式，可以分成-淀粉酶、-淀粉酶等。實(shí)驗(yàn)證明，在小麥、大麥、黑麥的休眠種子中只含有-淀粉酶，-淀粉酶是在發(fā)芽過程中形成的，所以在禾谷類萌發(fā)淀粉酶的種子和幼苗中，這兩類淀粉酶都存在。其活性隨萌發(fā)時(shí)間的延長而增高。本實(shí)驗(yàn)以淀粉酶催化淀粉生成還原的性糖的速度來測

2、定酶的活力，淀粉水解成還原性糖，還原性糖能使3，5二硝基水楊酸還原成棕色的3-氨基，5-硝基水楊酸。可用分光光度計(jì)法測定。 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)分光光度法測定酶活力的原理與方法；2、了解小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的變化。二、 實(shí)驗(yàn)原理淀粉酶是水解淀粉的糖苷鍵的一類酶的總稱。實(shí)驗(yàn)證明，在某些植物如小麥、大麥的休眠種子中只含有-淀粉酶，-淀粉酶是在發(fā)芽過程中形成的，所以在禾谷類萌發(fā)的種子和幼苗中，這兩類淀粉酶都存在。其活性隨萌發(fā)時(shí)間的延長而增高。本實(shí)驗(yàn)以淀粉酶催化淀粉生成麥芽糖的速度來測定酶的活力。麥芽糖是還原性糖，能使3，5-二硝基水楊酸還原成棕色的3-氨基5-硝基水楊酸，后者在500 nm處有最

3、大吸光度，而進(jìn)行定量測定。三、 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1、實(shí)驗(yàn)儀器：紫外-可見分光光度計(jì)；離心機(jī)；研缽.2、實(shí)驗(yàn)試劑小麥種子（萌發(fā)種子10粒、干種子10粒）；1%氯化鈉溶液；標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液；3，5-二硝基水楊酸溶液；0.02 mol/L 磷酸緩沖液.0.2%淀粉溶液.四、 實(shí)驗(yàn)步驟1麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 取7支具塞刻度試管，編號，按表 1 加入試劑：表1 制作麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線配方表充分搖勻，置于沸水浴中煮沸 5 min 。取出后流水冷卻，加蒸餾水定容至 20 m L 。以 1 號管作為空白調(diào)零點(diǎn)，在 500 nm 波長下比色測定。以麥芽糖含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、小麥萌發(fā)前后的酶液

4、提?。?）幼苗酶的提?。喝∶劝l(fā)的幼苗10株入研缽，加1 % NaCl 3 ml，研磨成勻漿，0-4 °C下放置20 min。 離心，2000 r/min 10 min .測定上清酶液的總體積。（2）種子酶的提取：取干燥種子10粒作對照，操作方法同上。3、二硝基水楊酸法測定酶活力量取待測酶液1 ml，pH6.9的0.02mol/L磷酸緩沖液稀釋10倍，作為酶活力測定物。取6根試管按下表加各物質(zhì)：表2測定各管的A500nm值五、 數(shù)據(jù)處理和分析1、數(shù)據(jù)記錄：（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線：麥芽糖含量（mg）00.40.81.21.62.0吸光度00.2340.4930.6980.9981.286（2）小

5、麥麥芽糖吸光度試管編號123456吸光度1.1051.0932.2042.1200.0030.002吸光度平均值1.0992.16200025其中1、2號管是小麥干種子，3、4號管是小麥幼苗，5、6號管屬于空白管。 2、數(shù)據(jù)處理和分析（1）將上面實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線直線方程即可計(jì)算出對應(yīng)的麥芽糖含量：小麥干種子液麥芽糖含量：C種子=1.754mg小麥幼苗液麥芽糖的含量：C幼苗=3.421mg空白管液麥芽糖含量：C0 =0.035mg（2）總酶活力單位= (C酶C0)× n × V酶式中：C酶為種子酶或幼苗酶分解淀粉產(chǎn)生的麥芽糖的濃度 （mg/ml）；C0為表2中空白管的麥芽

6、糖濃度；n為酶溶液稀釋的倍數(shù)；V酶為提取酶液的總體積（ml）。設(shè)在40、pH 6.9的條件下，3 min內(nèi)水解淀粉釋放1 mg麥芽糖所需要的酶量為1個(gè)活力單位（U）。小麥干種子總酶活力單位=（0.681-0.00159）/20×10*（20/0.5）1.0U=34.4U小麥萌發(fā)種子總酶活力單位=（1.359-0.00159）/20×10*（20/0.5）1.0U=67.7U由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)知萌發(fā)種子的酶活力值大約是干種子的兩倍，驗(yàn)證了種子在萌發(fā)過程中合成了新的淀粉酶。六、 誤差分析和思考題1、誤差分析不同的種子質(zhì)量會(huì)有所不同，所含淀粉酶量也會(huì)有所不同；因離心管為1.5ml，不能裝

7、下全部研磨液，可能喪失部分酶；干種子較難研磨，有部分酶未分離出來；兩次測量使用了不同的分光光度計(jì)，可能有一定的儀器偏差。2、思考題（1）為什么提取酶液的過程應(yīng)該在0-4 下進(jìn)行？測定淀粉酶活性時(shí)為什么要在40 條件下水解淀粉？ 答：提取酶液的過程在0-4 下進(jìn)行是為了保護(hù)酶蛋白，防止其在較高溫度下變性，甚至滋生微生物對其進(jìn)行分解。測定淀粉酶活性時(shí)在40 條件下水解淀粉是因?yàn)槊富钚韵鄬τ跍囟仁且粋€(gè)先上升后下降的曲線，在40度左右酶活性最高，因此在40度下進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)時(shí)所得的數(shù)據(jù)較為準(zhǔn)確。 （2）小麥萌發(fā)過程中淀粉酶活性升高的原因和意義是什么？ 答：原因：因?yàn)樗枰芰?而產(chǎn)生淀粉酶,更多的生產(chǎn)出糖分來進(jìn)行一系列活動(dòng),呼吸,光合等作用； 意義：小麥種子在萌發(fā)過程中淀粉酶活力升高的直接結(jié)果是淀粉的水解增多，那么就可以提供較多的能量供應(yīng)萌發(fā)時(shí)候的細(xì)胞分裂以及細(xì)胞生長使用，同時(shí)還能夠?yàn)榧?xì)胞的生命活動(dòng)提供原料。能夠更快地將儲(chǔ)存的有機(jī)物中的能量釋放出來，保證萌發(fā)過程能量供應(yīng)充足。