(論文)不同濃度6BA對菊花出芽的影響 論(2013年優(yōu)秀畢業(yè)設計論文)

畢 業(yè) 設 計（論 文） 不同濃度6-BA對菊花出芽的影響專 業(yè) 生物技術及應用 學生姓名 班 級 學 號 指導教師 完成日期 附1：成績評議學號姓名 題目 不同濃度6-BA對菊花出芽的影響 指導教師建議成績： 評閱教師建議成績： 答辯小組建議成績： 院答辯委員會評閱意見及評定成績：答辯委員會主任簽字（蓋章）： 年 月 日姓名學號班級題目不同濃度6-BA對菊花出芽的影響設計(論文)主要內容以菊花嫩莖段為材料, 在MS培養(yǎng)基中分別添加0.0 (對照)、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L的6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）,在相同條件下培養(yǎng)，觀察菊花的出芽誘導的情況。重點研究問題研究不濃度6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）對菊花出芽的影響主要技術指標植物組織培養(yǎng)技術的掌握，培養(yǎng)基配制的掌握，無菌操作技術的掌握其它要說明的問題菊花培養(yǎng)的適宜條件，菊花快繁中出現的異常情況與解決方法Vc對外植體褐變的抑制作用指導老師意見 指導教師簽字： 年 月 日指導教師意見 對論文的簡短評價：1.指出論文存在的問題及錯誤2.對創(chuàng)造性工作評價3.建議成績 優(yōu) 良 中 及格 不及格 指導教師簽字 年 月 日評閱教師意見 對論文的簡短評價：1.指出論文存在的問題及錯誤2.對創(chuàng)造性工作評價3.建議成績 優(yōu) 良 中 及格 不及格 評閱教師簽字 年 月 日答辯小組評議意見學號姓名 題目 不同濃度6-BA對菊花出芽的影響 答辯小組意見： 1、對論文的評價2.建議成績等級 優(yōu) 良 中 及格 不及格3.需要說明的問題 答辯小組長簽字 年 月 日畢業(yè)論文（設計）不同濃度6-BA對菊花出芽的影響摘要：為了探討菊花組培快繁技術中不同濃度的6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）對芽誘導的影響。以菊花嫩莖段為材料, 在MS培養(yǎng)基中分別添加0.0 (對照)、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L的6-BA,觀察菊花的出芽誘導的情況。結果表明最佳出芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L + NAA0.2mg/ L。另外Vc對防止外植體褐變有明顯作用。關鍵詞：快繁技術;組織培養(yǎng);菊花；褐變Effects of 6-BA with Different Concentrations on the budding of ChrysanthemumAbstract: In order to discuss the chrysanthemum group to cultivate in the quick numerous technology the different density 6- animal pen amino adenine (6-BA) pair of bud induction influence. Take the chrysanthemum tender stem section as the material, increases 0.0 separately in the MS culture medium(comparison),1.0,2.0,3.0,4.0mg/L 6-BA,the observation chrysanthemums bud induction situation. The result indicated the best bud induction culture medium is MS + 6-BA 4.0mg/L + NAA0.2mg/L .Moreover Vc to outside prevented plants the body turning brown to have the obvious function.Key words: the quick numerous technology；tissue culture；chrysanthemum；Browning目錄引言 91 材料和方法 91.1 實驗材料和用具91.2 培養(yǎng)條件91.3 培養(yǎng)方法 102 組織培養(yǎng)中出現的問題與處理（包括褐變、污染） 112.1 褐變 112.2 污染113結果與分析 124小結與討論 13參考文獻 13致謝 14引言菊花 1 (Chrysanthemum)為菊科菊屬的多年生宿根草本植物或半灌木,又稱“菊”、“秋菊”、“黃花”。株高20200cm，通常3090。莖色嫩綠或褐色，除懸崖菊外多為直立分枝，基部半木質化。單葉互生，卵圓至長圓形，邊緣有缺刻及鋸齒。頭狀花序頂生或腋生，一朵或數朵簇生。舌狀花為雌花，筒狀花為兩性花。舌狀花分為下、匙、管、畸四類，色彩豐富，有紅、黃、白、墨、紫、綠、橙、粉、棕、雪青、淡綠等。筒狀花發(fā)展成為具各種色彩的托桂瓣，花色有紅、黃、白、紫、綠、粉紅、復色、間色等色系。花序大小和形狀各有不同，有單瓣，有重瓣；有扁形，有球形；有長絮，有短絮，有平絮和卷絮；有空心和實心；有挺直的和下垂的，式樣繁多，品種復雜。在我國已有3 000多年的栽培歷史,現有3 000多個栽培品種；并已成為世界性的重要花卉,其產銷量居四大切花之首。目前,菊花的主要繁殖方法2有扦插繁殖、分株繁殖、壓條繁殖、嫁接繁殖等,這些方法均存在一定程度的缺點與不足,主要表現為繁殖速度不快、病蟲害發(fā)生頻率高、易受季節(jié)變化影響等等,利用組織培養(yǎng)技術進行菊花的快速繁殖,則可有效解決上述問題與矛盾,已越來越成為菊花繁殖的重要方法與手段,在菊花種苗生產上加以推廣應用。本研究以菊花的嫩莖為外植體,利用不同濃度6-芐氨基腺嘌呤(6-BA) 和一定濃度的-萘乙酸(NAA) 為外源激素,進行菊花的組織培養(yǎng)技術研究,旨在研究不同濃度6-BA對菊花出芽的影響。,結果報告如下：1 材料和方法1.1 實驗材料和用具(1)材料觀賞性菊花嫩莖(2)器材與用具超凈工作臺、 解剖刀、 長柄鑷子、 架臺、無菌濾紙、 酒精燈、火柴、 標簽、 鉛筆、棉球、廢液缸、垃圾袋、皮筋、精密pH試紙（5.47.0）、玻璃三角瓶（150ml）、封口膜、培養(yǎng)皿。(3)藥品與試劑MS培養(yǎng)基母液、激素(生長素 、細胞分裂素等)母液、有機物（瓊脂、蔗糖）、無菌水、0.1 %升汞、 70 %、75%酒精、0.1MNaOH。1.2 培養(yǎng)條件(1) 溫度適宜的溫度范圍為2426。(2) 光照光周期：以12 16h/ d 為宜。在愈傷誘導期進行適量的暗培養(yǎng),有促進愈傷形成的作用。光照強度：范圍為1000 4000lx, 較多選擇1500 2000lx。4000 5000lx 的光照使試管苗的分化增殖倍數提高, 但對生根則相反。(3) 光質白色光一般能滿足生長需要。本實驗采用一般的日光燈。1.3 培養(yǎng)方法31、接種室的滅菌在實驗的前一天,將接種室用高錳酸鉀和甲醛熏蒸進行滅菌消毒。2、超凈工作臺及器械消毒啟動超凈工作臺,操作之前用 70 %的酒精擦臺面。將操作用刀、 鑷子、 剪子等用具在酒精燈下用火灼燒到變紅,冷卻待用。 3、培養(yǎng)基配制 基本培養(yǎng)基為MS由6種母液按比例配成，附加蔗糖3%，瓊脂0.8%叢生芽誘導培養(yǎng)基：MS + 6-BA （0.0、1.0 、2.0、 3.0 、4.0）mg/ L + NAA0.2mg/ L NAA（奈乙酸）的濃度0.2 mg/ L是根據李秋杰,陳春燕,張吉3等人的研究數據得出的，其中5種6-BA濃度不同的培養(yǎng)基各配20瓶。生根培養(yǎng)基：1/ 2MS + IBA 0.1 mg/ L IBA（吲哚丁酸）的濃度0.1 mg/ L得出依據同NAA。共配100瓶。培養(yǎng)基裝瓶滅菌：將已配好的培養(yǎng)基,調節(jié)pH值為5.8。趁熱分裝在培養(yǎng)瓶中(每瓶3550mL)并注明培養(yǎng)基的成分與作用 。用專用透性膜封好后放入高壓滅菌鍋中滅菌、待用。 4、材料選取 選取在脫毒實驗中成功移栽上盆而且長勢健壯的植株作為實驗材料,選取莖作為實驗材料。5、材料滅菌 選取生長健壯的嫩莖洗去表面泥土 ,在超凈工作臺 ,用 75 %酒精處理 2030 秒 ,再用無菌水沖洗 35 次 ,轉入 0.1 %升汞溶液浸泡 810 分鐘 ,再用無菌水沖洗 46 次 ,用濾紙吸干水分。6、接種（1） 在無菌條件下將其切成2厘米左右?guī)в幸秆康男《巍＃?） 用鑷子夾取切好的外植體材料,然后按極性方向直立迅速接種到錐形瓶的培養(yǎng)基中,深約 23 mm,注意培養(yǎng)瓶口始終在火焰下方,盡量使切口接觸培養(yǎng)基。（3） 每個錐形瓶可接種 3 塊外植體。（4） 接種時錐形瓶應保持傾斜,接種后要迅速將瓶口在酒精燈上轉動灼燒一遍進行消毒,然后迅速蓋上專用透性膜封好。（5） 最后在瓶壁上貼上標簽,注明接種材料的名稱、 編號和接種日期。（6） 接種完成后即轉入培養(yǎng)室進行初代培養(yǎng) ,培養(yǎng)溫度2228 ,光強10004000 Lx。7、愈傷組織及叢生芽誘導外植體接種到培養(yǎng)基上7天左右，莖段開始變粗，并在其切口周圍出現少量嫩綠色、質地緊密的愈傷組織，同時腋芽開始萌動展開。經過105天的培養(yǎng)后，腋芽伸長，并形成叢生芽，逐漸長成苗叢。此時記錄出芽瓶數并比較不同濃度6-BA下的出芽瓶數。8、根的誘導當叢生芽長成的小苗達23厘米時，將其切下轉入生根培養(yǎng)基，大約一周左右的培養(yǎng)，小苗開始生根。2 組織培養(yǎng)中出現的問題與處理（包括褐變、污染）2.1 褐變外植體的褐變是組織培養(yǎng)過程中的主要障礙。目前一般認為影響褐變的因素主要有外植體材料、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。為了防止褐變的發(fā)生，主要可以從外植體和培養(yǎng)條件、進行細胞篩選和材料的預處理、抑制劑或者吸附劑的加入等方面入手8-11。主要方法有：（1）在培養(yǎng)基中加入吸附劑可以抑制褐變。（2）組織培養(yǎng)過程中可以在培養(yǎng)基加入抗氧化劑和其他抑制劑來抑制外植體的酶促褐變。（3）在愈傷組織誘導中，接種前先用100 mg/ L Vc（L-抗壞血酸） 浸泡外植體1 h ,可有效地控制褐變現象。（4）褐變程度與外植體的傷害程度有關，在切取材料時，應盡量減小傷口面積，傷口剪切得盡可能平滑。我們采用方法（3）即在接種前先用100 mg/ L Vc 浸泡外植體1 h進行重新試驗。并記錄了2次實驗結果。2.2 污染污染一般分為真菌性污染和細菌性污染,其來源可分成3大類:材料帶菌,接種污染,培養(yǎng)過程感染。細菌污染主要由于材料內部的內生細菌不能被一般的表面消毒方法所清除，隨著材料帶入培養(yǎng)過程，從而引起組培中的污染，從污染狀態(tài)來看，是發(fā)生于植物材料周圍，一般會由培養(yǎng)基內向外延展，并且發(fā)生的時間也會比接觸性污染要長，接觸性的細菌一般在24天表現，內生菌則會超過4天，并且菌的種類也相對單一。而真菌污染主要有曲霉，毛霉，青霉，根霉等。根據研究資料12得出染菌的原因有接種室空氣中真菌含量高，超凈工作臺、操作所需的機械未消毒干凈，接種時操作人員的操作失誤等3結果與分析由于培養(yǎng)過程中出現異常情況，我們通過查閱資料解決后再次試驗，記錄統(tǒng)計后得出下表：表1：Vc對外植體褐變的影響培養(yǎng)基接種瓶數/瓶沒用Vc前褐變瓶數/瓶用了Vc后褐變瓶數/瓶MS+6-BA0.0mg/L+NAA0.2mg/L20114MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L2072MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L2062MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L2062MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L2051表2：不同濃度6-BA培養(yǎng)基對菊花出芽的影響培養(yǎng)基6-BA與NAA的濃度配比接種芽數/個出芽數目/個出芽率/%MS+6-BA0.0mg/L+NAA0.2mg/L020*358.27%MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L1：220*32643.33MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L1：120*33761.67MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L1.5:120*34371.67MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L2:120*35083.33表1表明：Vc對外植體的褐變有明顯的抑制作用，這與崔唐兵，郭勇，張長遠的研究結果10相符合。表2表明：在芽誘導后通過比較5種培養(yǎng)基出芽瓶數得出6-BA濃度為4.0 mg/L的培養(yǎng)基出芽瓶數為最多，出芽率高達80%多。并且得出4.0mg/L6-BA+0.2，mg/LNAA為最佳濃度配比，對菊花出芽的正效果最顯著。即6-BA與NAA的濃度配比越的，對芽的誘導效果越好，這一結論與高亦珂等13 和李辛雷等14 的研究結果一致。4小結與討論通過不同濃度6-BA對菊花芽誘導的影響試驗得出:在相同的環(huán)境條件和其余影響因素不變的情況下，不同濃度的6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)對菊花出芽都有著有益的影響，其中6-BA濃度為4.0 mg/L的培養(yǎng)基對菊花的出芽效果最佳,菊花的出芽數最多。即得出培養(yǎng)基中6-BA濃度在1.0-4.0 mg/L范圍內時，6-BA濃度與NNA濃度的配比越高，出芽數就越多，出芽效果就越好。但該試驗只是對5種不同濃度6-BA與一定濃度的NAA的配比進行試驗得出的結論,還存在片面性。菊花在什么條件下出芽數最多,還有待于進一步研究。參考文獻：1 熊濟華. 菊花M. 上海:科學技術出版社, 1998.2 王鳳祥, 王月娥, 王雅芳, 馬長春. 菊花的繁殖方法. 內蒙古農業(yè)科技,2007(3) : 1043 李秋杰,陳春燕,張吉. 6-BA 和NAA 對菊花葉片離體再生的影響. 長江大學學報(自科版) 農學卷2007 年9 月第4 卷第3 期4 建德鋒,趙文若,趙海鋒, 陳剛.菊花組織培養(yǎng)技術研究. 北方園藝,2007(9): 2002015 余義和,李桂榮,王新娟.菊花離體培養(yǎng)體系的優(yōu)化.陜西農業(yè)科學，2006（4）6 李力藝,侯志鋼.菊花組織培養(yǎng)技術研究.山西農業(yè)科學，2004，2：50-527 焦德志,李波,魏明麗,孫琦.菊花的快速繁殖.北方園藝，2007(6): 208-210 (2):1316.8高國訓.植物組織培養(yǎng)中的褐化問題J.植物生理學通訊,1999,35(6): 5019王東霞、李長杰.如何對抗植物組織褐變J.中國花卉盆景，2