談疏肝祛淤方對兔膝早中期骨性關節(jié)炎軟骨的影響

1、談疏肝祛淤方對兔膝早中期骨性關節(jié)炎軟骨的影響    摘要：目的探討以“疏肝郁、祛膝淤”為原則組方的膝舒湯對膝早中期骨性關節(jié)炎軟骨的影響機理。方法選擇成年健康日本大耳白兔30只，雌雄不限，體重2.53.0 kg，隨機分出未造模10只為正常組，20只通過結扎股靜脈造膜8周后隨機分為模型組和中藥治療組，每組10只。中藥治療組以膝舒湯灌胃，模型組以生理鹽水灌胃。于實驗開始后10，12周兩個時相過量麻醉處死，每組每批各5只。打開關節(jié)腔進行關節(jié)軟骨大體觀察，然后切取股骨髁下面全層關節(jié)軟骨，行軟骨的組織學觀察 。結果中藥治療2周軟骨恢復明顯，與模型組2周相比明顯改善（

2、P0.01），但與正常組同時期相比軟骨修復未接近正常（P0.01）；中藥治療4周軟骨修復顯著，與生理鹽水對照4周相比明顯改善（P0.01），與正常組同時期相比軟骨修復接近正常（P0.05）。結論以“疏肝郁、祛膝淤”為原則組方的膝舒湯能明顯促進軟骨的修復，使軟骨層次恢復正常，細胞核濃縮得以恢復，軟骨陷窩結構恢復清晰。 關鍵詞：  膝； 骨性關節(jié)炎； 中醫(yī)藥療法； 軟骨； 膝舒湯膝骨性關節(jié)炎（Knee osteroarthritis  KOA ）是一種多發(fā)于老年人的慢性進行性骨關節(jié)疾病，主要病變?yōu)橄リP節(jié)軟骨退行性變和繼發(fā)性骨質增生，本病晚期治療效果不佳，給患者的生活質量帶來極大

3、的影響，故早中期的治療顯得尤為重要。根據(jù)全國名老中醫(yī)朱少廷教授的經驗，作者在臨床實踐中應用以“疏肝郁、祛膝淤”原則組方的膝舒湯（組成：柴胡、當歸、白芍、茯苓、丹皮、羌活、防風、桃仁、紅花、牛膝、木瓜、蜈蚣等）治療中老年骨性關節(jié)炎，取得良好療效1。為進一步探討本治法的作用機理進行此實驗研究。實驗采用結扎兔股靜脈造成骨內高壓，從而造成兔膝早中期骨性關節(jié)炎模型，觀察膝舒湯對兔膝早中期骨性關節(jié)炎的療效，探討其治療機制。1  材料1.1  動物成年健康日本大耳白兔30只，雌雄不限，體重2.53.0 kg，由廣西中醫(yī)學院動物實驗中心提供。1.2  藥品膝舒湯濃縮液：純中藥制劑

4、，主要組成：柴胡、當歸、白芍、茯苓、丹皮、羌活、防風、桃仁、紅花、牛膝、木瓜、蜈蚣等。由廣西中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院制劑室提供，每10 ml相當生藥12 g。生理鹽水，廣西南寧百會藥業(yè)集團有限公司生產，批號0608012。青霉素鈉，華北制藥股份有限公司生產，批號X0601318。20%烏拉坦，中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司，批號20031216。1.3  儀器切開包，灌胃器，切片機，顯微光鏡，組織脫水機，組織包埋機， 漂烘處理儀，恒溫培養(yǎng)箱，石蠟切片機， Olympus 攝影顯微鏡 ， Olympus CH-2 光學顯微鏡等。2  方法2.1  動物分組 日本大耳白兔3

5、0只，隨機分出未造模10只為正常組，20只造模8周后隨機分為模型組和中藥治療組，每組10只。2.2  造模原理  結扎股靜脈，造成靜脈瘀滯，骨內壓升高，使其形成膝早中期骨關節(jié)炎模型。2.3  造模方法  20%烏拉坦4 ml/kg體重，行耳緣靜脈麻醉。將大耳白兔仰臥固定在兔臺上，以右腹股溝中點以下約1.0 cm為中心，作0.5 cm的縱行切口，分離股靜脈，分別在遠、近端雙重結扎股靜脈，在兩道結扎線間將股靜脈剪斷，逐層縫合皮下組織及皮膚。術后青霉素肌注抗炎3 d，分籠飼養(yǎng)，1周后拆線。造模8周后開始治療。2.4  給藥  根據(jù)Meeh-

6、Rubner公式計算兔的給藥劑量，中藥治療組予膝舒湯，1劑/d，相當于生藥12 g·kg-1·d-1，配成30 ml，分早晚兩次灌胃；模型組給予生理鹽水30 ml，分早晚兩次灌胃。2.5  取材  于實驗開始后10，12周分批予過量麻醉處死，每組每批各5只。打開關節(jié)腔進行大體觀察。然后切取股骨髁下面全層關節(jié)軟骨。2.6  病理切片制作及染色  石蠟切片制作：取材后的標本經4 %多聚甲醛溶液固定2448 h，遞增濃度乙醇脫水，石蠟包埋，間斷連續(xù)切片（切片方向：與軟骨表面垂直），厚3 m。蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡下組織學觀察。2.7

7、  結果評分股骨髁下面關節(jié)軟骨組織學觀察采用Mankin評分2。2.8  統(tǒng)計學處理所有實驗數(shù)據(jù)采用SPPS10.0軟件進行分析，以±s表示，采用t檢驗。3  結果3.1  關節(jié)軟骨大體觀察正常組：兩個時相取材時觀察白兔關節(jié)軟骨外觀均呈淡藍色，色澤明亮，邊緣規(guī)整，無裂紋及軟化。模型對照組：第1次取材，白兔關節(jié)軟骨失去原有光澤，變暗淡，觸之較軟，滑膜稍充血，輕度增生，粘連輕；第2次取材，白兔關節(jié)軟骨失去原有光澤，變暗，觸之軟，滑膜充血輕，增生不明顯，粘連輕。中藥治療組：第1次取材時關節(jié)軟骨有光澤，色淡，觸之稍軟，滑膜無充血，輕度增生，粘連輕；第2

8、次取材時觀察白兔關節(jié)軟骨外觀呈淡藍色，色澤亮，邊緣規(guī)整，無裂紋。3.2  關節(jié)軟骨病理學評價見表12。表1  實驗開始8周后繼續(xù)以下處理2周的結果及Mankin評分值（略）中藥（灌服2周）治療組與生理鹽水（灌服2周）模型對照組比較，P0.01，與正常組比較，P0.01；n=5表2  實驗開始8周后繼續(xù)以下處理4周的結果及Mankin評分值（略）中藥（灌服4周）治療組與生理鹽水（灌服4周）模型對照組比較，P0.01，與未造模空白組比較，P0.05；n=5    中藥灌服2周軟骨恢復明顯，與模型生理鹽水灌服2周相比明顯改善，P 0.01，說明兩組間有顯著性差異；但與正常組同時期相比軟骨修復未接近正常，P0.01，說明兩組間有顯著性差異。    中藥灌服4周軟骨修復顯著，表層軟骨細胞多，軟骨面平整，層次清晰，潮線清楚明顯，軟骨細胞餡窩清晰，細胞飽滿，細胞核大，胞漿豐富，基質呈酸性（見圖1）。模型組生理鹽水灌服4周，軟骨表面有破壞，凹凸不平，表層軟骨細胞少，細胞層次不清，軟骨細胞餡窩不清晰，胞漿少，基質偏堿性（見圖2）。正常組表層軟骨細胞多，排列均勻，軟骨面平整，層次清晰，軟骨細胞餡窩不清晰，細胞飽滿，細胞核大，胞漿豐富，基質偏堿性（見圖3）。中藥灌服4周與模型組生理鹽水灌服4周相比軟骨明顯改善（P