第三章生物制品課件

第三章 滅活劑、保護劑、與免疫增強劑第一節(jié) 滅活劑一、滅活與滅活劑n （一）滅活：殺死病原微生物，但不影響免疫原性；其次是破壞血清的補體，以免干擾血清學反應(yīng)結(jié)果。n 滅活劑：滅活微生物的化學試劑。n 滅活方法：物理滅活：加熱、及射線滅活微生物，此方法免疫原性易破壞，現(xiàn)很少使用（血清 56C半小時滅活補體用此方法）。n 化學滅活：用化學試劑將病原微生物殺死，此方法經(jīng)常使用。二、常用的滅活劑種類和原理n （一）甲醛：是最古老常用的滅活劑，現(xiàn)在我國用的 26種滅活疫苗，均以甲醛為滅活劑。n 性質(zhì)：甲醛為刺鼻的氣體，水溶液叫福爾馬林，濃度為 36%-40%。 10C以下易聚合成三聚甲醛或多聚甲醛，為白色沉淀。n 原理：甲醛的醛基起滅活作用，可使n 蛋白質(zhì)的氨基 羥甲基胺n 羧基 亞甲基二醇單酯n 羥基 羥甲基酚n 巰基 硫代亞甲基二醇n 濃度：需氧菌甲醛濃度到 0、 1%-0、 2%.n 厭氧菌 0、 4%-0、 8%.n 病毒 0、 05%-0、 4%.n 原則是濃度低，時間短，溫度低可以滅活細菌，盡量減少破壞抗原（通常加入量，以福爾馬林量計算，不再折合甲醛濃度）。n （二）烷化劑：將烷基引入，形成烷基取代物，使微生物變性死亡。n 原理：主要破壞病毒的核酸，作用于 A： G堿基，引起 DNA單鏈斷裂或雙鏈鉸連。n 此類常用于病毒滅活，種類有 AEIN- 乙酰乙烯亞胺，加入濃度到 0、 05%。n BEI 二乙烯亞胺，濃度 0、 02%； EEI2 乙基乙烯亞胺， GDA 縮水甘油醛。n 滅活后加硫代硫酸鈉可終止滅活，防止抗原損失。n 保存： AEI， 0-4C一年， -20C二年； BEI 0-4C保存一個月。n （三）苯酚（石碳酸）人類用的 第一個消毒藥，具有特殊氣味的無色結(jié)晶，易潮解成水溶液，與光、氧后顏色變紫色。n 原理：蛋白質(zhì)變性以及抑制氧化脫氫酶，芽孢和病毒對它抵抗力強。n 滅活濃度：抑菌作用是 0、 20 、 5%（血清防腐），殺菌是 1%，殺葡萄球菌是 3%。n 消毒常用它的衍生物，來蘇兒（甲酚皂） 35% 濃度，特殊氣味，覆蓋其他氣味，也是醫(yī)院常用的。(Joseph Lister,18271912)首創(chuàng)用石炭酸噴灑手術(shù)室和煮沸手術(shù)用具以防術(shù)后感染，為防腐、消毒，以及無菌操作奠定了基礎(chǔ)。n （四）結(jié)晶紫（龍膽紫），也叫紫藥水，堿性染料，也叫甲紫或甲基青蓮，化學名，六甲基副玫瑰苯胺。n 原理：堿性陽離子可結(jié)合細菌陰離子羧基；干擾細胞壁粘肽合成；常作用于革蘭氏陽性菌。n 生物制品的應(yīng)用有豬瘟結(jié)晶紫疫苗，雞白痢染色抗原。n （五） 丙酰內(nèi)酯 良好病毒滅活劑，性狀是無色有氣味液體，易潮解和高溫失效，5C密封保存好，現(xiàn)主要用于狂犬滅活苗。三、影響滅活作用的因素n （一）藥物的特異性：酚類不能殺滅真菌和病毒，陽離子的結(jié)晶紫，主要作用于 G+菌。n （二）微生物的種類和特異性： G+菌和 G-菌對藥物敏感不一樣，繁殖體和芽孢對藥物敏感也不一樣。n （三）藥物濃度：濃度愈大，滅活越快，抗原也損失大；但是， 95%酒精沒 75%酒精殺滅細菌好。n （四）溫度：溫度與滅活成正比，每升高 10度，金屬類殺菌作用增加 25 倍。但高溫超過 40C，抗原也損失大。n （五）時間：滅活時間與溫度和濃度成反比，即滅活殺菌 長，溫度舊低，濃度也 低，就可以殺滅細菌。n （六） pH：堿性快，酸性慢，酸性環(huán)境對 抗原保護好。n （七）有機物存在：環(huán)境的 有機物減低滅活的效果，微生物也是有機物。四、滅活疫苗時的注意事項n 2人參加滅活，注意藥品名和量，滅活后標記。n 37C滅活一天后，接種適宜培養(yǎng)基 無菌檢查。n 動物試驗，滅活苗制成后，注射小白鼠 0、2ml，兩只，觀察 3天。n 使用試驗：用戶可先注射 1-2頭，觀察 12天，看有無過敏，應(yīng)激等反應(yīng)，證明安全，才全群使用。n 思考題：n 什么叫滅活和滅火劑？n 滅活劑的種類有哪些？n 影響滅活的因素是什么？n 滅活的注意事項有哪些？第二節(jié) 保護劑n 保護劑也叫穩(wěn)定劑，是防止微生物在凍干過程中受到破壞。n 按作用原理分兩類：n 滲透劑：能滲入細胞，使胞內(nèi)外滲透壓平衡，防止慢凍時損傷細胞。有甘油，蔗糖，二甲基亞砜。n 非滲透劑：防止細胞內(nèi)外物質(zhì)交換在速凍時保護細胞。有 蛋白質(zhì)，聚乙烯吡咯酮。n 按保護劑分子量分類：n 低分子量保護劑：糖、氨基酸類。n 高分子量保護劑：脫脂牛奶、明膠。n 按化學性質(zhì)分類：n 復(fù)合物：脫脂牛奶，血清。n 糖類：蔗糖、乳糖。n 鹽類：乳酸鈣、谷氨酸鈉。n 醇類：甘油，山梨醇，甘露醇。n 酸類：檸檬酸，氨基酸。n 聚合物：葡聚糖，聚乙烯吡咯酮。一、凍干保護劑的組成和作用n 按組成將保護劑分為營養(yǎng)液，賦形劑，抗氧化劑。n 營養(yǎng)液：使受損細胞修復(fù)：脫脂牛奶，蛋白質(zhì)，氨基酸，糖類。n 賦形劑：骨架作用，制品形成網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，易溶解 -蔗糖，乳糖。n 抗氧化劑：保護酶類，防止氧化 VC ， VE，硫代硫酸鈉。保護劑的作用：n 防止細胞內(nèi)水結(jié)晶和細胞失去水分。n 平衡細胞內(nèi)外滲透壓，防止細胞破裂。n 助于細胞修復(fù)以及凍干后復(fù)蘇。二、影響保護劑效果的因素判斷保護劑的好壞，從凍干后的存活率，以及生物制品的保質(zhì)期研究。然后對不同物質(zhì)篩選不同配方，選出好的保護劑。n 1、保護劑的種類：不同微生物用不同的保護劑。n 2、保護劑的濃度： 510% 的葡萄糖保存大腸桿菌存活率高。n 3、保護劑配制方法：糖、血清、維生素不能高溫滅菌，糖可以 114C30分鐘滅菌，其他可以過濾除菌。n 4、保護劑的 pH：一般為 6-8。三、常用的保護劑n 生物制品保護劑很多，各國家不同，如雞新城疫苗（ ND），我國是 5%蔗糖脫脂牛奶；日本是 5%乳糖、 0、 15%聚乙烯吡咯酮、1%馬血清。n (一 )不同微生物用不同保護劑n 細菌疫苗： 10%蔗糖； 5%蔗糖脫脂牛奶；5%蔗糖、 1、 5%明膠； 10-20%脫脂牛奶。n 厭氧菌苗： 0、 1%谷氨酸鈉、 10%乳糖；10%脫脂牛奶； 7、 5%葡萄糖血清。n 病毒疫苗：多用混合保護劑，如 5%蔗糖脫脂牛奶。q (二 )幾種常用的保護劑n 5%蔗糖脫脂牛奶 新城疫疫苗n 明膠蔗糖保護劑 -禽霍亂疫苗n 聚乙烯吡咯酮乳糖 厭氧菌n SPGA（蔗糖 76、 62g，磷酸二氫鉀 0、 52g，磷酸氫二鉀 1、 62g，谷氨酸鈉 0、 83g，牛血清蛋白 10g，去離子水 1000ml）雞馬立克氏疫苗。n (三 )保護劑的添加：一般是疫苗和保護劑 1： 1加入（ 5%蔗糖脫脂牛奶 新城疫疫苗），還有是按疫苗量加入保護劑到規(guī)定濃度（如 5%蔗糖明膠保護劑，加疫苗是先配濃度高的 40%的蔗糖、 12%明膠，然后按疫苗 7份，保護劑 1份混合。）。n 弱毒疫苗飲水：加 0、 2%奶粉，以中和水中的 有害離子和毒性物質(zhì)。n 思考題：n 什么叫保護劑？組成和作用是什么？n 影響保護劑效果的因素有哪些？n 常用保護劑有哪些？第三節(jié) 免疫佐劑n 一、佐劑的概念：n 概念： adjuvant一詞來源于拉丁語，