人教版 選修一 DNA的粗提取和鑒定 課件（30張）.ppt

1 課題dna的粗提取與鑒定 提取dna的基本思路 利用dna與rna 蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異 提取dna 去除其他成分 2 dna的粗提取與鑒定 1 原理 方法和目的 高溫 dna耐高溫 dna和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同 蛋白質(zhì) dna熱穩(wěn)定性不同 大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60 80 的高溫 而dna在80 以上才會(huì)變性 dna對(duì)洗滌劑耐受性洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜 但對(duì)dna沒有影響 加入洗滌劑 3 1 不同濃度nacl中dna溶解度不同 2 dna與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同 dna不溶于酒精 細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精 3 dna和蛋白質(zhì)對(duì)酶耐受性不同 酶的專一性 蛋白酶水解蛋白質(zhì) 但是對(duì)dna沒有影響 4 dna和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同 蛋白質(zhì) dna熱穩(wěn)定性不同 大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60 80 的高溫 而dna在80 以上才會(huì)變性 5 dna和蛋白質(zhì)對(duì)洗滌劑耐受性不同 洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜 但對(duì)dna沒有影響 提取dna的原理包括dna的兩個(gè)方面 溶解性和耐受性 1 dna的粗提取實(shí)驗(yàn)原理 4 2 實(shí)驗(yàn)材料 動(dòng)物 提醒 人和哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核 也沒有dna 不適于作為dna提取的材料 但卻是提取血紅蛋白的理想材料 雞血紅細(xì)胞 白細(xì)胞中都有細(xì)胞核 含大量的dna 既經(jīng)濟(jì)又易取 植物 新鮮菜花 蒜黃 菠菜等 5 3 方法與過程 1 制雞血細(xì)胞液 500ml燒杯中 玻棒攪拌 離心或靜置沉淀 離心或靜置后去掉上清液 血漿 血細(xì)胞 6 關(guān)于dna粗提取的實(shí)驗(yàn)材料的選擇 也經(jīng)過了多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較 最終選擇雞血做實(shí)驗(yàn)材料的原因是什么 請(qǐng)回答下列問題 1 雞血中紅細(xì)胞 家雞屬于鳥類 新陳代謝旺盛 因而血液中細(xì)胞數(shù)目較多 可以提供豐富的 2 實(shí)驗(yàn)前由老師制備雞血細(xì)胞液供同學(xué)們做實(shí)驗(yàn)材料 而不用雞全血 主要原因是 3 生活在牧區(qū)的人們 采集羊 牛和馬血比較方便 若他們按實(shí)驗(yàn)要求完成實(shí)驗(yàn)步驟后 結(jié)果是 這是因?yàn)?但若改用動(dòng)物肝臟做實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)可以順利進(jìn)行 這是因?yàn)?4 若選用動(dòng)物肝臟做實(shí)驗(yàn)材料 在提取之前 最好增加程序 使組織細(xì)胞更易分離 含有完整的 成形的細(xì)胞核 紅 dna量 所以一般采用雞血 雞的全血包括血漿和血細(xì)胞 血漿中無dna 全血中除掉血漿后就是濃縮的血細(xì)胞液 dna的相對(duì)含量提高了 在實(shí)驗(yàn)中很難提取到dna 哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中無細(xì)胞核 反靠白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中的少量dna 在實(shí)驗(yàn)中很難提取到 肝細(xì)胞中含有細(xì)胞核 并且肝組織容易被破壞 有利于dna的提取 若使肝組織易分離 將肝細(xì)胞剪碎 研磨是一種簡便易行的方法 7 2 實(shí)驗(yàn)方法步驟 在上述溶液中緩緩加入蒸餾水 并沿一個(gè)方向輕輕攪拌 出現(xiàn)絲狀物 當(dāng)絲狀物不在增加時(shí) 停止加水 此時(shí)nacl溶液的濃度相當(dāng)于0 14mol l 用多層紗布過濾 含dna的粘稠物留在紗布上 濾液中含有dna 所得的濾液 體積分?jǐn)?shù)為95 的冷卻酒精50ml 用玻棒沿一個(gè)方向輕緩攪拌 溶液中 析出 出現(xiàn)乳白色絲狀物 用玻棒將絲狀物卷起 并用濾紙吸取上面的水分 利用細(xì)胞吸水破裂 細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來 后用紗布過濾取其濾液 血細(xì)胞在蒸餾水中易吸水而導(dǎo)致細(xì)胞膜和核膜的破裂 據(jù)此可得出含核dna的溶液 8 鑒定 均加入 4ml二苯胺試劑 2mol lnacl溶液5ml 鑒定時(shí)藍(lán)色的深淺與溶液中dna的含量多少有關(guān) 自變量 你能采用其他方法對(duì)dna進(jìn)行鑒定嗎 洋蔥的鱗片葉表皮細(xì)胞 取少許絲狀物 置玻片中央 加1滴甲基綠溶液 絲狀物變成綠色 鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠 用二苯胺須加熱 用甲基綠不用水浴加熱 9 10 注意事項(xiàng) 制備雞血細(xì)胞液時(shí) 要在取雞血的同時(shí)加入檸檬酸鈉 靜置后上層是血清 下層為所需要的血細(xì)胞 整個(gè)實(shí)驗(yàn)中加入 兩次蒸餾水 三次nacl溶液 一次酒精 兩次加蒸餾水的目的不同 一是漲破細(xì)胞 二是稀釋溶液 酒精最好用95 的冷酒精 加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時(shí) 動(dòng)作要輕緩且朝一個(gè)方向 保證dna分子的完整性 使用時(shí)注意玻璃棒不要碰到燒杯底 鑒定dna時(shí)需沸水浴加熱 二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用 否則會(huì)影響鑒定的效果 二苯胺是一種有毒性的試劑 使用時(shí)注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位 盛放雞血細(xì)胞的容器最好是塑料容器 雞血細(xì)胞破碎后釋放的dna 容易被玻璃容器吸附 造成提取過程中dna的損失 11 dna的直徑約為20 10 10m 實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的絲狀物的粗細(xì)是否表示1個(gè)dna分子直徑的大小 答 dna分子直徑只有2nm 絲狀物是多個(gè)dna聚在一起形成的 12 下圖為 dna粗提取和鑒定 實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作 這些操作目的正確的是 a 是洗滌血細(xì)胞 去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)b 是溶解dna 去除不溶于酒精的雜質(zhì)c 是溶解dna 去除不溶于2mol lnacl溶液的雜質(zhì)d 是稀釋nacl溶液 去除不溶于低濃度nacl溶液的雜質(zhì) 是釋放核物質(zhì) 是提純dna 去除溶于酒精的雜質(zhì) 稀釋nacl溶液 析出dna c 13 甲 乙兩圖為 dna的粗提取與鑒定 實(shí)驗(yàn)中涉及的兩個(gè)操作裝置圖 相關(guān)敘述正確的是甲乙a 圖甲的燒杯和圖乙的試管中所用溶劑都為nacl溶液 但兩者濃度不同b 圖乙試管經(jīng)少許加熱后即可觀察到一支試管中的溶液明顯變藍(lán) 另一支試管中的溶液不變藍(lán)c 圖甲操作需用玻棒迅速攪拌以使dna成為絮狀沉淀并纏繞在玻棒上d 圖乙操作中所用的二苯胺需現(xiàn)配現(xiàn)用以達(dá)到較好的鑒定效果 d 14 小結(jié) 生物體內(nèi)有機(jī)物與化學(xué)試劑的特定顏色反應(yīng) 磚紅色沉淀 藍(lán)色 橘黃色紅色 紫色 藍(lán)紫色 加熱 加熱 斐林試劑班氏試劑 蘇丹iii蘇丹iv 雙縮脲試劑 二苯胺試劑 碘液 15 植物細(xì)胞需要先用洗滌劑 洗發(fā)香波 沐浴液 洗潔精等 溶解細(xì)胞膜 洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜的原因是 洗滌液中含有十二烷基硫酸鈉和堿 它們可使細(xì)胞膜破裂 蛋白質(zhì)變性 使蛋白質(zhì)與dna分離開來 利于dna的釋放 動(dòng)物細(xì)胞膜是不用試劑 洗滌劑 破壞的 因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞膜外面沒有細(xì)胞壁的保護(hù) 放在清水中自然的就會(huì)吸水而脹破 釋放出其中的dna等物質(zhì) 4 植物 新鮮菜花 蒜黃 菠菜等 16 方法步驟 1 將30g香蕉或菜花切碎 放入研缽中 向研缽中加入2g氯化鈉 研磨直至成半流體狀 3 將混合液用兩層紗布過濾 向?yàn)V液中加入預(yù)冷的10ml乙醇溶液 靜置 可產(chǎn)生絮狀的dna 4 取兩支試管 分別加入5ml生理鹽水 將dna挑至其中一支試管中 輕輕攪拌使其溶解 有利于dna的溶解 2 向研缽中加入10ml蒸餾水或涼開水 攪拌 然后加入10ml洗滌劑 輕輕攪拌 能溶解細(xì)胞膜 有利于dna的釋放 dna析出 除去溶于酒精的蛋白質(zhì) 17 2007年高考生物試題 在某些深海魚中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因 該對(duì)提高農(nóng)作物的抗寒能力有較好的應(yīng)用價(jià)值 該基因可以從這些魚的dna中擴(kuò)增得到 試述在提取和純化dna時(shí)影響提純效果的因素及其依據(jù) 列舉兩點(diǎn) 選擇nacl溶液的合適濃度 利用dna和其它雜質(zhì)在不同nacl溶液中溶解度不同的特性 達(dá)到分離目的 加人一定量酒精 使部分蛋白質(zhì)雜質(zhì)溶解于酒精 與dna分離 加人蛋白酶 除去蛋白質(zhì)雜質(zhì)的干擾 控制dna提取的溫度 使大多數(shù)蛋白質(zhì)雜質(zhì)變性 18 1 如果用棉花植株作為實(shí)驗(yàn)材料做 dna的粗提取與鑒定 實(shí)驗(yàn) 請(qǐng)你說出可能用到的二種化學(xué)試劑名稱 并說出這種試劑在該實(shí)驗(yàn)中的用途 4分 氯化鈉溶液 不同濃度的nacl溶液 能使dna溶解或析出 從而起到提取dna的作用 95 乙醇 dna不溶于酒精 可以用于提取出含雜質(zhì)較少的dna 二苯胺 作為鑒定dna的試劑 洗滌劑 能溶解細(xì)胞膜 有利于細(xì)胞內(nèi)dna的釋放 答出每種試劑的名稱和用途得2分 19 2 下列圖示中能反映dna溶解度與nacl溶液濃度 mol l 之間的關(guān)系的是 c 20 b 溶解度與析出量的關(guān)系是相反 21 4 江蘇有一道涼菜 白斬雞 雞肉嫩而不韌 味美鮮香 其加工過程中添加了從木瓜中提取的酶制成的 嫩肉粉 下列有關(guān)嫩肉粉的敘述中 正確的是 a 嫩肉粉 可能是通過催化細(xì)胞間的纖維素水解而實(shí)現(xiàn) 嫩肉 的b 與高溫蒸煮相比 嫩肉粉 是通過降低反應(yīng)活化能而實(shí)現(xiàn) 嫩肉 的c 嫩肉粉 應(yīng)在蒸煮雞肉時(shí)加入 才能實(shí)現(xiàn) 嫩肉 d 嫩肉粉 是一種化工產(chǎn)品 不利于人體健康 實(shí)際應(yīng)用中能少則少 能無則無 b 22 5 09 江蘇四市 下列操作可以達(dá)到目的的選項(xiàng)是 b 微火加熱并不斷攪拌 其目的是防止海藻酸鈉焦煳 促使血細(xì)胞破裂 防止根尖過分解離 對(duì)染色造成影響 因玻璃紙是半透膜 所以將裝有蛋白質(zhì)粗制品的透析袋 玻璃紙制成 放入透析液中 可以將蛋白質(zhì)與其他小分子化合物分離 23 6 在 dna粗提取與鑒定 實(shí)驗(yàn)中 將含有一定雜質(zhì)的dna絲狀物分別放入體積為2ml的四種溶液中 經(jīng)攪拌后過濾 獲得4種濾液 含dna較少的是a 濾液eb 濾液fc 濾液gd 濾液h cd 7 欲使溶有dna的2mol l的nacl溶液中的dna析出 最有效的辦法是a加蒸餾水b加礦泉水c加清水d加生理鹽水 24 8 與析出dna粘稠物有關(guān)的敘述 不正確的是 多選 a操作時(shí)緩慢滴加蒸餾水 降低dna的溶解度b操作時(shí)用玻棒輕緩攪拌以保證dna分子的完整c加蒸餾水可以同時(shí)降低dna和蛋白質(zhì)的溶解度d當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時(shí) nacl溶液的濃度可以認(rèn)為是0 14mol le 改變nacl溶液的濃度只能使dna溶解而不能使其析出 9 下列與dna粗提取有關(guān)描述正確的是 a dna能夠溶解在一定濃度的nacl溶液中b dna能夠溶解在質(zhì)量分?jǐn)?shù)95 冷酒精中c dna在0 14mol l的nacl溶液中溶解度最高d dna只能溶解在2mol l的nacl溶液中 a 25 10 下列操作中 對(duì)dna的提取量影響較小的是a 使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂 放出dna等核物質(zhì)b 攪拌時(shí) 要用玻璃棒沿一個(gè)方向輕緩攪動(dòng)c 在析出dna黏稠物時(shí) 要緩緩加蒸餾水 直至溶液中黏稠物不再增多d 在用酒精沉淀dna時(shí) 要使用冷酒精 甚至再將混合液放入冰箱中冷卻 解析 在b所述的操作中 可以保證dna分子的完整性 但不影響提取量 除了a c d及在dna的溶解和再溶解時(shí) 要充分?jǐn)嚢栌绊慸na的提取量外 使用塑料器皿也可以減少dna在操作中的損失 因?yàn)樗芰现破返男再|(zhì)相對(duì)比較溫和 所以比金屬等其他的制品好一些 對(duì)dna的損傷也就小一些 因?yàn)閐na容易與玻璃制品粘連 答案 b 26 11 多選 下表是關(guān)于dna粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用的材料 操作及其作用的表述 正確的是 ac 27 12 下列關(guān)于dna粗提取與鑒定的說法正確的是 a 氯化鈉的濃度越低 對(duì)dna的溶解度越大b 人血也可代替雞血進(jìn)行實(shí)驗(yàn)c 檸檬酸鈉的主要作用是加速血細(xì)胞破裂d dna不能溶于酒精尤其是冷酒精 d 防止凝血 13 蛙的紅細(xì)胞 雞的紅細(xì)胞都有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器 哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器 它們的呼吸方式是什么 蛙的紅細(xì)胞 雞的紅細(xì)胞都是正常的細(xì)胞 進(jìn)行的是有氧呼吸 哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞是進(jìn)行無氧呼吸的 28 16 實(shí)驗(yàn)中nacl的物質(zhì)的量濃度為2mol l和0 14mol l對(duì)dna有何影響 15 在dna的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中 兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是 a 稀釋血液 沖洗樣品b 使血細(xì)胞破裂 降低nacl濃度使dna析出c 使血細(xì)胞破裂 增大dna溶解量d 使血細(xì)胞破裂 提取含雜質(zhì)較少的dna b 答 前者是溶解dna 后者是使dna析出 17 dna遇二苯胺 沸水浴 會(huì)染成 a 磚紅色b 橘黃色c 紫色d 藍(lán)色 d 29 18 dna在nacl溶液中的溶解度有兩重性 隨著nacl溶液濃度的變化而變化 1 請(qǐng)?jiān)谙铝袧舛鹊膎acl溶液中 選出能使dna析出最徹底的一種和溶解度最高的一種 a 0 14mol lb 2mol lc 0 15mol ld 0 3mol l 2 dna不溶于酒精 但細(xì)胞中的某些物質(zhì)卻可以溶于酒精溶液 利用這一原理可以 可以推測(cè)溶于酒精中的可能有 a b 去除雜質(zhì) 某些鹽類 蛋白質(zhì) 糖類或其他大分子物質(zhì) 30 19 2011 江蘇卷 19 在利用雞血進(jìn)行 dna的粗提取與鑒定 的實(shí)驗(yàn)中 相關(guān)敘述正確的是 a 用蒸餾水將nacl溶液濃度調(diào)