藏藥五脈綠絨蒿不同溶劑提取物鎮(zhèn)痛作用的實驗研究(一)

1、藏藥五脈綠絨蒿不同溶劑提取物鎮(zhèn)痛作用的實驗研究(一)    【摘要】 目的 通過用4種極性由強到弱的溶劑水、90 %(v/v)乙醇、氯仿、石油醚(b.r. 3060 )分別提取五脈綠絨蒿全草，以篩選鎮(zhèn)痛活性部位。方法 采用加熱回流法提取五脈綠絨蒿，以氫溴酸高烏甲素為中度以上鎮(zhèn)痛陽性對照藥，利用醋酸致小鼠扭體為指標(biāo)，研究五脈綠絨蒿不同溶劑提取物的鎮(zhèn)痛活性。結(jié)果 五脈綠絨蒿的有機溶劑提取物均能明顯減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)，乙醇提取物組及石油醚提取物組與空白組比較，有高度統(tǒng)計意義(P0.01)。結(jié)論 五脈綠絨蒿的鎮(zhèn)痛活性物質(zhì)主要存在于乙醇提取物中，其次是石油

2、醚提取物。 【關(guān)鍵詞】 綠絨蒿；藏藥；提取物；扭體法綠絨蒿是罌粟科(Papaveraceae)綠絨蒿屬(Meconopsis Vig.)植物的統(tǒng)稱，集中分布在青藏高原及周邊地區(qū)1-3。在中國，有關(guān)綠絨蒿的記載最早可追溯到藏醫(yī)古籍月王藥診，距今約有1200年的歷史。綠絨蒿屬植物是著名的高山欣賞植物，它的美譽“藍罌粟”“歐洲罌粟”“喜馬拉雅罌粟”等已遠播亞非歐。隨著認識的深入，學(xué)者們愈加看重它的藥用價值。在傳統(tǒng)藏醫(yī)中，五脈綠絨蒿(M. quintuplinervia Regel)始終被列為綠絨蒿的藥用品種，始以花入藥，目前也可全株入藥。藏藥志中指出五脈綠絨蒿具有清熱解毒、止痛、消炎之功效，可用于治

3、療頭痛、肺炎、肝炎等4。綠絨蒿品種繁多，藏藥名著晶珠本草記載，不同的綠絨蒿針對不同的病癥。五脈綠絨蒿作為重要的藥用品種之一，鎮(zhèn)痛作用尤佳，在30多個藏藥配方中均用到。為進一步研究五脈綠絨蒿的鎮(zhèn)痛效果，筆者對其進行了活性部位及鎮(zhèn)痛作用強弱等方面的探索，以期為臨床用藥提供實驗依據(jù)。1 實驗材料1.1 實驗動物普通級KM小鼠60只，雌雄兼半，體質(zhì)量(20±2) g，由蘭州大學(xué)實驗動物中心提供，動物許可證號Scxk(甘)20050007。1.2 實驗藥品及試劑五脈綠絨蒿全草購自甘肅省合作市藏醫(yī)院，經(jīng)甘肅省定西市臨洮農(nóng)校盧通寧高級講師鑒定；實驗用五脈綠絨蒿的水、90 %(v/v)乙醇、氯仿、石

4、油醚(b.r. 3060 )提取液，均相當(dāng)于原生藥1.8 g/mL；鎮(zhèn)痛陽性藥物氫溴酸高烏甲素，由甘肅新蘭藥藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號080201；其他試劑均為分析純。2 實驗方法和結(jié)果2.1 不同極性溶劑提取五脈綠絨蒿2.1.1 水提取物的制備稱取五脈綠絨蒿粗粉100 g，用蒸餾水回流提取2次(第1次700 mL，浸漬12 h，回流1.5 h；第2次300 mL，回流1 h)，濾過，合并濾液，減壓回收至20 mL，加90 %乙醇100 mL，以40 %NaOH溶液調(diào)pH=85，濾液濃縮成無醇味干浸膏，得10.25 g。2.1.2 醇提取物的制備稱取五脈綠絨蒿粗粉100 g，用90 %乙醇回流提取

5、2次(第1次700 mL，浸漬12 h，回流1.5 h；第2次300 mL，回流1 h)，濾過，合并濾液，減壓回收至20 mL，以40 %NaOH溶液調(diào)pH=85，濾液濃縮成無醇味干浸膏，得12.02 g。2.1.3 氯仿提取物的制備提取溶劑為氯仿，不調(diào)節(jié)pH，其他按2.1.2項下操作，得干浸膏2.21 g。2.1.4 石油醚提取物的制備提取溶劑為石油醚(b.r. 3060 )，不調(diào)節(jié)pH，其他按2.1.2項下操作，得干浸膏0.25 g。2.2 試藥的配制各浸膏加1 %(v/v)吐溫80研勻，以蒸餾水稀釋至相當(dāng)于原生藥1.8 g/mL；空白組為1 %吐溫80水溶液；陽性藥加1 %吐溫80至0.

6、071 mg/mL。2.3 五脈綠絨蒿提取物對醋酸致小鼠扭體的鎮(zhèn)痛作用的比較將60只KM小鼠均衡隨機分為6組(空白組、陽性組、水提取物組、乙醇提取物組、氯仿提取物組、石油醚提取物組)，每組10只，分別按表1劑量灌胃0.02 mL/g(各提取物溶液均相當(dāng)于原生藥36 g/kg)。1 h后，每組小鼠均靜脈注射0.6 %(v/v)醋酸溶液0.01 mL/g，觀察并記錄注射醋酸后15 min內(nèi)各組小鼠第1次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時間(潛伏期) 及扭體次數(shù)。以扭體次數(shù)為指標(biāo)進行組間差異性t檢驗，并計算鎮(zhèn)痛抑制率6-7。結(jié)果見表1。鎮(zhèn)痛抑制率(%) =空白組扭體均數(shù)-試藥組扭體均數(shù)空白組扭體均數(shù)×100

7、 % 表1五脈綠絨蒿對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響注：與A組比較P0.05，P0.01；與B組比較P0.05，P0.01；與D組比較P0.05由表1可以得出以下結(jié)論：（1）五脈綠絨蒿的不同溶劑提取物中除水提取物外，均能明顯提高小鼠痛閾，其鎮(zhèn)痛由強到弱的順序依次為乙醇提取物、石油醚提取物、氯仿提取物；（2）在五脈綠絨蒿的不同提取物中，乙醇提取物同陽性藥氫溴酸高烏甲素的鎮(zhèn)痛作用相近，余者皆不及陽性藥；（3）各提取物中，石油醚提取物的鎮(zhèn)痛作用與乙醇提取物相比較無統(tǒng)計意義，氯仿提取物和水提取物遠不及乙醇提取物。因此，可斷定五脈綠絨蒿的鎮(zhèn)痛活性物質(zhì)主要存在于醇提取物和石油醚提取物中。3 討論為摒除干擾因素，

8、本實驗在提取過程中調(diào)節(jié)pH值以除去鞣質(zhì)，防止鞣質(zhì)對鎮(zhèn)痛實驗的影響。考慮到陽性藥氫溴酸高烏甲素的鎮(zhèn)痛作用應(yīng)用于動物時，對體質(zhì)并無選擇性，但對人體質(zhì)卻有選擇性，而五脈綠絨蒿的鎮(zhèn)痛作用在臨床中得到很好的驗證，所以綜合評價，五脈綠絨蒿的乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于氫溴酸高烏甲素。至于五脈綠絨蒿中的鎮(zhèn)痛活性成分現(xiàn)在仍是空白，值得進一步深入研究?！緟⒖嘉墨I】1吳征鎰,莊璇.綠絨蒿屬分類系統(tǒng)的研究J.云南植物研究,1980,2(4):371-381.2中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志(32卷) M.北京:科學(xué)出版社,1999：123.3王彬,宋學(xué)華,陳重明，等.藏藥綠絨蒿的品種研究J.中國野生植物資源,2003,22(4):43-46.4楊永昌.藏藥志M.西寧:青海人民出版社,1991：465.5張兆旺.中藥