檢驗(yàn)方法驗(yàn)證、檢驗(yàn)方法確認(rèn)實(shí)例(年版GMP)

1、精品檢驗(yàn)方法確認(rèn)報(bào)告檢驗(yàn)方法確認(rèn) - 產(chǎn)品名稱確認(rèn)報(bào)告編號(hào)人工牛黃甲硝唑膠囊R-TS-VP-4001-00批號(hào)： 20151201、 20151202、20151203驗(yàn)證工作組工作組職務(wù)姓名部門及職務(wù)職責(zé)組長(zhǎng)黃漢新質(zhì)量負(fù)責(zé)人 / 質(zhì)量受權(quán)人負(fù)責(zé)確認(rèn)方案及報(bào)告的批準(zhǔn)副組長(zhǎng)曾鳳敏質(zhì)量部 QC 組長(zhǎng)負(fù)責(zé)確認(rèn)方案起草、 實(shí)施、匯總報(bào)告及培訓(xùn)工作副組長(zhǎng)胡建新質(zhì)量部 QA 組長(zhǎng)審核確認(rèn)方案、審核驗(yàn)證報(bào)告并協(xié)調(diào)工作組員劉紅華質(zhì)量部 QC參加確認(rèn)方案實(shí)施、匯總報(bào)告工作-可編輯 -精品目錄1. 概述2. 確認(rèn)目的和范圍3. 組織及職責(zé)4. 確認(rèn)起止日期5. 方法確認(rèn)所需要的儀器設(shè)備及相關(guān)文件的確認(rèn)6. 方法確

2、認(rèn)所需要的對(duì)照品、原輔料、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn)7. 確認(rèn)項(xiàng)目和確認(rèn)方法、確認(rèn)結(jié)果7.1 【鑒別（ 1）】人工牛黃薄層色譜鑒別方法確認(rèn)7.2 【鑒別（ 2）】甲硝唑紫外光譜鑒別方法確認(rèn)7.3 【鑒別（ 3）】人工牛黃膽紅素液相色譜鑒別方法確認(rèn)7.4 甲硝唑含量測(cè)定方法專屬性確認(rèn)7.5 甲硝唑含量測(cè)定方法線性關(guān)系與線性范圍確認(rèn)7.6 甲硝唑含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度確認(rèn)7.7 甲硝唑含量測(cè)定方法精密度確認(rèn)7.8 甲硝唑含量測(cè)定方法耐用性確認(rèn)7.9 膽紅素含量測(cè)定方法系統(tǒng)適用性確認(rèn)7.10 膽紅素含量測(cè)定方法專屬性確認(rèn)7.11 膽紅素含量測(cè)定方法線性關(guān)系與線性范圍確認(rèn)7.12 膽紅素含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度確認(rèn)7.13

3、 膽紅素含量測(cè)定方法精密度確認(rèn)7.14 膽紅素含量測(cè)定方法耐用性確認(rèn)8. 三批產(chǎn)品按本檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)的結(jié)果確認(rèn)9. 偏差與漏項(xiàng)控制10. 確認(rèn)報(bào)告會(huì)審-可編輯 -精品1. 概述我公司生產(chǎn)的品種人工牛黃甲硝唑膠囊，執(zhí)行國(guó)家藥監(jiān)局頒布的法定藥品標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為：WS-10001-(HD-0204)-2002。本公司前身（原廣東華衛(wèi)藥業(yè)有限公司）按該標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)、檢驗(yàn)人工牛黃甲硝唑膠囊已有多年的歷史。根據(jù) GMP （ 2010 版）第二百二十三條規(guī)定，對(duì)收入藥典和其它法定標(biāo)準(zhǔn)的分析方法，應(yīng)通過(guò)檢驗(yàn)方法確認(rèn)來(lái)證明該方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性。故本公司依照法定標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002

4、以及中國(guó)藥典2015版四部附錄9101 ：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則的規(guī)定，制定本檢驗(yàn)方法確認(rèn)方案，由質(zhì)量部按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果判斷檢驗(yàn)方法在本公司是否適用。本產(chǎn)品的微生物限度檢查方法驗(yàn)證，另行制定驗(yàn)證方案進(jìn)行驗(yàn)證，不包括在本次確認(rèn)。2. 確認(rèn)目的和范圍確認(rèn)該產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法在本公司檢驗(yàn)室的適用性，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本確認(rèn)方案采用 3 批按 GMP 要求組織生產(chǎn)的人工牛黃甲硝唑膠囊，進(jìn)行檢驗(yàn)方法的確認(rèn)。確認(rèn)項(xiàng)目包括【鑒別】 、【甲硝唑含量測(cè)定】 、【膽紅素含量測(cè)定】等。3. 組織及職責(zé)3.1 確認(rèn)方案和確認(rèn)報(bào)告的起草、審核、批準(zhǔn)確認(rèn)方案由質(zhì)量部 QC 組負(fù)責(zé)起草，由質(zhì)量部

5、審核，最終由質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)。確認(rèn)方案實(shí)施完成后，由 QC 組負(fù)責(zé)匯總各個(gè)項(xiàng)目確認(rèn)的結(jié)果、撰寫報(bào)告，由質(zhì)量部審核，最終由質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)報(bào)告。3.2 確認(rèn)方案的培訓(xùn)確認(rèn)方案在經(jīng)質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后，由 QC 組組長(zhǎng)對(duì)本次確認(rèn)實(shí)施的相關(guān)人員組織培訓(xùn)工作，并將該次的培訓(xùn)記錄歸檔。3.3 確認(rèn)方案實(shí)施過(guò)程中的變更和偏差確認(rèn)方案實(shí)施過(guò)程中如有變更和偏差，質(zhì)量負(fù)責(zé)人應(yīng)當(dāng)組織進(jìn)行評(píng)估并采取相應(yīng)的控制措施。3.4確認(rèn)工作小組成員表姓名部門及職務(wù)職責(zé)黃漢新質(zhì)量負(fù)責(zé)人 / 質(zhì)量受權(quán)人負(fù)責(zé)確認(rèn)方案及報(bào)告的批準(zhǔn)曾鳳敏質(zhì)量部 QC 組長(zhǎng)負(fù)責(zé)方案制定、實(shí)施、報(bào)告及培訓(xùn)工作胡建新質(zhì)量部 QA 組長(zhǎng)審核確認(rèn)方案、審核確認(rèn)報(bào)告并協(xié)調(diào)

6、工作劉紅華質(zhì)量部 QC參加確認(rèn)方案實(shí)施、匯總報(bào)告工作-可編輯 -精品4. 確認(rèn)起止日期用于本次檢驗(yàn)方法確認(rèn)的三批產(chǎn)品是人工牛黃甲硝唑膠囊批號(hào)：、實(shí)施確認(rèn)工作的起止時(shí)間是：5. 方法確認(rèn)所需要的儀器設(shè)備及相關(guān)文件的確認(rèn)5.1. 主要檢驗(yàn)儀器設(shè)備確認(rèn)表序儀器設(shè)備名稱型 號(hào)編號(hào)校準(zhǔn)單位校準(zhǔn)日期有效期至號(hào)1電子天平BSA124SJY-102數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱GZX-9076MBEJY-193紫外可見分光光度計(jì)UV-2401-PCJY-034高效液相色譜儀LC-10ATJY-015液相色譜儀LC-20ADJY-02檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：5.2. 確認(rèn)所需文件的確認(rèn)表文件名稱文件編碼是否有效版本

7、文件保存處人工牛黃甲硝唑膠囊內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)TS-QS-4002-00是 否質(zhì)量部人工牛黃甲硝唑膠囊檢驗(yàn)操作規(guī)程SOP-QC-4002-00是 否質(zhì)量部取樣操作規(guī)程SOP-QA-0001-00是 否質(zhì)量部 紫外可 見分光光 度法檢 驗(yàn)操作 規(guī)SOP-QC-0008-00程 是 否質(zhì)量部高效液相色譜法檢驗(yàn)操作規(guī)程SOP-QC-0009-00是 否質(zhì)量部薄層色譜法操作規(guī)程SOP-QC-0030-00是 否質(zhì)量部 UV-2401-PC紫外可見分光光度計(jì)SOP-QC-5006-00是 否質(zhì)量部-可編輯 -精品操作規(guī)程 LC-10AT高效液相色譜儀操作規(guī)程SOP-QC-5005-00是 否質(zhì)量部 LC-20

8、AD高效液相色譜儀操作規(guī)SOP-QC-5007-00是 否質(zhì)量部程 BSA124S電子天平操作規(guī)程SOP-QC-5017-00是 否質(zhì)量部檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：6. 方法確認(rèn)所需要的對(duì)照品、原輔料、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn)6.1.對(duì)照品、原輔料檢查表序號(hào)品名來(lái)源批號(hào)備注1膽酸對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所2豬去氧膽酸對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所3膽紅素對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所含量 98.5%標(biāo)定含量為4甲硝唑原料藥湖北省宏源藥業(yè)科技股份有限公司100.0%5人工牛黃原料藥武漢百草園生化藥業(yè)有限公司6淀粉輔料東莞市東岳葡萄糖廠有限公司7二氧化硅輔料湖州展望藥業(yè)有限公司檢查人 / 日期：復(fù)核

9、人 / 日期：6.2.檢驗(yàn)樣品確認(rèn)表-可編輯 -精品批號(hào)是否按 GMP序號(hào)品名生產(chǎn)廠家規(guī)格要求生產(chǎn)1人工牛黃甲硝唑佛山市華普生藥業(yè)有限公司甲硝唑 0.2g是 否膠囊人工牛黃 5mg2人工牛黃甲硝唑佛山市華普生藥業(yè)有限公司甲硝唑 0.2g是 否膠囊人工牛黃 5mg3人工牛黃甲硝唑佛山市華普生藥業(yè)有限公司甲硝唑 0.2g是 否人工牛黃 5mg膠囊檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：7. 確認(rèn)項(xiàng)目及確認(rèn)方法7.1 【鑒別（ 1）】人工牛黃薄層色譜鑒別方法確認(rèn)7.1.1 鑒別方法的專屬性確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002【鑒別（ 1 ）】項(xiàng)下規(guī)定，分

10、別制備以下溶液，進(jìn)行鑒別方法專屬性的確認(rèn)：（ 1）膽酸、豬去氧膽酸對(duì)照品溶液：取膽酸、豬去氧膽酸對(duì)照品， 加乙醇制成每1ml 各含 0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；（ 2）3 批人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：分別取本品3 批的內(nèi)容物約0.95g （約相當(dāng)于人工牛黃 20mg ），研細(xì)，加氯仿15ml ，超聲處理20 分鐘，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；（ 3）人工牛黃陰性樣品溶液：按照人工牛黃甲硝唑膠囊工藝處方的比例，除人工牛黃不稱取外，稱取甲硝唑原料0.80g ，淀粉0.08g ，二氧化硅0.04g共置量瓶中，加氯仿15ml ，超聲處理20 分鐘，濾過(guò)，濾液

11、置水浴上蒸干，殘?jiān)右掖?ml 使溶解，作為人工牛黃陰性樣品溶液。試驗(yàn)方法：照薄層色譜法 （中國(guó)藥典2015 年版四部0502 ）試驗(yàn)，吸取上述溶液各4 l,分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正己烷- 醋酸乙酯 - 醋酸 -甲醇（ 20 ：25 ：2 ：3 ）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10% 硫酸乙醇溶液， 在 105 加熱數(shù)分鐘至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下或置紫外光燈 （ 365nm ）下檢視。7.1.2 方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)：（1 ）膽酸、豬去氧膽酸對(duì)照品溶液：顯2 個(gè)主斑點(diǎn)；-可編輯 -精品（ 2 ）3 批人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯同顏色斑點(diǎn)；（ 3

12、）人工牛黃陰性樣品溶液：在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，不顯斑點(diǎn)。7.1.3 方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1 ）電子天平 型號(hào)編號(hào)，數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱型號(hào)編號(hào)硅膠 G 薄層板批號(hào)，來(lái)源（2 ）膽酸對(duì)照品稱樣量，稀釋倍數(shù)豬去氧膽酸對(duì)照品稱樣量，稀釋倍數(shù)（3 ）人工牛黃甲硝唑膠囊內(nèi)容物稱樣量：批號(hào)，稱樣量；批號(hào)，稱樣量；批號(hào)，稱樣量；（4 ）項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果【鑒別（ 1 ）】人工牛黃薄層色譜鑒別 - 方法專屬性確認(rèn)結(jié)果膽酸、豬去氧膽酸人工牛黃甲硝唑膠囊人工牛黃陰性測(cè)試樣品201512012015120220151203對(duì)照品溶液批批批樣品與對(duì)照品色譜與對(duì)照品色譜與對(duì)照品色譜與對(duì)照品色譜薄層色譜顯 2 個(gè)主斑點(diǎn)相應(yīng)位

13、置顯同相應(yīng)位置顯同相應(yīng)位置顯同相應(yīng)位置不顯顏色斑點(diǎn)顏色斑點(diǎn)顏色斑點(diǎn)斑點(diǎn)項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：7.2 【鑒別（ 2）】甲硝唑紫外光譜鑒別方法確認(rèn)7.2.1 鑒別方法的專屬性確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002【鑒別（ 2 ）】項(xiàng)下規(guī)定，分別制備以下溶液，進(jìn)行鑒別方法專屬性的確認(rèn)：（ 1）甲硝唑?qū)φ掌啡芤海喝〖紫踹驅(qū)φ掌芳s 20.0mg ，精密稱定，置 100ml 量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）溶解，稀釋至刻度， 搖勻；精密量取 5ml 置 100ml 量瓶中，加鹽酸溶液 （ 9 1000 ）稀釋至刻

14、度，搖勻即得。（ 2） 3 批人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：分別精密取本品3 批的內(nèi)容物約59mg （約相當(dāng)于甲硝唑50mg ），置 100ml量瓶中，加鹽酸溶液（9 1000 ）約 80ml ，微溫使甲硝唑溶解，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）稀釋至刻度， 搖勻，用干燥濾紙濾過(guò)， 精密量取續(xù)濾液 5ml ，置 200ml 量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻即得。（ 3）甲硝唑陰性樣品溶液：按照人工牛黃甲硝唑膠囊工藝處方的比例，除甲硝唑不稱取外，-可編輯 -精品稱取淀粉 10mg ，二氧化硅5mg 、人工牛黃3mg置 200ml量瓶中，加鹽酸溶液 （ 9 1000 ）160ml

15、微溫，放冷后稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml ，置 200ml量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻即得。試驗(yàn)方法：照分光光度法，取上述各種溶液掃描紫外吸收光譜7.2.2 方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)： （1 ）甲硝唑?qū)φ掌啡芤海涸?277 ±2 nm 的波長(zhǎng)處有最大吸收；在 241±2nm的波長(zhǎng)處有最小吸收；（2 ）3 批人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：在277 ±2 nm 的波長(zhǎng)處有最大吸收 ；在 241 ±2nm的波長(zhǎng)處有最小吸收；（3 ）甲硝唑陰性樣品溶液：在277 ±2 nm 的波長(zhǎng)處無(wú)最大吸收 ；在 241 &

16、#177;2nm 的波長(zhǎng)處無(wú)最小吸收。7.2.3 方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1）電子天平 型號(hào)編號(hào)，紫外分光光度計(jì)型號(hào)編號(hào)（2）甲硝唑?qū)φ掌贩Q樣量20.1 mg（3）人工牛黃甲硝唑膠囊內(nèi)容物稱樣量：批號(hào)，稱樣量；批號(hào)，稱樣量；批號(hào)，稱樣量；（4）項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果【鑒別（ 2 ）】甲硝唑紫外光譜鑒別- 方法專屬性確認(rèn)結(jié)果人工牛黃甲硝唑膠囊測(cè)試樣品甲硝唑?qū)φ掌?01512012015120220151203甲硝唑陰性樣品批批批最大吸收277±2 nm277±2nm277±2 nm277±2 nm277 ±2nm無(wú)最大吸收最小吸收241±2nm2

17、41±2nm241±2nm241±2nm241 ±2nm無(wú)最小吸收項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期7.3 【鑒別（ 3）】人工牛黃膽紅素液相色譜鑒別方法確認(rèn)7.3.1 鑒別方法的專屬性確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) WS-10001-(HD-0204)-2002 【鑒別（ 3 ）】項(xiàng)下規(guī)定，分別制備以下溶液，進(jìn)行鑒別方法專屬性的確認(rèn)：-可編輯 -精品（ 1）膽紅素對(duì)照品溶液：取膽紅素對(duì)照品約10.0mg ，精密稱定，置 100ml 量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，搖勻，精密量取1.0ml 置 25ml 棕色量瓶中 ,

18、 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 鹽酸 (90 ：10 ：0.3 ： 0.03) 混合液稀釋至刻度，制成每1ml 中含膽紅素約4 g 的溶液，即得。（ 2）樣品提取溶劑：氯仿 -甲醇 - 水 - 鹽酸（ 90 ： 10:0.3:0.03 ）的混合液（ 3）人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：取20151201 批本品的內(nèi)容物約 1.7g （約相當(dāng)于膽紅素0.2mg ），精密稱定，置 50ml棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 鹽酸（90 ：10:0.3:0.03 ）混合液約40ml ，超聲提取 15 分鐘，取出，迅速冷卻至室溫，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。（ 4）人工牛黃陰性樣品溶液

19、：按照人工牛黃甲硝唑膠囊工藝處方的比例，除人工牛黃不稱取外，稱取甲硝唑 1.45g ，淀粉 0.145g ，二氧化硅 0.072g 共置 50ml 棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 -10%鹽酸（ 50 ：50:0.3 ）混合液約40ml ，超聲提取15 分鐘，取出，冷卻至室溫，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。試驗(yàn)方法：精密吸取上述溶液各20 l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。7.3.2方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)： （ 1 ）人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液主峰保留時(shí)間與膽紅素對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致（相對(duì)偏差不超過(guò)0.5% ）；（2 ）人工牛黃陰性樣品溶液、樣品提取溶劑在膽紅素峰保留時(shí)間處均應(yīng)為平直基

20、線，無(wú)吸收峰。7.3.3 方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1 ）電子天平型號(hào)編號(hào)，高效液相色譜儀型號(hào)編號(hào)（ 2 ）膽紅素對(duì)照品稱樣量： 9.90mg（ 3 ）人工牛黃甲硝唑膠囊內(nèi)容物稱樣量：批號(hào)20151201，稱樣量（4 ）項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果【鑒別（ 3 ）】人工牛黃膽紅素液相色譜鑒別- 方法專屬性確認(rèn)結(jié)果測(cè)試樣品膽紅素對(duì)照品成品樣品提取溶劑人工牛黃陰性樣品膽紅素峰保留7.183min7.170min在膽紅素峰保留時(shí)間處為在膽紅素峰保留時(shí)間處時(shí)間平直基線，無(wú)色譜峰。為平直基線， 無(wú)色譜峰。項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期7.4 甲硝唑含量測(cè)定方法專屬性確認(rèn)-可編輯 -精品7.4

21、.1 甲硝唑含量測(cè)定方法的專屬性確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) WS-10001-(HD-0204)-2002 【含量測(cè)定 甲硝唑】項(xiàng)下規(guī)定，分別制備以下溶液，進(jìn)行方法專屬性的確認(rèn)：（ 1）甲硝唑?qū)φ掌啡芤海喝〖紫踹驅(qū)φ掌芳s 20.0mg ，精密稱定，置 100ml 量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）溶解，稀釋至刻度， 搖勻；精密量取 5ml 置 100ml 量瓶中，加鹽酸溶液 （ 9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻即得。（ 2） 3 批人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：分別精密取本品3 批的內(nèi)容物約59mg （約相當(dāng)于甲硝唑50mg ），置 100ml量瓶中，加鹽酸溶液（9 1000

22、）約 80ml ，微溫使甲硝唑溶解，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）稀釋至刻度， 搖勻，用干燥濾紙濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml ，置 200ml量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻即得。（ 3）甲硝唑陰性樣品溶液：按照人工牛黃甲硝唑膠囊工藝處方的比例，除甲硝唑不稱取外，稱取淀粉 10mg ，二氧化硅5mg 、人工牛黃3mg置 200ml量瓶中，加鹽酸溶液 （ 9 1000 ）160ml微溫，放冷后稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml ，置 200ml量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻即得。試驗(yàn)方法：照分光光度法，取上述各種溶液掃描紫外吸收光譜

23、，并讀取吸收峰處的吸收度。7.4.2方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)： （ 1 ）甲硝唑?qū)φ掌啡芤海涸?77 ±2 nm 的波長(zhǎng)處有最大吸收 ；（2 ）3 批人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：在277 ±2 nm 的波長(zhǎng)處有最大吸收；（3 ）甲硝唑陰性樣品溶液：在277 ±2 nm 的波長(zhǎng)處基本無(wú)吸收 ，吸收度 A 值接近 0。7.4.3方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1）電子天平 型號(hào)編號(hào)，紫外分光光度計(jì)型號(hào)編號(hào)（2）甲硝唑?qū)φ掌贩Q樣量 20.1 mg（3）人工牛黃甲硝唑膠囊內(nèi)容物稱樣量：批號(hào)，稱樣量；批號(hào)，稱樣量；批號(hào)，稱樣量；（4）項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果甲硝唑含量測(cè)定- 方法專屬性確認(rèn)結(jié)果人工牛黃

24、甲硝唑膠囊測(cè)試樣品甲硝唑?qū)φ掌?01512012015120220151203甲硝唑陰性樣品批批批-可編輯 -精品在 277±在 277±在 277±在 277 ±2nm在 277±2nm 基本無(wú)吸最大吸收有最大吸收2nm 有 最2 nm有 最2 nm有 最收，吸收度 A=0大吸收大吸收大吸收項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期7.5 甲硝唑含量測(cè)定方法的線性關(guān)系與線性范圍確認(rèn)7.5.1 甲硝唑含量測(cè)定方法的線性關(guān)系與線性范圍確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002【含量測(cè)定

25、甲硝唑】項(xiàng)下規(guī)定，分別制備以下溶液，進(jìn)行線性關(guān)系與線性范圍的確認(rèn)：（ 1）甲硝唑?qū)φ掌焚A備液：取甲硝唑?qū)φ掌芳s20.0mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000）溶解，稀釋至刻度，搖勻。精密量取6ml置 100ml 量瓶中，加鹽酸溶液（ 91000 ）稀釋至刻度，搖勻即得。（ 2）線性關(guān)系測(cè)試溶液：分別精密量取甲硝唑?qū)φ掌焚A備液4ml 、 5ml 、 6ml 、 7ml 、 10ml置 100ml量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻得系列濃度的測(cè)試溶液。試驗(yàn)方法：照紫外 - 可見分光光度法，在277nm的波長(zhǎng)處測(cè)定上述系列溶液的吸收度。計(jì)算出各個(gè)測(cè)試溶液的

26、甲硝唑濃度，以濃度為橫坐標(biāo)， 吸收度為縱坐標(biāo)， 計(jì)算線性回歸方程、 回歸系數(shù) R2、線性范圍。7.5.2 方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)： （1 ）測(cè)試溶液的甲硝唑濃度與吸收度之間呈良好線性關(guān)系，回歸系數(shù) R2：0.995 R21 ；（2 ）甲硝唑濃度線性范圍： 應(yīng)涵蓋人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002【含量測(cè)定甲硝唑】項(xiàng)下樣品溶液中甲硝唑濃度12.5 g/ml 的 80% 120%，即結(jié)果的線性范圍應(yīng)涵蓋 10.0g/ml 15.0 g/ml 。7.5.3 方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1 ）電子天平 型號(hào)編號(hào)，紫外分光光度計(jì)型號(hào)編號(hào)（2 ）甲硝唑?qū)φ掌贩Q樣量20.1 mg

27、（3 ）項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果甲硝唑含量測(cè)定方法- 線性關(guān)系與線性范圍確認(rèn)-可編輯 -精品對(duì)照品濃度8.0410.0512.0614.0720.10（ug/ml）277nm的 A0.3130.3890.4640.5440.783值線性回歸方程y=0.039x-0.0037回歸系數(shù) R2R2 =0.9998甲硝唑濃度線性范圍8.04 ug/ml20.10 ug/ml項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期7.6 甲硝唑含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度確認(rèn)（回收率試驗(yàn)）7.6.1 甲硝唑含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002【含量測(cè)定

28、甲硝唑】項(xiàng)下規(guī)定，分別制備以下溶液，進(jìn)行方法準(zhǔn)確度的確認(rèn)：-可編輯 -精品（ 1 ）甲硝唑陰性樣品溶液：按照人工牛黃甲硝唑膠囊工藝處方的比例，精密稱取人工牛黃25.0mg ，淀粉 100.0mg，二氧化硅50.0mg共置 100ml量瓶中，加鹽酸溶液（9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻即得。（ 2）回收率測(cè)試溶液：精密稱取甲硝唑工作對(duì)照品約50mg ，置 100ml量瓶中，精密加入甲硝唑陰性樣品溶液5ml ，再加鹽酸溶液（9 1000 ）約 75ml ，微溫使甲硝唑溶解，加鹽酸溶液（91000 ）稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml ，置 200ml量瓶中，加鹽酸溶液（ 9 1

29、000 ）稀釋至刻度， 搖勻，照分光光度法， 在 277nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按 C6H 9 N 3O 3的吸收系數(shù)為377 計(jì)算甲硝唑加入量，計(jì)算加樣回收率。（ 3）甲硝唑工作對(duì)照品：采用依照中國(guó)藥典2015 年版“甲硝唑”項(xiàng)下進(jìn)行全檢合格，標(biāo)定純度的甲硝唑原料藥。7.6.2 方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)：A ×40（1 ）計(jì)算公式：工作對(duì)照品回收率%= ×100%377 ×W R式中： A 為回收率測(cè)試溶液的吸收度；W R 為工作對(duì)照品加入量（g ）（2 ）工作對(duì)照品回收率限度為99.0% 101.0% ，回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD ）限度為2.0%7.6.3 方法確

30、認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1 ）電子天平 型號(hào)編號(hào)，紫外分光光度計(jì)型號(hào)編號(hào)（2 ）甲硝唑工作對(duì)照品（湖北省宏源藥業(yè)科技股份有限公司，批號(hào)：01120151028，標(biāo)定結(jié)果純度為 100.0%）。（3 ）項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果甲硝唑含量測(cè)定方法- 準(zhǔn)確度確認(rèn)結(jié)果試 驗(yàn) 編工作對(duì)照品測(cè)得吸收測(cè)得甲硝工作對(duì)照品回平均回收回收率的號(hào)加入量度 A 值唑量收率 %率%RSD（ mg ）（ mg ）148.90.46249.02100.24250.30.47250.0899.56349.30.46849.66100.73100.140.47%450.60.47950.82100.43550.50.47450.2999.586

31、49.60.46949.76100.32項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)-可編輯 -精品檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期7.7 甲硝唑含量測(cè)定方法精密度確認(rèn)7.7.1 甲硝唑含量測(cè)定方法的精密度確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002【含量測(cè)定甲硝唑】項(xiàng)下方法，進(jìn)行方法精密度的確認(rèn)：（ 1）人工牛黃甲硝唑膠囊成品甲硝唑含量測(cè)定溶液：精密取本品20151201批成品的內(nèi)容物約 59mg （約相當(dāng)于甲硝唑50mg ），置 100ml量瓶中，加鹽酸溶液（9 1000 ）約 80ml ，微溫使甲硝唑溶解， 加鹽酸溶液 （ 9 1000 ）稀釋至刻度， 搖勻，用

32、干燥濾紙濾過(guò)， 精密量取續(xù)濾液5ml ，置 200ml量瓶中，加鹽酸溶液（9 1000 ）稀釋至刻度，搖勻, 照分光光度法，在277nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C6H 9 N 3 O3 的吸收系數(shù)為377 計(jì)算甲硝唑含量。（ 2）儀器吸收度讀數(shù)重復(fù)性：取同一份含量測(cè)定溶液,在紫外分光光度上連續(xù)測(cè)定吸收度。（ 3）甲硝唑含量測(cè)定的重復(fù)性：取20151201批成品，由同一人分別稱取6 份樣品，進(jìn)行含量測(cè)定。（ 4 ）甲硝唑含量測(cè)定的中間精密度：取20151201批成品，由甲實(shí)驗(yàn)人員稱取6 份樣品，進(jìn)行測(cè)定（即上述甲硝唑含量測(cè)定的重復(fù)性）；再由乙實(shí)驗(yàn)人員在不同的日期稱取6 份樣品，進(jìn)行測(cè)定。7.7.2

33、 方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)：A ×40（1 ）計(jì)算公式：甲硝唑的絕對(duì)百分含量%= ×100%377 ×W式中： A 為溶液的吸收度；W 為樣品稱樣量（ g ）（2）儀器吸收度讀數(shù)重復(fù)性：讀數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD ）限度為 0.3%（3）甲硝唑含量測(cè)定的重復(fù)性：結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）限度為 1.5%（4）甲硝唑含量測(cè)定的中間精密度：結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）限度為 2.0%7.7.3 方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1）電子天平型號(hào)編號(hào)，紫外分光光度計(jì)型號(hào)編號(hào)（2）儀器吸收度讀數(shù)重復(fù)性：同一份溶液讀數(shù)6 次，結(jié)果如下：測(cè)定次數(shù)1#2#3#4#5#6#RSD吸收度 A0.4

34、700.4720.4720.4720.4720.4710.2%確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期-可編輯 -精品（3 ）甲硝唑含量測(cè)定的重復(fù)性：成品批號(hào)20151201含量均含量測(cè)定測(cè)定次數(shù)1#2#3#4#5#6#的 RSD值稱 樣 量0.05950.05920.05890.05960.05930.0592W(g)84.68%1.2%吸收度 A0.4710.4650.4680.4780.4760.481百分含量83.99%83.34%84.30%85.09%85.17%86.21%確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：-可編輯 -精品（4 ）甲硝唑含量

35、測(cè)定的中間精密度成品批號(hào)20151201甲 1甲 2甲 3甲 4甲 5甲 6乙 1乙 2乙 3乙 4乙 5乙 6含量測(cè)定試驗(yàn)次數(shù)平均值的 RSD稱 樣 量0.05950.05920.05890.05960.05930.05920.06170.06130.06160.05740.05700.0581W(g)吸收度 A0.4710.4650.4680.4780.4760.4810.4910.4930.4900.4560.4560.457百分含量83.99%83.34%84.30%85.09%85.17%86.21%84.43%85.33%84.40%84.29%84.8883.46%84.57%0

36、.96%確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：-可編輯-精品7.8 甲硝唑含量測(cè)定方法耐用性確認(rèn)將 7.2項(xiàng)下成品溶液、對(duì)照品溶液放置于室溫，每隔一段時(shí)間測(cè)定吸收度，吸收度至少應(yīng)在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。甲硝唑含量測(cè)定 - 方法耐用性確認(rèn)溶液吸收度 A成品溶液對(duì)照品溶液時(shí)間0hr0.4700.39124hr0.4720.39148hr0.4690.39096hr0.4640.385確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：7.9 膽紅素含量測(cè)定方法系統(tǒng)適用性確認(rèn)7.9.1 膽紅素含量測(cè)定方法系統(tǒng)適用性確認(rèn)方法參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-02

37、04)-2002【含量測(cè)定膽紅素】項(xiàng)下方法，進(jìn)行高效液相色譜系統(tǒng)適用性確認(rèn)：（ 1）人工牛黃甲硝唑膠囊成品膽紅素含量測(cè)定溶液：精密稱取批號(hào)20151201的人工牛黃甲硝唑膠囊內(nèi)容物約1.7g（約相當(dāng)于膽紅素0.2mg ），置 50ml棕色量瓶中，加氯仿 - 甲醇 - 水 - 鹽酸（90 ：10:0.3:0.03 ）混合液約40ml ，超聲提取15 分鐘，取出，迅速冷卻至室溫，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。（ 2）色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相為甲醇- 氯仿 -1% 磷酸溶液（ 81:13:6 ），檢測(cè)波長(zhǎng) 449nm 。（ 3 ）取上述同一份含量測(cè)定溶液,連續(xù) 6 次進(jìn)

38、樣測(cè)定，每次進(jìn)樣量均為20 l，記錄色譜圖。7.9.2 膽紅素含量測(cè)定方法系統(tǒng)適用性確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)（ 1 ）主峰（膽紅素峰）保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD ）限度為 1.0%（ 3 ）主峰（膽紅素峰）面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）限度為 2.0%（ 4 ）主峰（膽紅素峰）的理論板數(shù)應(yīng)大于1500（ 5 ）主峰（膽紅素峰）的分離度應(yīng)大于1.5-可編輯 -精品（6）主峰（膽紅素峰）的拖尾因子應(yīng)在0.9 1.1 之間7.9.3 方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1）電子天平 型號(hào)編號(hào)，高效液相色譜儀型號(hào)編號(hào)（2）系統(tǒng)適用性確認(rèn)結(jié)果如下：試驗(yàn)次數(shù)1#2#3#4#5#6#RSD保留時(shí)間7.1707.1657.1657

39、.1597.1507.1690.1%峰面積5325405318385279005298225271455267710.46%理論板數(shù)205020352043203720412042膽紅素峰單峰（溶劑單峰（溶劑單峰（溶劑單峰（溶劑單峰（溶劑單峰（溶劑分離度峰除外）峰除外）峰除外）峰除外）峰除外）峰除外）膽紅素峰1.081.081.081.081.081.08拖尾因子確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期7.10 膽紅素含量測(cè)定方法專屬性確認(rèn)7.10.1 膽紅素含量測(cè)定方法的專屬性確認(rèn)方法：參照人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0204)-2002【含量測(cè)定膽紅

40、素】項(xiàng)下規(guī)定，分別制備以下溶液，進(jìn)行含量測(cè)定方法專屬性的確認(rèn)：（ 1）膽紅素對(duì)照品溶液：取膽紅素對(duì)照品約10.0mg ，精密稱定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，搖勻，精密量取1.0ml置 25ml棕色量瓶中 , 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 鹽酸 (90 ：10 ：0.3 ： 0.03) 混合液稀釋至刻度，制成每1ml 中含膽紅素約4 g 的溶液，即得。（ 2）樣品提取溶劑：氯仿 -甲醇 - 水 - 鹽酸（ 90 ： 10:0.3:0.03 ）的混合液（ 3）人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液：取20151201 批本品的內(nèi)容物約 1.7g （約相當(dāng)于膽紅素0.2mg ），精密稱定，置

41、50ml棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 鹽酸（90 ：10:0.3:0.03 ）混合液約40ml ，-可編輯 -精品超聲提取 15 分鐘，取出，迅速冷卻至室溫，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。（ 4）人工牛黃陰性樣品溶液：按照人工牛黃甲硝唑膠囊工藝處方的比例，除人工牛黃不稱取外，稱取甲硝唑 1.45g ，淀粉 0.145g ，二氧化硅 0.072g 共置 50ml 棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 -10%鹽酸（ 50 ：50:0.3 ）混合液約40ml ，超聲提取15 分鐘，取出，冷卻至室溫，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。試驗(yàn)方法：精密吸取上述溶液各20 l，注入

42、液相色譜儀，記錄色譜圖。7.10.2 方法確認(rèn)接受標(biāo)準(zhǔn)： （ 1）人工牛黃甲硝唑膠囊成品溶液主峰保留時(shí)間與膽紅素對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致（相對(duì)偏差不超過(guò)0.5% ）；（2 ）人工牛黃陰性樣品溶液、樣品提取溶劑在膽紅素峰保留時(shí)間處均應(yīng)為平直基線，無(wú)吸收峰。7.10.3 方法確認(rèn)記錄與確認(rèn)結(jié)果（1 ）電子天平型號(hào)編號(hào)，高效液相色譜儀型號(hào)編號(hào)（ 2 ）膽紅素對(duì)照品稱樣量： 9.90mg（ 3 ）人工牛黃甲硝唑膠囊內(nèi)容物稱樣量：批號(hào)20151201，稱樣量（4 ）項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果膽紅素含量測(cè)定 - 方法專屬性確認(rèn)結(jié)果測(cè)試樣品膽紅素對(duì)照品成品樣品提取溶劑人工牛黃陰性樣品膽紅素峰保留7.183min7.170min在膽紅素峰保留時(shí)間處為在膽紅素峰保留時(shí)間處時(shí)間平直基線，無(wú)色譜峰。為平直基線， 無(wú)色譜峰。項(xiàng)目確認(rèn)結(jié)果 :通過(guò)不通過(guò)檢