園藝植物遺傳實驗技能訓練教程是園藝技術(shù)專業(yè)的主要專

1、前 言園藝植物遺傳實驗技能訓練教程是園藝技術(shù)專業(yè)的主要專業(yè)基礎(chǔ)課。為使學生將課堂所學理論知識應用于實踐，加深對理論知識的理解，增強學生解決實際問題的能力，根據(jù)專業(yè)要求安排不同的實訓內(nèi)容。通過各種專業(yè)技能訓練使學生能熟練掌握制片、壓片、染色、固定技術(shù)，熟練使用電泳儀、顯微鏡、離心機等的使用方法，掌握常用的植物遺傳分析技術(shù)，如：數(shù)理統(tǒng)計法、有機溶劑提取法、組織培養(yǎng)法、帶型分析法等，明確染料的種類和正確使用，了解并掌握園藝植物遺傳基本理化性質(zhì)的分析方法與原理，學會實驗數(shù)據(jù)的處理與分析，并根據(jù)實驗結(jié)果得出結(jié)論。通過綜合實訓使學生了解園藝植物的基礎(chǔ)理論知識，掌握細胞分裂與染色體行為、遺傳物質(zhì)的分子基礎(chǔ)、

2、植物細胞的組織分化、經(jīng)典的遺傳規(guī)律、染色體數(shù)目的變異等。掌握顯微鏡的使用與維護方法、細胞固定與細胞染色方法、孚爾根染色法、植物染色體分帶技術(shù)、遺傳物質(zhì)的鑒定及提取方法。通過具體單項的訓練，提高學生實踐技能，具有指導農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的實際能力，同時培養(yǎng)學生良好的職業(yè)素質(zhì)和科學發(fā)展觀。為體現(xiàn)高職教育特色，增強學生的動手能力，使學生對所學知識融會貫通，培養(yǎng)他們獨自解決生產(chǎn)問題的能力，洋蔥根尖中DNA的鑒定、植物細胞減數(shù)分裂的觀察 、大麥中期染色體的組型分析、植物多倍體的誘發(fā)、植物材料中DNA的分離提取、實訓十 植物細胞的脫分化和分化培養(yǎng)等12個實訓技能訓練，增強了指導生產(chǎn)的能力。目 錄第一部分 植物遺傳的基

3、本理論21-1細胞分裂與染色體行為21-2 遺傳物質(zhì)的分子基礎(chǔ)61-3 植物細胞組織分化71-4孟德爾遺傳規(guī)律81-5染色體數(shù)目的改變12第二部分 園藝植物遺傳實驗基本知識192-1 實驗室安全管理制度192-2顯微操作技術(shù)202-3顯微鑒定的方法212-4生物顯微鏡常見故障的修理23第三部分 植物遺傳實驗基本操作253-1顯微鏡的使用與維護253-2細胞固定253-3細胞染色273-4常用染料283-5孚爾根染色法293-6植物染色體分帶313-7 DNA的提取方法簡介32第四部分 園藝植物遺傳實驗技能訓練35實訓一 植物根尖石蠟切片的制作石蠟制片法35實訓二 花粉管生殖細胞有絲分裂的觀察固

4、定染色法36實訓三 洋蔥根尖中DNA鑒定孚爾根核染色法37實訓四 植物細胞減數(shù)分裂的觀察染色體玻片法38實訓五 孟德爾遺傳規(guī)律的驗證數(shù)理統(tǒng)計法38實訓六 大麥中期染色體的組型分析染色體分析法40實訓七 植物多倍體的誘發(fā)秋水仙素法42實訓八 植物材料中DNA的分離提取有機溶劑提取法43實訓九 植物中過氧化物酶的提取電泳染色法45實訓十 植物細胞的脫分化和分化培養(yǎng)組織培養(yǎng)法47實訓十一 植物單倍體的誘發(fā)花藥培養(yǎng)法49實訓十二 植物染色體的分帶C帶分析法50第一部分 植物遺傳的基本理論1-1細胞分裂與染色體行為1-1-1簡介一個細胞分裂為兩個細胞的過程。分裂前的細胞稱母細胞，分裂后形成的新細胞稱子細

5、胞。細胞分裂通常包括核分裂和胞質(zhì)分裂兩步。在核分裂過程中母細胞把遺傳物質(zhì)傳給子細胞。在單細胞生物中細胞分裂就是個體的繁殖，在多細胞生物中細胞分裂是個體生長、發(fā)育和繁殖的基礎(chǔ)。細胞分裂（cell division）是活細胞繁殖其種類的過程。通常包括核分裂和胞質(zhì)分裂兩步。在核分裂過程中母細胞把遺傳物質(zhì)傳給子細胞。在單細胞生物中細胞分裂就是個體的繁殖，在多細胞生物中細胞分裂是個體生長、發(fā)育和繁殖的基礎(chǔ)。1855年德國學者魏爾肖（R.Virchow）提出“一切細胞來自細胞”的著名論斷，即認為個體的所有細胞都是由原有細胞分裂產(chǎn)生的。現(xiàn)在除細胞分裂外還沒有證據(jù)說明細胞繁殖有其他途經(jīng)。 1-1-2種類一、原

6、核細胞的分裂?，F(xiàn)在還了解不多，只對少數(shù)細菌的分裂有些具體認識。原核細胞既無核膜，也無核仁，只有由環(huán)狀DNA分子構(gòu)成核區(qū)，又稱擬核，具有類似細胞核的功能。擬核的DNA分子或者連在質(zhì)膜上，或者連在質(zhì)膜內(nèi)陷形成的質(zhì)膜體上，質(zhì)膜體又稱間體。隨著DNA的復制間體也復制成兩個。以后，兩個間體由于其間的質(zhì)膜的生長而逐漸離開，與它們相連接的兩個DNA分子環(huán)于是被拉開，每一個DNA環(huán)與一個間體相連。在被拉開的兩個 DNA環(huán)之間細胞膜向中央長入，形成隔膜，終于使一個細胞分為兩個細胞。二、真核細胞的分裂。按細胞核分裂的狀況可分為3種：即有絲分裂、減數(shù)分裂和無絲分裂。有絲分裂是真核細胞分裂的基本形式。減數(shù)分裂是在進行

7、有性生殖的生物中導致生殖母細胞中染色體數(shù)目減半的分裂過程。它是有絲分裂的一種變形，由相繼的兩次分裂組成。無絲分裂又稱直接分裂。其典型過程是核仁首先伸長，在中間縊縮分開，隨后核也伸長并在中部從一面或兩面向內(nèi)凹進橫縊，使核變成腎形或啞鈴型，然后斷開一分為二。差不多同時細胞也在中部縊縮分成兩個子細胞，由于在分裂過程中不形成由紡錘絲構(gòu)成的紡錘體，不發(fā)生由染色質(zhì)濃縮成染色體的變化。1-1-3細胞的演化一、無絲分裂 amitosis無絲分裂時由于不經(jīng)過染色體有規(guī)律的平均分配,故存在遺傳物質(zhì)不能保證(但是不是沒有可能)平均等分配的問題,由此有些人認為這是一種不正常的分裂方式. 無絲分裂是最早發(fā)現(xiàn)的一種細胞分

8、裂方式，早在1841年德馬克（R.Remak）于雞胚血球細胞中見到。在無絲分裂中，核仁、核膜都不消失，沒有染色體的出現(xiàn)，在細胞質(zhì)中也不形成紡錘體，當然也就看不到染色體復制和平均分配到子細胞中的過程。但進行無絲分裂的細胞，染色體也要進行復制，并且細胞要增大。當細胞核體積增大一倍時，細胞就發(fā)生分裂。至于核中的遺傳物質(zhì)DNA時如何分配到子細胞中的，還有待進一步研究。無絲分裂是最簡單的分裂方式。過去認為無絲分裂主要見于低等生物和高等生物體內(nèi)的衰老或病態(tài)細胞中，但后來發(fā)現(xiàn)在動物和植物的正常組織中也比較普遍地存在。無絲分裂在高等生物中主要是高度分化的細胞，在動物的上皮組織、疏松結(jié)締組織、肌肉組織和肝組織中

9、，在植物各器官的薄壁組織、表皮、生長點和胚乳等細胞中，都曾見到過無絲分裂現(xiàn)象。 二、無性分裂生殖時核的分裂方式分裂生殖又叫裂殖，是無性生殖中常見的一種方式，即是母體分裂成2個(二分裂)或多個(復分裂)大小形狀相同的新個體的生殖方式。這種生殖方式在單細胞生物中比較普遍，但對不同的單細胞生物來說，在生殖過程中核的分裂方式是有所不同的，可歸納為以下幾種方式：（一）以無絲分裂方式營無性分裂生殖 無絲分裂又稱直接分裂，是一種最簡單的細胞分裂方式。整個分裂過程中不經(jīng)歷紡錘絲和染色體的變比，這種方式的分裂在細菌、藍藻等原核生物的分裂生殖中最常見。 原核細胞的分裂包括兩個方面：(1)細胞DNA的分配，使分裂后

10、的子細胞能得到親代細胞的一整套遺傳物質(zhì)；(2)胞質(zhì)分裂把細胞基本上分成兩等分。復制好的兩個DNA分子與質(zhì)膜相連，隨著細胞的生長，把兩個DNA分子拉開，細胞分裂時，細胞壁與質(zhì)膜發(fā)生內(nèi)褶，最終把母細胞分成了大致相等的兩個子細胞。 （二）以核的有絲分裂方式營無性分裂生殖 有絲分裂的過程要比無絲分裂復雜得多，是多細胞生物細胞分裂的主要方式，但一些單細胞如：甲藻、眼蟲、變形蟲等，在分裂生殖時，也以有絲分裂的方式進行： (1)甲藻細胞染色體的結(jié)構(gòu)和獨特的有絲分裂，兼有真核細胞和原核細胞的特點，細胞開始分裂時核膜不消失，核內(nèi)染色體搭在核膜上，分裂時核膜在中部向內(nèi)收縮形成凹陷的槽，槽內(nèi)細胞質(zhì)出現(xiàn)由微管按同一方

11、向排列的類似于紡錘絲的構(gòu)造，調(diào)節(jié)核膜和染色體，分離為子細胞核，最終分裂成兩個子細胞(甲藻)。 (2)眼蟲營分裂生殖時，核進行有絲分裂，分裂過程中核膜并不消失，隨著細胞核中部收縮分離成兩個子核，然后細胞由前向后縱裂為二(縱二分裂)，其中一個帶有原來的一根鞭毛，另一個又長出一根新鞭毛，從而形成兩個眼蟲。 (3)變形蟲長到一定大小時，進行分裂繁殖，是典型的有絲分裂，核膜消失，隨著細胞核中部收縮，染色體分配到子核中，接著胞質(zhì)一分為二，將細胞分裂成兩個子代個體。 （三）以核的無絲分裂和有絲分裂方式營無性分裂生殖 這種方式最典型的代表就是草履蟲，草履蟲屬原生動物纖毛蟲綱，細胞內(nèi)有大小兩種類型的核，即大核和

12、小核，小核是生殖核，大核是營養(yǎng)核，在草履蟲進行無性繁殖時，小核進行核內(nèi)有絲分裂，大核則行無絲分裂，接著蟲體從中部橫縊分成2個新個體。 植物細胞通過分裂進行繁殖。繁殖是生物或細胞形成新個體或新細胞的過程。植物細胞的分裂包括無絲分裂、有絲分裂和減數(shù)分裂和細胞的自由形成等不同的方式。 有絲分裂 mitosis有絲分裂又稱為間接分裂，它是一種最普遍，是常見的分裂方式。有絲分裂為連續(xù)分裂，一般分為核分裂和胞質(zhì)分裂。 核分裂（時間長）：核分裂是一個連續(xù)的過程，為了敘述的方便，人為地把核分裂劃分為前期、中期、后期作末期四個時期。有絲分裂各期的特點如下： 前期：核內(nèi)的染色質(zhì)凝縮成染色體，核仁解體，核膜破裂以及

13、紡錘體開始形成。 中期：中期是染色體排列到赤道板上，紡錘體完全形成時期。 后期：后期是各個染色體的兩條染色單體分開，分別由赤道移向細胞兩極的時期。 末期：為形成二子核和胞質(zhì)分裂的時期。染色體分解，核仁、核膜出現(xiàn)，赤道板上堆積的紡錘絲，稱為成膜體。 細胞質(zhì)分裂（時間短）：核分裂后期，染色體接近兩極時，細胞質(zhì)分裂開始。在兩個子核之間的連續(xù)絲中增加了許多短的紡錘絲，形成一個密集著紡錘絲的桶狀區(qū)域，稱之為成膜體。微管的數(shù)量增加，成膜體中有來自高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的泡囊（含多糖類物質(zhì)），沿著微管指引方向，聚集，融合，釋放出多核物質(zhì)，構(gòu)成細胞板，從中間開始向周圍擴展，直至與母細胞壁相連，成為胞間層初生壁，新質(zhì)

14、膜由泡囊的被膜融合而成。新細胞壁形成后，把兩個新形成的細胞核和它們周圍的細胞質(zhì)分隔成為兩個子細胞。 有絲分裂的特點：通過細胞分裂使每一個母細胞分裂成兩個基本相同的子細胞，子細胞染色體數(shù)目、形狀、大小一樣，每一染色單體所含的遺傳信息與母細胞基本相同，使子細胞從母細胞獲得大致相同的遺傳信息。使物種保持比較穩(wěn)定的染色體組型和遺傳的穩(wěn)定性。 減數(shù)分裂 meiosis有性生殖要通過兩性生殖細胞的結(jié)合，形成合子，再由合子發(fā)育成新個體。生殖細胞中的染色體數(shù)目是體細胞中的一半。(否則生物每繁殖一代，體細胞中的染色體數(shù)目就會增加一倍)。既然在形成生殖細胞精子或卵細胞時，染色體數(shù)目要減少一半，則原細胞必須經(jīng)過減數(shù)

15、分裂。 減數(shù)分裂是一種特殊分裂方式的細胞分裂，僅在配子形成過程中發(fā)生。這一過程的特點是：連續(xù)進行兩次核分裂，而染色體只復制一次，結(jié)果形成四個核，每個核只含單倍數(shù)的染色體，即染色體數(shù)減少一半，所以稱減數(shù)分裂。在此過程中先由有性組織（花藥或胚珠）中的某些細胞分化為二倍性的小孢子母細胞或大孢子母細胞，這些細胞連續(xù)進行兩次細胞分裂即減數(shù)第一分裂和減數(shù)第二分裂，結(jié)果一個小孢子母細胞形成4個小孢子，一個大孢子母細胞形成一個大孢子，它們都只具有單倍的染色體。另外一個特點是前期特別長，而且變化復雜，包括同源染色體的配對、交換與分離等。在適當?shù)臅r機采集植物的花蕾或動物的精巢，經(jīng)過固定、染色、壓片后，就可以在顯微

16、鏡下觀察細胞的減數(shù)分裂。減數(shù)分裂在遺傳上有重要意義。性母細胞(2n)經(jīng)過減數(shù)分裂形成染色體數(shù)目減半的配子(n)。經(jīng)過受精作用雌雄配子融合為合子，染色體數(shù)目恢復為2n 。這樣在物種延續(xù)的過程中確保了染色體數(shù)目的恒定，從而使物種在遺傳上具有相對的穩(wěn)定性。另外，在減數(shù)分裂過程中包含有同源染色體的配對、交換、分離和非同源染色體的自由組合，這些都是遺傳學分離、自由組合和連鎖互換規(guī)律的細胞學基礎(chǔ)。在這些基本規(guī)律的作用之下，導致了各種遺傳重組的發(fā)生，而遺傳重組又是生物變異的重要源泉。1-1-4植物染色體的組型分析染色體是遺傳物質(zhì)的載體，各種生物染色體的數(shù)目、形態(tài)、結(jié)構(gòu)都是相當穩(wěn)定的。在二倍體生物中，配子所含

17、有的全套染色體稱為染色體組型或核型，包括染色體數(shù)目、形態(tài)、大小、著絲點位置及副縊痕、隨體的有無等特征。染色體組型分析，就是對染色體組中的染色體做上述各種形態(tài)特征的描述，對染色體標本和其照片進行測量、對比分析、配對、分組、排列和編號。組型分析所用的材料可以是有絲分裂時期的細胞也可以是減數(shù)分裂時期的細胞。染色體組型分析對研究遺傳疾病的機理，物種的親緣關(guān)系以及遠緣雜種的鑒定，基因工程等方面都有著重要的意義。染色體組型分析方法為兩大類，一類是分析體細胞有絲分裂時期的染色體數(shù)目和形態(tài)。另一類是分析減數(shù)分裂時期的染色體數(shù)目和形態(tài)，都能得到染色體組型。各染色體的長臂與短臂之比稱為臂率。臂率 1.0-1.7

18、為中部著絲粒染色體，用M表示1.7-3.0 近中部著絲粒染色體，用SM表示3.0-7.0 近端部著絲粒染色體，用ST表示7.0以上 為端部著絲粒染色體，用T表示SAT代表具有隨體的染色體，計算染色體的長度時，可以包括隨體也可以不包括，但是都要注明。1-2 遺傳物質(zhì)的分子基礎(chǔ)1-2-1綜述生物性狀的遺傳和變異都是由遺傳物質(zhì)控制的，基因存在于染色體上。染色體主要由 DNA 、組蛋白、非組蛋白、以及 RNA 組成。 DNA 和組蛋白的分量大致相等，兩者相加，構(gòu)成了染色體的大部分。非組蛋白的比率變化很大， RNA 含量很低。 DNA是一切生物細胞的重要組成成分，主要存在于細胞核中，鹽溶法是提取DNA的

19、常規(guī)技術(shù)之一。從細胞中分離得到的DNA是與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA，其中還含有大量RNA，即核糖核蛋白。如何有效地將這兩種核蛋白分開是技術(shù)的關(guān)鍵。DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液中，而RNA則能溶于0.14mol/L的NaCl溶液之中，利用這一性質(zhì)就可以將二者從破碎細胞漿液中分開。制備過程中，細胞破碎的同時就有Dnase釋放到提取液中，使DNA因被降解而影響得率，在提取緩沖液中加入適量的檸檬酸鹽和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白質(zhì)變性而與核酸分離，再加入陰離子去垢劑0.15的SDS，經(jīng)過2h攪拌，或用氯仿異醇除去蛋白，通過離心使蛋白質(zhì)沉淀而除去，得到的是含有核酸的上清液。然后用95

20、的預冷乙醇即可把DNA從除去蛋白質(zhì)的提取液中沉淀出來。 1-2-2兩類核酸及其分布 核酸（ nucleic acid）是一種高分子化合物。構(gòu)成核酸的基本單元是核苷酸（nucleotide）。核酸是核苷酸的多聚體。每個核苷酸又由三部分組成：五碳糖、磷酸和環(huán)狀的含氮堿基。含氮堿基共有 5種：兩種雙環(huán)結(jié)構(gòu)的嘌呤（purine）和三種單環(huán)結(jié)構(gòu)的嘧啶（pyrimidine）。嘌呤有腺嘌呤（A）和鳥嘌呤（G）；嘧啶有胞嘧啶（C）、胸腺嘧啶（T）和尿嘧啶（U）。 在多聚體中，兩個核苷酸之間由5'和3'位的磷酸二脂鍵相連。核酸有兩種：核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）。此外， DNA通

21、常以雙鏈形式存在，RNA則多以單鏈形式存在。    在真核生物中，絕大部分 DNA存在于細胞核內(nèi)的染色體上，少量DNA存在于細胞質(zhì)中的葉綠體、線粒體等細胞器中。 RNA在細胞核和細胞質(zhì)中都有，在核內(nèi)，RNA主要集中在核仁上，少量在染色體上。細菌也含有DNA和RNA。多數(shù)噬菌體只含有 DNA；多數(shù)植物病毒只含有RNA；動物病毒有的含RNA，有的含DNA。 1-3 植物細胞組織分化 1-3-1概述分化了的植物根、莖、葉細胞往往具有全能性，在一定條件下進行離體培養(yǎng)，給于一定的營養(yǎng)與激素，可以脫分化為愈傷組織，由愈傷組織制備成細胞懸浮液，在一定的條件下經(jīng)振蕩培養(yǎng)，逐漸形成

22、具有兩極性的胚狀體，經(jīng)過進一步的分化培養(yǎng)，給于不同的營養(yǎng)和激素成分，又可以生出完整的小植株。植物的脫分化和分化培養(yǎng)，證明分化了的植物細胞仍具備形成全整植株所需要的全套基因。在一定條件下，活動的基因可以關(guān)閉、已關(guān)閉的基因又可以重新啟動、再行由胚到成熟植株發(fā)育過程中有關(guān)基因的先后活動程序。脫分化培養(yǎng)基和分化培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于激素的成分和含量上，說明各種激素的出現(xiàn)和含量改變對于植物組織分化起著重要的作用。許多植物從脫分化到分化過程對培養(yǎng)基里激素成份要求嚴格、有的還要進行液體培養(yǎng)才能重新分化。例如，胡蘿卜貯藏根組織，是最早用于研究植物細胞的全能性的材料，至今仍是研究脫分化的好材料，但當胡蘿卜組織形成

23、愈傷組織之后，若要它們重新分化，必須經(jīng)過振蕩培養(yǎng)和采用合適的培養(yǎng)基，條件較為復雜。另一些植物，例如煙草的根、莖、葉和甘藍的花莖等容易進行脫分化和分化培養(yǎng)，不需液體振蕩培養(yǎng)可以在固體培養(yǎng)基上直接完成，是兩類較好的實驗材料。1-3-2植物組織培養(yǎng)一、愈傷組織花藥培養(yǎng) anther culture 用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，把發(fā)育到一定階段的花藥，通過無菌操作技術(shù)，接種在人工培養(yǎng)基上，以改變花藥內(nèi)花粉粒的發(fā)育程序，誘導其分化，并連續(xù)進行有絲分裂，形成細胞團，進而形成一團無分化的薄壁組織愈傷組織，或分化成胚狀體，隨后使愈傷組織分化成完整的植株。亦稱愈合組織或創(chuàng)傷組織。植物體局部受傷后，在傷口表面形成的具有分

24、生能力和保護作用的活的薄壁細胞群。愈傷組織的外層細胞常可木質(zhì)化或形成周皮，對其表層的細胞起保護作用。在植物嫁接中愈傷組織促使砧木與接穗緊密結(jié)合，植物扦插能從愈傷組織分化出不定根和不定芽；在組織和細胞培養(yǎng)時，條件適宜也能長出愈傷組織。利用愈傷組織誘導形成新植株已廣泛應用于植物的無性繁殖。 在植物組織培養(yǎng)中，主要目標是誘導愈傷組織形成和形態(tài)發(fā)生，使一個離體的細胞、一塊組織或一個器官的細胞，通過脫分化形成愈傷組織愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式主要有不定芽方式和胚狀體方式兩種。不定芽方式是在某些條件下，愈傷組織中的分生細胞發(fā)生分化，形成不同的器官原基，再逐漸形成芽和根。胚狀體方式是由愈傷組織細胞誘導分化出具有

25、胚芽、胚根、胚軸的胚狀結(jié)構(gòu)，進而長成完整植株。這種由愈傷組織中的薄壁細胞不經(jīng)過有性生殖過程，直接產(chǎn)生類似于胚的結(jié)構(gòu)，叫做胚狀體。不定芽方式和胚狀體方式是植物組織培養(yǎng)中最常見和最重要的兩種方式。胚狀體方式比不定芽方式有更多的優(yōu)點，如胚狀體產(chǎn)生的數(shù)量比不定芽多，胚狀體可以制成人工種子，等等。1-4孟德爾遺傳規(guī)律1-4-1概述在孟德爾從事的大量植物雜交試驗中，以豌豆雜交試驗的成績最為出色。經(jīng)過整整8年（1856-1864）的不懈努力，終于在1865年發(fā)表了植物雜交試驗的論文，提出了遺傳單位是遺傳因子（現(xiàn)代遺傳學稱為基因）的論點，并揭示出遺傳學的兩個基本規(guī)律分離規(guī)律和自由組合規(guī)律。這兩個重要規(guī)律的發(fā)現(xiàn)

26、和提出，為遺傳學的誕生和發(fā)展奠定了堅實的基礎(chǔ)，這也正是孟德爾名垂后世的重大科研成果。孟德爾的這篇不朽論文雖然問世了，但令人遺憾的是，由于他那不同于前人的創(chuàng)造性見解，對于他所處的時代顯得太超前了，竟然使得他的科學論文在長達35年的時間里，沒有引起生物界同行們的注意。直到1900年，他的發(fā)現(xiàn)被歐洲三位不同國籍的植物學家在各自的豌豆雜交試驗中分別予以證實后，才受到重視和公認，遺傳學的研究從此也就很快地發(fā)展起來。1-4-2孟德爾的分離規(guī)律豌豆具有一些穩(wěn)定的、容易區(qū)分的性狀，這很符合孟德爾的試驗要求。所謂性狀，即指生物體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理、生化等特性的總稱。在他的雜交試驗中，孟德爾全神貫注地研究了7對相

27、對性狀的遺傳規(guī)律。所謂相對性狀，即指同種生物同一性狀的不同表現(xiàn)類型，如豌豆花色有紅花與白花之分，種子形狀有圓粒與皺粒之分等等。為了方便和有利于分析研究起見，他首先只針對一對相對性狀的傳遞情況進行研究，然后再觀察多對相對性狀在一起的傳遞情況。這種分析方法是孟德爾獲得成功的一個重要原因。一、顯性性狀與隱性性狀大家知道，孟德爾的論文的醒目標題是植物雜交試驗，因此他所從事試驗的方法，主要是“雜交試驗法”。他用純種的高莖豌豆與矮莖豌豆作親本（親本以P表示），在它們的不同植株間進行異花傳粉。如圖2-4所示高莖豌豆與矮莖豌豆異花傳粉的示意圖。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論是以高莖作母本，矮莖作父本，還是以高莖作父本，矮莖作

28、母本（即無論是正交還是反交），它們雜交得到的第一代植株（簡稱“子一代”，以F1表示）都表現(xiàn)為高莖。也就是說，就這一對相對性狀而言，F(xiàn)1植株的性狀只能表現(xiàn)出雙親中的一個親本的性狀高莖，而另一親本的性狀矮莖，則在F1中完全沒有得到表現(xiàn)。又如，純種的紅花豌豆和白花豌豆進行雜交試驗時，無論是正交還是反交，F(xiàn)1植株全都是紅花豌豆。正因為如此，孟德爾就把在這一對性狀中，F(xiàn)1能夠表現(xiàn)出來的性狀，如高莖、紅花，叫做顯性性狀，而把F1未能表現(xiàn)出來的性狀，如矮莖、白花，叫做隱性性狀。孟德爾在豌豆的其他5對相對性狀的雜交試驗中，都得到了同樣的試驗結(jié)果，即都有易于區(qū)別的顯性性狀和隱性性狀。二、分離現(xiàn)象及分離比在上述的

29、孟德爾雜交試驗中，由于在雜種F1時只表現(xiàn)出相對性狀中的一個性狀顯性性狀，那么，相對性狀中的另一個性狀隱性性狀，是不是就此消失了呢？能否表現(xiàn)出來呢？帶著這樣的疑問，孟德爾繼續(xù)著自己的雜交試驗工作。孟德爾讓上述F1的高莖豌豆自花授粉，然后把所結(jié)出的F2豌豆種子于次年再播種下去，得到雜種F2的豌豆植株，結(jié)果出現(xiàn)了兩種類型：一種是高莖的豌豆（顯性性狀），一種是矮莖的豌豆（隱性性狀），即：一對相對性狀的兩種不同表現(xiàn)形式高莖和矮莖性狀都表現(xiàn)出來了。孟德爾的疑問解除了，并把這種現(xiàn)象稱為分離現(xiàn)象。不僅如此，孟德爾還從F2的高、矮莖豌豆的數(shù)字統(tǒng)計中發(fā)現(xiàn)：在1064株豌豆中，高莖的有787株，矮莖的有277株，兩

30、者數(shù)目之比，近似于31。如圖2-4A所示。孟德爾以同樣的試驗方法，又進行了紅花豌豆的F1自花授粉。在雜種F2的豌豆植株中，同樣也出現(xiàn)了兩種類型：一種是紅花豌豆（顯性性狀），另一種是白花豌豆（隱性性狀）。對此進行數(shù)字統(tǒng)計結(jié)果表明，在929株豌豆中，紅花豌豆有705株，白花豌豆有224株，二者之比同樣接近于31。三、分離規(guī)律的驗證前面講到孟德爾對分離現(xiàn)象的解釋，僅僅建立在一種假說基礎(chǔ)之上，他本人也十分清楚這一點。假說畢竟只是假說，不能用來代替真理，要使這個假說上升為科學真理，單憑其能清楚地解釋他所得到的試驗結(jié)果，那是遠遠不夠的，還必須用實驗的方法進行驗證這一假說。下面介紹孟德爾設(shè)計的第一種驗證方法

31、，也是他用得最多的測交法。測交就是讓雜種子一代與隱性類型相交，用來測定F1的基因型。按照孟德爾對分離現(xiàn)象的解釋，雜種子一代F1（Dd）一定會產(chǎn)生帶有遺傳因子D和d的兩種配子，并且兩者的數(shù)目相等；而隱性類型（dd）只能產(chǎn)生一種帶有隱性遺傳因子d的配子，這種配子不會遮蓋F1中遺傳因子的作用。所以，測交產(chǎn)生的后代應當一半是高莖（Dd）的，一半是矮莖（dd）的，即兩種性狀之比為11。如圖2-6所示測交實驗的方法。孟德爾用子一代高莖豌豆（Dd）與矮莖豌豆（dd）相交，得到的后代共64株，其中高莖的30株，矮莖的34株，即性狀分離比接近11，實驗結(jié)果符合預先設(shè)想。對其他幾對相對性狀的測交試驗，也無一例外地

32、得到了近似于11的分離比。孟德爾的測交結(jié)果，雄辯地證明了他自己提出的遺傳因子分離假說是正確的，是完全建立在科學的基礎(chǔ)上的。1-4-3孟德爾的自由組合規(guī)律一、自由組合現(xiàn)象及比例孟德爾在揭示了由一對遺傳因子（或一對等位基因）控制的一對相對性狀雜交的遺傳規(guī)律分離規(guī)律之后，這位才思敏捷的科學工作者，又接連進行了兩對、三對甚至更多對相對性狀雜交的遺傳試驗，進而又發(fā)現(xiàn)了第二條重要的遺傳學規(guī)律，即自由組合規(guī)律，也有人稱它為獨立分配規(guī)律。這里我們僅介紹他所進行的兩對相對性狀的雜交試驗。雜種F1（YyRr）能夠產(chǎn)生四種不同類型、相等數(shù)量的配子。當雜種F1自交時，這四種不同類型的雌雄配子隨機結(jié)合，便在F2中產(chǎn)生1

33、6種組合中的9種基因型合子。由于顯隱性基因的存在，這9種基因型只能有四種表現(xiàn)型，即：黃色圓形、黃色皺形、綠色圓形、綠色皺形。如圖2-8所示它們之間的比例為9331。這就是孟德爾當時提出的遺傳因子自由組合假說，這個假說圓滿地解釋了他觀察到的試驗結(jié)果。事實上，這也是一個普遍存在的最基本的遺傳定律，這就是孟德爾發(fā)現(xiàn)的第二個遺傳定律自由組合規(guī)律，也有人稱它為獨立分配規(guī)律。二、自由組合規(guī)律的驗證與分離規(guī)律相類似，要將自由組合規(guī)律由假說上升為真理，同樣也需要科學試驗的驗證。孟德爾為了證實具有兩對相對性狀的F1雜種，確實產(chǎn)生了四種數(shù)目相等的不同配子，他同樣采用了測交法來驗證。把F1雜種與雙隱性親本進行雜交，

34、由于雙隱性親本只能產(chǎn)生一種含有兩個隱性基因的配子（yr），所以測交所產(chǎn)生的后代，不僅能表現(xiàn)出雜種配子的類型，而且還能反映出各種類型配子的比數(shù)。換句話說，當F1雜種與雙隱性親本測交后，如能產(chǎn)生四種不同類型的后代，而且比數(shù)相等，那么，就證實了F1雜種在形成配子時，其基因就是按照自由組合的規(guī)律彼此結(jié)合的。1-4-4孟德爾遺傳規(guī)律在理論和實踐上的意義孟德爾的分離規(guī)律和自由組合規(guī)律是遺傳學中最基本、最重要的規(guī)律，后來發(fā)現(xiàn)的許多遺傳學規(guī)律都是在它們的基礎(chǔ)上產(chǎn)生并建立起來的，它猶如一盞明燈，照亮了近代遺傳學發(fā)展的前途。1理論應用從理論上講，自由組合規(guī)律為解釋自然界生物的多樣性提供了重要的理論依據(jù)。大家知道，

35、導致生物發(fā)生變異的原因固然很多，但是，基因的自由組合卻是出現(xiàn)生物性狀多樣性的重要原因。比如說，一對具有20對等位基因（這20對等位基因分別位于20對同源染色體上）的生物進行雜交，F(xiàn)2可能出現(xiàn)的表現(xiàn)型就有2201048576種。這可以說明現(xiàn)在世界生物種類為何如此繁多。當然，生物種類多樣性的原因還包括基因突變和染色體變異，這在后面還要講到。分離規(guī)律還可幫助我們更好地理解為什么近親不能結(jié)婚的原因。由于有些遺傳疾病是由隱性遺傳因子控制的，這些遺傳病在通常情況下很少會出現(xiàn)，但是在近親結(jié)婚（如表兄妹結(jié)婚）的情況下，他們有可能從共同的祖先那里繼承相同的致病基因，從而使后代出現(xiàn)病癥的機會大大增加。因此，近親結(jié)

36、婚必須禁止，這在我國婚姻法中已有明文規(guī)定。2實踐應用孟德爾遺傳規(guī)律在實踐中的一個重要應用就是在植物的雜交育種上。在雜交育種的實踐中，可以有目的地將兩個或多個品種的優(yōu)良性狀結(jié)合在一起，再經(jīng)過自交，不斷進行純化和選擇，從而得到一種符合理想要求的新品種。比方說，有這樣兩個品種的番茄：一個是抗病、黃果肉品種，另一個是易感病、紅果肉品種，現(xiàn)在需要培育出一個既能穩(wěn)定遺傳，又能抗病，而且還是紅果肉的新品種。你就可以讓這兩個品種的番茄進行雜交，在F2中就會出現(xiàn)既抗病又是紅果肉的新型品種。用它作種子繁殖下去，經(jīng)過選擇和培育，就可以得到你所需要的能穩(wěn)定遺傳的番茄新品種。1-5染色體數(shù)目的改變 各種生物都有一定的特

37、征性的染色體數(shù)目。已知真核生物中染色體數(shù)最少的種是2n=2-4（馬蛔蟲），植物： 纖細單冠菊2n=4，瓶爾小草屬中有些種的染色體多達2n=1024。 一般2n=10100之間。 不同數(shù)目的染色體在細胞中不是簡單的聚集，而是以染色體組的形式存在。1-5-1染色體組和染色體倍性 在介紹細胞的減數(shù)分裂時，我們介紹過同源染色體和非同源染色體的概念。同源染色體（homo logous chromosome）是指形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上相同的染色體。所以，在細胞中存在著“相同”或“不同”的染色體。 染色體組（genome）：在一個染色體組內(nèi)的各個染色體在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能方面互不相同，但卻是一個和諧的整體，對于細

38、胞或個體的發(fā)育來說，是缺一不可的。 討論：“一個正常配子中所包含的染色體數(shù)?！?說明：(1)染色體組內(nèi)每條染色體的形態(tài)和功能雖然各不相同，但它們包含著生物體生長發(fā)育所必須的全部遺傳物質(zhì)，沒有多余，缺失其中任何一條都將出現(xiàn)性狀或育性的變異。如雄蜂、雄蟻。 (2)染色體組內(nèi)沒有同源染色體，但非同源染色體并不一定在一個染色體組。（缺一不可的非同源染色體） (3)染色體組所包括的染色體數(shù)用x表示。 不同的生物體中所包含的染色體組的數(shù)目是不同的，體細胞中的染色體組可以是一個或多個。其中： 一倍體（monoploid）： 只含有一個染色體組的個體或細胞，如二倍體生物的配子，如玉米 x = 10，蜜蜂的雄蜂

39、 x = 16 二倍體（diploid）： 含有二個染色體組的個體或細胞。一般生物。 三倍體（triploid）： 具有三個染色體組的細胞或個體。如三倍體西瓜。 四倍體（tetraploid）： 具有四個染色體組的細胞或個體。如4倍體蕃茄 x=12 4x=48 多倍體（polyploid）：細胞或個體中的染色體組數(shù)多于二個。 一倍體、二倍體、多倍體，這類染色體的變化是以染色體組為單位的增減，所以稱為倍數(shù)性變異，而把體細胞內(nèi)含有完整的染色體組的類型稱為整倍體（euploid）。 如果在二倍體的基礎(chǔ)上，增加或減少個別染色體，則屬于非整倍性（uneuploidy）變異，這種變異的細胞或個體叫非整倍體

40、（uneuploid）。1-5-2整倍體的類別及其遺傳表現(xiàn) 一、 單倍體（haploid） （一）概念：是具有配子染色體數(shù)的個體或細胞的總稱。 (1)單倍體與一倍體的區(qū)別： 配子中包含的染色體組數(shù)可以不同，如4倍體西紅柿，配子的染色體數(shù)是24，而x=12。所以單倍體中包含的染色體組數(shù)可以一至多個。配子染色體數(shù)為n，n可以是x的倍數(shù)。(2)單倍體(3)并不是只有配子是單倍體。 如菌絲體、雄蜜蜂。 （二）產(chǎn)生： (1) (2)屬正常。 (3) (4)屬異常。 (1)性細胞配子。 菌絲體有性過程的產(chǎn)物。 (2)體細胞雄蜜蜂、白蟻、螞蟻孤雌生殖的產(chǎn)物。由未受精卵發(fā)育而成。能產(chǎn)生有效精子假減數(shù)分裂（不分

41、向兩極） (3)自發(fā)產(chǎn)生無融合生殖（apomixis）的產(chǎn)物。36種植物 原因： a單倍體孤雌生殖（haploid parthenogenesis，未受精，水稻） b單雄生殖（androgenesis，精核，煙草）。 (4)人工產(chǎn)生花粉培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、球莖大麥法 （三）遺傳表現(xiàn) (1)一般不能正常發(fā)育： 與二倍體相比，體型小，生活力弱，有時白化隱性不利基因得以表現(xiàn)，體內(nèi)代謝不諧調(diào)之故。(2)高度不育：沒有聯(lián)會，無規(guī)律分離。玉米(3)同源多倍體的可育性。如馬鈴薯、紫苜蓿等。 （四）應用 (1)無直接應用價值。 育種上淘汰不利基因。選擇。 (2)獲得基因型的純合體：染色體加倍，得純合二倍體。 (3

42、)研究基因突變單倍體，加倍單倍體。 （五）花粉形成單倍體植株有兩種方式：（1）.花粉形成愈傷組織，再由愈傷組織分化成單倍體植株，如水稻、麥類等作物。（2）.花粉不經(jīng)愈傷組織，直接形成胚狀體，如煙草、曼陀羅等。花粉粒形成愈傷組織或胚狀體，二者間不存在絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中生長素的濃度。雜交育種是選育新品種最常用的方法，由于雜種后代的分離，要得到一個穩(wěn)定的品系，通常要經(jīng)過五年以上的選擇，應用花藥培養(yǎng)，第二年能得到純合的二倍體。1-5-3 同源多倍體（autopolyploid） （一）概念  具有三個以上相同染色體組的細胞或個體 如曼陀羅4x=48 香焦3x=33 黃花菜3x=3

43、3 大麗菊 （二）產(chǎn)生： 通常二倍體的染色體加倍而成為同源四倍體，同源四倍體和原來的二倍體雜交，可產(chǎn)生同源三倍體。 (1)體細胞有絲分裂 染色體復制而細胞不分裂嵌合體（自然，少見） (2)減數(shù)分裂未減數(shù)的配子四倍體、三倍體（自然，可能性大） (3)機械損傷部位。 如番茄，10%是四倍體（茄屬） (4)人工誘發(fā)體細胞染色體加倍。 A. F. Blokeslee（1937）在曼陀羅加倍中發(fā)現(xiàn)。秋水仙素溶液最為有效（0.011.0%）。作用：抑制紡錘體的形成，對分裂中的細胞起作用。注意處理時間、溫度、濃度。 實例： 水稻、小麥、桑、茶、葡萄、西瓜。 形成同源多倍體的頻率： (1)自花授粉植物>

44、異花 (2)多年生>一年生 (3)動物中罕見 ，原因：a.性染色體， b.，異體。 （三）遺傳表現(xiàn) (1)表型特征（四倍體）： a. 形態(tài)巨大性（細胞核、莖、葉、花、種子），也有例外；b. 代謝活性增強（大麥蛋白質(zhì)1012%，玉米的類胡羅卜素40%，番茄Vc一倍）劑量效應；c.發(fā)育延遲，結(jié)實率低；d.三倍體植物具有很強的生活力。 (2)減數(shù)分裂 配對特點： 同源染色體有四（三）個相同，在任何區(qū)段內(nèi)只有兩條之間配對。同染四倍體聯(lián)會和分離形式： a. 一個四價體（）：分離結(jié)果或2/2（可育，如曼陀羅4x=48）或3/1。 b. 兩個二價體（+）分離2/2（可育）。 c. 三價體加一（+）2/

45、2，3/1，2/1。 d. 二價體加兩個一價體2/2，3/1，2/1，1/1。 同源三倍體的聯(lián)會與分離： a三價體，2/1。 b二價加一，2/1，1/1。 同源多倍體多數(shù)是部分不育或高度不育的（特別是三倍體），主要原因是三價體和單價體的頻率較高，染色體分配不均，使配子的染色體組不平衡，產(chǎn)生n，2n配子的機會很小，交配更難。 (3)基因型與基因分離： 四倍體比三倍體復雜，因同源染色體有4條，對于一對等位基因A，a可有五種基因型： 同質(zhì)結(jié)合的：AAAA（四顯式），aaaa（零顯式）。 異質(zhì)結(jié)合的：AAaa（三顯體triplex），AAaa（二顯體duplex），Aaaa（單顯體simplex）。

46、對于同源四倍體AAaa：     a. 配子種類和比例AAAaaa=141     b. 自交子代基因型比例A4A3aA2a2Aa3a4=181881/36；     c. 表型比例A_aa=351/36 （4）應用： 同源三倍體高度不育，但許多三倍體卻具有很強的生命力,營養(yǎng)器官十分繁茂。自然界中的香蕉、黃花菜、水仙都是三倍體。 (1)三倍體甜菜，產(chǎn)糖率比2n提高1015%。 (2)三倍體楊樹，生長速度為2n的二倍。 (3)三倍體杜鵑花，開花期特別長。 (4)三倍體無籽西瓜，2n=22  

47、60;   四、異源多倍體（allopolyploid） （一）概念： 加倍的染色體來源于不同的物種 自然界中的異源多倍體幾乎都是偶數(shù)倍性的（每個染色體組都有兩個）。奇數(shù)倍性的異源多倍體除非可以無性繁殖，一般不能保存下去。 有許多異源多倍體是部分異源多倍體（在它們的不同染色體組之間存在著部分同源區(qū)段）。一般進行同源聯(lián)會（autosynapsis），只有當同源染色體不存在時，才發(fā)生部分同源染色體的聯(lián)會異源聯(lián)會（auosynapsis）。根據(jù)異源聯(lián)會的情況可以知道不同染色體組之間的關(guān)系。分析異源聯(lián)會的最好材料是多元單倍體，普通小麥是部分異源多倍體。1A1B1D。 節(jié)段異源多倍體

48、：不同染色體組之間部分同源的程度很高。如洋蔥和蔥，染色體聯(lián)會出現(xiàn)二價體和四價體、多價體。當然有的異源多倍體的不同染色體組之間毫無同源關(guān)系。如羅卜甘蘭（2n=18，RR）（2n=18，BB）是不同屬的植物。其雜種RB18I，互不配對。偶爾F1未減數(shù)配子受精而成RRBB新種,但沒有經(jīng)濟價值。   （二）產(chǎn)生： (1)不同種、屬間雜交，雜種的染色體加倍而成。（自然的或人為的，主要形成方式） (2)人工誘發(fā) 五、同源異源多倍體      如AAAABB 已知 菊芋（2n=102）×向日葵（2n=34） 2n=68（減數(shù)分裂完全正常3

49、4）， 說明菊芋配子中有一個染色體組是重復的，同時還有一個染色體組與向日葵相同。菊芋的染色體組成可能是AAAABB，向日葵是BB。 六、多倍體人工誘導方法人工誘導多倍體的方法很多，分為物理的和化學的誘導方法。其中，秋水仙素是引變多倍體植物的最有效的方法之一。秋水仙素是從百合科秋水仙屬的一個種秋水仙的器官和種子內(nèi)提煉出來的一種植物堿。因有劇毒，故使用時要特別注意，切勿使藥液進入眼內(nèi)或口中。秋水仙素誘發(fā)植物產(chǎn)生多倍體的作用是極其顯著的。它的作用在于阻止分裂細胞產(chǎn)生紡錘絲，而對染色體的結(jié)構(gòu)和復制無顯著影響。若濃度適合，藥劑在細胞中擴散后，不致發(fā)生嚴重毒害，細胞經(jīng)一定時期后仍可恢復常態(tài)，繼續(xù)分裂，只是

50、染色體數(shù)目加倍成多倍性細胞，并在此基礎(chǔ)上進一步發(fā)育成多倍體植物。1-5-4 同工酶（isozymes）同工酶是指作用于底物相似或完全相同的酶的不同分子形式，即催化同一種反應而結(jié)構(gòu)不同的一族酶，它們是受遺傳體系決定的酶的不同分子形式。利用凝膠電泳技術(shù)可以將它們分開，用專一的作用底物和特殊染料，把需要分析的酶染色，在膠柱上同工酶的不同分子形式，可以出現(xiàn)在同一生物的不同發(fā)育時期，所以取不同期的材料，酶帶的情況就不一樣，這是同工酶技術(shù)適用于發(fā)育研究的方便之處。另一方面，利用同工酶技術(shù)進行遺傳學分析與群體遺傳學研究時，則特別要求取材的一致性。否則，它們之間的差異可能不是遺傳而是由發(fā)育造成的。例如要比較兩

51、個品種蠶豆的遺傳差別，可用它們的發(fā)芽種子進行比較。但這時至少應該檢查是否是同年的種子、是否在發(fā)芽前都曬過種、是否是同時浸種，是否是恒溫發(fā)芽，以及是否是取同樣部位和同樣分量等。第二部分 園藝植物遺傳實驗基本知識2-1 實驗室安全管理制度  2-1-1實驗室工作人員職責：錯誤！未找到索引項。1 嚴格遵守學校各項規(guī)章制度，認真執(zhí)行坐班制，不遲到、早退，不擅離崗位，遇特殊情況外出，及時掛牌通知。2 樹立為教學服務(wù)的思想，認真學習有關(guān)教學大綱和教材，刻苦鉆研業(yè)務(wù)，努力勤奮地學習和工作，及時了解教學進度，安排好切實可行的實驗計劃，并協(xié)同教師認真落實各種實驗聯(lián)系單制度，確保100的實驗開出率。認真

52、領(lǐng)會實驗要求，做好學生實驗的各項準備工作，幫助教師做好演示實驗。3 全面負責一個學科的實驗室管理工作，儀器室要保持整潔，儀器陳放整齊規(guī)范，儀器帳物清楚規(guī)范，做到帳帳、帳物相符，并認真做好儀器添置、申報、驗收、上帳，及時做好儀器的清點、報損、一般的維修保養(yǎng)等有關(guān)工作。4 做好每學期的儀器自查，每年一次清查登記、造冊工作，并與總財產(chǎn)核對一次，保證正確無誤。5 積極參加教研活動，及時向教師介紹新儀器、新實驗，認真做好實驗室、儀器室的安全保衛(wèi)工作，管好各樓道大門。6 嚴格遵守實驗室管理制度，安全實行專人負責，切實做好水、火、電等安全防范工作，及時管好實驗樓樓道的電燈。危險藥品有專人負責，專柜保存使用，

53、杜絕事故的發(fā)生，為師生創(chuàng)造良好的教學環(huán)境。7 做好衛(wèi)生保潔工作。8 積極配合課外小組活動，做好各項有關(guān)工作。9 完成教導主任、校長交給的其他工作，完成教委儀器站布置的各項工作。2-1-2實驗室管理制度（一）儀器使用辦法：1 演示需要儀器，早三天通知，并填好實驗預約通知單，分組實驗早一個星期通知，并填好實驗預約通知單，演示實驗儀器用后及時歸還到儀器室（分組實驗儀器安排好后，通知上課老師）。做好實驗后，通知實驗教師收回儀器并驗收。2 教師演示和學生實驗過程，應嚴格注意安全，使用危險藥品時必須先經(jīng)領(lǐng)導批準，正確配置，教師與實驗教師一起稱出數(shù)量，填好物品使用單，用后必須及時回收清理，并在物品使用單上寫

54、明回收數(shù)量情況等。3 學校儀器一律不許隨便拆裝，如確實需拆裝時，應說明理由，由學校批準。拆裝后并按時復原。貴重精密儀器應報請上級批準。4 教師要教育學生嚴格遵守實驗制度，并要求學生愛護儀器財物，保持實驗室整潔。（二）借用制度：1 外系借用儀器須由系領(lǐng)導批準。2 教工因工作需要，需借用儀器、工具，要有借條。3 本組教師用工具要有借條。（三）賠償制度：1 教師做實驗時如損壞儀器，須說明原因并向?qū)嶒灲處煹怯洝７惨蚬ぷ鞑回撠熑味鴵p壞者，要負責賠償。2 學生實驗時，凡不按實驗規(guī)章行事或任意破壞損壞儀器者，除教育批評外，需上報教導處，并酌情賠償。（四）管理制度：1 自購及下?lián)軆x器須及時分類登記。2 儀器應

55、經(jīng)常保持整潔，每學期清點一次。如有缺少，及時查明原因。3 配合各科教師保管儀器。如有破損及時維修，每年暑假檢修一次。4 每年與系財產(chǎn)保管員核對一次，做到帳帳相符，帳物相符，以防止危險物品丟失。5 對有毒和易燃易爆的實驗藥品要嚴格管理和存放。6 禁止學生攜帶煙花、爆竹等易燃易爆的物品進入實驗室，在沒有教師允許的情況不準使用明火。 2-2顯微操作技術(shù)微操作技術(shù)（micromanipulation technique）是指在高倍復式顯微鏡下，利用顯微操作器（micromanipulator）進行細胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動的機械裝置。顯微操作的基礎(chǔ)平

56、臺-倒置研究級顯微鏡（例如OLYMPUS的IX71/81）各種活細胞應用實驗，如顯微操作、細胞培養(yǎng)，IVF，ICSI等. 顯微鏡的觀察方式一定要選擇-浮雕相襯觀察方式(簡稱RC觀察方式).絕對不能選擇相差觀察方式，因為相差觀察在顯微鏡觀察下只能看到平面效果，根本沒有3D效果，這樣在做顯微操作時很難進行注射，因為都是平面效果，下針比較困難，所以顯微鏡的觀察方式一定要選擇-浮雕相襯觀察方式，顯微操作的最佳選擇:浮雕相襯觀察方式(簡稱RC).原因在于浮雕相襯系統(tǒng)能夠產(chǎn)生高反差的3D 圖像，可用于塑料器皿中的樣品。浮雕相襯用于細胞受精，使細胞核膜可以更容易看到和穿刺。所以選擇好的顯微鏡和觀察方式是完成

57、顯微操作系統(tǒng)的前提條件。顯微操作器目前大都是美國的SUTTER，其中MP-225是4軸移動。目前比較流行4軸移動，當然3軸移動的顯微操作器也很多。還有美國SD操作器，美國的WPI，日本的成茂操作器，這幾款目前占有率高。顯微操作技術(shù)包括細胞核移植、顯微注射、嵌合體技術(shù)、胚胎移植以及顯微切割等該實驗會需要到拉針儀等其它顯微操作實驗裝備 2-3顯微鑒定的方法進行顯微鑒定，首先根據(jù)觀察的對象和目的，選擇具有代表性的生藥，制作不同的顯微制片，包括組織制片、表皮制片和粉末制片 。組織制片的方法主要有徒手制片、滑走制片、冰凍制片及石蠟制片等。對植物類中藥，如根、根莖、莖藤、皮、葉等類，一般制作橫切片觀察，必要時制縱切片；果實、種子類須制作橫切片及縱切片觀察；木類藥材須制作橫切片、徑向縱切片及切向縱切片三個面觀察。表皮制片系將表皮細胞組織制成顯微觀察片的一種方法，適用于觀察葉片、花瓣、花萼和其它器官表皮的細胞形狀、氣孔、腺毛、非腺毛的類型和角質(zhì)層的紋理以及各種細胞內(nèi)含物等的顯微特征。粉末制片用于觀察藥材的組織、細胞及細胞后含物特征