《化學(xué)生物學(xué)》課件Part 2

1、2022/7/1012022/7/102酶學(xué)研究歷史公元前兩千多年，我國(guó)已有釀酒記載。一百余年前，Pasteur認(rèn)為發(fā)酵是酵母細(xì)胞生命活動(dòng)的結(jié)果。1877年，Kuhne首次提出Enzyme一詞。1897年，Buchner兄弟用不含細(xì)胞的酵母提取液，實(shí)現(xiàn)了發(fā)酵。1926年，Sumner首次從刀豆中提純出脲酶結(jié)晶,并指出酶是蛋白質(zhì)。1982年，Cech首次發(fā)現(xiàn)RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念。1995年，Jack W. Szostak研究室首先報(bào)道了具有DNA連接酶活性DNA片段，稱為脫氧核酶(deoxyribozyme)。2022/7/103大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)James

2、 Batcheller SumnerJohn Howard Northrop 1926年，美國(guó)化學(xué)家薩姆納首次從刀豆中提純了脲酶，并證明是一種蛋白質(zhì)。 美國(guó)化學(xué)家諾思譜把一系列酶提純出來(lái)，證明它們都是蛋白質(zhì)。兩人因而共同獲得了1946年諾貝爾獎(jiǎng)。 2022/7/104Thomas R. Cech 1982年美國(guó)科羅拉多大學(xué)的T.R.Cech等人首次提出了RNA具有酶活性的概念。 1983年，耶魯大學(xué)的S. Altman 發(fā)現(xiàn)核糖核酸酶P真正發(fā)揮催化活性的是核糖核酸酶P中的RNA成分，而其中的蛋白質(zhì)成分是非活性的。這類RNA被稱為ribozyme（核酶）。 Cech和Altman因此獲得1989

3、年的諾貝爾獎(jiǎng)。某些RNA有催化活性Sidney Altman2022/7/105內(nèi)容第一節(jié) 酶是生物催化劑第二節(jié) 輔酶第三節(jié) 酶的結(jié)構(gòu)與酶的催化作用機(jī)制第四節(jié) 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)第五節(jié) 酶活性的測(cè)定2022/7/106酶的概念一酶催化特性二酶的命名與分類三第一節(jié) 酶是生物催化劑2022/7/107一、酶的概念 酶是由活細(xì)胞產(chǎn)生的，能在體內(nèi)或體外起同樣催化作用的一類具有活性中心和特殊構(gòu)象的生物大分子，包括蛋白質(zhì)和核酸，是生物催化劑。2022/7/108生物催化劑(biocatalyst) 核酶(ribozyme)：具有高效、特異催化作用的核酸，主要參與RNA的剪接。酶是一類由活細(xì)胞產(chǎn)生的，對(duì)其特異底

4、物具有高效催化作用的蛋白質(zhì)。2022/7/109幾個(gè)有關(guān)名詞底物(substrate, S)：酶作用的物質(zhì)。 產(chǎn)物(product, P)：反應(yīng)生成的物質(zhì)。酶促反應(yīng)：酶催化的反應(yīng)。酶活性：酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力。CH3CH2OH+ NAD+ CH3CHO +NADH+ H+ 乙醇脫氫酶2022/7/1010酶與一般催化劑的共同點(diǎn):（1）用量少而催化效率高（2）能加快化學(xué)反應(yīng)的速度，但不改變平衡點(diǎn)，反應(yīng)前后本身不發(fā)生變化（3）降低反應(yīng)所需的活化能 2022/7/1011活化能：底物分子從初態(tài)轉(zhuǎn)變到活化態(tài)所需的能量。2022/7/1012例 2H2O22H2O+O2 反 應(yīng)活化能非催化反應(yīng)75.24

5、kJ/mol鈀催化反應(yīng)48.9kJ/molH2O2酶催化8.36kJ/mol2022/7/1013二、酶催化作用特性四1高效性2專一性3反應(yīng)條件溫和4酶的催化活性可調(diào)節(jié)控制2022/7/10141高效性 efficiency 酶催化反應(yīng)速度是相應(yīng)的無(wú)催化反應(yīng)的108-1020倍，并且是非酶催化反應(yīng)速度的若干倍。 2H2O22H2O+O2 反 應(yīng)活化能非催化反應(yīng)75.24kJ/mol鈀催化反應(yīng)48.9kJ/molH2O2酶催化8.36kJ/mol2022/7/1015 酶的專一性,又稱為特異性，是指酶在催化生化反應(yīng)時(shí)對(duì)底物的選擇性。根據(jù)專一性的不同又可分為：2專一性 specificity （1

6、) 絕對(duì)專一性（2）相對(duì)專一性（3）立體異構(gòu)專一性2022/7/1016（1） 絕對(duì)專一性 有些酶對(duì)底物的要求非常嚴(yán)格，只作用于一個(gè)特定的底物。這種專一性稱為絕對(duì)專一性（Absolute specificity)。2022/7/10172022/7/1018 有些酶的作用對(duì)象不是一種底物，而是一類化合物或一類化學(xué)鍵。這種專一性稱為相對(duì)專一性(Relative Specificity)。（2）相對(duì)專一性2022/7/1019酶作用于一類化合物或一種化學(xué)鍵。如：糖苷酶2022/7/1020族(group)專一性。如-葡萄糖苷酶，催化由-葡萄糖所構(gòu)成的糖苷水解，但對(duì)于糖苷的另一端沒(méi)有嚴(yán)格要求。鍵(b

7、ond)專一性。如酯酶催化酯的水解，對(duì)于酯兩端的基團(tuán)沒(méi)有嚴(yán)格的要求。包括：2022/7/1021（3）立體化學(xué)專一性酶的一個(gè)重要特性是能專一性地與手性底物結(jié)合并催化這類底物發(fā)生反應(yīng)。例如，淀粉酶只能選擇性地水解D葡萄糖形成的1，4糖苷鍵I 光學(xué)專一性 Optical Specificity2022/7/1022II 幾何專一性 geometrical specificity 有些酶只能選擇性催化某種幾何異構(gòu)體底物的反應(yīng)，而對(duì)另一種構(gòu)型則無(wú)催化作用。 如延胡索酸水合酶只能催化延胡索酸水合生成蘋果酸，對(duì)馬來(lái)酸則不起作用。2022/7/1023酶促反應(yīng)一般在pH 5-8 水溶液中進(jìn)行，反應(yīng)溫度范圍為

8、20-40C。高溫或其它苛刻的物理或化學(xué)條件，將引起酶的失活。3反應(yīng)條件溫和2022/7/10244.酶的催化活性可調(diào)節(jié)控制 如抑制劑調(diào)節(jié)、共價(jià)修飾調(diào)節(jié)、反饋調(diào)節(jié)、酶原激活及激素控制等。對(duì)酶生成與降解量的調(diào)節(jié)酶催化效力的調(diào)節(jié)通過(guò)改變底物濃度對(duì)酶進(jìn)行調(diào)節(jié)等2022/7/1025三、酶的命名和分類1. 習(xí)慣命名法推薦名稱2. 系統(tǒng)命名法系統(tǒng)名稱（一）酶的命名2022/7/10261.依據(jù)底物來(lái)命名（絕大多數(shù)酶）：蛋白酶、淀粉酶2. 依據(jù)催化反應(yīng)的性質(zhì)命名：水解酶、轉(zhuǎn)氨酶3. 結(jié)合上述兩個(gè)原則命名：琥珀酸脫氫酶。4. 有時(shí)加上酶的來(lái)源胃蛋白酶、牛胰凝乳蛋白酶1. 習(xí)慣命名2022/7/1027基本原

9、則：明確標(biāo)明酶的底物及催化反應(yīng)的性質(zhì)（底物為水時(shí)可略去不寫）。2. 系統(tǒng)命名乳酸：NAD+氧化還原酶（EC1.1.1.27）， 習(xí)慣名：乳酸脫氫酶 2022/7/1028 國(guó)際系統(tǒng)分類法及編號(hào)（EC編號(hào)）（1）按反應(yīng)性質(zhì)分六大類，用1、2、3、4、5、6表示。（2）根據(jù)底物中被作用的基團(tuán)或鍵的特點(diǎn)，將每一大類分為若干個(gè)亞類，編號(hào)用1、2、3 。（3）每個(gè)亞類又可分為若干個(gè)亞一亞類，用編號(hào)1、2、3表示。 2022/7/1029酶的編碼乳酸脫氫酶 EC 1. 1. 1. 27第1大類，氧化還原酶第1亞類，氧化基團(tuán)CHOH第1亞亞類，H受體為NAD+該酶在亞亞類中的流水編號(hào)每個(gè)酶都有一個(gè)有四個(gè)數(shù)字

10、組成的編碼2022/7/1030(二)、酶的分類1.氧化還原酶類(oxidoreductases)2.轉(zhuǎn)移酶類 (transferases )3.水解酶類 (hydrolases)4.裂解酶類 (lyases)5.異構(gòu)酶類( isomerases)6.合成酶類 (ligases, synthetases)2022/7/10311、 氧化還原酶類催化氧化還原反應(yīng)： A2H+B=A+B2H乳酸：NAD+氧化還原酶（EC1.1.1.27）， 習(xí)慣名：乳酸脫氫酶 2022/7/10322、 轉(zhuǎn)移酶類AB+C=A+BCAla：酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（EC2.6.1.2）， 習(xí)慣名： 谷丙轉(zhuǎn)氨酶2022/7/

11、10333、 水解酶類催化水解反應(yīng)，包括淀粉酶、核酸酶、蛋白酶、脂酶。三脂酰甘油?；饷?(EC3.1.1.3)脂肪酶AOH + BHAB + H2O2022/7/10344、 裂合酶類（裂解酶）催化從底物上移去一個(gè)基團(tuán)而形成雙鍵的反應(yīng)或其逆反應(yīng)，包括水化酶、醛縮酶以及脫氨酶等。ABA+B延胡索酸水合酶EC 4.2.1.2延胡索酸酶延胡索酸L-蘋果酸2022/7/10355、 異構(gòu)酶催化同分異構(gòu)體相互轉(zhuǎn)化 6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶(EC.5.3.1.9)A-BA-Bgg2022/7/10366、 合成酶（連接酶）催化一切必須與ATP分解相偶聯(lián)、并由兩種物質(zhì)合成一種物質(zhì)的反應(yīng)。 A + B + A

12、TP + H2O=A-B + ADP +Pi 丙酮酸羧化酶（EC 6.4.1.1 ） 丙酮酸 + CO2 +ATP 草酰乙酸+ADP+Pi2022/7/1037乙醇脫氫酶EC1.1.1.1 ，乳酸脫氫酶EC1.1.1.27 ， 蘋果酸脫氫酶EC1.1.1.37第一個(gè)數(shù)字表示大類： 氧化還原第二個(gè)數(shù)字表示反應(yīng)基團(tuán)：醇基第三個(gè)數(shù)字表示電子受體：NAD+或NADP+第四個(gè)數(shù)字表示此酶底物：乙醇，乳酸，蘋果酸。 2022/7/1038溶菌酶是體內(nèi)免疫系統(tǒng)的一部分，可殺滅革蘭氏陽(yáng)性菌，最早在蛋清中發(fā)現(xiàn)。溶菌酶結(jié)合到細(xì)菌表面，減少負(fù)電荷并協(xié)助對(duì)細(xì)菌的吞噬作用。新生兒缺乏溶菌酶會(huì)導(dǎo)致肺支氣管發(fā)育不良。食用缺

13、乏溶菌酶的配方奶粉會(huì)使嬰兒腹瀉的概率提高三倍。眼淚中缺乏溶菌酶會(huì)導(dǎo)致結(jié)膜炎。溶菌酶 EC 3.2.1.173水解酶2水解糖苷鍵1第四位碳原子的糖苷鍵17N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺第四位碳原子的糖苷鍵2022/7/1039輔酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與功能一輔酶在酶促反應(yīng)中的特點(diǎn)二第二節(jié) 輔酶2022/7/1040酶簡(jiǎn)單酶：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等。 結(jié)合酶酶蛋白輔助因子（簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)）（結(jié)合蛋白質(zhì)）輔酶輔基全酶 = 酶蛋白 + 輔助因子酶的組成金屬離子2022/7/1041 酶的輔助因子主要有金屬離子和有機(jī)化合物金屬離子：Fe2+、Fe3+ 、 Zn2+、 Cu+、Cu2+、 Mn2+、Mn3+

14、、Mg2+ 、K+、 Na+ 、Mo6+ 、Co2+等。有機(jī)化合物：NAD，NADP，F(xiàn)AD，生物素，卟啉等 2022/7/1042與酶蛋白結(jié)合比較疏松的小分子有機(jī)物，可透析除去與酶蛋白結(jié)合緊密的小分子有機(jī)物輔酶輔基2022/7/1043酶蛋白和輔助因子單獨(dú)存在均無(wú)催化活性，只有二者結(jié)合為全酶才有催化活性。酶蛋白決定酶催化專一性，輔助因子通常是作為電子、原子或某些化學(xué)基團(tuán)的載體決定反應(yīng)的性質(zhì)。2022/7/1044一、輔酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與功能大多數(shù)輔酶的前體是維生素，主要是水溶性B族維生素，許多維生素的生理功能與輔酶的作用密切相關(guān)。2022/7/10451維生素B1（硫胺素thiamine） （1

15、）結(jié)構(gòu) 噻唑環(huán)2022/7/1046硫胺素+ATP TPP+AMP焦磷酸硫胺素2022/7/1047（2）功能 B1的輔酶形式TPP，是丙酮酸脫羧酶和-酮 戊二酸脫羧酶的輔酶，參與-酮酸的氧化脫 羧。另外還是轉(zhuǎn)酮酶的輔酶，參與糖代謝。 促進(jìn)年幼動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育 保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng) 2022/7/1048（3）缺乏癥 腳氣?。ㄆつw麻木、肌肉萎縮及下肢浮腫，以及心力衰竭、等癥狀）中樞神經(jīng)和腸胃患糖代謝失常2022/7/10492維生素B2（核黃素riboflavin） （1）結(jié)構(gòu) 異吡咯嗪環(huán)2022/7/1050黃素單核苷酸FMN黃素腺嘌呤二核苷酸FAD2022/7/1051（2）功能 維生素B2是FMN

16、，F(xiàn)AD的組成成分，F(xiàn)MN和FAD是脫氫酶的輔酶。 （3）缺乏癥 口腔炎等粘膜?。谇谎住⒄衬ぱ?、眼瞼角膜炎等）2022/7/1052（4）性質(zhì) 氧化型的FMN或FAD是黃色的，還原后成無(wú)色。 FMN或FAD有強(qiáng)烈的黃綠色熒光，還原后熒光消失。 紫外吸收氧化態(tài)吸收峰為260nm，375nm，450nm，還原后260nm還存在，但375nm，450nm的吸收峰消失。2022/7/10533維生素B3（泛酸，遍多酸pantothenic acid） （1）結(jié)構(gòu) 2022/7/1054輔酶A乙酰輔酶A2022/7/1055（2）功能 B3是CoA的組成成分，CoA是生物體內(nèi)轉(zhuǎn)?；傅妮o酶（主要作為轉(zhuǎn)

17、乙酰基酶的輔酶），參與轉(zhuǎn)?；饔?。 （3）缺乏癥 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，毛發(fā)邊灰白，并自行脫落。2022/7/10564維生素B5（也稱維生素pp、抗癩皮病維生素或 煙酰胺nicotinamide） （1）結(jié)構(gòu) 維生素B5是吡啶的衍生物 吡啶-3-羧酸 nicotinic acid 吡啶-3-酰胺 nicotinamide2022/7/1057煙酰胺腺嘌呤二核苷酸煙酰胺腺嘌呤磷酸二核苷酸2022/7/1058（2）功能 B5是NAD+和NADP+的組成成分，NAD+和NADP+是許多脫氫酶的輔酶，參與遞氫。糙皮?。?）缺乏癥 2022/7/10595維生素B6（吡哆素） （1）結(jié)構(gòu) 吡哆醛吡哆醇吡哆胺20

18、22/7/1060( PLP )( PMP )2022/7/1061（2）功能 PLP和PMP主要作為氨基酸轉(zhuǎn)氨酶、氨基酸脫羧酶、氨基酸消旋酶的輔酶。 血液、皮膚、神經(jīng)等的損害（3）缺乏癥 2022/7/10626維生素B7（生物素biotin） （1）結(jié)構(gòu) （尿素部分）（C5酸根部分）（硫戊烷環(huán)部分）2022/7/10632022/7/1064（2）功能 B7作為多種羧化酶的輔酶，起CO2載體的作用。 皮炎、肌肉疼痛等（3）缺乏癥 2022/7/10657維生素B11（葉酸folic acid） （1）結(jié)構(gòu) 2022/7/1066（2）功能 葉酸在5、6、7、8位加上四個(gè)氫，生成四氫葉酸（F

19、H4），是合成酶的輔酶。 巨幼紅細(xì)胞性貧血，胎兒神經(jīng)管畸形（3）缺乏癥 2022/7/10678維生素B12（氰鈷胺素cyanocobalamin） （1）結(jié)構(gòu) B12的咕啉核心2022/7/1068二甲基苯并咪唑核苷酸氨基異丙醇氰鈷胺素cyanocobalamin2022/7/10695脫氧腺苷2022/7/1070（2）功能 主要的輔酶形式是5脫氧腺苷鈷胺素 另一種輔酶形式是甲基鈷胺素 惡性貧血（3）缺乏癥 2022/7/1071B12輔酶的功能 分子內(nèi)重排 2022/7/10729. 其它的輔酶（1） CoQ(泛醌)n=610，微生物n=6，動(dòng)物組織n=10。結(jié)構(gòu):功能: 傳遞氫或電子2

20、022/7/1073（2）硫辛酸Ox型Red型硫辛酸（6,8-二硫辛酸）2022/7/1074功能: 在機(jī)體代謝中，作為酰基載體。2022/7/1075二、輔酶在酶促反應(yīng)中的作用特點(diǎn)輔酶在催化反應(yīng)過(guò)程中，直接參加了反應(yīng)。每一種輔酶都具有特殊的功能，可以特定地催化某一類型的反應(yīng)。同一種輔酶可以和多種不同的酶蛋白結(jié)合形成不同的全酶。一般來(lái)說(shuō)，全酶中的輔酶決定了酶所催化的類型（反應(yīng)專一性），而酶蛋白則決定了所催化的底物類型（底物專一性）。2022/7/1076酶分子結(jié)構(gòu)一酶催化作用機(jī)制二第三節(jié) 酶的結(jié)構(gòu)和酶的催化作用機(jī)制酶催化作用專一性機(jī)制三2022/7/1077活性中心(active center

21、) ：酶分子中結(jié)合底物并起催化作用的少數(shù)氨基酸殘基，包括底物結(jié)合部位、催化部位。一、酶分子結(jié)構(gòu)2022/7/1078結(jié)合部位 酶分子中與底物結(jié)合的部位或區(qū)域一般稱為結(jié)合部位，結(jié)合部位決定酶的專一性。2022/7/1079催化部位 酶分子中促使底物發(fā)生化學(xué)變化的部位稱為催化部位，催化部位決定酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)。使底物的價(jià)鍵狀態(tài)發(fā)生形變或極化，起到激活底物分子和降低過(guò)渡態(tài)活化能作用。 2022/7/1080必需基團(tuán)(essential group)：酶分子中氨基酸殘基側(cè)鏈的化學(xué)基團(tuán)中，一些與酶活性密切相關(guān)的基團(tuán)，活性中心內(nèi)外都有。包括：親核性基團(tuán)和酸堿性基團(tuán)。2022/7/1081 親核性基團(tuán)：絲

22、氨酸的羥基，半胱氨酸的巰基和組氨酸的咪唑基。2022/7/1082 酸堿性基團(tuán)：門冬氨酸和谷氨酸的羧基，賴氨酸的氨基，酪氨酸的酚羥基，組氨酸的咪唑基和半胱氨酸的巰基等。2022/7/1083底 物 活性中心以外的必需基團(tuán)結(jié)合部位催化部位 活性中心 2022/7/1084四1降低活化能2中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō)3高效性機(jī)制4專一性機(jī)制二、酶催化作用的機(jī)制2022/7/10851.活化能降低反應(yīng)總能量改變 非催化反應(yīng)活化能 酶促反應(yīng) 活化能 一般催化劑催化反應(yīng)的活化能 能量 反 應(yīng) 過(guò) 程 底物 產(chǎn)物 酶促反應(yīng)活化能的改變 2022/7/10862.中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō) 在酶催化的反應(yīng)中，第一步是酶與底物形成酶底物中

23、間復(fù)合物。當(dāng)?shù)孜锓肿釉诿缸饔孟掳l(fā)生化學(xué)變化后，中間復(fù)合物再分解成產(chǎn)物和酶。許多實(shí)驗(yàn)事實(shí)證明了ES復(fù)合物的存在。ES復(fù)合物形成的速率與酶和底物的性質(zhì)有關(guān)。k1k-12022/7/1087酶催化作用的本質(zhì)是酶的活性中心與底物分子通過(guò)短程非共價(jià)力(如氫鍵,離子鍵和疏水鍵等)的作用，形成E-S反應(yīng)中間物。其結(jié)果使底物的價(jià)鍵狀態(tài)發(fā)生形變或極化，起到激活底物分子和降低過(guò)渡態(tài)活化能作用。 與反應(yīng)過(guò)渡狀態(tài)結(jié)合作用2022/7/10883. 與酶作用高效性有關(guān)的因素 鄰基反應(yīng)與定向反應(yīng)多功能催化作用廣義酸堿催化 共價(jià)催化efficiency2022/7/10894.酶作用專一性的機(jī)制 2022/7/1090(1

24、)“三點(diǎn)結(jié)合”的催化理論認(rèn)為酶與底物的結(jié)合處至少有三個(gè)點(diǎn)，而且只有一種情況是完全結(jié)合的形式。只有這種情況下，不對(duì)稱催化作用才能實(shí)現(xiàn)。2022/7/10912022/7/1092 認(rèn)為整個(gè)酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特定的形狀。酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對(duì)一把鎖一樣。(2)鎖鑰學(xué)說(shuō)2022/7/1093鎖鑰學(xué)說(shuō)2022/7/1094 該學(xué)說(shuō)認(rèn)為酶表面并沒(méi)有一種與底物互補(bǔ)的固定形狀，而只是由于底物的誘導(dǎo)才形成了互補(bǔ)形狀。(2)誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)2022/7/1095誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)2022/7/1096第四節(jié) 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)2022/7/1097酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究各種因素對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響

25、。影響因素包括有酶濃度、底物濃度、pH、溫度、抑制劑、激活劑等。2022/7/1098一、 底物濃度的影響 1米氏方程2米氏常數(shù)的求算2022/7/10991.米氏方程k1k-12022/7/10100令酶的原始濃度為E0，反應(yīng)達(dá)穩(wěn)態(tài)后，一部分變?yōu)橹虚g化合物ES，余下的濃度為E2022/7/10101k1k-1以r為縱坐標(biāo)，以S為橫坐標(biāo)作圖2022/7/101022.當(dāng)?shù)孜餄舛群艽髸r(shí)，SKM，r =k2E0，反應(yīng)只與酶的濃度有關(guān)，而與底物濃度無(wú)關(guān)，對(duì)S呈零級(jí)。酶催化的反應(yīng)速率曲線1.當(dāng)SE。 產(chǎn)物濃度P(t)2022/7/101304. 酶活力的測(cè)定方法 （1）分光光度法（spectrophotometry） 該法要求酶的底物和產(chǎn)物在紫外或可見(jiàn)光部分光吸收不同。 如氧化還原酶類。簡(jiǎn)便、迅速、準(zhǔn)確。 一個(gè)樣品可多次測(cè)定，有利于動(dòng)力學(xué)研究。 可檢測(cè)到10-9mol/L水平的變化。 優(yōu)點(diǎn)：2022/7/10131乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ 乳酸脫氫酶 乳酸脫氫酶的活力可用丙酮酸的增加量表示，也可用340nm光吸收的增加量來(lái)表示。 2022/7/10132（2）熒光法（fluorometry） 該法要求酶反應(yīng)的底物或產(chǎn)物有熒光變化。 主要的優(yōu)點(diǎn)：靈敏度很高，