MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá).doc

MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)作者：李艷萍1,庾英蘭2,關(guān)寶生3單位：1.武警哈爾濱支隊(duì)衛(wèi)生隊(duì)，黑龍江 哈爾濱 150036;2.佳木斯市中心醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154002;3.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007;4.鶴崗礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院，黑龍江 鶴崗 154100【關(guān)鍵詞】 甲狀腺乳頭狀癌;基質(zhì)金屬蛋白酶-2;基質(zhì)金屬蛋白酶-9;細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子甲狀腺癌是頭頸部常見的惡性腫瘤，其中甲狀腺乳頭狀癌(thyroid papillary carcinoma，PTC)是最常見的病理類型。術(shù)前提高早期甲狀腺癌的診斷率已成為目前臨床亟待解決的問題。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測甲狀腺乳頭狀癌組織中MMP-2、MMP-9、CD147的表達(dá)，探討MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺乳頭狀癌表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，以期為細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查(fine needle aspiration，F(xiàn)NA)篩選甲狀腺癌術(shù)前診斷的敏感指標(biāo)和術(shù)前判斷有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感指標(biāo)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 資料與方法1.1 一般資料收集2000—032006—12佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科診斷為甲狀腺乳頭狀癌病例60例、甲狀腺腺瘤病例20例、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫病例20例及正常甲狀腺組織10例的石蠟包埋標(biāo)本，連續(xù)制成4μm厚切片各5片。所有標(biāo)本HE染色后重新確診分類，并行病例回顧，統(tǒng)計(jì)病人性別、年齡、甲狀腺癌腫瘤大小、包膜的完整性、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。60例甲狀腺乳頭狀癌患者中，男27例(45.0%)，女33例(55.0%)，年齡7116(48.5±2.4)歲，其中<45歲28例，≥45歲32例。根據(jù)UICC1997年分期標(biāo)準(zhǔn)，期37例，期23例。1.2 藥品鼠抗人MMP-2單克隆抗體、鼠抗人MMP-9單克隆抗體及兔抗人CD147單克隆抗體由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供;SP試劑盒及DAB顯色液由武漢博士德生物技術(shù)有限公司提供。1.3 組織學(xué)檢查采用免疫組織化學(xué)方法檢測甲狀腺組織中MMP-2、MMP-9、CD147的表達(dá)。以細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)和/或胞膜上染色強(qiáng)度和細(xì)胞陽性百分率得分之和判定MMP-2、MMP-9、CD147表達(dá)：隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野(200×)，無染色記0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，黃褐色計(jì)3分。細(xì)胞陽性率<5%計(jì)0分，5%25%記1分，25%50%記2分，>50%記3分。上述二項(xiàng)相加，0分為陰性，l2分為弱陽性(+)，34分為中等陽性(+)，56分為強(qiáng)陽性(+)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SAS6.12版統(tǒng)計(jì)分析軟件包，根據(jù)數(shù)據(jù)特征進(jìn)行Kruskal-Wallis Test、秩相關(guān)分析，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)常規(guī)HE染色，鏡下觀察，所選病例病理診斷均與原診斷相符。MMP-2、MMP-9陽性蛋白主要定位于細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中，呈棕色或棕黃色細(xì)顆粒狀。在甲狀腺癌中的陽性表達(dá)分布較密集，多呈高度表達(dá)，在甲狀腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的陽性表達(dá)相對較彌散;CD147陽性蛋白主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，少數(shù)可見腫瘤細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，呈棕黃色或黃褐色顆粒。在甲狀腺癌細(xì)胞中相對分布較密集，染色較深;在甲狀腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的陽性表達(dá)相對較彌散。三種基因蛋白在正常甲狀腺組織中均不表達(dá)。三種基因蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)明顯高于甲狀腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫，差異有顯著性(P<0.01)，在甲狀腺瘤與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的表達(dá)，差異無顯著性(P>0.05)。MMP-2、MMP-9、CD147表達(dá)在年齡≥45歲、腫瘤直徑≥1.0cm、腫瘤包膜不完整、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌中的表達(dá)水平均明顯高于年齡<45歲、腫瘤直徑<1.0cm、腫瘤包膜完整、沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，與臨床分期、性別無明顯關(guān)系(P>0.05)。MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺癌的表達(dá)均具有顯著相關(guān)性(P<0.01)。見表13。2.2 術(shù)前甲狀腺癌篩選MMP-2、MMP-9、CD147敏感性分別為88.3%、81.7%、60.0%，特異性分別為85%、90%、95%;聯(lián)合檢測MMP-2與MMP-9 、MMP-2與CD147、 MMP-9與CD147敏感性分別為85.0%、74.2%、70.8%，特異性分別為87.5 %、90%、93%;聯(lián)合檢測MMP-2、MMP-9、CD147敏感性76.7%，特異性90%。2.3 術(shù)前篩選判定甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移MMP-2、MMP-9、CD147敏感性分別為95.5%、88.6%、70.5%，特異性分別為31%、37.5%、69%;聯(lián)合檢測MMP-2與MMP-9 、MMP-2與CD147、 MMP-9與CD147敏感性分別為92.0%、82.95%、79.6%，特異性分別為34% 、50%、53%;聯(lián)合檢測MMP-2、MMP-9、CD147敏感性84.9%，特異性46%。表1 MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)nMMP-2MMP-9CD147BHDG1*3,WK3*3。4W-+甲狀腺癌(1組)605216378317321410927甲狀腺瘤(2組)20122601424014411結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(3組)20164001640018200正常甲狀腺組織(4組)10100001000010000MMP-2：1組VS 2組χ2=29.870，P<0.01;1組VS 3組 χ2=39.903，P<0.01;2組VS 3組χ2= 3.041，P>0.05。MMP-9：1組VS 2組χ2=27.500，P<0.01;1組VS 3組χ2= 34.062，P<0.01; 2組VS 3組χ2= 0.999，P>0.05。CD147：1組VS 2組χ2= 16.768，P<0.01; 1組VS 3組χ2=26.284，P<0.01;2組VS 3組χ2= 2.662，P>0.05。表2 MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺癌中表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系MMP-2：腫瘤包膜χ2=6.103，P<0.05;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移χ2=14.461，P<0.01;腫瘤直徑χ2=16.456，P<0.01;臨床分期χ2=1.370，P>0.05;性別χ2=0.170，P>0.05;年齡χ2=9.701，P<0.01。MMP-9：腫瘤包膜χ2=13.742，P<0.01; 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移χ2=5.5176，P<0.05; 腫瘤直徑χ2=6.0120，P<0.05; 臨床分期χ2=2.0767，P>0.05; 性別χ2=0.5924，P>0.05; 年齡χ2=8.8819，P<0.01。CD147：腫瘤包膜χ2=7.205，P>0.05; 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移χ2=6.209，P<0.05; 腫瘤直徑χ2=6.474，P<0.05; 臨床分期χ2=2.448，P>0.05; 性別χ2=0.042，P>0.05; 年齡χ2=10.134，P>0.05。表3 甲狀腺癌中MMP-2、MMP-9、CD147表達(dá)的相關(guān)性3 討論甲狀腺乳頭狀癌約占甲狀腺癌成人的70%，兒童的全部，是最常見的病理類型。其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)83.3%，即使臨床未觸及腫大淋巴結(jié)者(N0)，仍有46%72%的隱匿淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而淋巴結(jié)的徹底清除是治療成功的關(guān)鍵。目前，國內(nèi)大部分學(xué)者傾向于依據(jù)原發(fā)癌灶對包膜的侵犯情況來決定是否行頸淋巴結(jié)清除術(shù)，即侵出包膜者行頸淋巴結(jié)清除術(shù)，而包膜內(nèi)型和僅侵犯包膜者不必行頸淋巴結(jié)清除術(shù)。研究表明，腺內(nèi)型及腺外型的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為69.5%和76.9%，雖遠(yuǎn)高于包膜內(nèi)型(7.8%)，但依據(jù)此項(xiàng)指標(biāo)對腺內(nèi)型及腺外型的患者行頸淋巴結(jié)清除術(shù)仍會使30%左右的患者接受不必要的手術(shù)，而將近10%的包膜內(nèi)型的患者又得不到及時(shí)的治療1。因此，迫切需要通過研究與甲狀腺癌浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的癌基因，尋找一種特異性分子標(biāo)志物以便在術(shù)前鑒別腫瘤性質(zhì)、預(yù)測腫物轉(zhuǎn)移浸潤情況，指導(dǎo)臨床手術(shù)術(shù)式的選擇及術(shù)后的進(jìn)一步治療。腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)的黏附及基質(zhì)的降解是腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的重要步驟，MMP-2和MMP-9能夠特異的降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的主要成分IV型膠原，是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中最直接、最重要的金屬蛋白酶2，同時(shí)可促進(jìn)腫瘤血管的生長，在毛細(xì)血管末梢形成及血管內(nèi)皮基膜形成的過程中起重要作用。Nakamura等3研究發(fā)現(xiàn)MMP-2和MMP-9不僅在甲狀腺癌癌細(xì)胞中高表達(dá)，而且在基質(zhì)中的纖維母細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞中也有表達(dá)，其陽性表達(dá)強(qiáng)度以浸潤癌巢周圍最明顯，說明其與腫瘤的浸潤密切相關(guān)4。作為MMP-1、MMP-2和MMP-3的主要刺激因子，CD147在人類許多惡性腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯增高，并與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移相關(guān)。CD147不僅能夠刺激成纖維細(xì)胞表達(dá)MMP，同時(shí)它也可以通過一種旁分泌的方式作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞MMP的表達(dá)，提示腫瘤源性的CD147可能通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞MMPs的產(chǎn)生，參與破壞天然組織機(jī)械屏障，降解基質(zhì)成分，促使癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移和參與腫瘤新生血管生成，還促進(jìn)MMP-11分泌而使腫瘤細(xì)胞更具惡性表型58。研究發(fā)現(xiàn)，三種基因蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)明顯高于甲狀腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(P<0.01)，且在年齡≥45歲、腫瘤直徑≥1.0cm的甲狀腺癌中的表達(dá)水平均明顯高于年齡<45歲、腫瘤直徑<1.0cm，在腫瘤包膜不完整的甲狀腺癌中的表達(dá)水平明顯高于腫瘤包膜完整者，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)水平明顯高于沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。同時(shí)，MMP-2、MMP-9、CD147在甲狀腺癌的表達(dá)具有顯著相關(guān)性(P<0.01)。MMP-2、MMP-9為診斷甲狀腺癌和判斷甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感指標(biāo)，CD147為診斷甲狀腺癌和判斷甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的較特異性指標(biāo)。因此，術(shù)前細(xì)針穿刺取材聯(lián)合檢測MMP-2、MMP-9、CD147有助于術(shù)前診斷甲狀腺癌及判定是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可為臨床是否行功能性頸淋巴結(jié)清掃提供依據(jù)，使有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的N0期PTC患者得到及時(shí)有效治療，同時(shí)使沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者免除不必要的創(chuàng)傷。【參考文獻(xiàn)】 1李樹玲.甲狀腺乳頭狀癌551例外科治療遠(yuǎn)期療效觀察J.中國腫瘤臨床，1992，19(1):52Loukopoulos P，Mungall BA，Straw RC，et al. 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