人自然殺傷細(xì)胞制劑制備及放行檢驗(yàn)規(guī)范

ICS07.080

CCSC04

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

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人自然殺傷細(xì)胞制劑制備及放行檢驗(yàn)規(guī)范

Specificationforpreparationandreleaseinspectionofhumannaturalkillercell

preparations

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

中國(guó)國(guó)際經(jīng)濟(jì)技術(shù)合作促進(jìn)會(huì)發(fā)布

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人自然殺傷細(xì)胞制劑制備及放行檢驗(yàn)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了人自然殺傷細(xì)胞的術(shù)語(yǔ)和定義、基本要求、制備過(guò)程、記錄、放行檢驗(yàn)以及質(zhì)量評(píng)價(jià)。

本文件適用于人自然殺傷細(xì)胞的制備與放行檢驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB/T37864生物樣本庫(kù)質(zhì)量和能力通用要求

GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范

GB50346生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范

GB50591潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范

3術(shù)語(yǔ)和定義、縮略語(yǔ)

術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1.1

人自然殺傷細(xì)胞humannaturalkillercells

人體組織分離的或干細(xì)胞分化或轉(zhuǎn)分化獲得的，具有非特異性殺傷、抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性、免疫調(diào)

節(jié)功能的固有淋巴細(xì)胞。

3.1.2

供者donor

提供用于細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)用細(xì)胞的個(gè)體。

3.1.3

樣本specimen

在特定時(shí)間從受試者或捐獻(xiàn)者中采集的器官、組織等標(biāo)本。

3.1.4

細(xì)胞活率cellviability

能夠增值、保持正常代謝活性的細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比。

3.1.5

臺(tái)盼藍(lán)trypanblue

細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性，檢測(cè)細(xì)胞是否存活。

注：活細(xì)胞因細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整會(huì)排斥臺(tái)盼藍(lán)，而喪失活性或者細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不完整的細(xì)胞則會(huì)被臺(tái)盼藍(lán)染成淡藍(lán)色。

3.1.6

放行檢驗(yàn)releasetesting

在細(xì)胞已完成質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)每種類(lèi)型的每批次細(xì)胞，在凍存入庫(kù)及出庫(kù)前所進(jìn)行的相對(duì)快

速和簡(jiǎn)化的檢驗(yàn)。

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縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件。

HAV：甲型肝炎病毒（HepatitisAVirus）

HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）

HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）

HIV：人類(lèi)免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）

HTLV：人類(lèi)嗜T細(xì)胞病毒(HumanThymicLeukemiaVirus)

EBV：人類(lèi)皰疹病毒（Epstein-barrVirus）

CMV：巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus）

4基本要求

場(chǎng)地與設(shè)施

4.1.1人自然殺傷細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)場(chǎng)地應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求，空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB

3095標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

4.1.2人自然殺傷細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室或廠房應(yīng)由具有潔凈實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)資質(zhì)的工程公司設(shè)計(jì)與建

造，并應(yīng)符合GB19489、GB50073、GB50346和GB50591的規(guī)定。建設(shè)完成后，各功能區(qū)域的潔凈級(jí)

別應(yīng)由專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)并出具合格證明。

4.1.3細(xì)胞制備功能區(qū)應(yīng)按人自然殺傷細(xì)胞制備工藝進(jìn)行各區(qū)域設(shè)計(jì)，符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》

和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求。制備機(jī)構(gòu)應(yīng)配備獨(dú)立質(zhì)量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，并符合

GB19489和GB50346的規(guī)定。

設(shè)備和耗材

4.2.1人自然殺傷細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)優(yōu)先選用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控

制及臨床前研究指導(dǎo)原則》的要求，并獲得國(guó)家資質(zhì)認(rèn)證的設(shè)備、儀器、耗材和試劑。

4.2.2人自然殺傷細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)設(shè)備、儀器、耗材和試劑供應(yīng)商進(jìn)行資質(zhì)審核認(rèn)證，要求供應(yīng)

商提供產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告和批次檢驗(yàn)報(bào)告，并對(duì)耗材及試劑進(jìn)行質(zhì)量抽檢，避免采購(gòu)質(zhì)量不合格的產(chǎn)品。

4.2.3人自然殺傷細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)設(shè)備和儀器正式使用前應(yīng)做安裝確認(rèn)(IQ)、運(yùn)行確認(rèn)（OQ）和性能

確認(rèn)(PQ)，并定期進(jìn)行第三方校準(zhǔn)，不得使用有安全隱患的儀器操作樣本及細(xì)胞制品。

4.2.4人自然殺傷細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)設(shè)備與儀器進(jìn)行編號(hào)建檔，并建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程(SOP)，確保使

用、運(yùn)行、保養(yǎng)、維修記錄完整可追溯，對(duì)于關(guān)鍵工藝相關(guān)設(shè)備參數(shù)應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，及時(shí)對(duì)狀態(tài)異常

的設(shè)備進(jìn)行校對(duì)和維修。

人員管理

4.3.1人自然殺傷細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)分別設(shè)立細(xì)胞制備負(fù)責(zé)人、質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人和質(zhì)量授權(quán)人崗位。由

法人授權(quán)任命，任職資質(zhì)應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)

原則》要求，定期接受崗位專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，制備技術(shù)負(fù)責(zé)人與質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人、質(zhì)量授權(quán)人不得相互兼任。

4.3.2人自然殺傷細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員應(yīng)具備的健康要求：HAV、HBV、HCV、HIV及梅毒的抗體檢

測(cè)應(yīng)為陰性，并且(矯正)視力正常，無(wú)色盲、色弱。

4.3.3人自然殺傷細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員應(yīng)半年接受體檢一次，有呼吸道感染或發(fā)熱等疾病狀態(tài)下

不得進(jìn)入潔凈操作區(qū)，需完全康復(fù)后方可恢復(fù)崗位操作。

4.3.4人自然殺傷細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員上崗前應(yīng)經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，內(nèi)容包括但不限于干細(xì)胞理論與

實(shí)踐、生命倫理、干細(xì)胞法律法規(guī)、GMP管理、GCP資質(zhì)、制劑基本知識(shí)、細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)、生物安全、

儀器設(shè)備使用與維護(hù)方法、物料管理與清潔衛(wèi)生、崗位職責(zé)、操作規(guī)范等內(nèi)容。

5制備過(guò)程

樣本采集

5.1.1基本原則

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5.1.1.1樣本采集與處理應(yīng)符合GB/T37864的要求。

5.1.1.2采集和處理程序可供樣本采集人員使用。

5.1.1.3應(yīng)具備相關(guān)的資質(zhì)和設(shè)施環(huán)境。

5.1.1.4應(yīng)通過(guò)倫理審查批準(zhǔn)并履行知情同意程序。

5.1.1.5應(yīng)建立適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量管理體系確保符合用戶(hù)需求并持續(xù)改進(jìn)。

5.1.2供者健康

5.1.2.1樣本采集制備方應(yīng)對(duì)供者的基本信息與健康信息進(jìn)行詳細(xì)采集與記錄，同時(shí)做好對(duì)供者的隱

私保護(hù)，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。

5.1.2.2供者應(yīng)無(wú)血液系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤史、性傳播疾病及高危人群史、吸毒史，

不應(yīng)具有包括但不限于以下疾病或健康狀況：

a)一般傳染性疾病或其他遺傳疾?。篐IV、HBV、HCV、梅毒、HTLV、EBV與CMV抗體與核酸檢測(cè)

應(yīng)為陰性；

b)傳染性皮膚病(未治愈的)；

c)大面積皮膚損傷(未治愈的)；

d)鼻/咽喉傳染病(未治愈的)。

e)采集前12個(gè)小時(shí)內(nèi)用過(guò)酒精，鎮(zhèn)靜藥等。

5.1.3采集場(chǎng)所及人員

采集場(chǎng)所應(yīng)達(dá)到Ⅲ級(jí)潔凈手術(shù)室要求。采集人員應(yīng)具有醫(yī)師職業(yè)證，且經(jīng)過(guò)相應(yīng)的技術(shù)培訓(xùn)。

5.1.4采集過(guò)程

由醫(yī)師抽取人自然殺傷細(xì)胞組織，置于無(wú)菌采集瓶中，密封保存，并粘貼條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。

樣本運(yùn)輸

5.2.1運(yùn)輸人員應(yīng)是經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)合格的人員，對(duì)樣本運(yùn)輸應(yīng)制定規(guī)范及應(yīng)急預(yù)案，并對(duì)樣本運(yùn)輸全

程做記錄，包括但不限于運(yùn)輸?shù)姆绞?、條件、路徑、時(shí)間、人員、地址及樣本信息，相關(guān)記錄入檔保留

至少30年。

5.2.2樣本運(yùn)輸應(yīng)采用平穩(wěn)、安全、快速的運(yùn)輸途徑，宜采用冷藏運(yùn)輸車(chē)或?qū)Ｓ脴?biāo)本冷藏運(yùn)輸箱運(yùn)輸。

5.2.3運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)防滲漏、防輻射、抗震動(dòng)、耐壓、耐熱等，樣本包裝應(yīng)貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。

5.2.4樣本運(yùn)輸溫度應(yīng)維持在2℃～8℃，運(yùn)輸時(shí)間不超過(guò)12小時(shí)。

樣本接收

5.3.1樣本接收人員應(yīng)是經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)合格的人，應(yīng)遵從安全與準(zhǔn)確的原則對(duì)樣本接收制定規(guī)范及應(yīng)

急預(yù)案，并對(duì)樣本接收過(guò)程進(jìn)行記錄，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。

5.3.2樣本接收時(shí)，接收人員應(yīng)做好自我防護(hù)工作，接觸樣本之前應(yīng)佩戴手套與口罩，并對(duì)接收?qǐng)鏊?/p>

進(jìn)行消毒。

5.3.3接收樣本后應(yīng)先觀察樣本容器外包裝的外觀，檢查有無(wú)破損。

5.3.4檢查外觀后，工作人員應(yīng)檢查樣本采集信息記錄表是否齊全，同時(shí)確認(rèn)記錄表上信息是否填寫(xiě)

完整，檢查信息記錄表信息是否與樣本信息一一對(duì)應(yīng)，樣本及記錄表上應(yīng)貼有一致對(duì)應(yīng)的條形碼，做到

樣本與供者信息相對(duì)應(yīng)，確認(rèn)無(wú)誤后進(jìn)行接收。

5.3.5樣本接收后，使用75%醫(yī)用酒精消毒清理容器外表面，如不能及時(shí)對(duì)樣本進(jìn)行處理，需把樣本

保存在2℃～8℃條件下，最長(zhǎng)時(shí)間不超過(guò)12小時(shí)。

5.3.6樣本量應(yīng)能夠滿(mǎn)足制備和檢測(cè)的最低要求。

5.3.7樣本接收后應(yīng)及時(shí)將信息反饋給樣本發(fā)送方。

5.3.8細(xì)胞制備方應(yīng)制定樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)，按照樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)處理樣本，并及時(shí)通知有關(guān)部門(mén)或負(fù)責(zé)人，

同時(shí)做好相應(yīng)記錄。

分離與培養(yǎng)

5.4.1人自然殺傷細(xì)胞分離與培養(yǎng)應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨慶

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前研究指導(dǎo)原則》要求的車(chē)間內(nèi)進(jìn)行。

5.4.2所有操作應(yīng)事先制定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，由經(jīng)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的技術(shù)人員嚴(yán)格遵照?qǐng)?zhí)行，并進(jìn)行記錄登記，相

關(guān)記錄入檔保留至少30年。

5.4.3分離與培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)標(biāo)識(shí)干細(xì)胞的名稱(chēng)、代次、批次、操作日期、培養(yǎng)條件、操作人員姓名等

信息。

5.4.4所使用試劑應(yīng)采用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》、《中華人民共和國(guó)藥典》和《干細(xì)胞制劑

質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求的藥品輔料或已獲批的藥品，應(yīng)出具產(chǎn)品質(zhì)檢合格報(bào)告，并對(duì)各

批次試劑進(jìn)行質(zhì)量抽檢。

5.4.5應(yīng)避免人源或動(dòng)物源性血清及蛋白，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，

應(yīng)確保其無(wú)特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來(lái)源的牛血清。

細(xì)胞換液

5.5.1人自然殺傷細(xì)胞換液操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨

床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。

5.5.2換液時(shí)間及頻次應(yīng)根據(jù)人自然殺傷細(xì)胞生長(zhǎng)情況及培養(yǎng)基狀態(tài)進(jìn)行判斷，以保障細(xì)胞生長(zhǎng)所需

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水平，并消除代謝物毒害作用。

5.5.3換液操作時(shí)吸棄培養(yǎng)瓶中原有的部分或全部培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液。首次換液需要在鏡下

觀察到原代細(xì)胞完全貼壁和延展后方可進(jìn)行。

5.5.4培養(yǎng)基成分應(yīng)符合人自然殺傷細(xì)胞分離與培養(yǎng)基本要求，盡量采用已獲國(guó)家批準(zhǔn)的臨床級(jí)產(chǎn)品

或藥品輔料。

細(xì)胞傳代

5.6.1人自然殺傷細(xì)胞傳代操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨

床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。

5.6.2人自然殺傷細(xì)胞一般情況在達(dá)到80%～90%融合度可講行傳代操作，傳代操作應(yīng)密度適宜、及時(shí)，

迅速。

5.6.3傳代所使用消化酶應(yīng)符合人自然殺傷細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的臨床

級(jí)產(chǎn)品。如必須使用動(dòng)物源性消化酶，應(yīng)確保其無(wú)特定動(dòng)物源性病毒污染。

細(xì)胞凍存

5.7.1人自然殺傷細(xì)胞凍存操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨

床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。

5.7.2經(jīng)制備數(shù)量達(dá)到凍存要求的人自然殺傷細(xì)胞系可進(jìn)行凍存操作，凍存細(xì)胞應(yīng)加入適當(dāng)?shù)膬龃姹?/p>

護(hù)液，遵循程序降溫原則，并在液氮中進(jìn)行保存。

5.7.3凍存液成分應(yīng)符合人自然殺傷細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的臨床級(jí)產(chǎn)品

或藥品輔料，二甲基亞砜含量不得超過(guò)10%，如必須使用動(dòng)物源性血清，應(yīng)確保其無(wú)特定動(dòng)物源性病

毒污染，嚴(yán)禁使用海綿狀腦病流行區(qū)來(lái)源的牛血清。

5.7.4凍存細(xì)胞應(yīng)標(biāo)明干細(xì)胞名稱(chēng)、培養(yǎng)條件、代次、批次、操作人員、凍存日期等信息，并具有唯

一標(biāo)識(shí)。

5.7.5液氮凍存應(yīng)使用符合要求的液氮容器，氣相凍存，由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，保證液氮充足，溫度恒定。

穩(wěn)定性考察

5.8.1細(xì)胞庫(kù)應(yīng)依據(jù)儲(chǔ)存的干細(xì)胞產(chǎn)品的特性，制定年度的儲(chǔ)存細(xì)胞質(zhì)量穩(wěn)定性考察方案和計(jì)劃，并

制定穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.8.2穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)包括但不限于以下內(nèi)容：

a)凍存容器完整性和密閉性；

b)細(xì)胞活率；

c)微生物培養(yǎng)；

d)細(xì)胞凍存復(fù)蘇回收率；

e)細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)；

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f)細(xì)胞生物學(xué)效力。

5.8.3人自然殺傷細(xì)胞干細(xì)胞在凍存后1周復(fù)蘇存活率不應(yīng)低于80%，1年復(fù)蘇存活率不應(yīng)低于60%。

5.8.4常規(guī)每年至少執(zhí)行一次穩(wěn)定性考察計(jì)劃，如遇特殊情況（例如液相液氮罐故障）可臨時(shí)性增加

穩(wěn)定性考察計(jì)劃。

5.8.5應(yīng)對(duì)年度性的穩(wěn)定性考察結(jié)果進(jìn)行趨勢(shì)分析，便于監(jiān)測(cè)細(xì)胞儲(chǔ)存的連續(xù)穩(wěn)定性并改進(jìn)細(xì)胞儲(chǔ)存

工藝。

6記錄

原始記錄應(yīng)確保其可追溯細(xì)胞分離、處理和儲(chǔ)存操作所有環(huán)節(jié)，記錄內(nèi)容包含但不限于以下信息：

a)供者身份號(hào)碼；

b)產(chǎn)品描述碼、采集類(lèi)型和分類(lèi)碼；

c)產(chǎn)品名稱(chēng)和組分；

d)供者唯一身份辨識(shí)符，如果適用；

e)采集日期和時(shí)間；

f)生產(chǎn)制備機(jī)構(gòu)的名稱(chēng)和地址；

g)制備、保存、凍存中關(guān)鍵步驟的細(xì)節(jié)及結(jié)果；

h)關(guān)鍵步驟的日期和時(shí)間，如果適用；

i)每一步驟的操作人員姓名；

j)在分離、處理、凍存、儲(chǔ)存過(guò)程中使用的關(guān)鍵物料的名稱(chēng)、生產(chǎn)商、批號(hào)、有效期限；

k)使用試劑的數(shù)量；

l)使用設(shè)備編碼。

記錄的審核：應(yīng)對(duì)記錄的準(zhǔn)確性和完整性以及標(biāo)準(zhǔn)、法律法規(guī)的符合性進(jìn)行審核。

記錄的保存：記錄應(yīng)歸檔于受控區(qū)域進(jìn)行保存，確保整個(gè)保存期間記錄的清晰和完整性，并應(yīng)避

免意外或非授權(quán)的調(diào)閱、丟失、損壞、破壞、混淆或篡改。

記錄的修改：機(jī)構(gòu)應(yīng)建立并保持合適的記錄修改程序。記錄修改人的簽名及日期應(yīng)記錄下來(lái)；修

改前的記錄內(nèi)容應(yīng)清晰可辨認(rèn)。

隱私保護(hù)：應(yīng)建立保密機(jī)制，確保供者、員工信息的保密性。

記錄保存期限：文件記錄是要保存至細(xì)胞應(yīng)用或處理后20年。

7放行檢驗(yàn)

一般要求

每一批次人自然殺傷細(xì)胞制劑在臨床使用前應(yīng)在完成例行質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，由臨床研究機(jī)構(gòu)質(zhì)

檢平臺(tái)進(jìn)行快速和簡(jiǎn)化的質(zhì)量檢測(cè)，應(yīng)包括但不限于活率、細(xì)胞表型、細(xì)菌、病毒、支原體和內(nèi)毒素含

量等，確認(rèn)細(xì)胞合格后方可申請(qǐng)臨床放行使用。相關(guān)記錄報(bào)告應(yīng)入檔保存至少30年。

檢驗(yàn)內(nèi)容

7.2.1人自然殺傷細(xì)胞安全性

7.2.1.1無(wú)菌檢測(cè)

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則1101無(wú)菌檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)人自然殺傷細(xì)胞樣本采集、

運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液等）

檢測(cè)。細(xì)菌和真菌檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)為陰性。

7.2.1.2支原體檢測(cè)

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則3301支原體檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)人自然殺傷細(xì)胞樣本采

集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液

等）檢測(cè)。支原體檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)為陰性。

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T/XXXXXXX—XXXX

7.2.1.3細(xì)胞內(nèi)外源致病因子檢測(cè)

采用血清ELISA檢測(cè)法或核酸檢測(cè)法，對(duì)人自然殺傷細(xì)胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)

蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液、細(xì)胞等）檢測(cè)。HIV抗體、HBsAg、

HCV抗體、TP抗體、CMV-IgM、HTLV抗體、HPV抗體、HHV抗體、EBV抗體檢測(cè)應(yīng)為陰性；HCV、HBV、HIV病

毒核酸檢測(cè)應(yīng)為陰性。

7.2.1.4內(nèi)毒素檢測(cè)

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)人自然殺傷細(xì)胞樣

本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍

存液等）檢測(cè)。各類(lèi)樣本中的內(nèi)毒素檢測(cè)值應(yīng)≤0.5EU/mL。

7.2.1.5異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)

采用流式細(xì)胞術(shù)以及ELISA技術(shù)測(cè)定人自然殺傷細(xì)胞對(duì)于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對(duì)不同淋

巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響，以及對(duì)淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子分泌的影響。淋巴細(xì)胞亞群應(yīng)無(wú)異常增殖，

細(xì)胞因子表達(dá)水平應(yīng)無(wú)異常增加。

7.2.1.6致瘤性檢測(cè)

采用免疫缺陷動(dòng)物（裸鼠或SCID鼠），通過(guò)局部或靜脈方式接種人自然殺傷細(xì)胞，評(píng)價(jià)人自然殺傷

細(xì)胞致瘤性。體內(nèi)致瘤試驗(yàn)嚴(yán)格遵照動(dòng)物倫理要求執(zhí)行，單只小鼠接種人自然殺傷細(xì)胞數(shù)量≥106細(xì)胞

/kg，觀察期≥12周。人自然殺傷細(xì)胞應(yīng)無(wú)致瘤性。

7.2.2人自然殺傷細(xì)胞穩(wěn)定性

7.2.2.1細(xì)胞數(shù)量和活率檢測(cè)

選用血球細(xì)胞計(jì)數(shù)板或細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，將待檢測(cè)細(xì)胞使用臺(tái)盼藍(lán)或A0/PI熒光染料染

色，讀取細(xì)胞數(shù)并計(jì)算活率。各代數(shù)及批次人自然殺傷細(xì)胞活細(xì)胞比例≥90%。

7.2.2.2生長(zhǎng)活性檢測(cè)

通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞倍增時(shí)間、細(xì)胞周期、克隆形成率以及端粒酶活性對(duì)人自然殺傷細(xì)胞生長(zhǎng)活性進(jìn)行測(cè)

定，各代數(shù)及批次人自然殺傷細(xì)胞應(yīng)處于指數(shù)生長(zhǎng)期，GO期細(xì)胞數(shù)≤10%，具有端粒酶活性。

7.2.2.3細(xì)胞純度和均一性檢測(cè)

采用人自然殺傷細(xì)胞標(biāo)志物流式檢測(cè)以及人基因組DNA短片段重復(fù)序列(STR)測(cè)序進(jìn)行檢定。各代

數(shù)及批次人自然殺傷細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)應(yīng)符合流式檢測(cè)比例要求，單一細(xì)胞系的人自然殺傷細(xì)胞各

代次及批次細(xì)胞STR檢測(cè)結(jié)果應(yīng)保持一致。

7.2.3人自然殺傷細(xì)胞生物學(xué)特征

7.2.3.1細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)

體外二維懸浮培養(yǎng)條件中，靜息狀態(tài)下呈不規(guī)則形懸浮生長(zhǎng)；激活后形態(tài)變大變長(zhǎng)，用倒置顯微鏡

進(jìn)行觀察。

7.2.3.2細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè)

采用《中華人民共和國(guó)藥典(2020年版)》通則3429中流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測(cè)定。

7.2.3.3染色體核型檢測(cè)

按照《中華人民共和國(guó)藥典(2020年版)》檢驗(yàn)。

8質(zhì)量評(píng)價(jià)

質(zhì)量評(píng)價(jià)內(nèi)容

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T/XXXXXXX—XXXX

8.1.1供者健康篩查結(jié)果應(yīng)符合合格供者要求并簽署了知情同意書(shū)。

8.1.2人自然殺傷細(xì)胞及檢測(cè)標(biāo)本的采集和運(yùn)輸符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

8.1.3人自然殺傷細(xì)胞及檢測(cè)標(biāo)本的接收、標(biāo)識(shí)以及暫存符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

8.1.4細(xì)胞分離、處理、檢測(cè)區(qū)域應(yīng)滿(mǎn)足操作要求，有潔凈要求的操作環(huán)境應(yīng)滿(mǎn)足相應(yīng)級(jí)別環(huán)境要求，

應(yīng)有定期環(huán)境監(jiān)控；細(xì)胞分離、處理各工序完畢后均應(yīng)及時(shí)清場(chǎng)；現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)無(wú)污染及交叉污染，如有傳染

病原體或污染物，應(yīng)得到有效隔離或清除。

8.1.5細(xì)胞在分離、處理及檢測(cè)等過(guò)程中所涉及的人員均已通過(guò)考核合格后上崗。

8.1.6細(xì)胞分離、處理、檢測(cè)等所使用的設(shè)備應(yīng)符合設(shè)備管理要求（標(biāo)識(shí)清晰正確，在合格計(jì)量校驗(yàn)

期內(nèi)定期維護(hù)保養(yǎng)等）；與細(xì)胞接觸的器械應(yīng)經(jīng)消毒滅菌并在有效期內(nèi)。

8.1.7細(xì)胞制備、檢測(cè)所用物料應(yīng)經(jīng)確認(rèn)來(lái)自合格供應(yīng)商，關(guān)鍵物料均應(yīng)經(jīng)抽樣檢測(cè)并確認(rèn)其質(zhì)量合

格。試劑及耗材的有效期應(yīng)在規(guī)定期限內(nèi)，批號(hào)應(yīng)按照要求記錄下來(lái)以便具有可追溯