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第三章 滅活劑、保護劑、與免疫增強劑第一節(jié) 滅活劑一、滅活與滅活劑n (一)滅活:殺死病原微生物,但不影響免疫原性;其次是破壞血清的補體,以免干擾血清學反應(yīng)結(jié)果。n 滅活劑:滅活微生物的化學試劑。n 滅活方法:物理滅活:加熱、及射線滅活微生物,此方法免疫原性易破壞,現(xiàn)很少使用(血清 56C半小時滅活補體用此方法)。n 化學滅活:用化學試劑將病原微生物殺死,此方法經(jīng)常使用。二、常用的滅活劑種類和原理n (一)甲醛:是最古老常用的滅活劑,現(xiàn)在我國用的 26種滅活疫苗,均以甲醛為滅活劑。n 性質(zhì):甲醛為刺鼻的氣體,水溶液叫福爾馬林,濃度為 36%-40%。 10C以下易聚合成三聚甲醛或多聚甲醛,為白色沉淀。n 原理:甲醛的醛基起滅活作用,可使n 蛋白質(zhì)的氨基 羥甲基胺n 羧基 亞甲基二醇單酯n 羥基 羥甲基酚n 巰基 硫代亞甲基二醇n 濃度:需氧菌甲醛濃度到 0、 1%-0、 2%.n 厭氧菌 0、 4%-0、 8%.n 病毒 0、 05%-0、 4%.n 原則是濃度低,時間短,溫度低可以滅活細菌,盡量減少破壞抗原(通常加入量,以福爾馬林量計算,不再折合甲醛濃度)。n (二)烷化劑:將烷基引入,形成烷基取代物,使微生物變性死亡。n 原理:主要破壞病毒的核酸,作用于 A: G堿基,引起 DNA單鏈斷裂或雙鏈鉸連。n 此類常用于病毒滅活,種類有 AEIN- 乙酰乙烯亞胺,加入濃度到 0、 05%。n BEI 二乙烯亞胺,濃度 0、 02%; EEI2 乙基乙烯亞胺, GDA 縮水甘油醛。n 滅活后加硫代硫酸鈉可終止滅活,防止抗原損失。n 保存: AEI, 0-4C一年, -20C二年; BEI 0-4C保存一個月。n (三)苯酚(石碳酸)人類用的 第一個消毒藥,具有特殊氣味的無色結(jié)晶,易潮解成水溶液,與光、氧后顏色變紫色。n 原理:蛋白質(zhì)變性以及抑制氧化脫氫酶,芽孢和病毒對它抵抗力強。n 滅活濃度:抑菌作用是 0、 20 、 5%(血清防腐),殺菌是 1%,殺葡萄球菌是 3%。n 消毒常用它的衍生物,來蘇兒(甲酚皂) 35% 濃度,特殊氣味,覆蓋其他氣味,也是醫(yī)院常用的。(Joseph Lister,18271912)首創(chuàng)用石炭酸噴灑手術(shù)室和煮沸手術(shù)用具以防術(shù)后感染,為防腐、消毒,以及無菌操作奠定了基礎(chǔ)。n (四)結(jié)晶紫(龍膽紫),也叫紫藥水,堿性染料,也叫甲紫或甲基青蓮,化學名,六甲基副玫瑰苯胺。n 原理:堿性陽離子可結(jié)合細菌陰離子羧基;干擾細胞壁粘肽合成;常作用于革蘭氏陽性菌。n 生物制品的應(yīng)用有豬瘟結(jié)晶紫疫苗,雞白痢染色抗原。n (五) 丙酰內(nèi)酯 良好病毒滅活劑,性狀是無色有氣味液體,易潮解和高溫失效,5C密封保存好,現(xiàn)主要用于狂犬滅活苗。三、影響滅活作用的因素n (一)藥物的特異性:酚類不能殺滅真菌和病毒,陽離子的結(jié)晶紫,主要作用于 G+菌。n (二)微生物的種類和特異性: G+菌和 G-菌對藥物敏感不一樣,繁殖體和芽孢對藥物敏感也不一樣。n (三)藥物濃度:濃度愈大,滅活越快,抗原也損失大;但是, 95%酒精沒 75%酒精殺滅細菌好。n (四)溫度:溫度與滅活成正比,每升高 10度,金屬類殺菌作用增加 25 倍。但高溫超過 40C,抗原也損失大。n (五)時間:滅活時間與溫度和濃度成反比,即滅活殺菌 長,溫度舊低,濃度也 低,就可以殺滅細菌。n (六) pH:堿性快,酸性慢,酸性環(huán)境對 抗原保護好。n (七)有機物存在:環(huán)境的 有機物減低滅活的效果,微生物也是有機物。四、滅活疫苗時的注意事項n 2人參加滅活,注意藥品名和量,滅活后標記。n 37C滅活一天后,接種適宜培養(yǎng)基 無菌檢查。n 動物試驗,滅活苗制成后,注射小白鼠 0、2ml,兩只,觀察 3天。n 使用試驗:用戶可先注射 1-2頭,觀察 12天,看有無過敏,應(yīng)激等反應(yīng),證明安全,才全群使用。n 思考題:n 什么叫滅活和滅火劑?n 滅活劑的種類有哪些?n 影響滅活的因素是什么?n 滅活的注意事項有哪些?第二節(jié) 保護劑n 保護劑也叫穩(wěn)定劑,是防止微生物在凍干過程中受到破壞。n 按作用原理分兩類:n 滲透劑:能滲入細胞,使胞內(nèi)外滲透壓平衡,防止慢凍時損傷細胞。有甘油,蔗糖,二甲基亞砜。n 非滲透劑:防止細胞內(nèi)外物質(zhì)交換在速凍時保護細胞。有 蛋白質(zhì),聚乙烯吡咯酮。n 按保護劑分子量分類:n 低分子量保護劑:糖、氨基酸類。n 高分子量保護劑:脫脂牛奶、明膠。n 按化學性質(zhì)分類:n 復(fù)合物:脫脂牛奶,血清。n 糖類:蔗糖、乳糖。n 鹽類:乳酸鈣、谷氨酸鈉。n 醇類:甘油,山梨醇,甘露醇。n 酸類:檸檬酸,氨基酸。n 聚合物:葡聚糖,聚乙烯吡咯酮。一、凍干保護劑的組成和作用n 按組成將保護劑分為營養(yǎng)液,賦形劑,抗氧化劑。n 營養(yǎng)液:使受損細胞修復(fù):脫脂牛奶,蛋白質(zhì),氨基酸,糖類。n 賦形劑:骨架作用,制品形成網(wǎng)孔結(jié)構(gòu),易溶解 -蔗糖,乳糖。n 抗氧化劑:保護酶類,防止氧化 VC , VE,硫代硫酸鈉。保護劑的作用:n 防止細胞內(nèi)水結(jié)晶和細胞失去水分。n 平衡細胞內(nèi)外滲透壓,防止細胞破裂。n 助于細胞修復(fù)以及凍干后復(fù)蘇。二、影響保護劑效果的因素判斷保護劑的好壞,從凍干后的存活率,以及生物制品的保質(zhì)期研究。然后對不同物質(zhì)篩選不同配方,選出好的保護劑。n 1、保護劑的種類:不同微生物用不同的保護劑。n 2、保護劑的濃度: 510% 的葡萄糖保存大腸桿菌存活率高。n 3、保護劑配制方法:糖、血清、維生素不能高溫滅菌,糖可以 114C30分鐘滅菌,其他可以過濾除菌。n 4、保護劑的 pH:一般為 6-8。三、常用的保護劑n 生物制品保護劑很多,各國家不同,如雞新城疫苗( ND),我國是 5%蔗糖脫脂牛奶;日本是 5%乳糖、 0、 15%聚乙烯吡咯酮、1%馬血清。n (一 )不同微生物用不同保護劑n 細菌疫苗: 10%蔗糖; 5%蔗糖脫脂牛奶;5%蔗糖、 1、 5%明膠; 10-20%脫脂牛奶。n 厭氧菌苗: 0、 1%谷氨酸鈉、 10%乳糖;10%脫脂牛奶; 7、 5%葡萄糖血清。n 病毒疫苗:多用混合保護劑,如 5%蔗糖脫脂牛奶。q (二 )幾種常用的保護劑n 5%蔗糖脫脂牛奶 新城疫疫苗n 明膠蔗糖保護劑 -禽霍亂疫苗n 聚乙烯吡咯酮乳糖 厭氧菌n SPGA(蔗糖 76、 62g,磷酸二氫鉀 0、 52g,磷酸氫二鉀 1、 62g,谷氨酸鈉 0、 83g,牛血清蛋白 10g,去離子水 1000ml)雞馬立克氏疫苗。n (三 )保護劑的添加:一般是疫苗和保護劑 1: 1加入( 5%蔗糖脫脂牛奶 新城疫疫苗),還有是按疫苗量加入保護劑到規(guī)定濃度(如 5%蔗糖明膠保護劑,加疫苗是先配濃度高的 40%的蔗糖、 12%明膠,然后按疫苗 7份,保護劑 1份混合。)。n 弱毒疫苗飲水:加 0、 2%奶粉,以中和水中的 有害離子和毒性物質(zhì)。n 思考題:n 什么叫保護劑?組成和作用是什么?n 影響保護劑效果的因素有哪些?n 常用保護劑有哪些?第三節(jié) 免疫佐劑n 一、佐劑的概念:n 概念: adjuvant一詞來源于拉丁語,

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