高效液相色譜法課件

高效液相色譜法第一節(jié)概述一、起源俄國(guó)科學(xué)家：M.S.Tswett1903年發(fā)明，1906年正式命名色譜法。20世紀(jì)30年代開始廣泛研究和應(yīng)用色譜按流動(dòng)相的物態(tài)分:氣相色譜和液相色譜高效液相色譜法1色譜法的簡(jiǎn)稱(又叫色層法,層析法),其本質(zhì)是一種分離分析方法常見的分離方法蒸餾離心電泳過濾色譜：目前最有效的分離方法色譜法的簡(jiǎn)稱(又叫色層法,層析法),其本質(zhì)是一種分離分析方法2以高壓液體為流動(dòng)相的液相色譜分析法稱高效液相色譜法（HPLC)。以高壓液體為流動(dòng)相的液相色譜分析法稱高效液相色譜法（HPLC3HPLC是在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、高靈敏檢測(cè)器等新實(shí)驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。它是20世紀(jì)70年代初發(fā)展起來的一種新的色譜分離分析技術(shù)。HPLC是在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、高靈敏檢測(cè)器4液相色譜的分類1.按流動(dòng)相和固定相的相對(duì)極性分:正相色譜：固定相的極性大于流動(dòng)相反相色譜：固定相的極性小于流動(dòng)相2.按分離過程的機(jī)理分:吸附色譜分配色譜離子交換色譜,簡(jiǎn)稱離子色譜(IC)體積排除色譜液相色譜的分類5超高效液相色譜（UPLC）：是區(qū)別于HPLC的液相色譜新領(lǐng)域基于小顆粒填料和LC原理的一種創(chuàng)新方法實(shí)現(xiàn)超高分離度、靈敏度、分析速度與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。是Waters公司對(duì)液相色譜的新貢獻(xiàn)(2004年3月正式推出)超高效液相色譜（UPLC）：6二、HPLC與GC區(qū)別相同：兼具分離和分析功能，均可以在線檢測(cè)主要差別：分析對(duì)象、流動(dòng)相、操作條件上二、HPLC與GC區(qū)別7分析對(duì)象GC：能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品，高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品不可檢測(cè)，占有機(jī)物的20%HPLC：適于分析氣相色譜法不能分析的分子量較大、難氣化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物及高聚物的分離分析，大約占有機(jī)物的70～80%。分析對(duì)象8流動(dòng)相差別GC：流動(dòng)相為惰性氣體，組分與流動(dòng)相無親合作用力，只與固定相作用HPLC：流動(dòng)相為液體，流動(dòng)相與組分間有親合作用力，對(duì)分離起很大作用流動(dòng)相差別9操作條件差別GC：一般都在較高的溫度下進(jìn)行分離分析HPLC：通常在室溫條件下操作；高壓（15-35Mpa。）。操作條件差別10三、HPLC與經(jīng)典LC區(qū)別相同：高效液相色譜的原理與經(jīng)典液相色譜相同主要區(qū)別：固定相差別，輸液設(shè)備和檢測(cè)手段。三、HPLC與經(jīng)典LC區(qū)別11固定相差別經(jīng)典LC：固定相粒徑>100μm且不均勻；HPLC：固定相粒徑<10μm（球形，勻漿裝柱）固定相差別12輸液設(shè)備經(jīng)典LC：常壓輸送流動(dòng)相，柱效低（H↑，n↓），分析周期長(zhǎng)；HPLC：高壓輸送流動(dòng)相；柱效高（H↓，n↑）；分析時(shí)間大大縮短輸液設(shè)備13檢測(cè)手段經(jīng)典LC：無法在線檢測(cè)HPLC：可以在線檢測(cè)高效液相色譜法ppt課件14四、HPLC的特點(diǎn)和應(yīng)用1．高柱效2．高靈敏度3．高選擇性4．分析速度快5．應(yīng)用范圍廣泛四、HPLC的特點(diǎn)和應(yīng)用15五、HPLC的固定相和流動(dòng)相簡(jiǎn)介（一）、固定相以承受高壓能力來分兩大類剛性固體：以二氧化硅（硅膠）為基質(zhì)，可承受7.0108～1.0109Pa的高壓，它是目前最廣泛使用的一種固定相。硬膠：主要用于離子交換和尺寸排阻色譜中，它由聚苯乙烯與二乙烯苯基交聯(lián)而成?？沙惺軌毫ι舷逓?.5108Pa。五、HPLC的固定相和流動(dòng)相簡(jiǎn)介16高效液相色譜法ppt課件17（二）、流動(dòng)相1.分類按組成不同可分為單組分和多組分按極性可分為極性、弱極性、非極性按使用方式有固定組成（等梯度）淋洗和梯度淋洗。（二）、流動(dòng)相182.常用溶劑己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、甲醇、水。2.常用溶劑19常用流動(dòng)相極性石油醚＜汽油＜庚烷＜己烷＜二硫化碳＜二甲苯＜甲苯＜氯丙烷＜苯＜溴乙烷＜溴化苯＜二氯乙烷＜三氯甲烷＜異丙醚＜硝基甲烷＜乙酸丁酯＜乙醚＜乙酸乙酯＜正戊烷＜正丁醇＜苯酚＜甲乙醇＜叔丁醇＜四氫呋喃(THF)＜二氧六環(huán)＜丙酮＜乙醇＜乙腈＜異丙醇＜甲醇＜氮氮二甲基甲酰胺＜水常用流動(dòng)相極性20

第二節(jié)

高效液相色譜儀高效液相色譜儀自1967年問世以來，基本結(jié)構(gòu)和工作流程都差不多。第二節(jié)高效液相色譜儀21典型的高效液相色譜儀是由五個(gè)基本部分和相關(guān)輔助部件構(gòu)成。高壓輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（色譜工作站）典型的高效液相色譜儀是由五個(gè)基本部分和相關(guān)輔助部件構(gòu)成。22一、高壓輸液系統(tǒng)（一）貯液罐現(xiàn)多數(shù)使用溶劑瓶，一般采用耐腐蝕的玻璃瓶或聚四氟乙烯瓶，容量為1到2L。貯液罐的放置位置要高于泵體。一、高壓輸液系統(tǒng)23（二）高壓輸液泵氣相色譜由高壓鋼瓶直接提供動(dòng)力，高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關(guān)鍵部件之一。高壓輸液泵的類型高壓輸液泵主要有恒壓泵和恒流泵兩類，常使用恒流泵。（二）高壓輸液泵24恒流泵有幾種類型，其中往復(fù)柱塞泵目前應(yīng)用較多。恒流泵有幾種類型，其中往復(fù)柱塞泵目前應(yīng)用較多。25（三）輸液系統(tǒng)的輔助裝置1．過濾器：除掉機(jī)械雜質(zhì)及固體顆粒。一般用0.45或0.2μm微孔濾膜（分有機(jī)相和水相濾膜）進(jìn)行過濾。（三）輸液系統(tǒng)的輔助裝置262．混合器：體積不宜大。3．脈動(dòng)阻尼器：種類多，都有一定容積和彈性。4．壓力測(cè)量裝置：電子壓力控制器流量5．流量測(cè)量裝置：電子流量計(jì)6．脫氣裝置：除掉溶于流動(dòng)相中的各類氣體，以保證柱效能。2．混合器：體積不宜大。27吹氦脫氣法。這種脫氣方法雖然好，但氦氣價(jià)格較高，很少使用。加熱回流法。此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會(huì)丟失，混合流動(dòng)相的比例會(huì)有變化。吹氦脫氣法。28抽真空脫氣法。此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa，即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì)使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。抽真空脫氣法。29超聲波脫氣法。將欲脫氣的流動(dòng)相置于超聲波清洗機(jī)中，用超聲波震蕩10～20min。此法的脫氣效果最差。在線脫氣法HPLC儀器可配在線脫氣機(jī)。在線脫氣使用簡(jiǎn)單，低故障，有效。超聲波脫氣法。30（四）梯度洗脫裝置梯度洗脫的目的：提高分離效果，縮短分析時(shí)間。適用于分析極性差別較大的復(fù)雜組分類似GC的程序升溫（沸程較長(zhǎng)樣品）（四）梯度洗脫裝置31梯度洗脫裝置分為兩類：梯度洗脫裝置分為兩類：321．外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動(dòng)相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統(tǒng)，僅需一臺(tái)泵即可。2．內(nèi)梯度裝置（又稱高壓梯度），先將兩種溶劑分別用泵增壓后，再由泵按程序壓入混合室，混合，再注入色譜柱。1．外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動(dòng)相在常溫常壓下混合，用高33二、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)包括進(jìn)樣口、注射器和進(jìn)樣閥等。HPLC進(jìn)樣方式可分為：隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。

二、進(jìn)樣系統(tǒng)34（一）閥進(jìn)樣—六通閥進(jìn)樣（一）閥進(jìn)樣—六通閥進(jìn)樣35一般高效液相色譜手動(dòng)進(jìn)樣通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置。

六通閥的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。

完全裝液法進(jìn)樣量準(zhǔn)確，重復(fù)性好（0.5%）一般高效液相色譜手動(dòng)進(jìn)樣通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置。36①用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%（最多75％）。②用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5~10倍（最少3倍。①用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%（最多37（二）自動(dòng)進(jìn)樣用于大量樣品的常規(guī)分析。三、 分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)包括色譜柱、恒溫器和連接管等部件。(一)色譜柱高效液相色譜法ppt課件38色譜柱是液相色譜的心臟部件,多為直形。色譜柱可分為分析柱；制備柱；分析柱的保護(hù)柱。1．柱材料及規(guī)格包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。色譜柱是液相色譜的心臟部件,多為直形。色譜柱可分為分析柱；制39玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多，它是由內(nèi)部拋光的不銹鋼管制成。一般色譜柱長(zhǎng)5～40cm，內(nèi)徑為1～6mm。凝膠色譜柱內(nèi)徑3～12mm。制備柱內(nèi)徑較大，可達(dá)25mm以上。玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多，它是由內(nèi)部拋光的不銹鋼管制402．保護(hù)柱一般在分離柱前有一個(gè)前置柱，前置柱內(nèi)填充物和分離柱一樣，安裝在分析柱前。其作用是收集、阻斷來自進(jìn)樣器的機(jī)械和化學(xué)雜質(zhì)，以保護(hù)和延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。2．保護(hù)柱41選擇保護(hù)柱的原則是在滿足分離要求的前提下，盡可能選擇對(duì)分離樣品保留低的短保護(hù)柱。一般用1cm長(zhǎng)的保護(hù)柱即可選擇保護(hù)柱的原則是在滿足分離要求的前提下，盡可能選擇對(duì)分離樣42保護(hù)柱也可裝填和分析柱不同的填料，如較粗顆粒的硅膠（10～15μm）。保護(hù)柱為消耗品，通常分析50～100次樣品，柱壓力呈增大趨向時(shí)就需要更換。目前市場(chǎng)上供應(yīng)可更換芯式設(shè)計(jì)保護(hù)柱，是由保護(hù)套和可更換式保護(hù)芯兩部分組成。保護(hù)柱也可裝填和分析柱不同的填料，如較粗顆粒的硅膠（10～143(二)柱連接

柱出、入口的連接管的死體積越小越好一般常用窄孔(內(nèi)徑0.13mm)的厚壁(1.5～2.0mm)不銹鋼管，以減少柱外死體積.(二)柱連接44(三)柱溫控制在高效液相色譜分析中，柱溫一般為室溫或接近室溫?？梢圆捎脦в泻銣丶訜嵯到y(tǒng)的金屬夾套來保持色譜柱的溫度。溫度可以在室溫到60℃之間調(diào)節(jié)。對(duì)凝膠滲透色譜儀，其柱溫可從室溫至150℃實(shí)現(xiàn)精確控制。(三)柱溫控制45四、檢測(cè)系統(tǒng)

檢測(cè)器實(shí)際上是一種換能裝置，它將流動(dòng)相中組分含量的變化，轉(zhuǎn)變成可測(cè)量的電信號(hào)(通常是電壓)，然后輸入色譜工作站。高效液相色譜的檢測(cè)器很多，光學(xué)(紫外，熒光，折光檢測(cè)器)；電化學(xué)(極譜、電導(dǎo)、庫侖、離子選擇電極)等。四、檢測(cè)系統(tǒng)46對(duì)于毛細(xì)管氣相色譜和高效液相色譜，檢測(cè)器的色譜峰展寬是柱外效應(yīng)的一個(gè)主要來源。HPLC用得最多的是UV檢測(cè)器。甲醇，水可用作UV檢測(cè)器的流動(dòng)相。對(duì)于毛細(xì)管氣相色譜和高效液相色譜，檢測(cè)器的色譜峰展寬是柱外效47(一)檢測(cè)器分類1．按性質(zhì)或應(yīng)用范圍分類有總體性能檢測(cè)器和溶質(zhì)性能檢測(cè)器。總體性能檢測(cè)器：示差折光、電導(dǎo)等檢測(cè)器，GC中的熱導(dǎo)檢測(cè)器也屬于這類檢測(cè)器。溶質(zhì)性能檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器、安培檢測(cè)器、手性檢測(cè)器等。(一)檢測(cè)器分類482．按測(cè)量信號(hào)性質(zhì)分類有濃度型檢測(cè)器和質(zhì)量型檢測(cè)器。濃度型檢測(cè)器：大部分液相色譜檢測(cè)器屬這一類檢測(cè)器。質(zhì)量型檢測(cè)器：庫侖檢測(cè)器。2．按測(cè)量信號(hào)性質(zhì)分類49（二）、常用檢測(cè)器1、紫外－可見光檢測(cè)器（UV/VISdetector）：（UVD）又稱紫外檢測(cè)器。約有80％的樣品可以使用這種檢測(cè)器，是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器。適于吸收紫外-可見光的物質(zhì)。（二）、常用檢測(cè)器50（1）、工作原理與結(jié)構(gòu)紫外檢測(cè)器由光源、流通池和記錄器組成。工作原理是進(jìn)入檢測(cè)器的組分對(duì)特定波長(zhǎng)的紫外光能產(chǎn)生選擇性吸收，其吸收度與濃度的關(guān)系符合光吸收定律。（1）、工作原理與結(jié)構(gòu)51紫外檢測(cè)器的光學(xué)系統(tǒng)紫外檢測(cè)器的光學(xué)系統(tǒng)52（2）、UV檢測(cè)器分類：1）固定波長(zhǎng)紫外吸收檢測(cè)器：低壓汞燈提供固定254nm或280nm。2）可變波長(zhǎng)檢測(cè)器（VWD）：氘燈/鹵鎢燈做光源，光柵分光3）光二極管陣列檢測(cè)器（PDAD，PDA，DAD）：1982年惠普公司推出世界上首臺(tái)光電二極管陣列檢測(cè)器（2）、UV檢測(cè)器分類：53PDAD有1024個(gè)二極管陣列，可以得到吸光度、波長(zhǎng)、時(shí)間——這樣的三維光譜PDAD有1024個(gè)二極管陣列，可以得到吸光度、波長(zhǎng)、時(shí)間—54（3）、常用溶劑的紫外截止波長(zhǎng)溶劑正已烷二硫化碳四氯化碳苯氯仿二氯甲烷四氫呋喃丙酮乙腈甲醇水截止波長(zhǎng)/nm190380265210245233212330190205187溶劑正已烷二硫化碳四氯化碳苯氯仿二氯甲烷四氫呋喃丙酮乙腈甲醇55（4）、UVD的特點(diǎn):1）靈敏度高1×10-8g/mL（萘的甲醇溶液）。2）噪聲低≤±1.0×10-4AU3）線性范圍寬106（1uv為最小單位）4）應(yīng)用廣泛（4）、UVD的特點(diǎn):565）屬溶質(zhì)性能檢測(cè)器，適用于梯度洗脫。6）屬濃度敏感型檢測(cè)器7）屬非破壞性檢測(cè)器，可要用于制備色譜，也能與其它檢測(cè)器串聯(lián)使用。8）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，維修方便。5）屬溶質(zhì)性能檢測(cè)器，適用于梯度洗脫。572、示差折光檢測(cè)器：也稱為折光指數(shù)檢測(cè)器（refractiveindexdetectorRID）：示差折光檢測(cè)器是除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器。2、示差折光檢測(cè)器：58（1）工作原理與結(jié)構(gòu)RID是通過連續(xù)測(cè)定色譜柱流出液折光率的變化來檢測(cè)樣品濃度的。就是檢測(cè)參比池（流動(dòng)相本身）和樣品池中流動(dòng)相之間的折光率差值，差值與濃度呈正比。（1）工作原理與結(jié)構(gòu)59高效液相色譜法ppt課件60高效液相色譜法ppt課件61（2）特點(diǎn)1）屬總體性能檢測(cè)器，是通用型檢測(cè)器。它對(duì)沒有紫外吸收的物質(zhì)，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等都能檢測(cè)；示差折光檢測(cè)器不能用于梯度洗脫（2）特點(diǎn)622）適用于流動(dòng)相紫外吸收本底大，不適合用紫外檢測(cè)器的體系；在凝膠色譜中示差折光檢測(cè)器是必不可少的，尤其是對(duì)聚合物，如聚乙烯、聚乙二醇、丁苯橡膠等的分子量分布的測(cè)定；3）屬濃度敏感型檢測(cè)器；4）缺點(diǎn)是靈敏度低：最小檢測(cè)濃度達(dá)10-6

～10-7g/mL；5）線性范圍小于105；2）適用于流動(dòng)相紫外吸收本底大，不適合用紫外檢測(cè)器的體系；636）對(duì)壓力和溫度變化敏感。7）最常用的溶劑是水常采用空氣飽和溶劑作流動(dòng)相另外要將檢測(cè)器的流動(dòng)相出口位置提高。6）對(duì)壓力和溫度變化敏感。64五、色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)-色譜工作站五、色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)-色譜工作站65工作站自動(dòng)定性和定量分析1.定性分析微處理機(jī)在定量計(jì)算時(shí)，一般通過保留值來識(shí)別峰。具體采用下述兩種方法定性：“時(shí)間窗”法、“時(shí)間帶”法工作站自動(dòng)定性和定量分析66（1）“時(shí)間窗”法：tR±Δt這是一種絕對(duì)保留時(shí)間法，鑒別位于預(yù)定保留時(shí)間絕對(duì)容限內(nèi)的峰。每個(gè)峰的保留值相同，設(shè)置簡(jiǎn)單，但用于識(shí)別保留時(shí)間相差很近的相鄰峰不大方便。（1）“時(shí)間窗”法：67（2）“時(shí)間帶”法：tR(1±a%)這是一種相對(duì)保留時(shí)間法，鑒別位于預(yù)定保留時(shí)間相對(duì)容限內(nèi)的峰。對(duì)每個(gè)峰單獨(dú)設(shè)置，設(shè)置較麻煩，但對(duì)識(shí)別相鄰峰的分辨率較好（2）“時(shí)間帶”法：682、定量分析（1)定量分析方法所有色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)均支持面積歸一、校正面積歸一（這個(gè)通常就是理論上的歸一化法，校正系數(shù)是相對(duì)校正因子或相對(duì)校正因子倒數(shù)<稱為響應(yīng)值>）、帶范圍因子的校正面積歸一、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法等定量計(jì)算方法。高效液相色譜法ppt課件69（2）ID表建立合適的ID表（選擇合適的MODE）對(duì)準(zhǔn)確定量很重要。選擇內(nèi)容是：用峰面積還是用峰高定量方法；峰的識(shí)別用“時(shí)間窗”法還是“時(shí)間帶”法；校正方法用“單點(diǎn)”法還是“雙點(diǎn)”法。ID表內(nèi)容還包括：峰的保留時(shí)間；組分名等。（2）ID表70第三節(jié)

各類高效液相色譜法HPLC主要有液－固色譜法（吸附色譜法）；液－液分配色譜法；化學(xué)鍵合相色譜法；離子色譜法；凝膠色譜法（體積排阻色譜法）五大類。第三節(jié)各類高效液相色譜法71一、液-固色譜法（LSC）通常稱吸附色譜法1．分離機(jī)制：是根據(jù)填充劑吸附活性點(diǎn)對(duì)樣品的吸收系數(shù)不同而分離。

一、液-固色譜法（LSC）722．固定相：液固色譜固定相可分為極性和非極性兩大類型。最常見的極性吸附劑硅膠，其次是氧化鋁、非極性吸附劑是活性炭。常使用的是5～10μm的特制全多孔硅膠。2．固定相：733．流動(dòng)相：若使用極性固定相，應(yīng)以弱極性的戊烷、己烷、庚烷作流動(dòng)相的主體，再適當(dāng)加入二氯甲烷、氯仿、甲醇、水等極性溶劑作為改性劑，以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度；3．流動(dòng)相：74若使用非極性固定相，應(yīng)以水、甲醇、乙醇作為流動(dòng)相的主體，可加入乙腈、四氫呋喃等改性劑。4．應(yīng)用液─固色譜法的特點(diǎn)是適于分離那些能溶于有機(jī)溶劑、具有中等分子量的組分。若使用非極性固定相，應(yīng)以水、甲醇、乙醇作為流動(dòng)相的主體，可加75液─固色譜法的主要優(yōu)點(diǎn)是柱填料價(jià)格便宜、對(duì)樣品的負(fù)載量大、在pH=3-8范圍內(nèi)固定相的穩(wěn)定性較好。是大多數(shù)制備色譜分離中優(yōu)先選用的方法。液─固色譜法的主要優(yōu)點(diǎn)是76二、液-液色譜法（LLC）液－液色譜法也稱液液分配色譜法1.分離機(jī)制：依據(jù)它們?cè)诠潭ㄒ号c流動(dòng)相中的溶解度，即溶質(zhì)分子在固定相和流動(dòng)相間的分配系數(shù)大小來進(jìn)行分離的色譜方法。二、液-液色譜法（LLC）772.固定相：由載體和固定液組成。常用的載體有下列幾類：表面多孔型載體全多孔型載體全多孔型微粒載體，又稱堆積硅珠2.固定相：78常用的固定液有下列幾種：，

—氧二丙腈（ODPN）聚乙二醇（PEG）十八烷（ODS）角鯊?fù)楣潭ㄒ旱取，F(xiàn)在化學(xué)鍵合固定相已漸漸取代了液液色譜中固定相。常用的固定液有下列幾種：793.流動(dòng)相：（1）正相液液分配色譜：正相色譜：固定液極性>流動(dòng)相極性（NLLC）流動(dòng)相主體為已烷、庚烷，可加入20%的極性改性劑，如氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙腈等。3.流動(dòng)相：80（2）反相液液分配色譜：反相色譜：固定液極性<流動(dòng)相極性（RLLC）流動(dòng)相主體為水，可加入<20%的極性改性劑，如甲醇、四氫呋喃、異丙醇等。（2）反相液液分配色譜：81三、化學(xué)鍵合相色譜法（bondedphasechromatographyBPC）1、化學(xué)鍵合相介紹利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面?；瘜W(xué)鍵合固定相一般都采用硅膠（薄殼型或全多孔微粒型）為基體。三、化學(xué)鍵合相色譜法（bondedphasechroma822、化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)（1）使用過程中不流失，使用壽命長(zhǎng)。（2）有很好的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。（3）適于梯度洗脫。（4）適用于分離幾乎所有類型的化合物。（5）柱效高。（6）載樣量大。2、化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)833、鍵合相色譜法分類分為正相鍵合相色譜法和反相鍵合相色譜法（1）正相鍵合相色譜法極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱。適用：分離油溶性或水溶性的極性和強(qiáng)極性化合物。3、鍵合相色譜法分類84固定相：共價(jià)結(jié)合到載體上的基團(tuán)都是極性基團(tuán)，如胺基、氰基、二醇基等。流動(dòng)相：非極性溶劑，如庚烷、已烷及異辛烷等。由于固定相是極性，因此流動(dòng)溶劑的極性越強(qiáng)，洗脫能力也越強(qiáng)，即極性大的溶劑是強(qiáng)溶劑。固定相：852．反相鍵合相色譜反相色譜——固定液極性<流動(dòng)相極性（RLLC）極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱。適用：分離非極性、極性、或離子型化合物，應(yīng)用范圍比正相鍵合相色譜法更廣泛。2．反相鍵合相色譜86固定相：在反相色譜法中，一般采用非極性鍵合固定相，如硅膠-C18H37（簡(jiǎn)稱ODS或C18）、硅膠-苯基等固定相：87流動(dòng)相：用強(qiáng)極性的溶劑為流動(dòng)相最常用的流動(dòng)相：一般以水為流動(dòng)相的底溶劑，以加入不同配比的有機(jī)溶劑