第六章基因重組與基因工程

1、第六章 基因重組與基因工程 教 學(xué) 大 綱 要 求 1.熟悉基因工程、基因文庫、載體、限制性核酸內(nèi)切酶、PCR等概念；2.掌握以質(zhì)粒為載體進行DNA克隆的基本過程；3.了解重組DNA技術(shù)在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。 教 材 內(nèi)容 精 要 一、自然界的基因轉(zhuǎn)移和重組自然界不同物種或個體之間的基因轉(zhuǎn)移和重組是經(jīng)常發(fā)生的，它是基因變異和物種演 變、進化的基礎(chǔ)?；蛑亟M的方式有：接合作用、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)座。 1接合作用(Conjugation) 當細胞(細菌)與細胞(細菌)相互接觸時，質(zhì)粒DNA就可從一個細胞(細菌)轉(zhuǎn)移到另一個細胞(細菌)。 2轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 (1)轉(zhuǎn)化作用(Transformation)：由外

2、源性DNA導(dǎo)入宿主細胞，并引起生物類型改變或使宿主細胞獲得新的遺傳表型的過程，稱為轉(zhuǎn)化作用。 (2)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用(Transduction)：當病毒從被感染的(供體)細胞釋放出來，再次感染另一 (受體)細胞時，發(fā)生在供體細胞與受體細胞之間的DNA轉(zhuǎn)移及基因重組稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。 3轉(zhuǎn)座(轉(zhuǎn)位)(Transposition) 可移動的DNA序列包括插入序列和轉(zhuǎn)座子。故由插入 序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移或重排稱轉(zhuǎn)座。轉(zhuǎn)座是指一個或一組基因從一個位置轉(zhuǎn)到基因組的另一個位置?？煞譃椴迦胄蛄?insertionsequenceIS)轉(zhuǎn)座和轉(zhuǎn)座予(transposons)轉(zhuǎn)座。 4基因重組 不同DNA分子間發(fā)生的

3、共價連接稱基因重組?；蛑亟M有兩種類型： 位點特異的重組(sitespecial recombmatlon)和同源重組(homologous recomblnation)。 二、重組DNA技術(shù) 1重組DNA技術(shù)的相關(guān)概念 (1)DNA克?。嚎寺?Clone)就是來自同一個體的相同的集合。DNA克?。―NA clone）：應(yīng)用酶學(xué)方法在體外將目的基因與載體DNA結(jié)合成一具有自我復(fù)制能力的重組DNA分子，通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細胞，再進行擴增，提取獲得大量同一DNA分子的過程。DNA克隆又稱基因克隆或重組DNA。DNA克隆也指將DNA重組體引進受體細胞中，建立無性系的過

4、程。因此，又稱為基因克隆(gene cloning)、基因工程(gentre engneering)、重組DNA技術(shù)。 (2)工具酶；常用的有：內(nèi)切酶、連接酶、聚合酶I、反轉(zhuǎn)錄酶等。在所有工具酶中以限制性內(nèi)切核酸酶最重要。限制性內(nèi)切核酸酶(Restriction endonuclease)是指能識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。根據(jù)組成和作用特性的不同，常用的限制性核酸內(nèi)切酶可分為三類。，重組DNA技術(shù)用到的為類。其特點為：具有識別特異性：識別DNA分子上特定的核苷酸序列，該序列一般呈回文結(jié)構(gòu)(Palindrome)，如：ECoRI識別的序列為5¢

5、 GAATTC 3¢。具有切割特異性：從某一特定位點或其周圍切割，產(chǎn)生后產(chǎn)生粘性本端或鈍性末端，如：ECoRI從G和A之間切開，產(chǎn)生兩個 粘性本端（5¢ GAATTC 3¢）。不同的限制性內(nèi)切核酸酶識別DNA中的核苷酸長短不一，切割位點的多少也不同，產(chǎn)生的片段大小各異。 (3)目的基因：目的基因(target gene)是我們要研究或利用的DNA序列或基因，稱為目的基因。目的DNA有兩種類型：cDNA和基因組DNA。cDNA(Complementary DNA)是以RNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補的單鏈DNA。以cDNA為模板經(jīng)聚合反應(yīng)可合成雙鏈cDNA。

6、 基因組DNA(genomic DNA)是指代表一個細胞或生物體整套遺傳信息的所有DNA序列。(4)基因載體：也叫克載隆體(cloning vector)是攜帶目的基因，實現(xiàn)目的基因的無性繁殖或表達有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子。具有轉(zhuǎn)錄和翻譯所必須的DNA序列，可以完成目的基因表達過程的載載體稱為表達載體(expression vector)。作為載體，必須要有獨立的復(fù)制能力，可導(dǎo)入宿主細胞，并且要便于檢測。常用的載體有質(zhì)粒DNA、噬菌體DNA、和病毒DNA。質(zhì)粒(P1asmid)是存在于細菌染色體以外的環(huán)狀DNA分子。質(zhì)粒大小適宜，拷貝數(shù)多，易于轉(zhuǎn)化，利于篩選，有理想的酶切位點。噬菌

7、體(phage)是侵襲細菌的病毒。常見的噬菌體有l(wèi)噬菌體和M13噬菌體?；蚬こ趟褂玫氖删wDNA均是經(jīng)過人工改造的。Ml3噬菌體的基因間隔區(qū)插入ECo1i的調(diào)節(jié)基因及LacZ N一端146個aa殘基編碼基因，其產(chǎn)物為b-半乳糖苷酶的a-片段。而突變型Lac-E Coli可表達b-半乳糖苷酶的w-片段(酶的C-端)，單獨的a-片段及w-片段均無b-半乳糖苷酶的活性。當舍有LacZ的M13噬菌體轉(zhuǎn)化Lac-Ecoli細菌時， a-片段及w-片段共同表達，宿主LacECOli細菌才有b-半乳糖苷酶活性，使特異的作用物變?yōu)樘m色化合物，生長的細菌為蘭色，這就是a-互補?？捎糜谥亟M體的篩選。如果目的基

8、因插入lacZ基因內(nèi)，則LacZ不表達，為白色菌落。 2重組DNA技術(shù)一個完整的DNA克隆過程包括目的基因的獲?。ǚ郑?，克隆載體的選擇和構(gòu)建（切），目的基因與載體的連接（接），重組體導(dǎo)入受體菌（轉(zhuǎn)），重組體的篩選（篩），克隆基因的表達（表）六個過程。 (1)目的基因的獲?。嚎梢酝ㄟ^化學(xué)合成、文庫篩選，PCR等方法獲得。基因組DNA文庫(genomic DNA library)：轉(zhuǎn)化細菌內(nèi)，由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA的集合稱為基因組DNA文庫。構(gòu)建方法是把生物體全部的DNA提純后，用限制性內(nèi)切核酸酶，隨機切割成許多片段，將所有片段均重組入同一類載體上，得到許多重組DNA分于，繼而全部轉(zhuǎn)入

9、受體酋擴增，使每個細茼內(nèi)都攜帶一種重組DNA分子的多個拷貝，這樣生長的全部細菌所攜帶的所有基因組DNA片段，即為整個基因組。需要時用探針即可獲得。cDNA文庫(cDNA library) 是與基因組DNA文庫類似，以mRNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補的cDNA。以總mRNA制作的cDNA文庫，包含了細胞的各種mRNA cDNA。聚合酶鏈反應(yīng)(p01ymerasechainreaction，PCR)是DNA迅速大量擴增的方法，短時間內(nèi)獲得大量DNA，有利目的基因的獲得。 (2)克隆載體的選擇和構(gòu)建：根據(jù)不同的目的基因，選擇不同的載體。并選用限制性內(nèi)切核酸酶切割目的基因和載體。 (3)

10、目的基固與栽體的連接：利用DNA連接酶將目的基因DNA與載體DNA連接在一起，形成重組體。其連接方式有：粘性末端連接、平端連接、同聚物的加尾連接和人工接頭連接等。 (4)重組體導(dǎo)入受體菌：即把重組DNA導(dǎo)入受體菌的過程。根據(jù)載體的性質(zhì)不同導(dǎo)入方式有：轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、感染等早入方法如下：選擇適當?shù)氖荏w茵。符合安全標準，為限制酶和重組酶缺陷型。感受態(tài)細胞(competentcell)：具備接受外源DNA的能力的經(jīng)過特殊方法處理的受體菌。(5)重組體的篩選：篩選出含重組DNA的受體菌，有直接篩選法和非直接篩選法?？顾幮詷酥具x擇，標志補救及分子雜交屬直接選擇法；免疫化學(xué)湘酶聯(lián)免疫檢測法屬非直接選擇法。通過

11、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、感染等，導(dǎo)入重組體的受體細胞，經(jīng)過培養(yǎng)得到大量的菌落或噬菌斑，因為每一個重組體只攜帶某一段外源基因，轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染時，每一受體菌僅接受一個重組體分子，所以要將它們區(qū)分，并鑒定那一菌落，含有帶目的基因的重組體。即得到目的基因克隆。(6)克隆基因的表達：可以生成有價值的蛋白質(zhì)或多肽。原核生物表達體系；Ecoil是最常見的。運用ECOti表達有用的蛋白質(zhì)必須使構(gòu)建的表達載體符合以下標準：舍有大腸桿菌適宜的選擇標志，具有強啟動子，舍有適當?shù)姆g控制序列，合有合理設(shè)計的多接頭克隆位點。真核表達體系常見的有酵母、昆蟲、哺乳類細胞等。3重組DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系：現(xiàn)代分子醫(yī)學(xué)是重組DNA技術(shù)及其他分

12、子遺傳學(xué)技術(shù)、理論與醫(yī)學(xué)實踐相結(jié)合的結(jié)果，特別是在疾病基因的發(fā)現(xiàn)、發(fā)展生物制藥、DNA診斷、基因治療、遺傳病的預(yù)防等方面有重要意義。 測試題 一、名詞解釋 1基因工程 3轉(zhuǎn)化作用 4轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 5同源重組 6限制性核酸內(nèi)切酶 7回文結(jié)構(gòu) 8目的DNA 9互補DNA 10克隆載體 11表達載體 12質(zhì)粒 13a-互補 14基因組DNA文庫 15感受態(tài)細胞16cDNA文庫 二、填空題 1自然界的常見基因轉(zhuǎn)移方式有 、 、 、 。 2不同DNA分子間發(fā)生的共價連接稱為 ，有 、 兩種方式。 3. 由 和 介導(dǎo)的基因移位或重排稱為轉(zhuǎn)座。 4基因工程的載體必須具備的條件有 、 、 。 5限制性內(nèi)切核酸酶識

13、別的核苷酸序列的個數(shù)為 、 和，其切口有 端和 端。 6. 基因工程常用的載體DNA分子有 、 和 。 7一個完整的DNA克隆過程應(yīng)包括 、 、 、 、 。 8目的基因獲取的途徑或來源有 、 、 、 。 9基因工程過程中重組體直接篩選法的方式有 、 、 。 10基因克隆真核生物表達體系常見的有 、 、 表達體系。 11根據(jù)重組體DNA的性質(zhì)不同，將重組體DNA導(dǎo)人受體細胞的方式有 、 、 等。 12如果Mi：的外源基因被插入到lac z基因內(nèi)，則在含有X-gal的培養(yǎng)基上生長時會出現(xiàn) 色菌落，如果在1ac z基因內(nèi)無外源基因插入，在同樣的條件下呈現(xiàn) 色菌落。13重組DNA技術(shù)中常用的工具酶有

14、、 、 、 。 三、選擇題 A型題1cDNA文庫包含A一個物種的全部基因信息 B一個物種的全部mRNA信息C一個生物體組織或細胞的全部基因信息D.一個生物體組織或細胞的全部mRNA信息E一個生物體組織或細胞所表達mRNA信息2關(guān)于接合作用正確的是 A細胞與細胞或細菌通過菌毛相互接觸時，染色體DNA從一個細胞(細菌)轉(zhuǎn)移至另一細胞(細菌) B細胞與細胞或細菌通過菌毛相互接觸時，某些較大質(zhì)粒DNA從一個細胞(細菌)轉(zhuǎn)移至另一細胞(細菌) C細胞與細胞或細菌通過菌毛相互接觸時，噬菌體DNA從一個細胞(細菌)轉(zhuǎn)移至另一細胞(細菌) D. 細胞與細胞或細菌通過苗毛相互接觸時，所有類型的質(zhì)粒DNA從一個細

15、胞(細菌)轉(zhuǎn)移至另一細胞(細菌)E細胞與細胞或細菌通過菌毛相互接觸時，所有類型的噬菌體DNA從一個細胞(細菌)轉(zhuǎn)移至另一細胞(細菌)3基因工程的特點是： A.在分子水平上操作，在分子水平上表達 B在分子水平上操作，在細胞水平上表達 C.在細胞水平上操作，在分子水平上表達 D在細胞水平上操作，在細胞水平上表達 E以上均可以 4實驗室內(nèi)常用的連接外源性DNA和載體DNA的酶是： ADNA連接酶 BDNA聚合酶I CDNA聚合酶1 DDNA聚合酶I E反轉(zhuǎn)錄酶5用來鑒定DNA的技術(shù)是： ANorthern印跡 B。Southern印跡 CWestern印跡 D親和層析 E.離子交換層析6用來鑒定RN

16、A的技術(shù)是： ANorthern印跡 B。Southern印跡 E.Western印跡 D親和層析 E.離子交換層析 7重組DNA技術(shù)中常用的工具酶下列那項不是： A. 限制性核酸內(nèi)切酶 BDNA連接酶 C. DNA聚合酶I DRNA聚合酶 E反轉(zhuǎn)錄酶8F一細胞與F十細胞混合培養(yǎng)，產(chǎn)生F+細胞的過程為： A.轉(zhuǎn)化 B轉(zhuǎn)導(dǎo) C接合 n突變 E.轉(zhuǎn)位 9DNA致癌病毒感染宿主細胞后，使之發(fā)生癌變是因為發(fā)生了： A轉(zhuǎn)化 B轉(zhuǎn)導(dǎo) E.接合 D轉(zhuǎn)座 E轉(zhuǎn)位 10關(guān)于基因工程的敘述，不正確的是： A根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇目的基因 B選擇一個適合的載體 C.把目的基因和載體分別用限制性核酸內(nèi)切酶切開 D連接酶只連

17、接目的基因和載體 E把重組體轉(zhuǎn)化到細胞中去的過程不是絕對的11限制性核酸內(nèi)切酶不具有那項特點： A.僅存在原核細胞中 B用于重組DNA技術(shù)中的為I類酶 C.能識別雙鏈DNA中特定的堿基順序 D具有一定的外切酶活性 E.辨認的核苷酸序列常具有回文結(jié)構(gòu) NA片段，與適當載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，擴增為eDNA文庫，因此eDNA文12表達人類蛋白質(zhì)的最理想的細胞體系是 答案J E A正，coli表達體系 B原核表達體系 C酵母表達體系 D昆蟲表達體系 E哺乳類細胞表達體系13限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生 E A. 3¢磷酸基末端和5¢羥基末端 B5¢磷酸基末端和3

18、62;羥基末端 C. 3¢磷酸基末端和5¢磷酸基末端 D5¢羥基末端和3¢羥基末端 E. 3¢羥基末端、5¢羥基末端及磷酸 14下列描述最能確切表達質(zhì)粒DNA作為克隆載體特性的是 答案 D A小型環(huán)狀雙鏈DNA分子 B.攜帶有某些抗性基因 C.在細胞分裂時恒定地傳給子代細胞 D具有自我復(fù)制功能 E獲得目的基因15在分子生物學(xué)領(lǐng)域，分子克隆主要是指 ADNA的大量復(fù)制 BDNA的大量轉(zhuǎn)錄 CDNA的大量剪切 URNA的大量反轉(zhuǎn)錄 ERNA的大量剪切16在重組DNA技術(shù)中，不常用到的酶是 A限制性核酸內(nèi)切酶 BDNA聚合酶 CDNA連接酶

19、 D反轉(zhuǎn)錄酶 EDNA解鏈酶17多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶切割后的DNA末端為 A.乎頭末端 B3¢突出末端 C5¢突出末端 D粘性末端 E缺口末端18cDNA是指 A在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補的DNA D在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與DNA互補的DNA C在體外經(jīng)轉(zhuǎn)錄合成的與DNA互補的RNA D在體內(nèi)經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補的DNA E在體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)錄合成的與DNA互補的RNA19. 基因組代表一個細胞或生物體的 A部分遺傳信息 B整套遺傳信息 c-可轉(zhuǎn)錄基因 D非轉(zhuǎn)錄基因 E可表達基因 20在基因工程中通常所使用的質(zhì)粒存在于 A細菌染色體 B酵母染色體 C. 細菌染色體外 D.

20、 酵母染色體外 E以上都不是21.在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是 A.化學(xué)合成法 B基因組文庫抹 CcDNA文庫法 D聚合酶鏈反應(yīng) E. 差異顯示法22重組DNA的基本構(gòu)建過程是將 A.任意兩段DNA接在一起 B.外源UNA.接人人體叫A C目的基因接入適當載體 D.目的基因接入哺乳類DNA E外源基因接人宿主基因23如果某限制性核酸內(nèi)切酶識別的堿基序列為6個，則24Kb的一段隨機的DNA序列出現(xiàn)的切口數(shù)為； A4次 B5次 C6次 D7次 E8次24關(guān)于限制性核酸內(nèi)切酶的敘述，下列那項是錯誤的： A限制性核酸內(nèi)切酶分為三類，用于基因工程的為1酶 B限制性核酸內(nèi)切酶切割后可

21、產(chǎn)生枯性末端或平端 C識別的核苷酸序列個數(shù)可以是6個或8個 D識別的序列一般具有回文結(jié)構(gòu) E.識別的DNA為單鏈25關(guān)于基因工程的敘述，下列那項是錯誤的? A.基因工程也稱基因克隆 B只有質(zhì)粒DNA可作為載體 C. 重組體DNA轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細胞 D.需獲得目的基因 E.需對重組DNA進行純化、篩選26有關(guān)質(zhì)粒的敘述，下列那項是錯誤的? A小型環(huán)狀雙鏈DNA分子 B可小到23Kb，大到數(shù)百個Kb C能在宿主細胞中獨立自主地進行復(fù)制 D常含有耐藥基因 E只有一種限制性核酸內(nèi)切酶切口 27下列那項不是重組DNA的連接方式? A粘性末端與粘性末端的連接 B平端與平端的連接 C.粘性末端與平端的連接

22、D人工接頭連接 E.同聚物加尾連接 28。關(guān)于基因重組的敘述，錯誤的是： A整段的DNA不能在細胞內(nèi)進行交換 B整段的DNA能在細胞內(nèi)進行交換 C整段的DNA能在不同的物種間進行交換 D.交換的DNA能在新的位置上進行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯 E基因重組可引起自然突變現(xiàn)象29基因重組的方式不包括： A轉(zhuǎn)化 B轉(zhuǎn)導(dǎo) C轉(zhuǎn)位 D轉(zhuǎn)換 E.整合30EcoRI切割DNA雙鏈產(chǎn)生A平端 B5突出粘端 C3突出粘端D鈍性末端 E配伍末端31催化聚合酶鏈反應(yīng)的酶是ADNA連接酶 B反轉(zhuǎn)錄酶 C末端轉(zhuǎn)移酶D堿性磷酸酶 ETaqDNA聚合酶32將PstI內(nèi)切酶切割后的目的基因與用相同內(nèi)切酶切割后的載體4A連接屬 A同聚

23、物加尾連接 B人工接頭連接 C平端連接 D粘性末端連接 E非粘性末端連接33重組DNA技術(shù)中實現(xiàn)目的基因與載體DNA拼接的酶是 ADNN聚合酶 BRNA聚合酶 · C,DNA連接酶 0RNA連接酶 E限制性核酸內(nèi)切酶34以質(zhì)粒為載體，將外源基因?qū)胧荏w菌的過程稱 A轉(zhuǎn)化 B轉(zhuǎn)染 E.感染 D轉(zhuǎn)導(dǎo) E.轉(zhuǎn)位35最常用的篩選轉(zhuǎn)化細菌是否含質(zhì)粒的方法是 A營養(yǎng)互補篩選 B抗藥性篩選 E.免疫化學(xué)篩選 DKR篩選 E分子雜交篩選36a-互補篩選法屬于 A抗藥性標志篩選 B酶聯(lián)免疫篩選 C標志補救篩選 D. 原位雜交篩選 E免疫化學(xué)篩選37 列常用于原核表達體系的是 A.酵母細胞 B。昆蟲細胞

24、 CD船L類細胞 D真菌 E大腸桿菌38在對目的基因和載體DNA進行同聚物加尾時，需采用 A. 反轉(zhuǎn)錄酶 D多聚核昔酸激酶 C.引物酶 DRNA聚合酶 E末端轉(zhuǎn)移酶 39DNA克隆不包括下列那項步驟? A選擇一個適合的載體 B限制性核酸內(nèi)切酶在特異位點裂解質(zhì)粒和目的基因 C用連接酶連接載體DNA和目的DNA，形成重組體 D用載體的相應(yīng)抗生素抗性篩選含重組體的細菌 E.重組體用融合法導(dǎo)人細胞40下列那項不能作為表達載體導(dǎo)人真核細胞的方法? A.磷酸鈣轉(zhuǎn)染 B電穿孔 C脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 D. 顯微注射 E.氯化鈣轉(zhuǎn)染41下列那項不能作為基因工程重組體的篩選方法? A抗藥性標志選擇 B宿主菌的營養(yǎng)缺陷標志

25、補救 C原位雜交 DSouthern印 A.將瓊脂培養(yǎng)板上的轉(zhuǎn)化子茵落經(jīng)蒸汽裂解釋放抗原 B將固定目的基因編碼蛋白質(zhì)的抗血清聚乙烯薄膜覆蓋在裂解菌落上 E.再使用P標記的DNA探針與薄膜反應(yīng) D經(jīng)放射自顯影檢出陽性反應(yīng)菌落 E.免疫學(xué)方法特異性強、靈敏度高，尤其適用于選擇不為宿主菌提供任何選擇標志的基因42重組DNA技術(shù)不能應(yīng)用于： A. 疾病基因的發(fā)現(xiàn) B生物制藥 CDNA序列分析 D. 基因診斷 E.基因治療43基因重組是指DNA分子的： A.共價連接 且氫鍵連接 巴離子鍵連接 D交換 E.退火44下列那種藥物不能用基因工程的方法生產(chǎn)?A胰島素 B干擾素 C白細胞介素 D性激素 E促紅細胞

26、生成素45DNA重組技術(shù)不能應(yīng)用于下列哪個方面? A. 產(chǎn)前診斷 B攜帶者測試 C. 癥候前診斷 D遺傳病的易感性 E.傳染病的傳染性46一種可靠的DNA診斷學(xué)方法，下列那項是不必符合的? A能正確擴增靶基因 B能準確區(qū)分單個堿基的差別 C本底或噪聲低，不干擾DNA的鑒定 D便于完全自動化操作 E.方法簡便，易于推廣應(yīng)用47關(guān)于轉(zhuǎn)化錯誤的是： A受體細胞獲得新的遺傳表型 B外源DNA一定整合進受體細胞基因組 C自然界中較大的外源DNA轉(zhuǎn)化幾率較低 D自然界中較大的外源DNA轉(zhuǎn)化幾率較高 E越大的外源DNA與染色體整合幾宰越低48關(guān)于同源重組不正確的是： A同源重組不需要特異的DNA序列 B同源

27、重組要求兩分子間序列必須相同 。 C. ReeB；CD具有內(nèi)切酶和解旋酶活性 ·DHolliday中間體的形成，是同源重組的重要步驟E PCR技術(shù)49下列那種酶是重組DNA技術(shù)中最重要的? A反轉(zhuǎn)錄酶 B堿性磷酸酶 巴末端轉(zhuǎn)移酶 DDNA聚合酶 E.DNA連接酶50重組DNA技術(shù)常用的限制性核酸內(nèi)切酶為 AI類酶 B類酶 C類酶 D類酶 EV類酶51在分子生物學(xué)領(lǐng)域，分子克隆專指 A細胞克隆 BRNA克隆 CDNA克隆 D抗體克隆 EnRNA克隆52用于重組DNA的限制性核酸內(nèi)切酶識別核苷酸序列的 A.正超螺旋結(jié)構(gòu) B負超螺旋結(jié)構(gòu) Ca-螺旋結(jié)構(gòu) D. 回文結(jié)構(gòu) E鋅指結(jié)構(gòu)53在基因

28、工程中通常所使用的質(zhì)粒是 A細菌的染色體DNA B細菌染色體外的DNA E.病毒染色體DNA n病毒染色體外的DNA E噬菌體DNA54構(gòu)建基因組DNA文庫時，首先需分離細胞的 A染色體DNA E線粒體DNA C總mRNA DtRNA ErRNA55建cDNA文庫時，首先需分離細胞的 A.染色體DNA B線粒體DNA C總mRNA DtRNA ErRNA56設(shè)計聚合酶鏈反應(yīng)的引物時，應(yīng)考慮引物與模板的 A5¢端特定序列互補 B5¢端任意序列互補 C3¢端特定序列互補 D3¢端任意序列互補 E中間序列互補57用于鑒定轉(zhuǎn)化子細胞是否含重組DNA的最常用方法是

29、 A. 抗藥性選擇 B分子雜交選擇 CRNA反轉(zhuǎn)錄 D免疫學(xué)方法 E體外翻譯58. 限制性核酸內(nèi)切酶酶切后的DNA末端最常見的是： A平頭末端 B3，突出末端 C5突出末端 D粘性末堵 E.缺口末端59. 能識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類酶稱為： ADNA內(nèi)切酶 B限制性內(nèi)切核酸酶 E.非限制性內(nèi)切核酸酶 D限制性外切棱酸酶 E非限制性外切核酸酶60. cDNA是指： A在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補的DNA B在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與DNA互補的DNA C在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補的RNA D在體內(nèi)經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補的RNA · E在體

30、內(nèi)經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補的DNA61基因工程中通常使用的質(zhì)粒存在于： A.細菌染色體 B酵母染色體 C。細菌染色體外 D酵母染色體外 E.以上均不是 ·62質(zhì)粒的分子結(jié)構(gòu)是： A.環(huán)狀雙鏈DNA B環(huán)狀單鏈DNA C環(huán)狀單鏈RNA D. 線狀雙鏈DNA E線狀單鏈DNA B型題 （13）A.抗藥性選擇 B分子雜交選擇 CRNA反轉(zhuǎn)錄 D.免疫學(xué)方法 E.體外翻譯 1用于鑒定是否有質(zhì)粒轉(zhuǎn)入受體菌的一般方法是 2用于鑒定轉(zhuǎn)化子細胞是否含目的基因的常用方法是 3利用目的基因表達產(chǎn)物的特異性抗體來篩選含目的基因的轉(zhuǎn)化子胞的方法是 （46）A限制性核酸內(nèi)切酶 BDNA連接酶 C反轉(zhuǎn)錄酶 D

31、TaqDNA聚合酶 E堿性磷酸酶 4識別DNA回文結(jié)構(gòu)井對其雙鏈進行切割的是 5用于聚合酶鏈反應(yīng)的酶是 6將目的基因與載體DNA進行拼接的酶是 （78）A.支原體 B衣原體 C噬菌體 n細菌 E酵母 7常用作原核表達體系的是 8常用作真核表達體系的是 （910）A基因組文庫 BcDNA文庫 CmlLNA文庫 DtRNA文庫 ErRNA文庫 9分離細胞染色體DNA可制備 10分離細胞總mRNA可制備 （1113）A.轉(zhuǎn)染 B轉(zhuǎn)化 C感染 D轉(zhuǎn)導(dǎo) E轉(zhuǎn)位 11以質(zhì)粒為載體，細菌為宿主的導(dǎo)人方式是 12PA噬菌體為載體，細菌為宿主的導(dǎo)人方式是 13P2病毒為載體，哺乳動物細胞株為宿主的導(dǎo)人方式是 （

32、1415）A.抗藥性選擇 BRNA反轉(zhuǎn)錄 C.免疫化學(xué)方法 D體外翻譯 EPCR 14對重組體內(nèi)基因進行直接選擇的方法是 15通過鑒定基因表達產(chǎn)物篩選重組體的方法是 （1618）ARNA聚合酶 B末端轉(zhuǎn)移酶 巴堿性磷酸酶 D反轉(zhuǎn)錄酶 己核苷酸酶 16切除DNA末端磷酸基用 17在DNA 3羥基末端進行同聚物加尾用 18合成cDNA用（1921）A.同聚物加尾連接 B人工接頭連接 C粘性末端連接 D缺口末端連接 E.平端連接 19外源基因和載體DNA經(jīng)EcoRI切割后的連接屑 20. 在外源基因和載體DNA末端添加同聚物序列后再進行連接屬 21在外源基因和載體DNA末端添加短核苷酸序列，人為制造

33、粘性末端再進行連接屑 (2224) A. 噬菌體感染宿主菌后核酸進入菌體的過程 B. 外來DNA引起生物類型改變的過程 C. 溶源菌中的噬菌體全部基因都表達 D溶源苗中的噬菌體部分調(diào)控區(qū)的基因表達 E帶有宿主DNA的噬菌體 · 22溶源狀態(tài)是： 23進入裂解周期是： 24轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體是指： (2527) A接合作用 B轉(zhuǎn)化作用 C轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 D轉(zhuǎn)座作用 E轉(zhuǎn)移作用 25F因子陰性細胞與F因子陽性細胞形成F因子陽性細胞的是：26病毒從被感染的細胞釋放出來，再次感染另一細胞時，發(fā)生在供體細胞與受體細胞間的DNA轉(zhuǎn)移的是：27從一個染色體位點轉(zhuǎn)移至另一位點的分散的重復(fù)序列稱為： (2831)

34、A.插入序列轉(zhuǎn)座 B轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座 C位點特異的重組 D同源重組 E溶源28噬菌體DNA和宿主染色體的特異靶位點整合稱為：29噬苗體的生長方式是：30Tn3發(fā)生的DNA轉(zhuǎn)移的是：31復(fù)制后的一個復(fù)制本遷移至新位，另一個仍保留在原位的是： (3234) ARec A BE.coR I CRuv C DLex A EF factor32有蛋白水解酶活性的是：33能使同源重組中單鏈DNA對另一雙鏈DNA的侵入的是：34切割Holliday中間體的內(nèi)切酶是： (3537) AReplicon BCloning CInverted repeats DPalindrome ETransposons35目的基因

35、與載體連接形成；36來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合稱為：37限制性內(nèi)切核酸酶識別的序列具有： (3840) A抗藥性篩選 B分子雜交篩選 CRNA反轉(zhuǎn)錄 D免疫學(xué)方法 E體外翻譯38用于鑒定質(zhì)粒是否轉(zhuǎn)化的一般方法是：39用于鑒定轉(zhuǎn)化子細胞是否含有目的基因的常用方法是：40利用目的基因表達產(chǎn)物的特異性抗體來篩選含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細胞的方法 (4143) A.限制性核酸內(nèi)切酶 BDNA連接酶 C. 反轉(zhuǎn)錄酶 DTaqDNA聚合酶 E.堿性磷酸酶41識別DNA回文結(jié)構(gòu)并對其雙鏈進行切割的是；42用于PCR反應(yīng)的酶是；43將目的基因與載體進行拼接的酶是： (4445) A.支原體 B衣原體 C.

36、 噬菌體 D細菌 E酵母44常用于原核表達體系的是：45常用于真核表達體系的是； (4648) A.轉(zhuǎn)染 B轉(zhuǎn)化 C感染 D. 轉(zhuǎn)導(dǎo) E.轉(zhuǎn)位44以質(zhì)粒為載體，細菌為宿主的導(dǎo)人方式是：45以噬菌體為載體，細菌為宿主的導(dǎo)人方式是：46以病毒為載體，哺乳動物細胞為宿主的導(dǎo)人方式是； (4748) A.抗藥性篩選 BRNA反轉(zhuǎn)錄 C免疫化學(xué)方法 D體外翻譯 E.PCR47對重組體內(nèi)基因進行直接篩選的方法是：48通過鑒定基因表達產(chǎn)物篩選重組體的方法是： (4951) A. RNA聚合酶 B末端轉(zhuǎn)移酶 C. 堿性磷酸酶 D. 反轉(zhuǎn)錄酶 E核苷酸酶49能切除DNA末端磷酸基的是：50能在DNA3羥基末端進

37、行同聚物加尾的是：51合成cDNA用的是： (5254) A. 同聚物加尾連接 B人工接頭連接 C. 粘性末端連接 D缺口末端連接 E.平端連接52外源基因和載體DNA經(jīng)過EcoRI切割后的連接屬于：53在外源基因和載體DNA末端加同聚物后進行連接屬于：54在外源基因和載體DNA末端添加短核苷酸序列，人為制造粘性末端后進行連接屬于 X型題1可用作克隆載體的DNA分子有 A染色體DNA D病毒DNA C細菌DNA D噬菌體DNA2重組DNA基本過程包括 A. 目的基因的獲取 B克隆載體的構(gòu)建 C. 目的基因與載體的拼接 D重組分子導(dǎo)入受體菌3基因克隆又稱 A. 重組RNA B重組DNA C. D

38、NA克隆 D. RNA克隆4組成PCR反應(yīng)體系的有 A. RNA引物 BTaqDNA聚合酶 CRNA聚合酶 D. DNA模板5. 對于重組體的篩選，屬直接選擇法的有 A免疫化學(xué)法 nSouthern印跡 E.酶聯(lián)免疫法 D標志補救6對于重組體的篩選，屬非直接選擇法的有 A免疫化學(xué)法 DSouthern印跡 C酶聯(lián)免疫法 D標志補救7限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA時，可產(chǎn)生 A5¢突出粘端 B平末端 C. 缺口末端 D3¢突出粘端8基因工程中目的基因的來源可以是 A.化學(xué)合成 B. PCR合成 C. BCR合成 DcDNA文庫 9在已知DNA序列的情況下，獲取目的基因的最方便的方

39、法是： A人工化學(xué)合成 B基因組文庫法 CcDNA文庫法 DPCR法 E. 從染色體DNA直接提取10E.coRI切割DNA雙鏈產(chǎn)生： A. 平端 B5¢突出的粘性末端 C3¢突出的粘性末端 D鈍性末端 E.配伍末端11基因工程中使目的基因與載體拼接的酶是： ADNA聚合酶 BRNA聚合酶 巴DNA連接酶 DRNA連接酶 E.限制性核酸內(nèi)切酶12以質(zhì)粒為載體，將外源基因?qū)耸荏w菌的過程稱為 A轉(zhuǎn)化 B轉(zhuǎn)染 C轉(zhuǎn)導(dǎo) D轉(zhuǎn)位 E.感染13最常用的篩選轉(zhuǎn)化細菌是否含有質(zhì)粒的方法是： A營養(yǎng)互補篩選 B抗藥性篩選 C免疫化學(xué)篩選 D原位雜交篩選 E.Southern印跡篩選 14.

40、 互補篩選屬于：A. 抗藥性標志篩選 B酶聯(lián)免疫篩選 C標志補救篩選 D.原位雜交篩選 E.免疫化學(xué)篩選15進行同聚物加尾法連接目的基因和載體DNA時，需要那種酶? A.DNA聚合酶 BRNA聚合酶 C引物酶 D逆轉(zhuǎn)錄酶 E.末端轉(zhuǎn)移酶16下列描述最能確切表達質(zhì)粒DNA作為克隆載體特性的是： A小型環(huán)狀雙鏈DNA分子 B攜帶有某些耐藥基因 C在細胞分裂時恒定地傳遞給子代細胞 D具有自我復(fù)制能力 E.獲得目的基因17表達人類蛋白質(zhì)的最理想的細胞體系是： AE.coil表達體系 B原核表達體系 巴酵母表達體系 D昆蟲表達體系 E哺乳類細胞表達體系 B型題18可用于基因工程載體的DNA分子有： A染

41、色體DNA B病毒DNA C細菌DNA D噬菌體DNA E質(zhì)粒DNA 19重組DNA技術(shù)的基本過程包括： A目的基因的獲取 D，PCR反應(yīng) C克隆載體的構(gòu)建 D目的基因與載體的連接 E.重組體分子導(dǎo)人受體菌20基因克隆又稱為： A重組DNA B重組RNA eDNA克隆 DRNA克隆 E.蛋白質(zhì)復(fù)制21組成PCR反應(yīng)體系的物質(zhì)包括： ARNA引物 B'FaqDNA聚合酶 CRNA聚合酶 DDNA模板 EddNTP22對于重組體的篩選，屬于直接選擇法的是： A免疫化學(xué)法 B原位雜交法 CSouthern印跡 D.補救標志篩選 E. 抗藥性標志篩選23對于重組體的篩選，屬于非直接選擇法的是：

42、 A免疫化學(xué)法 B原位雜交法 C. Southern印跡 D補救標志篩選 E.酶聯(lián)免疫篩選24限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA時可產(chǎn)生： A5¢粘性末端 B3¢粘性末端 C. 平末端 D單鏈缺口 E.粘性末端 153基因工程中目的基因的來源有； A化學(xué)合成 BPCR合成 巴CDNA文庫 D基因組文庫 E.組織細胞中染色體DNA直接提取25基因工程中外源性基因又稱為：A目的基因 B目的DNA C目的RNA Dtarget DNA E.外源RNA26重組DNA技術(shù)中常用的工具酶有， A限制性枝酸內(nèi)切酶 BDNA聚合酶I CDNA連接酶 D反轉(zhuǎn)錄酶 E末端轉(zhuǎn)移酶27使細胞獲取新的遺傳表

43、型的方式有： A接合作用 B轉(zhuǎn)化作用 C. 轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 D轉(zhuǎn)座 E以上均可以28作為基因工程的載體必須具備的條件是： A能獨立自主復(fù)制 B易轉(zhuǎn)化 C易檢測(含有抗藥性基因等) D具有限制性內(nèi)切核酸酶的切口 E.易提取獲得29將表達載體導(dǎo)人真核細胞的轉(zhuǎn)染方法有： A.磷酸鈣轉(zhuǎn)染 BDEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染 C電穿孔 D脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 E.顯微注射30為保證轉(zhuǎn)錄和翻譯的順利進行，表達載體必須具備的DNA序列應(yīng)包括： A較強的啟動子 B較強的衰減子 C較強的沉默子 D 合適的SD序列 E. 核糖體結(jié)合位點31融合蛋白的結(jié)構(gòu)中包含有： AN端為原核蛋白質(zhì) BN端為真核蛋白質(zhì) C. C端為原核蛋白質(zhì) DC端為真

44、核蛋白質(zhì) EN，C兩端為原核蛋白質(zhì)，中間為真核蛋白質(zhì)32可以連接的目的基因與載體的末端有： A.同一限制性內(nèi)切核酸酶切割的粘性末端 ， B不同一限制性內(nèi)切核酸酶切割的配伍末端 C. 不同一限制性內(nèi)切核酸酶切割的不同類型的粘性末端 D同一限制性內(nèi)切核酸酶切割的平端 E.不同一限制性內(nèi)切核酸酶切割的平端 四、問答題1. 什么叫基因克隆?簡述基因克隆的步驟。2. 限制性內(nèi)切核酸酶有哪些特點?3簡述重組DNA技術(shù)中目的基因的獲取來源和途徑。4簡述?；パa篩選重組體質(zhì)粒細菌的原理。5基因工程中重組體篩選的方法有那些? ；： 6基因工程Ec。Ii表達體系的表達載體必須符合那些標準?7常用的真核表達體系有哪些

45、?常用于細胞轉(zhuǎn)染的方法有哪些?8已知有一mRNA分子，你怎樣才能使它翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)?簡述其過程。9一種可靠的DNA診斷學(xué)方法必須符合哪些標準?10作為基因工程的載體必須具備哪些條件? 參 考 答案 一、名詞解釋 1基因工程(engineering)是指將DNA重組體引進受體細胞中，建立無性系的過程。克隆某一基因或DNA片段過程中，將外源DNA插入載體分子所形成的復(fù)制子是雜合分子嵌合DNA(DNAchimerase)，所以又稱為重組DNA(recombinantDNA)。 2當細胞(細菌)與細胞(細菌)相互接觸時，質(zhì)粒DNA就可以從一個細胞(細菌)轉(zhuǎn)移到另一個細胞(細菌)，這種類型的DNA轉(zhuǎn)

46、移稱為接合作用。 3由外源性DNA導(dǎo)入宿主細胞，并引起生物類型改變的過程或使宿主細胞獲得新的遺傳表型稱為轉(zhuǎn)化作用。 4當病毒從被感染的(供體)細胞釋放出來，再次感染另一(受體)細胞時，發(fā)生在供體細胞與受體細胞之間的DNA轉(zhuǎn)移及基因重組稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用?；驇в兴拗鱀NA的噬菌體或病毒，再感染另外的宿主的過程中發(fā)生的DNA轉(zhuǎn)移及基因重組稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。 5. 轉(zhuǎn)座即是指一個成一組基因從一個位置轉(zhuǎn)倒基因組的另一個位置。可移動的DNA序列包括插入序列和轉(zhuǎn)座于。故由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移或重排稱轉(zhuǎn)座。 6轉(zhuǎn)座于是可以從一個染色體位點轉(zhuǎn)移至另一個位點的分散的重復(fù)序列。轉(zhuǎn)座子也包括含有兩個反向重復(fù)序列的側(cè)

47、翼，內(nèi)有轉(zhuǎn)座酶基因，并含有抗生素耐藥基因等其他基因。 7發(fā)生在同源序列間的重組稱為同源重組，又稱基本重組(general recombination)。同源重組不需要特異DNA列，而是依糗兩分子間序列的相同或類似性 8. 發(fā)生在同源序列問的重組稱為同源重組，又稱基本重組(8eneralrecombination)。 9. 是指含有單一DNA重組體的無性系?；蛑笇NA重組體引進受體細胞中，建立無性系的過程。因此，又稱為基因克隆(genecloning)。 10外源DNA插入載體DNA分子所形成的具有自我復(fù)制能力的DNA分子稱為復(fù)制子(replicon)。 11限制性內(nèi)切核酸酶(Restrict

48、ionendonuelease)是指能識別DNA的特異序列，井在識別位點或其周 圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。 12. DNA的核苷酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對稱結(jié)構(gòu)即回文結(jié)構(gòu)Palindrome(或正讀反讀序列相同的DNA序 列)。 13不同限制性內(nèi)切酶識別位點不同，但切割后產(chǎn)生相同類型的粘性末端，稱為配伍末端。 14DNA重組技術(shù)中是我們所需要的DNA序列或基因，就稱為目的基田(target gene)或目的DNA(target DNA)。 15以mRNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補的DNA稱為eDNAcomplementaryDNA)。 16克隆載體(cloningvector)是攜帶目的纂因，實現(xiàn)目的基因的無性繁殖或表達有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子。 17為使插入的目的基因可轉(zhuǎn)錄進而翻譯成多肽鏈，而特意設(shè)計的克隆載體又稱為表達載體(expression vector)，即具有轉(zhuǎn)錄和翻譯所必須的DNA序列的載體。18存在于細菌染色體以外的環(huán)狀DNA分子。 19M1。噬菌體的基因間隔區(qū)插入E.Coil的調(diào)節(jié)基因及LacZ(p一