乙肝定量檢測(cè)意義及新型檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展課件

發(fā)光乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)意義發(fā)光乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)意義主要內(nèi)容一、乙肝病毒病原學(xué)、流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)二、乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)意義三、乙肝五項(xiàng)常見(jiàn)檢測(cè)模式解釋主要內(nèi)容一、乙肝病毒病原學(xué)、流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)一、乙肝病毒的病原學(xué)

及流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)

1.1乙肝病毒的流行現(xiàn)狀；1.2乙肝病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)；1.3乙肝的傳播途徑和高危人群；一、乙肝病毒的病原學(xué)

及流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)

1.1乙1.1乙肝病毒的流行現(xiàn)狀1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概況1.1.2我國(guó)HBV感染流行現(xiàn)狀1.1.3乙肝亞型的地理分布1.1乙肝病毒的流行現(xiàn)狀1.1.1全世界乙肝病毒感染的流1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行現(xiàn)狀1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行現(xiàn)狀1.1.2我國(guó)HBV感染流行現(xiàn)狀我國(guó)是HBV感染的高流行區(qū)。我國(guó)HBV感染率概況為：抗HBc及／或抗HBs陽(yáng)性：60％非感染人群：26％慢性乙型肝炎：2％表面抗原陽(yáng)性的慢性無(wú)癥狀HBV攜帶者：10％表面抗原陰性的慢性無(wú)癥狀HBV攜帶者：2％資料來(lái)源：駱抗先，《乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床》第二版1.1.2我國(guó)HBV感染流行現(xiàn)狀我國(guó)是HBV感染的高流行區(qū)。1.1.3乙肝亞型的地理分布ayw多見(jiàn)于非洲、東地中海、中東及巴基斯坦；adw多見(jiàn)于北歐及美洲；adr多見(jiàn)于東南亞及遠(yuǎn)東，adw及adr多見(jiàn)于印尼、馬來(lái)西亞、新幾內(nèi)亞及泰國(guó)

我國(guó)則具有一定的民族性，漢族人以adr為主，adw次之蒙古族、維吾爾族、回族等兄弟民族幾乎都是ayw亞型，ayr亞型極其少見(jiàn)，而adr亞型幾乎沒(méi)有。

1.1.3乙肝亞型的地理分布ayw多見(jiàn)于非洲、東地中海、中東1.2乙肝病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)1.2.1HBV的基本（電鏡）結(jié)構(gòu)1.2.2HBV的基因結(jié)構(gòu)1.2乙肝病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)1.2.1HBV的基本（電鏡1.2.1HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)大球形顆粒（Dane顆粒）管形顆粒小球形顆粒1.2.1HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)大球形顆粒（Dane顆粒）管形顆粒小Dane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖HBsAgHBcAgDNAP（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）HBVDNADane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖HBsAgHBcAgDNAP（外Dane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖Dane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖1.2.2HBV基因結(jié)構(gòu)pre-s1pre-s2SPCpre-cXHBVDNA3.2kbpre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAgHBsAgpre-S2pre-S11.2.2HBV基因結(jié)構(gòu)pre-s1pre-s2SPCpr1.3傳播途徑及高危人群血液傳播、（輸血、血制品、醫(yī)療器械等）

日常生活（傷口、共用刀具、消化道粘膜破損或潰瘍等）

母嬰傳播性傳播1.3.1乙肝病毒的傳播途徑1.3傳播途徑及高危人群血液傳播、1.3.2高危人群母親是HBV感染者的嬰兒乙肝患者的家庭成員吸毒者監(jiān)獄犯人性傳播疾病病人血液透析病人醫(yī)護(hù)人員1.3.2高危人群母親是HBV感染者的嬰兒1.4疾病診斷的臨床意義及常見(jiàn)模式分析1.4.1HBV血清標(biāo)志物及其臨床意義1.4.2介紹幾個(gè)臨床乙肝檢測(cè)的概念1.4.3臨床常見(jiàn)乙肝血清標(biāo)志物反映模式1.4疾病診斷的臨床意義及常見(jiàn)模式分析1.4.1HBV血清1.4.1HBV血清標(biāo)志物及其臨床意義肝功能(主要為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)乙肝病毒感染標(biāo)志物※HBV-DNA※兩對(duì)半:

抗原抗體外膜——————HBsAgHBsAb

核殼分泌蛋白——HBeAgHBeAb

核殼結(jié)構(gòu)蛋白——HBcAgHBcAb

肝組織病理學(xué)檢查1.4.1HBV血清標(biāo)志物及其臨床意義肝功能(主要為丙氨酸ALT的意義谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）主要存在于肝細(xì)胞中。當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥、壞死時(shí)，ALT就會(huì)從肝細(xì)胞內(nèi)大量釋放入血，導(dǎo)致血清中ALT升高，因此ALT升高是判斷肝細(xì)胞損害的一個(gè)敏感指標(biāo)。但是除了病毒性肝炎外，其它類型的肝炎或肝臟疾病，ALT也會(huì)升高。ALT的意義谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）主要存在于肝細(xì)胞中。當(dāng)肝臟發(fā)HBV-DNA的意義DNA是基因，因此HBV-DNA是HBV的遺傳物質(zhì)，當(dāng)HBV侵入肝細(xì)胞后，就會(huì)以HBV-DNA為模板，合成新的HBV顆粒并釋放入血，故HBV-DNA是病毒復(fù)制的一個(gè)重要指標(biāo)。HBV-DNA的意義DNA是基因，因此HBV-DNA肝組織病理學(xué)檢查肝組織病理學(xué)檢查是“金標(biāo)準(zhǔn)”：明確診斷衡量肝臟炎癥活動(dòng)度衡量纖維化程度決定治療方案，預(yù)測(cè)藥物療效對(duì)肝病而言肝組織學(xué)檢查是比血清ALT

更靈敏而精確的指標(biāo)肝組織病理學(xué)檢查肝組織病理學(xué)檢查是“金標(biāo)準(zhǔn)”：乙肝病毒感染血清標(biāo)志物

抗原抗體（機(jī)體產(chǎn)生）外膜HBsAgHBsAb核殼分泌蛋白HBeAg

HBeAb核殼結(jié)構(gòu)蛋白HBcAgHBcAbDNAHBV-DNA乙肝病毒感染血清標(biāo)志物（1）HBsAg●出現(xiàn)時(shí)間：HBV感染后2～6個(gè)月（潛伏期）●持續(xù)時(shí)間：急性自限性肝炎：6個(gè)月內(nèi)可消失慢性肝炎或慢性HBsAg攜帶者：可持續(xù)陽(yáng)性曾用名：HA、澳抗（1）HBsAg●出現(xiàn)時(shí)間：HBV感染后2～6個(gè)月（潛伏期）●HBsAg有抗原性而無(wú)傳染性HBVS基因整合肝細(xì)胞DNA持續(xù)表達(dá)“空心湯團(tuán)”HBsAg●HBsAg的亞型adradwayrayw長(zhǎng)江以北長(zhǎng)江以南新疆、西藏、內(nèi)蒙等●HBsAg有抗原性而無(wú)傳染性HBVS基因整合肝細(xì)胞持續(xù)（2）抗-HBs●出現(xiàn)時(shí)間：急性感染后期、HBsAg消失后和注射疫苗后正常的免疫應(yīng)答者●抗-HBs為保護(hù)性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標(biāo)志著HBV感染進(jìn)入恢復(fù)期和注射乙肝疫苗后產(chǎn)生正常的免疫應(yīng)答●抗-HBs對(duì)相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對(duì)不同亞型的HBV保護(hù)力不完全。（2）抗-HBs●出現(xiàn)時(shí)間：急性感染后期、HBsAg消失后（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物HBVC基因前C區(qū)C區(qū)前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達(dá)切割、加工分泌到細(xì)胞外HBeAg只存在于血清中（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物HBVC基●HBeAg是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志血清HBeAg與HBVDNA的含量成正相關(guān)，符合率達(dá)到95%以上?！馠BeAg是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志血清HBeAg與HBV（4）抗-HBe●出現(xiàn)時(shí)間：隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)●抗-HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低抗-HBe陽(yáng)性者中，16.3%～30%左右HBVDNA仍陽(yáng)性可能與前C基因變異有關(guān)

易加重病情、易演變?yōu)楦斡不?干擾素療效亦較差（4）抗-HBe●出現(xiàn)時(shí)間：隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)●抗-（5）抗-HBc●HBcAg主要存在于HBV感染的肝細(xì)胞內(nèi)或DANE顆粒核心中，到血液中即被降解為HBeAg。一般血清學(xué)方法檢測(cè)不到HBcAg，而只能檢測(cè)到抗-HBc抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動(dòng)的標(biāo)志抗HBc-IgG：凡“有過(guò)”HBV感染者均可陽(yáng)性HBcAg的免疫原性最強(qiáng)持續(xù)時(shí)間：6～18個(gè)月可終身陽(yáng)性（5）抗-HBc●HBcAg主要存在于HBV感染的肝細(xì)胞內(nèi)或常規(guī)檢測(cè)的HBV血清標(biāo)志物的基本解釋HBsAgHBV感染，但未必是急性肝炎或者慢性病變活動(dòng)的病原。抗HBs感染后免疫；對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答；或HBIG的被動(dòng)免疫HBeAg反映HBV復(fù)制，有病毒血癥，血液高傳染性抗HBeALT持續(xù)正常者表示HBV低復(fù)制或不復(fù)制，HBsAg(+)血液低傳染性。

ALT波動(dòng)者表示病毒變異。抗HBc低滴度表示過(guò)去感染；高滴度表示現(xiàn)行感染。IgM抗HBc高滴度表示急性或近期感染；活動(dòng)性病變可出現(xiàn)低滴度。來(lái)源：駱抗先，乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床，第二版常規(guī)檢測(cè)的HBV血清標(biāo)志物的基本解釋HBsAgH1.4.2介紹幾個(gè)概念：①“兩對(duì)半”HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb②血清抗原—抗體轉(zhuǎn)換率：HBeAg

抗-HBe③“轉(zhuǎn)陰”常用指標(biāo)：血清HBeAg抗原—抗體轉(zhuǎn)換率

HBVDNA陰轉(zhuǎn)率1.4.2介紹幾個(gè)概念：①“兩對(duì)半”HBsAg、HBsA二、乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)的應(yīng)用急性乙肝治療中的具體監(jiān)測(cè)慢性無(wú)癥狀攜帶者（AsC）的動(dòng)態(tài)觀察酶免或膠體金檢測(cè)HBsAg（-）的HBV感染的結(jié)果分析注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs濃度的定量分析）結(jié)合FQ-PCR-DNA診斷病情二、乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)的應(yīng)用急性乙肝治療中的具體監(jiān)測(cè)乙肝定量檢測(cè)意義及新型檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展課件乙肝定量檢測(cè)意義及新型檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展課件乙肝定量檢測(cè)意義及新型檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展課件HBVDNAHBcAbHBsAgHBeAgHBeAbHBsAbHBVDNAHBcAbHBsAgHBeAgHBeAbHBs化學(xué)發(fā)光定量（CLIA）檢測(cè)HBsAg靈敏度可達(dá)0.05-0.1ng/ml，而酶標(biāo)（ELISA）檢測(cè)HBsAg靈敏度是0.5-1.0ng/ml，膠體金（POCT）檢測(cè)HBsAg靈敏度是1-5ng/ml也就是說(shuō)只有血清中的HBsAg達(dá)到0.5-5ng/ml酶標(biāo)或膠體金才會(huì)呈陽(yáng)性反應(yīng)?！黾毙砸腋卧缙冢篊LIA定量能及早檢出HBsAg，確證HBV感染，幾乎能與preS1同時(shí)檢測(cè)，在病程觀察中大大縮短“窗口期”時(shí)間，而酶標(biāo)或膠體金在乙肝早期檢測(cè)往往HBsAg呈陰性?！雎砸腋危阂恍┗颊哂捎跈C(jī)體對(duì)HBV包膜蛋白(HBsAg)表達(dá)較低，酶標(biāo)或膠體金檢測(cè)可出現(xiàn)HBsAg和抗-HBs均陰性的情況，而CLIA技術(shù)則可避免這些情況的出現(xiàn)，為正確判斷病情提供依據(jù)?！霾《景l(fā)生變異后，表達(dá)量較低，常規(guī)ELISA或膠體金測(cè)不出抗原，而CLIA定量具有極高的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)并極有可能同時(shí)檢測(cè)出HBsAg和抗-HBs。化學(xué)發(fā)光定量（CLIA）檢測(cè)HBsAg靈敏度可達(dá)0.05-0注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs濃度的定量分析）：全程（3針）免疫結(jié)束后1個(gè)月檢測(cè)保護(hù)性抗-HBs的濃度，據(jù)此值將乙肝疫苗接種者分為四種情況：（1）無(wú)應(yīng)答者：抗體濃度小于1mIU/ml，無(wú)抗體產(chǎn)生或非特異性結(jié)合反應(yīng)，約占接種者的5%，繼續(xù)加大劑量或更換疫苗廠家全程（3針）免疫注射；（2）低應(yīng)答者：抗體濃度為1-10mIU/ml，保護(hù)作用比較弱，約占接種者的10%，須加強(qiáng)兩針疫苗注射；（3）中應(yīng)答者：抗體濃度為10-100mIU/ml，已有一定的保護(hù)力，約占接種者65%，須加強(qiáng)一針疫苗注射；（4）高應(yīng)答者：抗體濃度大于100mIU/mI，免疫效果最好，約占接種者20%，不需要加強(qiáng)注射。因此定量測(cè)定對(duì)乙肝疫苗免疫力的評(píng)價(jià)和高危人群預(yù)防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預(yù)防乙肝方面。注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs濃度的定量分析）：全程（3FQ-PCR-DNA與HBeAg定量檢測(cè)相關(guān)性分析PCR基本知識(shí)：1、反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+2、PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)（變性溫度與時(shí)間為93℃～94℃lmin；退火與延伸(復(fù)性)溫度與時(shí)間；55℃2min；循環(huán)次數(shù)：40次3、PCR反應(yīng)步驟：變性，退火和延伸4、假陽(yáng)性和假陰性5、血清HBV-DNA熒光定量PCR測(cè)定可以直接反映病毒復(fù)制狀態(tài)

6、不能完全反映病毒復(fù)制靜息期肝細(xì)胞內(nèi)HBV病毒狀態(tài)

結(jié)合PCR診斷病情

HBV-DNA陰性并不完全代表體內(nèi)HBV已被清除，結(jié)合“兩對(duì)半”各項(xiàng)指標(biāo)定量變化更能客觀反映體內(nèi)HBV病毒狀態(tài)，正確判斷預(yù)后和治療。如果HBV-DNA陰性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc濃度均還較高，提示并未完全痊愈，有可能病毒再次出現(xiàn)復(fù)制狀況，尚須密切關(guān)注。如果HBV-DNA陰性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc濃度均很低或陰性并持續(xù)一段時(shí)間，提示可能完全痊愈，預(yù)后療效良好。

FQ-PCR-DNA與HBeAg定量檢測(cè)相關(guān)性分析PCR基本（1）定量分析HBsAg和抗-HBs的濃度變化，可以預(yù)見(jiàn)急性乙肝是否處于恢復(fù)期。如HBsAg濃度降低，抗-HBs的濃度逐漸升高，可說(shuō)明病情正往恢復(fù)期發(fā)展。反之，HBsAg濃度處于較高水平或上升趨勢(shì)，而抗-HBs一直處于較低水平，則容易發(fā)展為慢性乙肝或乙肝病毒攜帶者。在急性HBV恢復(fù)期中約有3%的個(gè)例可同時(shí)檢出低水平HBsAg和抗-HBs，然后HBsAg消失而抗-HBs水平漸增高。（1）定量分析HBsAg和抗-HBs的濃度變化，可以預(yù)見(jiàn)急性（2）定量分析HBeAg和抗-HBe的濃度變化，可以反映病情變化和治療效果。定量測(cè)定能明確檢測(cè)HBeAg向抗-HBe轉(zhuǎn)換的時(shí)期，即表現(xiàn)為HBeAg濃度下降和抗-HBe濃度升高的過(guò)程。高濃度的HBeAg還可間接提示病毒處于高復(fù)制狀態(tài)，具有較高的傳染性。高濃度的抗-HBe一方面提示病情的好轉(zhuǎn)，而在某些時(shí)候（如肝功能指標(biāo)很差）可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步結(jié)合肝功生化指標(biāo)如ALT、AST、BIL等進(jìn)行綜合判定。（2）定量分析HBeAg和抗-HBe的濃度變化，可以反映病情（3）抗-HBc濃度的高低可以反映病毒感染的狀態(tài)。高濃度的抗-HBc提示乙肝急性或現(xiàn)行感染，常與HBsAg并存，恢復(fù)期濃度降低。慢性乙肝呈抗-HBc持續(xù)高濃度。而低濃度的抗-HBc一般為恢復(fù)期或既往感染，常于抗-HBs并存，無(wú)肝損害或肝損害早已靜息。（3）抗-HBc濃度的高低可以反映病毒感染的狀態(tài)。高濃度的抗（4）急性乙肝一般會(huì)在六個(gè)內(nèi)病情緩解，甚至自愈。病情超過(guò)六個(gè)月仍未緩解者，多轉(zhuǎn)為慢性化，但通過(guò)五項(xiàng)聯(lián)合定量分析，再結(jié)合肝功指標(biāo)和HBVDNA的水平，即若表現(xiàn)為HBeAg下降、抗-HBe出現(xiàn)或漸升，HBsAg和HBVDNA血清水平降低，這是病變恢復(fù)的時(shí)相，可望在1-2年病毒被清除而疾病痊愈；若HBeAg和HBVDNA血清水平持續(xù)很高的病人，預(yù)期可能保留慢性無(wú)癥狀攜帶（AsC）或慢性乙型肝炎。

（4）急性乙肝一般會(huì)在六個(gè)內(nèi)病情緩解，甚至自愈。病情超過(guò)六個(gè)三.乙肝檢測(cè)模式的解釋3.1常見(jiàn)九種模式3.2少見(jiàn)十六種模式3.3罕見(jiàn)七種模式乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)模式解釋.doc三.乙肝檢測(cè)模式的解釋3.1常見(jiàn)九種模式謝謝大家！

謝謝大家！

發(fā)光乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)意義發(fā)光乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)意義主要內(nèi)容一、乙肝病毒病原學(xué)、流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)二、乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)意義三、乙肝五項(xiàng)常見(jiàn)檢測(cè)模式解釋主要內(nèi)容一、乙肝病毒病原學(xué)、流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)一、乙肝病毒的病原學(xué)

及流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)

1.1乙肝病毒的流行現(xiàn)狀；1.2乙肝病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)；1.3乙肝的傳播途徑和高危人群；一、乙肝病毒的病原學(xué)

及流行病學(xué)及常見(jiàn)檢測(cè)指標(biāo)

1.1乙1.1乙肝病毒的流行現(xiàn)狀1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概況1.1.2我國(guó)HBV感染流行現(xiàn)狀1.1.3乙肝亞型的地理分布1.1乙肝病毒的流行現(xiàn)狀1.1.1全世界乙肝病毒感染的流1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行現(xiàn)狀1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行現(xiàn)狀1.1.2我國(guó)HBV感染流行現(xiàn)狀我國(guó)是HBV感染的高流行區(qū)。我國(guó)HBV感染率概況為：抗HBc及／或抗HBs陽(yáng)性：60％非感染人群：26％慢性乙型肝炎：2％表面抗原陽(yáng)性的慢性無(wú)癥狀HBV攜帶者：10％表面抗原陰性的慢性無(wú)癥狀HBV攜帶者：2％資料來(lái)源：駱抗先，《乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床》第二版1.1.2我國(guó)HBV感染流行現(xiàn)狀我國(guó)是HBV感染的高流行區(qū)。1.1.3乙肝亞型的地理分布ayw多見(jiàn)于非洲、東地中海、中東及巴基斯坦；adw多見(jiàn)于北歐及美洲；adr多見(jiàn)于東南亞及遠(yuǎn)東，adw及adr多見(jiàn)于印尼、馬來(lái)西亞、新幾內(nèi)亞及泰國(guó)

我國(guó)則具有一定的民族性，漢族人以adr為主，adw次之蒙古族、維吾爾族、回族等兄弟民族幾乎都是ayw亞型，ayr亞型極其少見(jiàn)，而adr亞型幾乎沒(méi)有。

1.1.3乙肝亞型的地理分布ayw多見(jiàn)于非洲、東地中海、中東1.2乙肝病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)1.2.1HBV的基本（電鏡）結(jié)構(gòu)1.2.2HBV的基因結(jié)構(gòu)1.2乙肝病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)1.2.1HBV的基本（電鏡1.2.1HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)大球形顆粒（Dane顆粒）管形顆粒小球形顆粒1.2.1HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)大球形顆粒（Dane顆粒）管形顆粒小Dane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖HBsAgHBcAgDNAP（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）HBVDNADane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖HBsAgHBcAgDNAP（外Dane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖Dane顆粒的基本結(jié)構(gòu)示意圖1.2.2HBV基因結(jié)構(gòu)pre-s1pre-s2SPCpre-cXHBVDNA3.2kbpre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAgHBsAgpre-S2pre-S11.2.2HBV基因結(jié)構(gòu)pre-s1pre-s2SPCpr1.3傳播途徑及高危人群血液傳播、（輸血、血制品、醫(yī)療器械等）

日常生活（傷口、共用刀具、消化道粘膜破損或潰瘍等）

母嬰傳播性傳播1.3.1乙肝病毒的傳播途徑1.3傳播途徑及高危人群血液傳播、1.3.2高危人群母親是HBV感染者的嬰兒乙肝患者的家庭成員吸毒者監(jiān)獄犯人性傳播疾病病人血液透析病人醫(yī)護(hù)人員1.3.2高危人群母親是HBV感染者的嬰兒1.4疾病診斷的臨床意義及常見(jiàn)模式分析1.4.1HBV血清標(biāo)志物及其臨床意義1.4.2介紹幾個(gè)臨床乙肝檢測(cè)的概念1.4.3臨床常見(jiàn)乙肝血清標(biāo)志物反映模式1.4疾病診斷的臨床意義及常見(jiàn)模式分析1.4.1HBV血清1.4.1HBV血清標(biāo)志物及其臨床意義肝功能(主要為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)乙肝病毒感染標(biāo)志物※HBV-DNA※兩對(duì)半:

抗原抗體外膜——————HBsAgHBsAb

核殼分泌蛋白——HBeAgHBeAb

核殼結(jié)構(gòu)蛋白——HBcAgHBcAb

肝組織病理學(xué)檢查1.4.1HBV血清標(biāo)志物及其臨床意義肝功能(主要為丙氨酸ALT的意義谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）主要存在于肝細(xì)胞中。當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥、壞死時(shí)，ALT就會(huì)從肝細(xì)胞內(nèi)大量釋放入血，導(dǎo)致血清中ALT升高，因此ALT升高是判斷肝細(xì)胞損害的一個(gè)敏感指標(biāo)。但是除了病毒性肝炎外，其它類型的肝炎或肝臟疾病，ALT也會(huì)升高。ALT的意義谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）主要存在于肝細(xì)胞中。當(dāng)肝臟發(fā)HBV-DNA的意義DNA是基因，因此HBV-DNA是HBV的遺傳物質(zhì)，當(dāng)HBV侵入肝細(xì)胞后，就會(huì)以HBV-DNA為模板，合成新的HBV顆粒并釋放入血，故HBV-DNA是病毒復(fù)制的一個(gè)重要指標(biāo)。HBV-DNA的意義DNA是基因，因此HBV-DNA肝組織病理學(xué)檢查肝組織病理學(xué)檢查是“金標(biāo)準(zhǔn)”：明確診斷衡量肝臟炎癥活動(dòng)度衡量纖維化程度決定治療方案，預(yù)測(cè)藥物療效對(duì)肝病而言肝組織學(xué)檢查是比血清ALT

更靈敏而精確的指標(biāo)肝組織病理學(xué)檢查肝組織病理學(xué)檢查是“金標(biāo)準(zhǔn)”：乙肝病毒感染血清標(biāo)志物

抗原抗體（機(jī)體產(chǎn)生）外膜HBsAgHBsAb核殼分泌蛋白HBeAg

HBeAb核殼結(jié)構(gòu)蛋白HBcAgHBcAbDNAHBV-DNA乙肝病毒感染血清標(biāo)志物（1）HBsAg●出現(xiàn)時(shí)間：HBV感染后2～6個(gè)月（潛伏期）●持續(xù)時(shí)間：急性自限性肝炎：6個(gè)月內(nèi)可消失慢性肝炎或慢性HBsAg攜帶者：可持續(xù)陽(yáng)性曾用名：HA、澳抗（1）HBsAg●出現(xiàn)時(shí)間：HBV感染后2～6個(gè)月（潛伏期）●HBsAg有抗原性而無(wú)傳染性HBVS基因整合肝細(xì)胞DNA持續(xù)表達(dá)“空心湯團(tuán)”HBsAg●HBsAg的亞型adradwayrayw長(zhǎng)江以北長(zhǎng)江以南新疆、西藏、內(nèi)蒙等●HBsAg有抗原性而無(wú)傳染性HBVS基因整合肝細(xì)胞持續(xù)（2）抗-HBs●出現(xiàn)時(shí)間：急性感染后期、HBsAg消失后和注射疫苗后正常的免疫應(yīng)答者●抗-HBs為保護(hù)性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標(biāo)志著HBV感染進(jìn)入恢復(fù)期和注射乙肝疫苗后產(chǎn)生正常的免疫應(yīng)答●抗-HBs對(duì)相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對(duì)不同亞型的HBV保護(hù)力不完全。（2）抗-HBs●出現(xiàn)時(shí)間：急性感染后期、HBsAg消失后（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物HBVC基因前C區(qū)C區(qū)前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達(dá)切割、加工分泌到細(xì)胞外HBeAg只存在于血清中（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物HBVC基●HBeAg是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志血清HBeAg與HBVDNA的含量成正相關(guān)，符合率達(dá)到95%以上?！馠BeAg是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志血清HBeAg與HBV（4）抗-HBe●出現(xiàn)時(shí)間：隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)●抗-HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低抗-HBe陽(yáng)性者中，16.3%～30%左右HBVDNA仍陽(yáng)性可能與前C基因變異有關(guān)

易加重病情、易演變?yōu)楦斡不?干擾素療效亦較差（4）抗-HBe●出現(xiàn)時(shí)間：隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)●抗-（5）抗-HBc●HBcAg主要存在于HBV感染的肝細(xì)胞內(nèi)或DANE顆粒核心中，到血液中即被降解為HBeAg。一般血清學(xué)方法檢測(cè)不到HBcAg，而只能檢測(cè)到抗-HBc抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動(dòng)的標(biāo)志抗HBc-IgG：凡“有過(guò)”HBV感染者均可陽(yáng)性HBcAg的免疫原性最強(qiáng)持續(xù)時(shí)間：6～18個(gè)月可終身陽(yáng)性（5）抗-HBc●HBcAg主要存在于HBV感染的肝細(xì)胞內(nèi)或常規(guī)檢測(cè)的HBV血清標(biāo)志物的基本解釋HBsAgHBV感染，但未必是急性肝炎或者慢性病變活動(dòng)的病原?？笻Bs感染后免疫；對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答；或HBIG的被動(dòng)免疫HBeAg反映HBV復(fù)制，有病毒血癥，血液高傳染性抗HBeALT持續(xù)正常者表示HBV低復(fù)制或不復(fù)制，HBsAg(+)血液低傳染性。

ALT波動(dòng)者表示病毒變異?？笻Bc低滴度表示過(guò)去感染；高滴度表示現(xiàn)行感染。IgM抗HBc高滴度表示急性或近期感染；活動(dòng)性病變可出現(xiàn)低滴度。來(lái)源：駱抗先，乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床，第二版常規(guī)檢測(cè)的HBV血清標(biāo)志物的基本解釋HBsAgH1.4.2介紹幾個(gè)概念：①“兩對(duì)半”HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb②血清抗原—抗體轉(zhuǎn)換率：HBeAg

抗-HBe③“轉(zhuǎn)陰”常用指標(biāo)：血清HBeAg抗原—抗體轉(zhuǎn)換率

HBVDNA陰轉(zhuǎn)率1.4.2介紹幾個(gè)概念：①“兩對(duì)半”HBsAg、HBsA二、乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)的應(yīng)用急性乙肝治療中的具體監(jiān)測(cè)慢性無(wú)癥狀攜帶者（AsC）的動(dòng)態(tài)觀察酶免或膠體金檢測(cè)HBsAg（-）的HBV感染的結(jié)果分析注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs濃度的定量分析）結(jié)合FQ-PCR-DNA診斷病情二、乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)的應(yīng)用急性乙肝治療中的具體監(jiān)測(cè)乙肝定量檢測(cè)意義及新型檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展課件乙肝定量檢測(cè)意義及新型檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展課件乙肝定量檢測(cè)意義及新型檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展課件HBVDNAHBcAbHBsAgHBeAgHBeAbHBsAbHBVDNAHBcAbHBsAgHBeAgHBeAbHBs化學(xué)發(fā)光定量（CLIA）檢測(cè)HBsAg靈敏度可達(dá)0.05-0.1ng/ml，而酶標(biāo)（ELISA）檢測(cè)HBsAg靈敏度是0.5-1.0ng/ml，膠體金（POCT）檢測(cè)HBsAg靈敏度是1-5ng/ml也就是說(shuō)只有血清中的HBsAg達(dá)到0.5-5ng/ml酶標(biāo)或膠體金才會(huì)呈陽(yáng)性反應(yīng)?！黾毙砸腋卧缙冢篊LIA定量能及早檢出HBsAg，確證HBV感染，幾乎能與preS1同時(shí)檢測(cè)，在病程觀察中大大縮短“窗口期”時(shí)間，而酶標(biāo)或膠體金在乙肝早期檢測(cè)往往HBsAg呈陰性。■慢性乙肝：一些患者由于機(jī)體對(duì)HBV包膜蛋白(HBsAg)表達(dá)較低，酶標(biāo)或膠體金檢測(cè)可出現(xiàn)HBsAg和抗-HBs均陰性的情況，而CLIA技術(shù)則可避免這些情況的出現(xiàn)，為正確判斷病情提供依據(jù)?！霾《景l(fā)生變異后，表達(dá)量較低，常規(guī)ELISA或膠體金測(cè)不出抗原，而CLIA定量具有極高的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)并極有可能同時(shí)檢測(cè)出HBsAg和抗-HBs?；瘜W(xué)發(fā)光定量（CLIA）檢測(cè)HBsAg靈敏度可達(dá)0.05-0注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs濃度的定量分析）：全程（3針）免疫結(jié)束后1個(gè)月檢測(cè)保護(hù)性抗-HBs的濃度，據(jù)此值將乙肝疫苗接種者分為四種情況：（1）無(wú)應(yīng)答者：抗體濃度小于1mIU/ml，無(wú)抗體產(chǎn)生或非特異性結(jié)合反應(yīng)，約占接種者的5%，繼續(xù)加大劑量或更換疫苗廠家全程（3針）免疫注射；（2）低應(yīng)答者：抗體濃度為1-10mIU/ml，保護(hù)作用比較弱，約占接種者的10%，須加強(qiáng)兩針疫苗注射；（3）中應(yīng)答者：抗體濃度為10-100mIU/ml，已有一定的保護(hù)力，約占接種者65%，須加強(qiáng)一針疫苗注射；（4）高應(yīng)答者：抗體濃度大于100mIU/mI，免疫效果最好，約占接種者20%，不需要加強(qiáng)注射。因此定量測(cè)定對(duì)乙肝疫苗免疫力的評(píng)價(jià)和高危人群預(yù)防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預(yù)防乙肝方面。注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs濃度的定量分析）：全程（3FQ-PCR-DNA與HBeAg定量檢測(cè)相關(guān)性分析PCR基本知識(shí)：1、反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+2、PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)（變性溫度與時(shí)間為93℃～94℃lmin；退火與延伸(復(fù)性)溫度與時(shí)間；55℃2min；循環(huán)次數(shù)：40次3、PCR反應(yīng)步驟：變性，退火和