臨床免疫組化實(shí)用大全

1、免疫組化定義:免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理一一抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性 結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位 素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量 的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry）或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（immunocytochemistry）。臨床常用免疫組化指標(biāo)的意義臨床病理工作中，我們常用到“腫瘤細(xì)胞免疫組化 耐藥預(yù)后標(biāo)記"，但是許多單位只寫陽性結(jié)果，不寫臨床意義，其結(jié)果對臨床幫 助不大，因?yàn)樵S多醫(yī)生不懂得這些結(jié)果的意義，因此建議大家在出此類報(bào)告時， 把“腫瘤細(xì)胞免

2、疫組化耐藥預(yù)后標(biāo)記"的意義打印在報(bào)告中,以增加病理報(bào)告的使 用價值.1、惡性腫瘤免疫組化耐藥預(yù)后標(biāo)記，全套4項(xiàng)：P-gP, GSTn, TOPOlI,Ki 67。2、乳癌免疫組化耐藥預(yù)后標(biāo)記，全套7項(xiàng)：P-gp,GSTn, TOPOlI, Ki 67,ER, PR, C-erbB2。3、意義:標(biāo)記物-作用-陽性部位臨床意義多藥 耐藥基因蛋白（P-Gp）-藥泵作用-胞膜/胞漿-陽性率越高，對下列藥物耐藥 性越強(qiáng)：阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、米托蒽醍、長春花堿、長春新堿、紫彬 醇、泰素帝。谷光甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GST n）解毒作用-胞漿一一陽性率越高， 對下列藥物耐藥性越強(qiáng)：阿霉素、順鉑、氮

3、芥、環(huán)磷酰胺、瘤可寧。拓?fù)洚悩?gòu)酶 II（TOPOII）靶點(diǎn)作用一一胞核-陽性率越高，對下列藥物越有效：蒽環(huán) 類抗生素和鬼臼毒素類，如VP16、替尼泊昔、玫瑰樹堿、新霉素、柔紅霉素、 表阿霉素、阿霉素、VM26。陽性率高者對VP16尤其有效。雌激素受體（ER） - 一性激素作用一一胞核-陽性率越高，腫瘤對內(nèi)分泌治療越有效，預(yù)后越好。 孕激素受體（PR）-性激素作用一一胞核-陽性率越高，腫瘤對內(nèi)分泌治療越 有效，預(yù)后越好.CerbB2-癌基因產(chǎn)物-胞漿-陽性率越高，腫瘤惡性程度越 高。ER、PR陽性而CerbB2也陽性者,用三苯氧胺治療效果不好。Ki-67 細(xì)胞增殖標(biāo)志-胞核-陽性率越高，腫瘤增殖

4、越快，惡性程度越高。Ki-67為細(xì) 胞增值的一種標(biāo)記，在細(xì)胞周期G1、S、G2、M期均有表達(dá)，G0期缺如，其和 許多腫瘤分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。PCNA （增埴細(xì)胞核抗原）.CEA多 數(shù)腺癌表達(dá)CEARb （retinoblastoma視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤）基因是腫瘤抑制基因，調(diào)節(jié) 細(xì)胞周期。P53在免疫組化中均為突變型，陽性率越高，預(yù)后約差.野生型半衰期 很短N(yùn)m23是轉(zhuǎn)移抑制基因,其陽性表達(dá)和腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。目前已被廣泛應(yīng) 用于乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、喉癌等多種惡性腫瘤的檢測。 幾乎所有的研究都表明,nm23蛋白高表達(dá)患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率相對較低，存活期相 對較長。E

5、Ca,E鈣粘附蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞間粘連作用的跨膜糖蛋白,其功能喪失引 起細(xì)胞之間連接的破壞,主要用于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面的研究。PS2 （雌激素調(diào)節(jié) 蛋白），其表達(dá)和ER表達(dá)有關(guān)，可作為內(nèi)分泌治療和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。CK18, 低分子量角蛋白，主要標(biāo)記各種單層上皮包括腺上皮，而復(fù)層鱗狀上皮常陰性， 主要用于腺癌診斷。CK19,分布于單層上皮和間皮，常用于腺癌診斷，肝細(xì)胞不 表達(dá)，而膽管為陽性反應(yīng)Hep par 1 ,肝細(xì)胞抗原，正常肝細(xì)胞和高分化肝細(xì)胞癌 陽性，低分化肝細(xì)胞癌多弱陽性或陰性。CK20,用于胃腸道腺癌、卵巢黏液性腫 瘤、皮膚Merkel細(xì)胞癌診斷。鱗癌、乳腺癌、肺癌、子宮內(nèi)膜和卵巢非

6、黏液性腫瘤常陰性.CK7卵巢、肺和乳腺上皮常陽性，結(jié)腸、前列腺、胃腸道上皮陰性。 Villin絨毛蛋白，正常組織中，villin通常只表達(dá)于有刷狀緣的細(xì)胞上，如胃腸道 上皮細(xì)胞、胰腺和膽管上皮細(xì)胞以及腎實(shí)質(zhì)的上皮細(xì)胞中（特別是近曲小 管）.Villin在胃腸道癌、胰腺癌、膽囊癌和膽管癌組織中有很高的表達(dá)率，具有 明顯腺樣結(jié)構(gòu)的腫瘤上沒有villin表達(dá)，則這個腫瘤為胃腸道、胰腺、膽囊或膽 管來源的可能性極低.乳腺癌也經(jīng)常成為女性患者未知原發(fā)部位轉(zhuǎn)移癌要鑒別排 除的一種疾病。因?yàn)樵谵D(zhuǎn)移癌組織上觀察到明顯的villin免疫組化陽性染色，則 這個腫瘤就極不可能為乳腺來源.其他villin免疫組化染色

7、通常為陰性表達(dá)的腫瘤 還有：如卵巢漿液性癌、尿道移行細(xì)胞癌和前列腺癌。間皮瘤也經(jīng)常為villin陰 性表達(dá)，因此在一些情況下Villin還可以作為鑒別間皮瘤和腺癌使用抗體的一種. 但是也有一些非胃腸道來源的腫瘤可表達(dá)villin，如子宮內(nèi)膜樣腺癌、卵巢粘液 性癌、腎細(xì)胞癌和小部分肺癌。也有一些專家報(bào)道Villin在部分宮頸內(nèi)膜腺癌病 例中表達(dá)。肝癌的診斷Villin免疫組化染色可以顯示出毛細(xì)膽管結(jié)構(gòu)，因此它也可 能在表達(dá)部分肝癌的管狀結(jié)構(gòu)上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一種試劑， 而且CD10（CALLA）在表達(dá)肝癌的該結(jié)構(gòu)上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10 £

8、八皿2在肝癌病例上的表達(dá),相互之間并沒有任何的沖突，因此如果懷疑肝癌的 可能性，建議將這三種抗體共同使用以協(xié)助疑難病例的診斷。Villin在神經(jīng)內(nèi)分 泌腫瘤上的應(yīng)用Villin在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的研究上也很有幫助。眾所周知，類癌 和胰腺的胰島細(xì)胞腫瘤具有相相似的形態(tài)學(xué)特征，僅在形態(tài)學(xué)上區(qū)分這兩種腫瘤 幾乎是不可能的.Villin在這種情況下特別有用，因?yàn)閾?jù)文獻(xiàn)報(bào)道在85%的胃腸道類 癌病例中有villin的表達(dá)，但在胰島細(xì)胞腫瘤上未見陽性表達(dá)報(bào)道。Villin在類癌 上的表達(dá)通常為胞膜陽性。另外，有一些證據(jù)表明villin在胃和下消化道的小細(xì)胞 癌上的表達(dá)率比在其他部位的小細(xì)胞癌上要高.如:肺、

9、食道、膀胱或前列腺等。 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，大約有40%的肺類癌病例villin陽性，在其他一些神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤上， 如甲狀腺髓樣癌和少數(shù)的美克爾細(xì)胞瘤上也有villin的表達(dá)。MRP1多藥耐藥相關(guān) 蛋白1,影響化療敏感性，和預(yù)后相關(guān)。MDR多藥耐藥基因TS胸背合成酶，是 5-FU重要作用靶點(diǎn)，如果其高表達(dá)，陽性反映+以上，提示腫瘤細(xì)胞對5FU耐 藥。Syn突觸素神經(jīng)組織標(biāo)志S-100神經(jīng)組織標(biāo)志，存在于神經(jīng)組織，垂體、 頸動脈體，腎上腺髓質(zhì)、唾液腺、少數(shù)間葉組織，常用于神經(jīng)鞘瘤、惡黑、脂肪 肉瘤、軟骨腫瘤診斷。NSE主要用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷8,嗜銘素，腎上腺髓 質(zhì)含量很高，鑒別腎上腺髓質(zhì)和皮質(zhì),用于

10、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷。CKH高分子角 蛋白，主要標(biāo)記鱗狀細(xì)胞腫瘤CKL低分之角蛋白，主要標(biāo)記單層上皮、腺上皮EMA 上皮膜抗原,糖蛋白，廣泛分布各種上皮及其腫瘤Vim波形蛋白，間葉組織標(biāo)志 P504甲酰基輔酶A消旋酶檢測診斷前列腺癌的敏感性為97 %，特異性為100%.AMACR的優(yōu)點(diǎn)在于它是癌癥特異性，只存在于癌癥組織.Rubin稱，AMACR 亦可用作其他癌癥的診斷標(biāo)志物。對各種癌癥細(xì)胞進(jìn)行檢查后發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸直腸癌、 卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都過度表達(dá)AMACR,以結(jié)腸 直腸癌和前列腺癌表達(dá)最高。CD117胃腸間質(zhì)瘤CD10作為共同急性淋巴母細(xì)胞 型白血病抗原，主要表達(dá)于未

11、成熟淋巴細(xì)胞，在Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病 等造血系統(tǒng)疾病的診斷中具有應(yīng)用價值.近幾年來發(fā)現(xiàn)該抗原在造血系統(tǒng)外的某 些腫瘤中有表達(dá)，如子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、惡性黑色素瘤等?？贵w在對腎細(xì)胞癌進(jìn) 行診斷和鑒別時有一定的參考價值.CD15是一種細(xì)胞粘附分子，因其對霍奇金淋 巴瘤（HD）中的R-S細(xì)胞具有良好的標(biāo)記作用，被認(rèn)為是HD的重要標(biāo)志物。 除HD的鑒別診斷外，對胃癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、乳腺癌等腫瘤CD15的表 達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，CD15表達(dá)隨癌細(xì)胞分化程度下降、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期增高而 明顯增高。認(rèn)為CD15的表達(dá)是判斷腫瘤的發(fā)展、預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的良好 指標(biāo)。免疫電鏡觀察顯示，CD1

12、5抗原主要分布于大腸癌細(xì)胞漿的界膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、 高爾基體及近細(xì)胞核膜處，CD15可能是通過對所結(jié)合的鋪基構(gòu)型改變影響和參 與腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移過程。SMA平滑肌肌動蛋白，標(biāo)記平滑肌CD56為神經(jīng)細(xì) 胞黏附分子，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細(xì)胞，常用于星型細(xì)胞瘤、神經(jīng) 母細(xì)胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷，也是NK細(xì)胞瘤的重要標(biāo)志，也標(biāo)記小細(xì)胞肺癌 Des,結(jié)蛋白，廣泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞，高分化高表達(dá)、 低分化低表達(dá).MSA肌特異性肌動蛋白，廣泛分布于幾乎所有肌型細(xì)胞中CD68 存在于骨髓和各神經(jīng)組織的巨噬細(xì)胞用于粒細(xì)胞白血病、各種單核細(xì)胞來源腫 瘤、包括惡性纖維組織細(xì)胞瘤診斷(首

13、選)。CD34表達(dá)于早期淋巴造血干細(xì)胞、 祖細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、胚胎纖維母細(xì)胞和某些神經(jīng)組織細(xì)胞，多用于標(biāo)記血管內(nèi)皮 細(xì)胞，血管源性腫瘤的診斷，GIST 80-90%.CD31也標(biāo)記血管內(nèi)皮。CD44是一種 分布廣泛的跨膜糖蛋白分子，分CD44s和CD44v兩大類.CD44s主要作為透明質(zhì) 酸受體，結(jié)合透明質(zhì)酸后影響腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。而CD44v則主要表達(dá)于轉(zhuǎn)移 的腫瘤細(xì)胞。李道明等用免疫組化LSAB法檢測了 42例食管鱗癌CD44V4 / 5的 表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為76. 19% (16/21),而非轉(zhuǎn)移 組的陽性率為42. 86%(9/12),兩組間有顯著性差異。癌巢周邊

14、的癌細(xì)胞、肌 間浸潤的癌細(xì)胞、有核分裂的癌細(xì)胞和癌栓中的癌細(xì)胞及浸潤脈管壁的癌細(xì)胞 均呈強(qiáng)陽性表達(dá).張成武等檢測了 20例正常胃粘膜上皮、43例異型增生和85例 胃癌組織CD44V6的表達(dá)，結(jié)果正常胃粘膜無表達(dá)，而異型增生和胃癌組織陽性 率分別為30. 2%和74. 1%,其表達(dá)強(qiáng)度與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤 生長方式、靜脈和淋巴管侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以上結(jié)果均表明，CD44V 的高表達(dá)構(gòu)成了腫瘤細(xì)胞的侵襲性與易轉(zhuǎn)移性.NESTIN,神經(jīng)干細(xì)胞中極為豐富 Ost成骨素，為骨化細(xì)胞分泌。AAT抗胰蛋白酶 纖維組織細(xì)胞來源腫瘤ACT抗 糜蛋白酶GFAP膠質(zhì)纖維酸性蛋白神經(jīng)組織標(biāo)志，多用于

15、星形膠質(zhì)瘤診斷Tg甲 狀腺球蛋白，甲狀腺癌TG陽性。CT降鈣素甲狀腺髓樣癌陽性。PH甲狀旁腺 素甲狀旁腺腫瘤陽性N-myc表達(dá)增強(qiáng)的小細(xì)胞肺癌和神經(jīng)母細(xì)胞瘤對化療缺 乏反應(yīng)并進(jìn)展快速；bcl2：耐藥機(jī)理為抗凋亡作用，高表達(dá)者對多數(shù)抗癌藥物 /放射治療耐受。腫瘤相關(guān)抗原72 (TGA72)多種惡性上皮性腫瘤表達(dá)TGA72, 尤其是乳腺癌、卵巢癌和結(jié)腸癌。正常上皮細(xì)胞、肉瘤、淋巴造血系統(tǒng)腫瘤通常 TGA72陰性。TGA72抗體用于乳腺癌的研究較多，其高表達(dá)通常與腫瘤體積大、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞分化差及高增殖活性有關(guān)。腫瘤相關(guān)抗原(GA733)編碼上皮糖 蛋白40,是一種上皮細(xì)胞黏附分子(EPCAM)

16、,對上皮細(xì)胞的生長與分化起著 重要作用。多種腫瘤可有GA733表達(dá)，尤其是乳腺癌、結(jié)腸癌及肺癌等。Kubuschok 等采用GA733對非小細(xì)胞肺癌手術(shù)切除淋巴結(jié)中隱匿性微轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行檢測，發(fā) 現(xiàn)隱匿灶的檢出是判斷總生存率的獨(dú)立預(yù)后因子.結(jié)腸癌GA733表達(dá)形式與腫瘤 預(yù)后有關(guān)，細(xì)胞膜及細(xì)胞漿的表達(dá)預(yù)后較基膜側(cè)的表達(dá)為差.TTF-1甲狀腺轉(zhuǎn)錄因 子一1,TTF1表達(dá)于甲狀腺腺上皮和肺的上皮細(xì)胞中。在肺腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)，大 多數(shù)肺的小細(xì)胞癌、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腺癌、少部分大細(xì)胞未分化肺癌、大多數(shù) 非典型神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤免疫組化結(jié)果顯示TTF-1陽性，而肺鱗癌及絕大多數(shù)典型 類癌TTF-1陰性。在甲狀腺乳

17、頭狀腺癌中TTF-1亦陽性，而TTF在其它組織表達(dá)陰 性。據(jù)此認(rèn)為TTF-1可用來鑒別肺腺癌與鱗癌，并有助于與肺轉(zhuǎn)移性腺癌的鑒 別。TTF-1在甲狀腺及其腫瘤中的表達(dá)TTF-1主要表達(dá)在甲狀腺濾泡細(xì)胞中和甲狀旁腺的主細(xì)胞中，TTF-1為甲狀腺分化和甲狀腺球蛋白分泌調(diào)節(jié)的基礎(chǔ)物質(zhì)， 可促進(jìn)甲狀腺過氧化物酶、碘/鈉的轉(zhuǎn)運(yùn)，TTF-1與血清TSH的活性有關(guān)，活性 的TSH-R可增強(qiáng)TTF-1的表達(dá)。TTF-1在良惡性甲狀腺組織中表達(dá)不同，正常 甲狀腺和良性腺瘤表達(dá)多，甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌中表達(dá)少，未分化癌中不表 達(dá)，TTF-1在惡性甲狀腺病變中的表達(dá)強(qiáng)度隨年齡增加而增強(qiáng)，而且病變存瘤期 長,復(fù)發(fā)機(jī)

18、率高。TTF-1在肺癌中的表達(dá)75%的肺非小細(xì)胞癌（NSCLCs）陽性表達(dá), 腺癌（ACs）明顯高于鱗癌（SCC）, 90%以上的原發(fā)性小細(xì)胞肺癌（SCLC）表達(dá)陽性,TTF -1在非小細(xì)胞肺癌（NSCLCS）陽性表達(dá)強(qiáng)度與病人的預(yù)后成呈負(fù)相關(guān)，可作為一 項(xiàng)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)，肺的典型性類癌（TCS）均為陰性，表明小細(xì)胞肺癌和非小細(xì) 胞肺癌可能有一個不同于TCS的共同起源的理論。臨床常見的免疫組化指標(biāo)在乳腺癌診治中的應(yīng)用近年來，由于免疫組化實(shí)驗(yàn)方法 在各醫(yī)院病理科的迅速普及，許多患者的術(shù)后標(biāo)本可以進(jìn)行免疫組化檢查。這對 于患者的診斷、分型以及術(shù)后的綜合治療有著重要的意義.本文就臨床上常見的 一些指

19、標(biāo)及其意義進(jìn)行綜訴.一、激素受體（ER）和孕激素受體（PR）人類最先 發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞和激素的關(guān)系始于1896年.Bentson觀察到乳腺癌患者切除卵巢 后可使乳腺癌細(xì)胞的生長受到抑制。1967年Jensen發(fā)現(xiàn)人類乳腺癌中含有ER。 從此開始了真正意義上的乳腺癌內(nèi)分泌治療的研究.女性正常乳腺的細(xì)胞上存在 ER和PR,雌激素和孕激素通過ER和PR對細(xì)胞功能進(jìn)行調(diào)節(jié)。當(dāng)細(xì)胞惡變時, 腫瘤細(xì)胞可以部分地或全部保留正常的受體系統(tǒng)，其功能與正常細(xì)胞相似。這 種腫瘤細(xì)胞的生長仍然依賴原來的激素環(huán)境調(diào)節(jié)，稱為激素依賴性腫瘤，臨床上 稱為ER陽性乳腺癌.有些細(xì)胞在癌變過程中,其受體系統(tǒng)保留很少或完全喪失，不

20、能再作為激素的靶細(xì)胞，其生長不再受激素的控制與調(diào)節(jié)，臨床上表現(xiàn)為ER陰 性乳腺癌.Jensen發(fā)現(xiàn)ER后，很快又發(fā)現(xiàn)PR,并證明PR的合成與雌激素和ER 復(fù)合物在核內(nèi)發(fā)生的變化過程有關(guān)，PR的形成直接受ER的控制和調(diào)節(jié)，故PR陽 性的乳腺癌,ER大多為陽性。臨床上可以通過對雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR） 的檢測，得出腫瘤細(xì)胞內(nèi)激素受體含量的水平，從而提示乳腺癌的預(yù)后信息和指 導(dǎo)內(nèi)分泌治療。據(jù)報(bào)道乳腺癌ER、PR檢測的陽性率分別為40%60%、30%左右。 許多文獻(xiàn)均已證實(shí)，ER、PR變化與乳腺癌病人預(yù)后密切相關(guān)，亦與其他公認(rèn)的 預(yù)后因素，如腫瘤分級、倍體性及分期有關(guān).高分化腫瘤或臨床分

21、期較低的腫瘤 ER、PR更可能陽性，受體陽性腫瘤細(xì)胞的明顯減少與細(xì)胞增殖分級增高、c-erbB -2癌基因擴(kuò)增增加及EGFR表達(dá)增加有關(guān)。免疫組化抗受體檢測可預(yù)測乳腺癌 對激素治療的反應(yīng)性。無ER或PR表達(dá)的腫瘤對激素治療通常反應(yīng)性差，而ER及 PR陽性腫瘤則對激素治療反應(yīng)性高。1974年美國Bethesde國際會議，綜合世界 各國400多例各種方式的內(nèi)分泌治療報(bào)道，表明事先未經(jīng)激素受體測定的乳腺癌 患者，應(yīng)用內(nèi)分泌治療有效率只有30%;而經(jīng)ER測定陽性者有效率達(dá)55%60%, 受體陰性者有效率5%8%。TAM治療無效的原因與ER的異常結(jié)構(gòu)有關(guān)。其后 多年病例不斷積累，報(bào)道的有效率基本在這一水

22、平。1998年美國臨床腫瘤年會（ASCO）國際權(quán)威協(xié)作臨床研究報(bào)道37 000例乳腺癌患者的結(jié)果表明:乳腺癌 術(shù)后輔助三苯氧胺（TAM）治療可以明顯降低復(fù)發(fā)率、死亡率；TAM對絕經(jīng)后 患者有效，絕經(jīng)前患者也有一定療效;ER陽性患者用TAM效果最好，ER不明 的患者也有效；輔助化療后加用TAM,能進(jìn)一步提高療效；延長服藥時間能 提高療效;服用TAM明顯降低對測乳腺癌發(fā)生率；長期服用TAM會增加患子 宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險。二、PS2基因PS2蛋白是Masialowski于1982年從激素依賴性乳腺癌MCF-7細(xì)胞株中提取出來的雌激素誘導(dǎo)蛋白之一，在乳腺癌中表達(dá)陽性率 約為43%58%。PS2基因受雌激素

23、調(diào)節(jié)和控制，在雌激素誘發(fā)和控制下才能轉(zhuǎn) 錄，產(chǎn)生PS2蛋白.換言之PS2依賴于ER的存在?？梢哉J(rèn)為，PS2基因的存在與 ER、PB存在著密切正相關(guān)關(guān)系。Gion研究446例原發(fā)性乳腺癌，觀察PS2與ER、 PR關(guān)系。結(jié)果68. 5% PS2陽性病例，其ER、PB均陽性；而PS2陽性其ER、 PR均陰性者不足3%.Gillesby等報(bào)道ER（ + ）者中有59%,PR（ + ）者中有60% PS2 呈陽性。大量研究表明，PS2蛋白可以顯示功制性雌激素調(diào)節(jié)系統(tǒng),能更好的指導(dǎo) 臨床抗雌激素治療.目前認(rèn)為PS2對判斷預(yù)后及指導(dǎo)內(nèi)分泌治療均有價值，陽性 者預(yù)后好，復(fù)發(fā)率及死亡率均較低，且內(nèi)分泌治療有效.

24、作為內(nèi)分泌治療效果預(yù) 測的指標(biāo)，PS2可以補(bǔ)充ER、PR的不足，甚至有學(xué)者認(rèn)為PS2更優(yōu)于ER、PR。如 果將三者結(jié)合使用，可達(dá)到相當(dāng)滿意的效果.當(dāng)三項(xiàng)均陰性時，內(nèi)分泌治療很少有 效，預(yù)后甚差。三、c-erbB-2癌基因cerbB-2癌基因是乳腺組織細(xì)胞中較常見 而易激活的原癌基因.在多種腺癌細(xì)胞中此癌基因均有高水平表達(dá)，報(bào)道最多的 是乳腺癌。c-erbB-2癌基因的異常表達(dá)擴(kuò)增見于2530%的原發(fā)性乳腺癌病例, 并且僅限于癌細(xì)胞，而不出現(xiàn)于正常乳腺上皮。c-erbB-2擴(kuò)增與雌、孕激素 受體表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤級別較高有關(guān)。c-erbB-2基因表達(dá)陽性者可使ER 陽性病人對內(nèi)分泌治療的反應(yīng)率

25、降至20%； ER陰性病人內(nèi)分泌治療幾乎無效.c -erbB-2癌基因的擴(kuò)增或過度表達(dá)還與乳腺癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及生存期明顯相關(guān)。 過度表達(dá)者其術(shù)后早期復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率增加，生存期縮短，淋巴結(jié)陽性的乳 腺癌c-erbB-2的過表達(dá)是預(yù)后不良的重要因素。另有研究表明，乳腺癌c-erbB-2表達(dá)陽性病例其瘤腫往往大于2cm,因此推測其蛋白產(chǎn)物p185過量表達(dá) 可能與腫瘤的生長速度有關(guān)。因而c-erbB-2的強(qiáng)陽性表達(dá)可作為識別早期乳腺 癌的有效指標(biāo).近年來有人提出“四聯(lián)”檢測，包括ER、PR、PS2以及c-erbB-2。ER、PR、PS2陽性表達(dá)的乳腺癌激素治療的敏感性高，無c-erbB-2基因過度

26、擴(kuò) 增的乳腺癌同樣治療敏感性增加。相反，前三者陰性而后者陽性的乳腺癌，通常 其復(fù)發(fā)率、死亡率均高，預(yù)后差。四、p53抑癌基因p53是一種抑癌基因，是人 類研究最多的基因，分野生型（Wtp53）和突變型（Mtp53）。Wtp53在正常組織 內(nèi)含量低，半衰期短，僅3060分鐘，而免疫組化的敏感性無法檢測如此微量的抗 原成分。當(dāng)p53突變后，能和進(jìn)入組織內(nèi)的各種病毒蛋白、Wtp53蛋白、正常等 位基因蛋白和熱休克蛋白等結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物，在組織內(nèi)的半衰期長，含量 逐漸積累，為免疫組化的檢測提供了條件。其陽性表達(dá)率約2 5 %3 5%.Wtp53在正常組織中能參與細(xì)胞從G0期進(jìn)入G1期的負(fù)調(diào)節(jié)。從而

27、控制細(xì) 胞的增生，同時誘導(dǎo)細(xì)胞的程序性死亡。當(dāng)p53突變后則喪失了啟動細(xì)胞凋亡的 能力，結(jié)果使腫瘤細(xì)胞數(shù)目增加，從而使細(xì)胞呈現(xiàn)無休止生長而凋亡受到抑制. 在乳腺癌增生過程中有Mtp53基因表達(dá)，并隨著非典型增生程度的增加而增 加.p53表達(dá)水平與細(xì)胞的高度增生及腫瘤細(xì)胞的分化程度有關(guān)，分化越低惡性程 度越高的腫瘤，p53基因水平越高。p53基因蛋白陽性和ER陰性的乳腺癌患者預(yù) 后不良，生存期短。五、nm23nm23又稱為抗轉(zhuǎn)移癌基因，是一種抑癌基因，產(chǎn) 物是由152個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，與二磷酸核甘激酶（NDPK）的氨基酸序列 具有高度同源性。人類nm23基因有2個亞型:nm23H1和nm23

28、H2,兩者有88%同 源性，nm23H1與乳腺癌的預(yù)后關(guān)系更密切。nm23蛋白具有NDPK功能,通過影 響微管聚合而調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動，并通過影響G蛋白的信號傳遞而發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作 用，從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。但其作用并不依耐于NDPK的活性。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 與轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)的是nm23/NDPK的表達(dá)水平而不是NDPK的活性。nm23是獨(dú)立 預(yù)后指標(biāo)，其表達(dá)與年齡、腫瘤大小、ER、PR和C-erbB-2無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 狀況、組織學(xué)分型、分級及臨床分期均有顯著關(guān)系，nm23高表達(dá)者的預(yù)后明顯 好于低表達(dá)者。nm23表達(dá)降低的乳腺癌分化較低，ER表達(dá)水平低，并常常出現(xiàn) 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良。在乳腺癌進(jìn)展過

29、程中,nm23的表達(dá)水平降低。通過檢 測nm23可以把腋淋巴結(jié)陽性病人中可能發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和腋淋巴結(jié)陰性病人中有 潛在高轉(zhuǎn)移傾向的病例篩選出來，進(jìn)行相應(yīng)的預(yù)防性治療，從而提高治療效果。 六、多耐藥（MDR）基因腫瘤細(xì)胞耐藥是化療失敗的主要原因，引起耐藥的重要 原因之一是多藥耐藥性，即腫瘤細(xì)胞接觸一種抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性后，對多種結(jié) 構(gòu)和作用機(jī)制不同的其它抗癌藥也產(chǎn)生耐藥性。多藥耐藥（MDR）基因的產(chǎn)物P 糖蛋白（P-gp）是一種跨膜蛋白，作為“藥泵”功能引起癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥，它具 有膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的許多結(jié)構(gòu)特征，一旦與抗癌藥物結(jié)合，在ATP供能下，將藥物由 胞內(nèi)泵出胞外，因而胞內(nèi)藥物濃度不斷下降，以致無

30、法發(fā)揮細(xì)胞毒作用，出現(xiàn)耐 藥性。陽性表達(dá)的細(xì)胞對化療劑尤其是蒽環(huán)類和長春花堿類及阿霉素等化療劑， 具有固有和獲得性耐藥。P-gp表達(dá)可見于高度固有耐藥的腫瘤,在這些腫瘤,P- gp的高水平表達(dá)亦見于產(chǎn)生這些腫瘤的正常組織。對化療敏感的腫瘤通常P-gp 表達(dá)率低，那些對系統(tǒng)化療最敏感的實(shí)體瘤（精原細(xì)胞瘤和胚胎性癌）很少出 現(xiàn)P-gp表達(dá)，曾接受過化療患者發(fā)生的腫瘤常有P-gp表達(dá)增強(qiáng)。檢測P-gp表達(dá) 有助于確定可能對常規(guī)化療耐藥的腫瘤，從而提供適合于這些病人合理的替代治 療方法，對腫瘤病人選擇化療方案和預(yù)后的判斷具有重要的臨床意義。七、血 管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）血管形成在腫瘤生長、浸潤

31、、轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用， 它受到一系列促進(jìn)和抑制因子的調(diào)節(jié)，其中最重要的促進(jìn)因子之一是腫瘤細(xì)胞在 生長過程中分泌的VEGF,它的編碼基因位于6P21。3,由8個外顯子構(gòu)成，由 于mRNA不同的剪切形式，形成5種不同的VEGF分別含有121、145、165、189、 206個氨基酸，其中以VEGF165最重要，在各種細(xì)胞中表達(dá)占優(yōu)勢,VEGF121和 VEGF189在大部分表達(dá)VEGF的組織和細(xì)胞中均能檢測到，VEGF145和VEGF206 非常少見，其中VEGF206只在人胎肝cDNA庫中可以檢測到.VEGF通過二硫鍵結(jié) 合形成二聚體后才有活性，它的受體為酪氨酸蛋白激酶型膜受體，具有高度特異 性.

32、當(dāng)VEGF與受體結(jié)合后，可以刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,促進(jìn)血管形成，并增加血 管通透性，這樣腫瘤細(xì)胞一方面可以獲得充分的營養(yǎng)而迅速增殖，另一方面也容 易通過血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入血流從而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移.VEGF主要由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生,小 部分來自細(xì)胞間質(zhì)，它是獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)，與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)無關(guān)，與ER、PR呈負(fù)相 關(guān)，高表達(dá)者易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，預(yù)后不良，且內(nèi)分泌治療和化療的效果差,建議對VEGF 高表達(dá)者聯(lián)合應(yīng)用抗血管生成治療，如利用VEGF單抗阻斷與受體結(jié)合，重組 VEGF與VEGF競爭受體，將VEGF與小分子毒性物質(zhì)結(jié)合，利用反義核酸技術(shù)抑制 VEGF表達(dá)等等。七、腫瘤細(xì)胞增生標(biāo)志物目前被廣泛采用的兩種增殖相關(guān)

33、標(biāo)志 物是Ki-67及PCNA （增埴細(xì)胞核抗原）。PCNA （增殖細(xì)胞核抗原）：是一種僅在 增殖細(xì)胞中合成或表達(dá)的核內(nèi)多肽，其表達(dá)與細(xì)胞周期有關(guān).主要表達(dá)于增殖細(xì) 胞的S期、G1期和G2初期。Ki67與PCNA 一樣，為細(xì)胞增殖的一種標(biāo)記，在 細(xì)胞凋亡中S、G2、M期均有表達(dá)，G0期缺如。Ki-67增殖指數(shù)高低與許多腫 瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)。Ki-67與PCNA免疫反應(yīng)性與細(xì) 胞增生的形態(tài)學(xué)特征關(guān)系密切，特別是與有絲分裂數(shù)及腫瘤分級相關(guān)。在乳腺腫 瘤中，其表達(dá)還與其他分化及預(yù)后指標(biāo)相關(guān)，如與雌孕激素受體表達(dá)呈負(fù)相關(guān)， 而與P53基因異常呈正相關(guān)。在乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸 癌、肺癌、肝癌、胃 癌和一些淋巴瘤及肉瘤，采用Ki-67與PCNA免疫組化分析，均顯示有增殖證據(jù)，提