果蔬菜中農(nóng)藥殘留測定實驗報告

實驗四 果蔬菜中農(nóng)藥殘留測定 環(huán)境工程 李婷婷 一 實驗?zāi)康?1 練習(xí)使用農(nóng)藥殘留快速檢測儀 掌握其操作過程 2 掌握酶抑制法的實驗原理 二 實驗原理 本實驗采用酶抑制法 有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑酶活性 使本可以由酶參與的顯色反應(yīng)而失去顏色 呈白色 可用比色法定 量抑制程度 抑制率是有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制酶能力的強(qiáng) 弱 在一定條件下 有機(jī)磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥對膽堿脂酶正常功能 有抑制作用 其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān) 正常情況下 酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物 乙酰膽堿 水解 其水解產(chǎn) 物與顯色劑反應(yīng) 產(chǎn)生黃色物質(zhì) 用分光光度計在 412nm 處測定吸 光度隨時間的變化值 計算出抑制率 通過抑制率可以判斷出樣品 中是否含有高劑量有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在 三 實驗步驟 1 參數(shù)設(shè)置 2 校準(zhǔn)測量 選擇校準(zhǔn)菜單后 取 2 5ml 試劑一移入比色瓶后 各取 100ul 試劑二和試劑三倒入比色瓶中 蓋緊搖勻 放入比色槽中 放置 10min 按校準(zhǔn)鍵 儀器顯示正在預(yù)熱 儀器發(fā)出嘀嘀嘀三聲 后 表示校準(zhǔn)完畢 3 空白測量 接上步 按空白測量鍵 儀器顯示正在預(yù)熱 發(fā) 出嘀嘀嘀三聲后 提示加入試劑四 取出比色瓶加入 100ul 試劑四 蓋好搖勻 放入比色瓶中 按回車?yán)^續(xù) 儀器顯示正在測量 倒計 時三分鐘 結(jié)束后同樣發(fā)出嘀嘀嘀三聲 并顯示吸光度值 A1 A2 4 樣品測量 4 1 樣品制備 選取有代表性的果蔬樣品 擦去表面泥土 葉菜用葉菜取樣器取葉片部分 果實蔬菜可切割 然后切成 1cm 左右的見方碎片 稱取 2 0g 樣品 4 2 樣品中農(nóng)藥的提取 將 6 個樣品提取瓶放在支架上 各 放入 2 0g 樣品 各加 10 ml 試劑一 用攪拌針使樣品全部浸入 液體中 放入提取儀中萃取 6 分鐘 之后放回支架 取 2 5ml 注 入比色瓶中 4 3 樣品測量 選擇測量鍵 各加 100ul 試劑二和試劑三混 合搖勻 按確認(rèn)鍵進(jìn)行測量 預(yù)熱結(jié)束后 儀器顯示正在培養(yǎng) 10 分鐘后結(jié)束 發(fā)出嘀嘀嘀三聲 提示加入試劑四 加入后 按 確認(rèn)鍵三分鐘后 屏幕顯示結(jié)果 四 實驗結(jié)果與分析 1 抑制率公式 E A2 A1 A4 A3 A2 A1 100 E 抑制率 A1 空白測量 3 分鐘前的吸光度值 A2 空白測量 3 分鐘后的吸光度值 A3 樣品測量 3 分鐘前的吸光度值 A4 樣品測量 3 分鐘后的吸光度值 2 結(jié)果判定 當(dāng)被測樣品的抑制率在 50 以上時 表示被測樣 品中有高劑量有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在 樣品為陽性結(jié)果 陽性結(jié)果的樣品需要檢測兩次以上 對陽性結(jié)果的樣品 可用其他 方法進(jìn)一步確定農(nóng)藥品種的含量 并報有關(guān)部門處理 實驗所測樣品為豆角 經(jīng)實驗測得 A1 0 029 A2 0 617 A2 A1 0 646 0 300 所以空白有效 A3 0 329 A4 1 117 1 8 所以此樣品檢測有效 抑制率為 4 1 小于 50 所以樣品檢測一次即可 五 問題與討論 本次實驗中應(yīng)注意的問題有以下幾點 1 試劑二用量 若 A2 A1 小于 0 300 此空白無效 需要重新 檢測 若多次測定后 仍小于 0 300 則需要增加試劑二的用量 直 到大于為止 2 吸光度確認(rèn) 在樣品測量結(jié)束后 若 A4 大于 1 80 則此樣 品檢測無效 需重新檢測 多次測量后仍大于 1 80 為果蔬色素干 擾 需要對被測樣品進(jìn)行整株提取 不要剪碎樣品 3 注意時間間隔 提示加入試劑四時應(yīng)該在嘀嘀嘀三聲后加入 空白和樣品 且做空白和樣品時加入試劑