薄層層析、柱層析

1、色譜法色譜法（層析法）（層析法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?v1、了解色譜法分離、提純有機(jī)化合物的基本、了解色譜法分離、提純有機(jī)化合物的基本原理和應(yīng)用。原理和應(yīng)用。v2、掌握柱層析、薄層層析的操作技術(shù)。、掌握柱層析、薄層層析的操作技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 色譜法色譜法（Chromatography）亦稱）亦稱色層法色層法、層析法層析法等。等。 色譜法是色譜法是分離分離、純化純化和和鑒定鑒定有機(jī)化合物的重有機(jī)化合物的重要方法之一。要方法之一。色譜法的基本原理是利用混合物各組分在色譜法的基本原理是利用混合物各組分在某某一物質(zhì)一物質(zhì)中的中的吸附或溶解性能（分配）的不同吸附或溶解性能（分配）的不同

2、，或或其親和性的差異其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)，使混合物的溶液流經(jīng)該該種物質(zhì)種物質(zhì)進(jìn)行進(jìn)行反復(fù)反復(fù)的吸附或分配作用，從而使的吸附或分配作用，從而使各組分分離。各組分分離。 色譜法須在色譜法須在兩相系統(tǒng)兩相系統(tǒng)間進(jìn)行。一相是間進(jìn)行。一相是固定相固定相，需支持物，是固體或液體。另一相為需支持物，是固體或液體。另一相為流動(dòng)相流動(dòng)相，是液體或氣體。當(dāng)流動(dòng)相流經(jīng)固定相時(shí)，被是液體或氣體。當(dāng)流動(dòng)相流經(jīng)固定相時(shí)，被分離物質(zhì)在兩相間的分配，由平衡狀態(tài)到失分離物質(zhì)在兩相間的分配，由平衡狀態(tài)到失去平衡到又恢復(fù)平衡，即不斷經(jīng)歷吸附和解去平衡到又恢復(fù)平衡，即不斷經(jīng)歷吸附和解吸的過程。隨著流動(dòng)相不斷向前流動(dòng)，被

3、分吸的過程。隨著流動(dòng)相不斷向前流動(dòng)，被分離物質(zhì)間出現(xiàn)離物質(zhì)間出現(xiàn)向前移動(dòng)的速率差異向前移動(dòng)的速率差異，由開始，由開始的單一區(qū)帶逐漸分離出許多區(qū)帶，這個(gè)過程的單一區(qū)帶逐漸分離出許多區(qū)帶，這個(gè)過程叫叫展層展層。分類分類按層析的按層析的機(jī)理機(jī)理劃分：劃分： 吸附層析、分配層析、離子交換層析、吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析等。凝膠過濾層析、親和層析等。吸附層析：利用吸附層析：利用吸附劑表面對不同組吸附劑表面對不同組分吸附性能分吸附性能的差異，達(dá)到分離鑒定的目的。的差異，達(dá)到分離鑒定的目的。分配層析：利用不同組分分配層析：利用不同組分在流動(dòng)相和在流動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)固定

4、相之間的分配系數(shù)不同，使之分離。不同，使之分離。離子交換層析：利用不同組分離子交換層析：利用不同組分對離子對離子交換劑親和力交換劑親和力的不同。的不同。凝膠層析：利用某些凝膠凝膠層析：利用某些凝膠對于不同分對于不同分子大小的組分阻滯作用子大小的組分阻滯作用的不同。的不同。 v按流動(dòng)相與固定相的不同劃分按流動(dòng)相與固定相的不同劃分：v 氣相色譜（層析）、液相色譜（層氣相色譜（層析）、液相色譜（層析）。析）。 這兩大類層析是以這兩大類層析是以流動(dòng)相不同流動(dòng)相不同來劃分來劃分的。的。 如同時(shí)區(qū)分流動(dòng)相和固定相，劃分為：氣如同時(shí)區(qū)分流動(dòng)相和固定相，劃分為：氣固層析、氣液層析、液固層析和液液層析固層析、氣

5、液層析、液固層析和液液層析等。等。v按操作形式劃分：按操作形式劃分： v 柱層析、紙層析、薄層層析、高效液柱層析、紙層析、薄層層析、高效液相層析等相層析等。柱層析：將固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿一個(gè)柱層析：將固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿一個(gè)方向移動(dòng)而達(dá)到分離。方向移動(dòng)而達(dá)到分離。 紙層析：用濾紙做液體的載體，點(diǎn)樣后，用紙層析：用濾紙做液體的載體，點(diǎn)樣后，用流動(dòng)相展開，以達(dá)到分離鑒定的目的。流動(dòng)相展開，以達(dá)到分離鑒定的目的。 薄層層析：將適當(dāng)粒度的吸附劑鋪成薄層，薄層層析：將適當(dāng)粒度的吸附劑鋪成薄層，以紙層析類似的方法進(jìn)行物質(zhì)的分離和鑒定。以紙層析類似的方法進(jìn)行物質(zhì)的分離和鑒定。 以上劃分無嚴(yán)格界限，有

6、些名稱相互交以上劃分無嚴(yán)格界限，有些名稱相互交叉，如親和層析應(yīng)屬于一種特殊的吸附層析，叉，如親和層析應(yīng)屬于一種特殊的吸附層析，紙層析是一種分配層析，柱層析可做各種層紙層析是一種分配層析，柱層析可做各種層析。析。 v吸附色譜主要是以氧化鋁、硅膠等為吸附劑，吸附色譜主要是以氧化鋁、硅膠等為吸附劑，將一些物質(zhì)自溶液中吸附到它的表面上，而將一些物質(zhì)自溶液中吸附到它的表面上，而后用溶劑洗脫或展開，利用不同化合物受到后用溶劑洗脫或展開，利用不同化合物受到吸附劑的不同吸附作用，和它們在溶劑中不吸附劑的不同吸附作用，和它們在溶劑中不同的溶解度，也就是利用不同化合物在吸附同的溶解度，也就是利用不同化合物在吸附劑

7、上和溶液之間分布情況的不同而得到分離。劑上和溶液之間分布情況的不同而得到分離。吸附色譜分離可采用吸附色譜分離可采用柱色譜柱色譜和和薄層色譜薄層色譜兩種兩種方式。方式。 （一）柱層析法（一）柱層析法 1.原理原理 流動(dòng)相流過時(shí)各組分會以不同的速率向下移動(dòng)，吸流動(dòng)相流過時(shí)各組分會以不同的速率向下移動(dòng)，吸附弱的組分以較快的速率向下移動(dòng)。隨著流動(dòng)相附弱的組分以較快的速率向下移動(dòng)。隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，在新接觸的固定相表面上又依這種吸附的移動(dòng)，在新接觸的固定相表面上又依這種吸附-溶解過程進(jìn)行新的分配，新鮮流動(dòng)相流過已趨溶解過程進(jìn)行新的分配，新鮮流動(dòng)相流過已趨平衡的固定相表面時(shí)也重復(fù)這一過程，結(jié)果是吸平衡的固

8、定相表面時(shí)也重復(fù)這一過程，結(jié)果是吸附弱的組分隨著流動(dòng)相移動(dòng)在前面，吸附強(qiáng)的組附弱的組分隨著流動(dòng)相移動(dòng)在前面，吸附強(qiáng)的組分移動(dòng)在后面，吸附特別強(qiáng)的組分甚至?xí)浑S流分移動(dòng)在后面，吸附特別強(qiáng)的組分甚至?xí)浑S流動(dòng)相移動(dòng)，各種化合物在色譜柱中形成帶狀分布，動(dòng)相移動(dòng)，各種化合物在色譜柱中形成帶狀分布，實(shí)現(xiàn)混合物的分離。實(shí)現(xiàn)混合物的分離。 幾幾種種層層析析柱柱2.柱色譜分離條件柱色譜分離條件v 固定相選擇固定相選擇 柱色譜使用的固定相材料又稱吸附劑。柱色譜使用的固定相材料又稱吸附劑。 吸附劑對有機(jī)物的吸附作用有多種形式。吸附劑對有機(jī)物的吸附作用有多種形式。以氧化鋁作為固定相時(shí)，非極性或弱極性有以氧化鋁作為固

9、定相時(shí)，非極性或弱極性有機(jī)物只有范德華力與固定相作用，吸附較弱；機(jī)物只有范德華力與固定相作用，吸附較弱；極性有機(jī)物同固定相之間可能有偶極力或氫極性有機(jī)物同固定相之間可能有偶極力或氫鍵作用，有時(shí)還有成鹽作用。這些作用的強(qiáng)鍵作用，有時(shí)還有成鹽作用。這些作用的強(qiáng)度依次為：度依次為： 成鹽作用成鹽作用 配位作用配位作用 氫鍵作用氫鍵作用 偶極偶極作用作用 范德華力作用。范德華力作用。 有機(jī)物的極性越強(qiáng)，有機(jī)物的極性越強(qiáng)，在氧化鋁上的吸附越強(qiáng)。在氧化鋁上的吸附越強(qiáng)。表表1：各種吸附劑對于極性有機(jī)物的吸附作用強(qiáng)度：各種吸附劑對于極性有機(jī)物的吸附作用強(qiáng)度 v常用吸附劑有氧化鋁、硅膠、活性炭等（表常用吸附劑有

10、氧化鋁、硅膠、活性炭等（表1）。）。 v纖維素、淀粉纖維素、淀粉v硅酸鎂硅酸鎂v硫酸鈣硫酸鈣v硅膠硅膠v弗羅里硅土弗羅里硅土v氧化鎂氧化鎂v中性氧化鋁中性氧化鋁v活性炭活性炭對極性對極性有機(jī)物有機(jī)物的的吸附吸附作用增作用增強(qiáng)強(qiáng)色譜用的氧化鋁可分酸性、中性和堿性三種。酸性色譜用的氧化鋁可分酸性、中性和堿性三種。酸性氧化鋁氧化鋁pH約為約為4-4.5，用于分離，用于分離羧酸、氨基酸等酸羧酸、氨基酸等酸性物質(zhì)性物質(zhì)；中性氧化鋁；中性氧化鋁pH值為值為7.5，用于分離，用于分離中性物中性物質(zhì)質(zhì)，應(yīng)用最廣；堿性氧化鋁，應(yīng)用最廣；堿性氧化鋁pH為為9-10，用于分離，用于分離生生物堿、胺和其它堿性化合物物

11、堿、胺和其它堿性化合物等。等。吸附劑的活性與其含水量有關(guān)。含水量越低，活性吸附劑的活性與其含水量有關(guān)。含水量越低，活性越高。脫水的中性氧化鋁稱為活性氧化鋁。越高。脫水的中性氧化鋁稱為活性氧化鋁。硅膠是中性的吸附劑，可用于分離各種有機(jī)物，是硅膠是中性的吸附劑，可用于分離各種有機(jī)物，是應(yīng)用最為廣泛的固定相材料之一。應(yīng)用最為廣泛的固定相材料之一?；钚蕴砍Ｓ糜诜蛛x極性較弱或非極性有機(jī)物?；钚蕴砍Ｓ糜诜蛛x極性較弱或非極性有機(jī)物。吸附劑的粒度越小，比表面越大，分離效果越明顯，吸附劑的粒度越小，比表面越大，分離效果越明顯，但流動(dòng)相流過越慢，有時(shí)會產(chǎn)生分離帶的再重疊，但流動(dòng)相流過越慢，有時(shí)會產(chǎn)生分離帶的再重疊

12、，適得其反。適得其反。 v 流動(dòng)相選擇流動(dòng)相選擇 色譜分離使用的流動(dòng)相又稱展開劑色譜分離使用的流動(dòng)相又稱展開劑 。 展開劑對于選定了固定相的色譜分離有重展開劑對于選定了固定相的色譜分離有重要的影響。要的影響。 v在色譜分離過程中混合物中各組分在吸附劑在色譜分離過程中混合物中各組分在吸附劑和展開劑之間發(fā)生吸附和展開劑之間發(fā)生吸附-溶解分配，強(qiáng)極性展溶解分配，強(qiáng)極性展開劑對極性大的有機(jī)物溶解的多，弱極性或開劑對極性大的有機(jī)物溶解的多，弱極性或非極性展開劑對極性小的有機(jī)物溶解的多，非極性展開劑對極性小的有機(jī)物溶解的多，隨展開劑的流過不同極性的有機(jī)物以不同的隨展開劑的流過不同極性的有機(jī)物以不同的次序形

13、成分離帶。次序形成分離帶。v在氧化鋁柱中，選擇適當(dāng)極性的展開劑能使在氧化鋁柱中，選擇適當(dāng)極性的展開劑能使各種有機(jī)物按先弱后強(qiáng)的極性順序形成分離各種有機(jī)物按先弱后強(qiáng)的極性順序形成分離帶，流出色譜柱。帶，流出色譜柱。 表表2：各種展開劑對極性有機(jī)物的溶解能力：各種展開劑對極性有機(jī)物的溶解能力 v石油醚石油醚v環(huán)己烷環(huán)己烷v四氯化碳四氯化碳v苯苯v氯仿氯仿v乙醚乙醚v乙酸乙酯乙酸乙酯v丙酮丙酮v吡啶吡啶v乙醇乙醇v甲醇甲醇v水水v乙酸乙酸對極性對極性有機(jī)物有機(jī)物的的溶解溶解作用增作用增強(qiáng)強(qiáng)v當(dāng)一種溶劑不能實(shí)現(xiàn)很好的分離時(shí)，選擇使當(dāng)一種溶劑不能實(shí)現(xiàn)很好的分離時(shí)，選擇使用不同極性的溶劑分級洗脫。用不同極

14、性的溶劑分級洗脫。 如一種溶劑作如一種溶劑作為展開劑只洗脫了混合物中一種化合物，對為展開劑只洗脫了混合物中一種化合物，對其它組分不能展開洗脫，需換一種極性更大其它組分不能展開洗脫，需換一種極性更大的溶劑進(jìn)行第二次洗脫。這樣分次用不同的的溶劑進(jìn)行第二次洗脫。這樣分次用不同的展開劑可以將各組分分離。展開劑可以將各組分分離。 v薄層層析又叫薄板色譜，是快速分離和定性分析薄層層析又叫薄板色譜，是快速分離和定性分析少少量物質(zhì)量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固固-液吸附色譜液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少量樣品（

15、幾到幾微克，甚至量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另微克）的分離；另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，又可一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，又可用來精制樣品，此法特別適用于用來精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行及進(jìn)行柱色柱色譜之前的一種譜之前的一種“預(yù)試預(yù)試”。（二）薄層層析法（二）薄層層析法 1.原理：原理： 吸附劑被涂布在玻璃板上，形成薄薄吸附劑被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂層。干

16、燥后在涂層的一端點(diǎn)樣，的平面涂層。干燥后在涂層的一端點(diǎn)樣，放入一個(gè)盛有少量展開劑的的有蓋容器中。放入一個(gè)盛有少量展開劑的的有蓋容器中。展開劑接觸到吸附劑涂層，借毛細(xì)作用向展開劑接觸到吸附劑涂層，借毛細(xì)作用向上移動(dòng)。經(jīng)過在吸附劑和展開劑之間的多上移動(dòng)。經(jīng)過在吸附劑和展開劑之間的多次吸附次吸附-溶解作用，將混合物中各組分分溶解作用，將混合物中各組分分離成孤立的樣點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)混合物的分離。離成孤立的樣點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)混合物的分離。2.色譜條件色譜條件v固定相選擇固定相選擇 柱色譜中提到的吸附劑都可以用作為薄柱色譜中提到的吸附劑都可以用作為薄層色譜的固定相，分離性能及使用選擇同柱層色譜的固定相，分離性能及使用選擇

17、同柱色譜的選擇原則相同（各種吸附劑見柱色譜色譜的選擇原則相同（各種吸附劑見柱色譜表表1）。）。 一般用于薄層色譜時(shí)，要求吸附劑的粒度一般用于薄層色譜時(shí)，要求吸附劑的粒度更小。商品吸附劑區(qū)分為色譜級（用于柱色更小。商品吸附劑區(qū)分為色譜級（用于柱色譜）和薄層色譜級（用于薄層色譜）。譜）和薄層色譜級（用于薄層色譜）。 v展開劑選擇展開劑選擇 薄層色譜展開劑的選擇和柱色譜一樣，主薄層色譜展開劑的選擇和柱色譜一樣，主要根據(jù)樣品中各組分的極性、溶劑對于樣品要根據(jù)樣品中各組分的極性、溶劑對于樣品中各組分溶解度等因素來考慮。展開劑的極中各組分溶解度等因素來考慮。展開劑的極性越大，對化合物的洗脫力也越大。（各種

18、性越大，對化合物的洗脫力也越大。（各種溶劑極性見柱色譜表溶劑極性見柱色譜表2）。）。 v選擇展開劑時(shí)，除參照表列溶劑極性來選擇外，更選擇展開劑時(shí)，除參照表列溶劑極性來選擇外，更多地采用試驗(yàn)的方法，在一塊薄層板上進(jìn)行試驗(yàn)：多地采用試驗(yàn)的方法，在一塊薄層板上進(jìn)行試驗(yàn)：v 若所選展開劑使混合物中所有的組分點(diǎn)都移到了若所選展開劑使混合物中所有的組分點(diǎn)都移到了溶劑前沿，此溶劑的極性過強(qiáng)；溶劑前沿，此溶劑的極性過強(qiáng)； v若所選展開劑幾乎不能使混合物中的組分點(diǎn)移動(dòng)，若所選展開劑幾乎不能使混合物中的組分點(diǎn)移動(dòng)，留在了原點(diǎn)上，此溶劑的極性過弱。留在了原點(diǎn)上，此溶劑的極性過弱。 當(dāng)一種溶劑不能很好地展開各組分時(shí)，

19、常選擇用當(dāng)一種溶劑不能很好地展開各組分時(shí)，常選擇用混合溶劑作為展開劑。先用一種極性較小的溶劑為混合溶劑作為展開劑。先用一種極性較小的溶劑為基礎(chǔ)溶劑展開混合物，若展開不好，用極性較大的基礎(chǔ)溶劑展開混合物，若展開不好，用極性較大的溶劑與前一溶劑混合，調(diào)整極性，再次試驗(yàn)，直到溶劑與前一溶劑混合，調(diào)整極性，再次試驗(yàn)，直到選出合適的展開劑組合。合適的混合展開劑常需多選出合適的展開劑組合。合適的混合展開劑常需多次仔細(xì)選擇才能確定。次仔細(xì)選擇才能確定。 v相對移動(dòng)值相對移動(dòng)值 從點(diǎn)樣原點(diǎn)開始到展開后的溶劑從點(diǎn)樣原點(diǎn)開始到展開后的溶劑前沿，是溶劑的移動(dòng)距離，記為前沿，是溶劑的移動(dòng)距離，記為l0，混合物中各，混

20、合物中各組分的移動(dòng)距離分別記為組分的移動(dòng)距離分別記為l1，l2，l3 （移動(dòng)值（移動(dòng)值示意圖）。示意圖）。比移值示意圖比移值示意圖在不同的展開條件下，各在不同的展開條件下，各化合物的移動(dòng)距離不會相化合物的移動(dòng)距離不會相同，而在同一條件下，相同，而在同一條件下，相對于展開劑的移動(dòng)距離，對于展開劑的移動(dòng)距離，各化合物有可比較的展開各化合物有可比較的展開數(shù)據(jù)，稱為數(shù)據(jù)，稱為相對移動(dòng)值相對移動(dòng)值，或或比移值比移值： Rf=l1/l0在相同條件下測得的比移在相同條件下測得的比移值可以作為化合物的薄層值可以作為化合物的薄層色譜特征值進(jìn)行比較對照。色譜特征值進(jìn)行比較對照。l0l1l2v顯色顯色 分離的化合物

21、若有顏色，很容易識別出來各分離的化合物若有顏色，很容易識別出來各個(gè)樣點(diǎn)。但多數(shù)情況下化合物沒有顏色，要識個(gè)樣點(diǎn)。但多數(shù)情況下化合物沒有顏色，要識別樣點(diǎn)，必須使樣點(diǎn)顯色。通用的顯色方法有別樣點(diǎn)，必須使樣點(diǎn)顯色。通用的顯色方法有碘蒸氣顯色和紫外線顯色。碘蒸氣顯色和紫外線顯色。 碘蒸氣顯色：將展開的薄層板揮發(fā)干展開碘蒸氣顯色：將展開的薄層板揮發(fā)干展開劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產(chǎn)劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產(chǎn)生的碘蒸氣能與有機(jī)物分子形成有色的締合物，生的碘蒸氣能與有機(jī)物分子形成有色的締合物，完成顯色。完成顯色。 紫外線顯色：用摻有熒光劑的固定相材料紫外線顯色：用摻有熒光劑的固定相

22、材料（如硅膠（如硅膠F，氧化鋁，氧化鋁F等）制板，展開后在用紫等）制板，展開后在用紫外線照射展開的干燥薄層板，板上的有機(jī)物會外線照射展開的干燥薄層板，板上的有機(jī)物會吸收紫外線，在板上出現(xiàn)相應(yīng)的色點(diǎn)，可以被吸收紫外線，在板上出現(xiàn)相應(yīng)的色點(diǎn)，可以被觀察到。觀察到。 有時(shí)對于特殊有機(jī)物使用專用的顯色劑顯色。有時(shí)對于特殊有機(jī)物使用專用的顯色劑顯色。此時(shí)常用盛有顯色劑溶液的噴霧器噴板顯色。此時(shí)常用盛有顯色劑溶液的噴霧器噴板顯色。 3.薄層色譜應(yīng)用薄層色譜應(yīng)用 v可用于判斷兩個(gè)化合物是否相同（同一展可用于判斷兩個(gè)化合物是否相同（同一展開條件下是否有相同的移動(dòng)值）；開條件下是否有相同的移動(dòng)值）；v 可用于確

23、定混合物中含有的組分?jǐn)?shù)；可用于確定混合物中含有的組分?jǐn)?shù)；v可用于為柱色譜選擇合適的展開劑，監(jiān)視可用于為柱色譜選擇合適的展開劑，監(jiān)視柱色譜分離狀況和效果；柱色譜分離狀況和效果；v可用于檢測反應(yīng)過程?？捎糜跈z測反應(yīng)過程。 三、基本操作三、基本操作v正確裝柱、制板、點(diǎn)樣正確裝柱、制板、點(diǎn)樣及分離操作及分離操作 薄層板在不同的層析缸中展開的方式薄層板在不同的層析缸中展開的方式 柱色譜裝置圖柱色譜裝置圖1、裝柱、裝柱v用鑷子取少許脫脂棉放于干凈的色譜柱底部，用鑷子取少許脫脂棉放于干凈的色譜柱底部，輕輕塞緊，關(guān)閉活塞，通過一干燥的玻璃漏輕輕塞緊，關(guān)閉活塞，通過一干燥的玻璃漏斗向柱中慢慢加入色譜柱用中性氧化

24、鋁斗向柱中慢慢加入色譜柱用中性氧化鋁10g，并用橡皮塞輕輕敲打色譜柱下部，使填裝緊并用橡皮塞輕輕敲打色譜柱下部，使填裝緊密，在上面加一片小圓濾紙或脫脂棉使表面密，在上面加一片小圓濾紙或脫脂棉使表面水平。用滴管沿管壁加入酒精，使酒精順柱水平。用滴管沿管壁加入酒精，使酒精順柱體向下展開，打開活塞，控制流出速度為體向下展開，打開活塞，控制流出速度為1滴滴/秒。秒?！局V操作步驟】【柱色譜操作步驟】 v2、進(jìn)樣、進(jìn)樣 待酒精全部浸潤氧化鋁，液面剛好流至待酒精全部浸潤氧化鋁，液面剛好流至濾紙面時(shí)，立即用滴管從層析柱管中心加入濾紙面時(shí)，立即用滴管從層析柱管中心加入待分離樣品溶液，當(dāng)此溶液流至接近濾紙面待

25、分離樣品溶液，當(dāng)此溶液流至接近濾紙面時(shí)，立即用少量溶劑洗下管壁的有色物質(zhì)，時(shí)，立即用少量溶劑洗下管壁的有色物質(zhì)，如此連續(xù)如此連續(xù)23次，直至洗凈為止。次，直至洗凈為止。v3、洗脫、洗脫 依次用酒精和依次用酒精和NaOH洗脫，控制流出速度。洗脫，控制流出速度。整個(gè)過程都應(yīng)有洗脫劑覆蓋吸附劑。（每一整個(gè)過程都應(yīng)有洗脫劑覆蓋吸附劑。（每一種試劑加入前，前一種都要?jiǎng)倓偨^濾紙片）種試劑加入前，前一種都要?jiǎng)倓偨^濾紙片）【薄層色譜操作步驟】【薄層色譜操作步驟】 1、薄層板的制備（濕板的制備）、薄層板的制備（濕板的制備） 薄層板制備的好壞直接影響色譜的結(jié)果。薄層板制備的好壞直接影響色譜的結(jié)果。薄層應(yīng)盡量均

26、勻且厚度要固定。否則，在展薄層應(yīng)盡量均勻且厚度要固定。否則，在展開時(shí)前沿不齊，色譜結(jié)果也不易重復(fù)。在燒開時(shí)前沿不齊，色譜結(jié)果也不易重復(fù)。在燒杯中放入杯中放入2g硅膠，加入硅膠，加入56ml蒸餾水，調(diào)成蒸餾水，調(diào)成糊狀。將配制好的漿料傾注到清潔干燥的載糊狀。將配制好的漿料傾注到清潔干燥的載玻片上，拿在手中輕輕的左右搖晃，使其表玻片上，拿在手中輕輕的左右搖晃，使其表面均勻平滑，在室溫下晾干后進(jìn)行活化。也面均勻平滑，在室溫下晾干后進(jìn)行活化。也可買市售的硅膠板切割成適宜大小備用。本可買市售的硅膠板切割成適宜大小備用。本實(shí)驗(yàn)用此法制備薄層板：吸附劑為硅膠實(shí)驗(yàn)用此法制備薄層板：吸附劑為硅膠G，用用0.5%

27、的羧甲基纖維素鈉水溶液調(diào)成漿料。的羧甲基纖維素鈉水溶液調(diào)成漿料。v2、點(diǎn)樣、點(diǎn)樣 先用鉛筆在距薄層板一端先用鉛筆在距薄層板一端1cm處輕輕劃一橫線處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上小心點(diǎn)樣，吹干。斑點(diǎn)直徑一般不超過小心點(diǎn)樣，吹干。斑點(diǎn)直徑一般不超過2mm。若因。若因樣品溶液太稀，可重復(fù)點(diǎn)樣，但應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶樣品溶液太稀，可重復(fù)點(diǎn)樣，但應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點(diǎn)樣，以防樣點(diǎn)過大，造成拖尾、劑揮發(fā)后方可重新點(diǎn)樣，以防樣點(diǎn)過大，造成拖尾、擴(kuò)散等現(xiàn)象，而影響分離效果。若在同一板上點(diǎn)幾擴(kuò)散等現(xiàn)象，而影響分離效果。若在同一板上點(diǎn)

28、幾個(gè)樣，樣點(diǎn)間距離應(yīng)為個(gè)樣，樣點(diǎn)間距離應(yīng)為0.5-1cm，且不能離邊沿太，且不能離邊沿太近。點(diǎn)樣要輕，不可刺破薄層。近。點(diǎn)樣要輕，不可刺破薄層。 當(dāng)展開劑到達(dá)距離另一端當(dāng)展開劑到達(dá)距離另一端0.5cm處時(shí)拿出薄板，用處時(shí)拿出薄板，用鉛筆將最遠(yuǎn)處做好記號，吹干樣品點(diǎn)，測量鉛筆將最遠(yuǎn)處做好記號，吹干樣品點(diǎn)，測量l1、l0，計(jì)算計(jì)算Rfv3、展開、展開 薄層色譜的展開，需要在密閉容器中進(jìn)薄層色譜的展開，需要在密閉容器中進(jìn)行。在層析缸中加入配好的展開溶劑，使其行。在層析缸中加入配好的展開溶劑，使其高度不超過高度不超過1cm。將點(diǎn)好的薄層板小心放入。將點(diǎn)好的薄層板小心放入層析缸中，點(diǎn)樣一端朝下（點(diǎn)樣面朝

29、上），層析缸中，點(diǎn)樣一端朝下（點(diǎn)樣面朝上），浸入展開劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿浸入展開劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一定高度時(shí)取出，盡快在板上標(biāo)上展上升到一定高度時(shí)取出，盡快在板上標(biāo)上展開劑前沿位置。吹干，觀察斑點(diǎn)位置，計(jì)算開劑前沿位置。吹干，觀察斑點(diǎn)位置，計(jì)算Rf值。值。四、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵及注意事項(xiàng)：四、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵及注意事項(xiàng)： v1、薄層層析時(shí)，薄層板的制備要厚薄均勻，、薄層層析時(shí)，薄層板的制備要厚薄均勻，表面平整光潔。表面平整光潔。v2、點(diǎn)樣時(shí)，各樣點(diǎn)間距、點(diǎn)樣時(shí)，各樣點(diǎn)間距11.5cm，樣點(diǎn)直，樣點(diǎn)直徑應(yīng)不超過徑應(yīng)不超過2mm，不能太靠邊。，不能太靠邊。v3、柱層析時(shí)，柱子要致密緊實(shí)，

30、無氣泡。洗、柱層析時(shí)，柱子要致密緊實(shí)，無氣泡。洗柱、分離時(shí)洗脫劑液面不能低于柱中填充物柱、分離時(shí)洗脫劑液面不能低于柱中填充物上面。上面。 吸附劑的吸附力強(qiáng)弱，是由能否有效地接受或供吸附劑的吸附力強(qiáng)弱，是由能否有效地接受或供給電子，或提供和接受活潑氫來決定。被吸附物的給電子，或提供和接受活潑氫來決定。被吸附物的化學(xué)結(jié)構(gòu)如與吸附劑有相似的電子特性，吸附就更化學(xué)結(jié)構(gòu)如與吸附劑有相似的電子特性，吸附就更牢固。牢固。 常用吸附劑的吸附力的強(qiáng)弱順序?yàn)椋夯钚蕴?、常用吸附劑的吸附力的?qiáng)弱順序?yàn)椋夯钚蕴?、氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣、磷酸鈣、石膏、氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣、磷酸鈣、石膏、纖維素、淀粉和糖等。

31、以活性炭的吸附力最強(qiáng)。纖維素、淀粉和糖等。以活性炭的吸附力最強(qiáng)。 吸附劑在使用前須先用吸附劑在使用前須先用加熱脫水加熱脫水等方法活化。等方法活化。大多數(shù)吸附劑遇水即鈍化，因此吸附層析大多用于大多數(shù)吸附劑遇水即鈍化，因此吸附層析大多用于能溶于有機(jī)溶劑的有機(jī)化合物的分離，較少用于無能溶于有機(jī)溶劑的有機(jī)化合物的分離，較少用于無機(jī)化合物。機(jī)化合物。 洗脫溶劑的解析能力的強(qiáng)弱順序是：醋酸、水、洗脫溶劑的解析能力的強(qiáng)弱順序是：醋酸、水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、醚、氯仿、苯、四甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、醚、氯仿、苯、四氯化碳和己烷等。為了能得到較好的分離效果，常氯化碳和己烷等。為了能得到較好的分離效果

32、，常用兩種或數(shù)種不同強(qiáng)度的溶劑按一定比例混合，得用兩種或數(shù)種不同強(qiáng)度的溶劑按一定比例混合，得到合適洗脫能力的溶劑系統(tǒng)，以獲得最佳分離效果。到合適洗脫能力的溶劑系統(tǒng)，以獲得最佳分離效果。 吸附層析吸附層析在在支持物上形成部分互溶的兩相系統(tǒng)支持物上形成部分互溶的兩相系統(tǒng)。一。一般是水相和有機(jī)溶劑相。常用支持物是硅膠、般是水相和有機(jī)溶劑相。常用支持物是硅膠、纖維素和淀粉等，這些親水物質(zhì)能儲留相當(dāng)纖維素和淀粉等，這些親水物質(zhì)能儲留相當(dāng)量的水。被分離物質(zhì)在兩相中都能溶解，但量的水。被分離物質(zhì)在兩相中都能溶解，但分配比率不同，展層時(shí)就會形成以不同速度分配比率不同，展層時(shí)就會形成以不同速度向前移動(dòng)的區(qū)帶。向前移動(dòng)的區(qū)帶。 分配層析分配層析離子交換層析離子交換層析 支持物是人工交聯(lián)的帶有支持物是人工交聯(lián)的帶