DB1301-T306-2019種公雞精液技術(shù)規(guī)范

1、ICS65.020.30B 43DB1301石家莊市農(nóng)業(yè)地方標(biāo)準(zhǔn)DB 1301/T 3062019種公雞精液技術(shù)規(guī)范2019 - 09 - 16 發(fā)布2019 - 11 - 16 實施石家莊市市場監(jiān)督管理局發(fā) 布DB1301/T 3062019I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由石家莊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北良人牧業(yè)有限公司、石家莊市畜牧技術(shù)推廣站、石家莊市畜牧獸醫(yī)學(xué)會。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：褚素喬、謝艷華、云慧卿、桂蘊、倪惠勇、薛素琴、李海霞、孟莉、謝雨辰、郭偉婷、侯秀賢、李明江、劉文科、李劍、郭景凱。DB1301/T 3062019 PAGE 6種

2、公雞精液技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了種公雞精液質(zhì)量品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、檢測項目和方法等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于種公雞精液質(zhì)量的評定。術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2.1原精液采集后未經(jīng)稀釋的精液。2.2精子密度單位體積精液中的精子數(shù)。2.3精子活力在37環(huán)境下，呈直線前進(jìn)運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率。2.4精子畸形率畸形精子占總精子數(shù)的百分率。2.5有效精子數(shù)每只公雞1次采集的原精液中呈直線前進(jìn)運動的精子總數(shù)。檢測項目及檢測方法檢測項目外觀、精液量、精子活力、精子密度、精子畸形率。原精液品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)種公雞原精液品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1原精液品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)項目指標(biāo)外觀呈乳白色，不透明的乳狀液體，無血液、糞尿等雜質(zhì)精液量

3、（ml）0.25精子活力（%）60表 1(續(xù)) 原精液品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)項目指標(biāo)精子密度(（億個/ml）60有效精子數(shù)（億個）10精子畸形率（%）10檢測方法精液檢查前準(zhǔn)備工作室內(nèi)溫度控制在 2225，避免太陽光直射或紫外線燈照射。顯微鏡載物臺恒溫板應(yīng)預(yù)熱至 37。外觀采用目測法檢測。精液量用2.0ml的吸量管吸取集精管中精液，準(zhǔn)確讀數(shù)，檢測精液量。精子密度概述采用血細(xì)胞計數(shù)板法測定。主要器材血球計數(shù)板、血蓋片、微量移液器（10l100l）、10ml試管、計數(shù)器、顯微鏡、3.0%氯化鈉溶液。原精液稀釋處理用移液器準(zhǔn)確吸取25ul原精液，使用3.0%的氯化鈉溶液與其混勻，調(diào)整稀釋精液量到10ml，輕輕轉(zhuǎn)動

4、，混勻，使之成為400倍稀釋精液。檢測方法將準(zhǔn)備好的血球計數(shù)板用血蓋片將計數(shù)室蓋好，用移液器吸取稀釋好的精液，滴一滴于血蓋片邊緣， 使精液自行流入計數(shù)室，均勻充滿，不允許有氣泡或厚度過大，然后在顯微鏡下找到計數(shù)室觀察計數(shù)。計數(shù)時，在方框內(nèi)選取四個角和中央五個計數(shù)室進(jìn)行精子計數(shù)。壓在計數(shù)室邊線上的精子，計數(shù)時計頭不計尾、計左不計右、計上不計下。計算五個計數(shù)室的精子依次用計數(shù)器記錄，得出總數(shù)，再用以下公式計算精子密度，見公式（1）。精子密度（億個/ml）=5個方格中精子總數(shù)5（即25個中方格的總精子數(shù)）10（1mm3內(nèi)的精子數(shù)）1000（每ml精液的精子數(shù)）400（精液稀釋倍數(shù)）即：精子密度（億個

5、/ml）=5個方格中精子總數(shù)5104精液稀釋倍數(shù)(1)精子活力主要器材顯微鏡、恒溫水浴鍋、10ml試管、載玻片、蓋玻片、恒溫載物臺、滴管。原精液稀釋處理將采集的新鮮原精液吸取25ul加入10ml試管中，沿試管壁緩慢加入等溫的0.9%氯化鈉溶液，調(diào)整稀釋精液量到10ml，然后輕輕轉(zhuǎn)動，混勻，使之成為400倍稀釋精液。檢測方法取稀釋好的中層精液15ul25ul，在有37恒溫載物臺的（200倍400倍）顯微鏡下檢查。每份精液檢測兩次，每個樣片觀察三個視野，記錄視野中呈直線前進(jìn)運動的精子數(shù)。計算計算視野中呈直線前進(jìn)運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率，求平均值。若兩個樣片計數(shù)結(jié)果誤差超過5%，則應(yīng)重檢。原精

6、液中的有效精子數(shù)有效精子數(shù)為精液量、精子密度、精子活力三者的乘積，按公式（2）計算。n a b c(2)式中：n有效精子數(shù)，單位為億個； a精液量，單位為ml；b精子密度，單位為億個/ml； c精子活力，單位為%。精子畸形率概述采用姬姆薩染色法檢測。主要器材顯微鏡、載玻片、血球分類計數(shù)器、微量移液器、蒸餾水、姬姆薩染料、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、甲醛、甲醇、甘油，所用試劑為分析純。制片取一滴3.3.5.2原精液稀釋處理得到的稀釋精液于載玻片一端，用另一邊緣光滑的載玻片與有樣品的載玻片呈35。夾角，將樣品均勻地涂布于載玻片上，自然風(fēng)干（約5min），每個樣品制作兩個抹片。在已風(fēng)干的抹片上滴1.02

7、.0ml中性福爾馬林固定液，固定15min后用水沖去固定液，吹干或自然風(fēng)干。染色將固定好后的抹片反扣在帶有平槽的有機玻璃面上，把姬母薩染液滴于槽和抹片之間，讓其充滿平槽并使抹片接觸染液，染色1.5h后用水沖去染液，晾干待檢。鏡檢將制備好的抹片在顯微鏡（400倍600倍）下觀察，畸形精子包括尾部盤繞、斷尾、無尾、盤繞頭、鉤狀頭、小頭、破裂頭、鈍頭、膨脹頭、氣球頭、絲狀中段等。觀察兩個抹片，每個抹片觀察左、中、右三個視野中不少于200個精子，記錄其中屬于畸形精子的數(shù)量。計算計算畸形精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率，取兩片的平均值。兩片的變異系數(shù)不得大于20%，若超過應(yīng)重新制片。品質(zhì)檢測登記填寫種公雞精液品

8、質(zhì)檢測登記表，登記表見附錄A。檢測檔案管理檢測結(jié)果建立檔案，保存期2年。檢測規(guī)則種公雞在使用前必須進(jìn)行逐只檢測，以后每月抽檢一次。每次抽檢量不少于 30 只公雞。發(fā)現(xiàn)異常時（如受精率突然降低時），立即進(jìn)行精液檢查。對于檢出的不合格公雞要分開或者標(biāo)記飼養(yǎng)，每周至少采精 23 次，但不使用其精液。連續(xù) 3次檢測不合格則淘汰。在種雞場生產(chǎn)中，可采用精子密度測定儀快速檢測精子密度、活力、畸形率。須按照本標(biāo)準(zhǔn)中、3.3.5、3.3.7 規(guī)定的檢測方法定期校正。附錄A（規(guī)范性附錄）種公雞精液品質(zhì)檢測登記表表A.1種公雞精液品質(zhì)檢測登記表采精時間品種日齡采精員種公雞編號外觀精液量（ml）精子密度（億個/ml）精子活力（%）有效精子數(shù)（億個）精子畸形率（%）檢驗員備注參 考 文 獻(xiàn)1 GB 4143-2008 牛冷凍精液GB/T 25172-2010 豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范DB 13/T 683-2005 蛋種雞人工授精技