醫(yī)學(xué)微生物學(xué)第25章-病毒感染的檢查方法和防治原則

1、 第25章病毒感染的檢查方法和防治原則第一節(jié) 病毒感染的檢查方法一、標(biāo)本采集與送檢：供分離病毒、檢出核酸及抗原的標(biāo)本采集原則采集時間：發(fā)病初期（急性期）采集標(biāo)本標(biāo)本類型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的標(biāo)本標(biāo)本運(yùn)輸：盡快冷藏送檢，標(biāo)本在處理、接種前切忌反復(fù)凍融標(biāo)本的處理與儲存：采集標(biāo)本時注意無菌操作。使用抗生素以抑制標(biāo)本中的細(xì)菌或真菌等生長繁殖。盡量及時接種，如不能當(dāng)時接種，標(biāo)本應(yīng)保存在-70低溫冰柜或液氮中。供血清學(xué)檢測的標(biāo)本采集原則取急性期（發(fā)病初期）和恢復(fù)期（病后1個月）雙份血清，動態(tài)觀察雙份血清抗體效價二、病毒的分離 動物接種-動物模型雞胚培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng) 原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)

2、傳代細(xì)胞培養(yǎng)三大培養(yǎng)方法細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代細(xì)胞培養(yǎng) 對病毒的敏感性高，可用于生產(chǎn)病毒疫苗，但不能持續(xù)傳代培養(yǎng)，故不便用于診斷工作。(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng) 生長迅速，可傳50代保持二倍體染色體數(shù)目，可用于制備病毒疫苗，也可用于病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷工作。(3) 傳代細(xì)胞培養(yǎng) 由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來，染色體數(shù)為非整數(shù)倍，細(xì)胞生長迅速，可無限傳代，廣泛用于病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷工作。病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指征：病毒致細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathogenic effect, CPE）病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起細(xì)胞退形性變，表現(xiàn)為細(xì)胞皺縮、變圓、出現(xiàn)空泡、死亡和脫落。普通光學(xué)倒置顯微鏡可觀察正常細(xì)胞CPE紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象

3、帶有血凝素的病毒（如流感病毒）感染細(xì)胞后，細(xì)胞膜上可出現(xiàn)病毒血凝素，能與加入的脊椎動物（豚鼠、雞、猴等）紅細(xì)胞結(jié)合病毒干擾現(xiàn)象病毒干擾作用風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE()埃可病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE()人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？?？刹《綜PE(-)風(fēng)疹病毒(+) ?？刹《?-)CPE(+)風(fēng)疹病毒(-) ?？刹《?+)病毒感染性的定量測定空斑形成單位（plaque-forming unit, PFU）50%致死量（LD50）或50%組織細(xì)胞感染量（TCID50）測定病毒形態(tài)與結(jié)構(gòu)的觀察病毒的病原學(xué)鑒定三、病毒抗原的直接檢出免疫熒光法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)四、病毒抗體的直接檢出中和實(shí)驗(yàn)血凝抑

4、制實(shí)驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異性中和抗體作用而失去感染性的一種試驗(yàn)可檢查患者血清中抗體的消長情況，可用來鑒定未知病毒或研究病毒的抗原結(jié)構(gòu)補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)常用病毒內(nèi)部可溶性抗原檢測血清中IgM類抗體用于病毒早期感染的診斷血凝抑制實(shí)驗(yàn)檢測血凝抑制抗體的試驗(yàn)常用于有血凝素病毒感染的診斷及流行病學(xué)調(diào)查，也可用于鑒定病毒的型及亞型五、檢測病毒核酸核酸雜交技術(shù)PCR技術(shù)高通量的病毒核酸檢測技術(shù)形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查法電鏡和免疫電鏡檢查免疫學(xué)檢查法檢測病毒抗原免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢查病毒特異性IgM多種病毒抗原抗體檢測方法病毒核酸檢測技術(shù)病毒感染的快速診斷第二節(jié) 病毒感染的免

5、疫預(yù)防病毒感染的預(yù)防更重要!病毒感染的預(yù)防主要是使用疫苗!疫苗的使用對減少病毒感染和消滅某些 病毒性傳染病起到關(guān)鍵作用!特異性免疫的獲得方式（復(fù)習(xí)）主動免疫 自然主動免疫：患病、隱性感染人工主動免疫：疫苗 被動免疫 自然被動免疫：通過胎盤、初乳人工被動免疫：抗毒素、 丙種球蛋白免疫預(yù)防人工主動免疫滅活疫苗：Salk脊髓灰質(zhì)炎疫苗、狂犬疫苗流行性乙型腦炎疫苗、流感疫苗減毒活疫苗：Sabin脊髓灰質(zhì)炎疫苗、風(fēng)疹疫苗麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗甲型肝炎疫苗、乙型腦炎疫苗 其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等特點(diǎn)滅活疫苗減毒活疫苗免疫持續(xù)時間較短較長保護(hù)力（與自然感染接近程度）較低較高免疫球蛋白產(chǎn)生

6、IgGIgA和IgG粘膜免疫產(chǎn)生低有細(xì)胞介導(dǎo)免疫產(chǎn)生低有毒力回復(fù)無可能疫苗病毒運(yùn)輸和使用中的擴(kuò)散無可能受宿主其他病毒干擾無可能室溫穩(wěn)定性高低人工主動免疫滅活疫苗和減毒活疫苗我國常用的病毒疫苗疫苗名稱 疫苗種類（培養(yǎng)細(xì)胞種類） 脊髓灰質(zhì)炎疫苗 減毒活疫苗（人二倍體） 麻疹疫苗 減毒活疫苗（雞胚細(xì)胞）流行性腮腺炎疫苗 減毒活疫苗（雞胚細(xì)胞） 風(fēng)疹疫苗 減毒活疫苗（人二倍體細(xì)胞）甲型肝炎疫苗 減毒活疫苗（人二倍體細(xì)胞）人用狂犬病疫苗 滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）乙型腦炎病毒 滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）流感病毒 滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）乙型肝炎疫苗 基因工程疫苗（酵母菌表達(dá)）人工被動免疫 注射含有抗病毒中和抗體的

7、免疫血清、丙種球蛋白和IL-2，以及與細(xì)胞免疫有關(guān)的轉(zhuǎn)移因子、干擾素等，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力。普通免疫球蛋白用于某些病毒性疾病如免疫缺陷病以及傳染性肝炎、麻疹、水痘、腮腺炎、帶狀皰疹等病毒感染的緊急預(yù)防抗病毒血清免疫調(diào)節(jié)劑 第三節(jié) 抗病毒治療抑制病毒選用抑制病毒復(fù)制的化學(xué)藥物或制劑提高機(jī)體免疫提高機(jī)體的免疫應(yīng)答，促進(jìn)自身消滅病毒感染的細(xì)胞效能化學(xué)治療基本策略：根據(jù)病毒的復(fù)制周期設(shè)計不同藥物抑制病毒穿入、脫殼及病毒釋放 金剛烷胺抑制病毒核酸復(fù)制及mRNA合成核苷類類似物 阿昔洛韋（ACV）、疊氮脫氧胸苷（AZT）、拉米呋定、利巴韋林、碘苷非核苷類似物 抑制病毒蛋白的修飾雞尾酒療法AZT/ZDV免疫治療免疫調(diào)節(jié)或治療劑治療性疫苗免疫細(xì)胞的修飾與回輸 基因治療【目的要求】一、掌握1標(biāo)本的采集與送檢。2病毒的細(xì)胞培養(yǎng)。二、熟悉1病毒分離培養(yǎng)的方法與細(xì)胞病變效