基于全癌標(biāo)志物檢測評價細(xì)胞治療產(chǎn)品制備質(zhì)量安全及臨床應(yīng)用效果標(biāo)準(zhǔn)編制說明

基于全癌標(biāo)志物檢測評價細(xì)胞治療產(chǎn)品制備質(zhì)量安全及臨床應(yīng)用效果標(biāo)準(zhǔn)的起草說明食藥監(jiān)管科學(xué)的初衷2024年8月，中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會正式成立。專業(yè)委員會聯(lián)合高校及科研院所聚焦干細(xì)胞生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)的質(zhì)量安全問題。近半年來，基于應(yīng)用全癌標(biāo)志物TAGMe?DNA甲基化檢測，評價細(xì)胞質(zhì)量安全控制的標(biāo)準(zhǔn)研究；通過科學(xué)規(guī)范、可操作性強(qiáng)的TAGMe?DNA甲基化檢測標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控監(jiān)測評價體系，確保細(xì)胞產(chǎn)品的安全性和有效性。同時也探討全癌標(biāo)志物TAGMe?DNA甲基化檢測技術(shù)在食品、藥品、化妝品及植入性醫(yī)療器械致瘤性安全評價等領(lǐng)域的創(chuàng)新應(yīng)用，多家科研院所和細(xì)胞生產(chǎn)企業(yè)參與標(biāo)準(zhǔn)制定工作，取得了非常滿意的預(yù)期成果。細(xì)胞技術(shù)是健康中國戰(zhàn)略的重大驅(qū)動力；細(xì)胞質(zhì)量安全是細(xì)胞技術(shù)研發(fā)應(yīng)用的生命線；普惠人民大眾是細(xì)胞技術(shù)研發(fā)應(yīng)用的最終目的。中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會，旨在凝聚各方共識，共同促進(jìn)我國細(xì)胞科學(xué)與大健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展。帶領(lǐng)和指導(dǎo)細(xì)胞科研及生產(chǎn)機(jī)構(gòu)積極探索加快細(xì)胞科學(xué)新理論、新方法的應(yīng)用，尤其在細(xì)胞本身的質(zhì)量監(jiān)控、長期致瘤性風(fēng)險評估、臨床受試者選擇及臨床應(yīng)用有效性評估方面，搶占干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)新高地，不斷滿足人民群眾多層次、多樣化的健康需求，不斷增進(jìn)人民健康福祉。細(xì)胞與基因治療行業(yè)的需求人源細(xì)胞治療產(chǎn)品是醫(yī)藥發(fā)展史上最為復(fù)雜、亦是既有醫(yī)藥產(chǎn)品無法比擬的醫(yī)藥產(chǎn)品，其具有多樣性、異質(zhì)性、復(fù)雜性、變異性的特征，無論對研發(fā)與監(jiān)管均構(gòu)成了巨大挑戰(zhàn)。因此，細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制及安全問題就成為各種挑戰(zhàn)中最核心、最本質(zhì)的內(nèi)容。1.人源細(xì)胞治療產(chǎn)品及其長期安全性風(fēng)險人源細(xì)胞治療產(chǎn)品是指用于治療人的疾病，來源、體外操作和臨床試驗(yàn)過程符合倫理要求，按照藥品管理相關(guān)法規(guī)進(jìn)行研發(fā)、生產(chǎn)制備和注冊申報的人體來源的活細(xì)胞產(chǎn)品。包括起源于人的干細(xì)胞、免疫細(xì)胞及基因修飾細(xì)胞等。長時間的體外培養(yǎng)條件下可能會引導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（包括但不限于成瘤性、促/致瘤性等），生產(chǎn)制備的細(xì)胞產(chǎn)品中的細(xì)胞有發(fā)生細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的可能性，且目前現(xiàn)有的檢測方法難以及時排除和驗(yàn)證。人源細(xì)胞治療產(chǎn)品成瘤性/致瘤性風(fēng)險已經(jīng)成為質(zhì)量安全的重大隱患。干細(xì)胞產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險因素比如：=1\*GB3①干細(xì)胞復(fù)雜的制備工藝、長時間的細(xì)胞傳代和離體操作；=2\*GB3②干細(xì)胞產(chǎn)品中可能殘留未分化細(xì)胞、非預(yù)期分化細(xì)胞、惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞、基因突變；=3\*GB3③細(xì)胞培養(yǎng)過程中的遺傳和表觀遺傳變異/不穩(wěn)定性；=4\*GB3④基因修飾可能引入的高風(fēng)險基因元件以及基因/病毒載體插入所導(dǎo)致的致癌基因活化或抑癌基因失活等。為了控制上述風(fēng)險，應(yīng)進(jìn)行評估和控制干細(xì)胞產(chǎn)品的成瘤性/致瘤性。ESCs/iPSCs衍生細(xì)胞治療產(chǎn)品也可能因少量殘留的多能干細(xì)胞以及持續(xù)增殖的分化子代細(xì)胞，導(dǎo)致出現(xiàn)畸胎瘤、其他錯誤模式腫瘤或癌前病變等風(fēng)險。2.當(dāng)前，人源細(xì)胞治療產(chǎn)品的一般質(zhì)量控制檢測策略人源細(xì)胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制策略，是基于cGMP等原則的質(zhì)量保障體系和質(zhì)量評價體系構(gòu)成，包括物料質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝過程控制、中間樣品質(zhì)量檢驗(yàn)、終產(chǎn)品放行檢驗(yàn)以及留樣檢驗(yàn)等。如干細(xì)胞質(zhì)量評價體系包括基本生物學(xué)屬性、微生物學(xué)安全性、生物學(xué)安全性、及生物學(xué)有效性等質(zhì)量屬性，其中，基本生物學(xué)屬性包括細(xì)胞鑒別、活性及純度；微生物學(xué)安全性指與各類微生物（如細(xì)菌、真菌、病毒）及其代謝產(chǎn)物（如內(nèi)毒素）污染相關(guān)的安全性；生物安全性包括異常免疫反應(yīng)、成瘤性和/或促瘤性、異常分化及異位遷移等；生物學(xué)有效性包括分化潛能、免疫調(diào)控及組織再生功能。2024年4月，F(xiàn)DA向六款已上市的CAR-T療法發(fā)送安全標(biāo)簽變更函，要求其添加T細(xì)胞腫瘤風(fēng)險的黑框警告，并強(qiáng)調(diào)治療病人需進(jìn)行終生隨訪。可見，人源細(xì)胞治療產(chǎn)品成瘤性/致瘤性風(fēng)險評估及生產(chǎn)質(zhì)控，已經(jīng)成為制約細(xì)胞產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的難點(diǎn)、痛點(diǎn)與瓶頸因素。當(dāng)前，我國細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)化體系和監(jiān)管體系還不健全，尤其是缺乏連續(xù)性、統(tǒng)一性的安全和有效的品質(zhì)評價指標(biāo)；細(xì)胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化評價及檢測是制約細(xì)胞治療技術(shù)和產(chǎn)業(yè)健康穩(wěn)定與可持續(xù)發(fā)展的瓶頸。因此，建立針對不同的細(xì)胞治療產(chǎn)品、針對細(xì)胞生產(chǎn)及使用全生命周期的質(zhì)量質(zhì)控與成/致瘤性風(fēng)險評價，同時具有連續(xù)性、一致性、針對性檢測評價的金標(biāo)準(zhǔn)十分必要。三、全癌標(biāo)志物TAGMe?的技術(shù)突破與成熟1.“一對多”的檢測邏輯與傳統(tǒng)的泛癌標(biāo)志物（需多個標(biāo)志物組合檢測不同癌癥）不同，TAGMe?基于DNA甲基化的共性特征，通過單一標(biāo)志物即可覆蓋多種癌癥的檢測，實(shí)現(xiàn)“一對多”的篩查模式。例如，其在25+種腫瘤類型和13種樣本類型（如血液、尿液、宮頸刮片等）的臨床驗(yàn)證中，組織樣本符合率達(dá)90%。技術(shù)基礎(chǔ)：依托于文強(qiáng)教授團(tuán)隊(duì)開發(fā)的GPS（GuidePositioningSequencing）技術(shù)，覆蓋96%的基因組甲基化區(qū)域，解決了傳統(tǒng)全基因組甲基化測序（WGBS）比對率低的問題，并繪制了首個單堿基精度的全基因組甲基化圖譜。2.“全或無”的生物學(xué)特性TAGMe?僅在惡性腫瘤中呈現(xiàn)高甲基化，而在正常組織中無此特征。這種“全或無”的特性使其能精準(zhǔn)區(qū)分癌前病變和健康組織，甚至在病理形態(tài)學(xué)變化前即可捕捉腫瘤信號。例如，在宮頸癌的鱗狀上皮內(nèi)病變階段即可檢測到PCDHGB7等全癌標(biāo)志物的甲基化異常，將篩查提前至“前癌”階段。3.創(chuàng)新檢測平臺Me-qPCR于文強(qiáng)教授團(tuán)隊(duì)自主研發(fā)的Me-qPCR技術(shù)無需亞硫酸鹽處理，簡化了甲基化檢測流程，檢測時間縮短50%以上，且成本更低。該技術(shù)通過百分制量化甲基化水平（0-100分），支持結(jié)果分層（如陰性、弱陽性、強(qiáng)陽性），為臨床提供動態(tài)監(jiān)測依據(jù)。例如，尿路上皮癌檢測產(chǎn)品“滂奕清?”的敏感性達(dá)87.8%，特異性92.3%，優(yōu)于傳統(tǒng)膀胱鏡檢測。4.臨床應(yīng)用價值：覆蓋腫瘤全流程管理早期篩查：在宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等癌種中，TAGMe?的敏感性達(dá)80%-90%，特異性超82%，在宮頸癌中可達(dá)95.09%，顯著優(yōu)于HPV篩查的假陽性率。輔助診斷與療效監(jiān)測：例如，在膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測中，TAGMe?可較影像學(xué)提前3～15個月發(fā)現(xiàn)腫瘤進(jìn)展。手術(shù)切緣判定：通過檢測手術(shù)切緣樣本的甲基化水平（如胃癌中的SIX6標(biāo)志物），提供更精準(zhǔn)的腫瘤切除指導(dǎo)。5.全癌標(biāo)志物TAGMe?技術(shù)也已成熟并獲國際認(rèn)可目前已鑒定62個全癌標(biāo)志物（如HIST1H4F、PCDHGB7、SIX6等），進(jìn)一步豐富了檢測靶標(biāo)。隨著更多標(biāo)志物的開發(fā)與臨床驗(yàn)證，TAGMe?或?qū)⒊蔀榘┌Y早篩領(lǐng)域的“游戲規(guī)則改變者”。通過全癌標(biāo)志物TAGMe?及其配套技術(shù)，將癌癥篩查從“被動治療”轉(zhuǎn)向“主動預(yù)防”，尤其在高危人群早篩、術(shù)后監(jiān)測及基層醫(yī)療普及中展現(xiàn)獨(dú)特價值。其技術(shù)不僅填補(bǔ)了國內(nèi)甲基化檢測領(lǐng)域的空白，更以“中國原創(chuàng)”身份獲得國際認(rèn)可，為全球癌癥防控提供了新范式。TAGMe?相關(guān)產(chǎn)品已獲美國FDA“突破性醫(yī)療器械”認(rèn)定及歐盟CE認(rèn)證。四、致瘤性、成瘤性與促瘤性定義1.致瘤性（Oncogenicity）：指細(xì)胞裂解物中的化學(xué)物質(zhì)、病毒、病毒核酸或基因以及細(xì)胞成分接種動物后，導(dǎo)致被接種動物的正常細(xì)胞形成腫瘤的能力。即接種物（細(xì)胞和/或裂解物）促使正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤細(xì)胞的能力。評價場景：干細(xì)胞產(chǎn)品中殘留未分化細(xì)胞的風(fēng)險；免疫細(xì)胞（如CAR-T）基因編輯導(dǎo)致的插入突變風(fēng)險。檢測標(biāo)準(zhǔn)：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：NOD/SCID小鼠致瘤試驗(yàn)（金標(biāo)準(zhǔn)，但耗時6-12個月）。體外替代：TAGMe?甲基化檢測（PM值≥80提示高風(fēng)險）。2.成瘤性（Tumorigenicity）：指細(xì)胞接種動物后在注射部分和（或）轉(zhuǎn)移部位由接種細(xì)胞本身形成腫瘤的能力。即接種的細(xì)胞自身形成腫瘤的能力。核心機(jī)制：DNA甲基化異常（如PCDHGB7高甲基化）；基因突變（如KRAS、TP53突變）。檢測指標(biāo)：甲基化標(biāo)志物：TAGMe?評分（PM值）；突變分析：全外顯子測序（WES）。3.促瘤性（Tumor-PromotingActivity）：指細(xì)胞治療產(chǎn)品通過旁分泌、免疫抑制或物理接觸等方式間接促進(jìn)宿主已有腫瘤生長或轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。其核心機(jī)制是通過影響腫瘤微環(huán)境或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲來實(shí)現(xiàn)的。包括：分泌促瘤因子：如VEGF（血管生成）、IL-10（免疫抑制）、MMP9（轉(zhuǎn)移侵襲）。外泌體傳遞致癌信號：攜帶PD-L1、miRNA等調(diào)控微環(huán)境。機(jī)械巢效應(yīng)：與宿主腫瘤細(xì)胞直接接觸激活促增殖通路。傳統(tǒng)管控局限：依賴動物模型（耗時長、成本高）和有限因子檢測（如ELISA），難以全面評估動態(tài)風(fēng)險。4.