第二章生物制品的制備課件

1、 第二章 生物制品的制備 （Preparation） 第一節(jié) 一般生物制品的制備方法 (Preparation of general bio-preparate )一、生物制品原料的選擇、預(yù)處理與保存方法 （Selection、pretreatment and preservation of raw material of biopreparate） 歉告幸畫甩勸脅二猜獰寐翠豪澀跨限輔潛遞巢置霄峪娘愉鬼繹卸緞猛盈網(wǎng)第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（1）原料選擇 原料的選擇原則： 有效成分含量高，新鮮； 原料來源豐富，產(chǎn)地較近； 原料中雜質(zhì)含量少； 原料成本低等。蝴斟驅(qū)焉嚎艾淺牙徐膏劈心

2、郝拜盾混銳滲詛滾異埔硯豎睡獅乍闌噸賂執(zhí)痕第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備原料的選擇注意事項： 植物原料生長的季節(jié)性； 微生物原料的對數(shù)期； 動物原料的年齡與性別。背緬契劍憑繡籃譜帥幀值以諒穩(wěn)燼謅砒密拂籬熊嫩亨殷棒鵬構(gòu)熟晉徊跌素第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（2）原料的預(yù)處理與保存： 動物原料：采集后要立即處理，去除結(jié)締組織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存。植物原料：要擇時采集并就地去除不用的部分，保鮮處理；微生物原料：要及時將菌細(xì)胞與培養(yǎng)液分開，進行保鮮處理。 井肺削塊什咐談婚敏朗力闌會幾傻審征含媚穿拈攻簿敞市朔母到亡琺拳鄧第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備原料的保存方法主

3、要有：冷凍法。該方法適用于所有生物原料。常用-40速凍。有機溶劑脫水法。常用的有機溶劑是丙酮。該法適用于原料少而價值高、有機溶劑對活性物質(zhì)沒有破壞作用的原料，如腦垂體等。防腐劑保鮮。常用乙醇、苯酚等。該法適用于液體原料，如發(fā)酵液、提取液等。 趴快莊猾暇者衙裹鵲黔鈉踞嘻孔發(fā)履砷膩約逞缸麓嘉旅碩悶毗債帚保毋砧第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備二、生物制品的提取（extraction） (1)生物組織與細(xì)胞的破碎（obtrude of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物組織或細(xì)胞中，要提高提取率，破碎過程是非常重要的。常用的破碎方法： 磨切法，該法屬于機械破碎方法，設(shè)備

4、有組織搗碎機、膠體磨、勻漿器、勻質(zhì)機、球磨機、乳缽等。壓力法，有加壓、減壓、滲透壓三種 顏唉蟻簿撣曾債凈茫扎膿演崖緯駭鴕梳捐慮牟侗何場割芥沛懸歸棠趕婉寶第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備反復(fù)凍融法，設(shè)備簡便，活性保持好，但用時較長。超聲波振蕩破碎法，該方法破碎效果較好，但由于局部發(fā)熱，對活性有損失。自溶法或酶解法，用得較少。寂還餡楔匿下辛騎兒已擰銻淪暴貳戮蕩垛貼變運龔敷幟心誡仔木壽媳擎有第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（2）提?。╡xtraction） 生物組織與細(xì)胞破碎后要立即進行提取。提取時，首先要根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)， 選擇提取試劑。提取試劑主要有：水、緩沖溶液、鹽溶液、乙醇

5、、其他有機溶劑（如氯仿、丙酮等）。 考慮提取溶劑的用量及提取次數(shù)、提取時間。 注意提取的溫度、pH、變性劑等因素。 和關(guān)敷吹贏簽憲秘賒活蔬假損艾凋當(dāng)其繡擅幅含羽丈扭創(chuàng)坯婁奄帝粵隱玻第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備三、蛋白質(zhì)類制品的分離純化方法（Isolation and depuration of protein production） 包括蛋白質(zhì)、多肽和酶類等藥物。分離純化方法有： (1)沉淀法（precipitation）：蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。原理是使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而沉淀蛋白質(zhì)。常用的有鹽析法（salting out）、有機溶劑沉淀法（organic solv

6、ent precipitation）、等電點沉淀法（isoelectric precipitation）、與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法（如抗體抗原）（target banding precipitation）等。 叭摩需展呂樸甕使箭傍降萄喲洽嗎徹攙蜒暈嘎漢盧眉堰洲彬賺歲獺頓拂雄第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備蛋白質(zhì)中性鹽中和電荷水化層減弱溶解度下降，沉淀鹽析法原理等電點沉淀法在等電點時，蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零(即正負(fù)電荷相等)，此時蛋白質(zhì)分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產(chǎn)生沉淀，所以蛋白質(zhì)在等電點時，其溶解度最小，

7、最易形成沉淀物。專送匪面玄角輔頻釁踴蛋鴛滯八徒教胰凳另救汽潑饑湊綱創(chuàng)析差盾匿隴跋第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備(2) 按分子大小分離的方法：有超濾法（ultrafiltration）和透折法（dialysis）（即膜分離方法）、凝膠層析法（gel chromatography）、超速離心法（ultra centrifugation轉(zhuǎn)速大于20 000r/min）等。其中膜分離法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級和脫鹽。 壕敏莎巾無師嗚必決岔械壺閥絮稼讀嘛冶喧膘級忱蘿矮漬購隱校痹陶絞陌第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備凝膠層析又稱分子篩層析，主要根據(jù)混合物中分子的大小和形狀不同，在

8、通過凝膠時，分子的擴散速率各異而達到分離的目的。凝膠顆粒具有多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子易進入凝膠網(wǎng)孔，流程長而移動速度慢，而大分子物質(zhì)不能進入凝膠網(wǎng)孔，沿凝膠顆粒間隙流動，流程短移動快。這種現(xiàn)象稱為分子篩效應(yīng)。鼠臍宅巍彼癱怯晰剿弓翻鐵窘喉駕忠支淌呂泉鞋督敷管誘盡序佳頓擂飲伺第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備(3)按分子所帶電荷進行分離的方法氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解質(zhì)。它們具有等電點，在離開等電點的pH時便會帶正或負(fù)電荷。例如某蛋白質(zhì)等電點為7.0，當(dāng)溶液pH為4.0時，分子則帶有正電荷。由于具有該性質(zhì)，利用帶電性質(zhì)進行分離是極其有效的方法。利用電學(xué)性質(zhì)進行分離的方法有離子交換柱層

9、析法（ion-exchange chromatography）、電泳法（electrophoresis）、等電聚焦法（isoelectric focusing）等。鎂區(qū)甜穩(wěn)夜呢跌略便藻覺夢別倒刮埋跳爺博凱許蕾枚熒嘲妮砰獻歇澤絳杜第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（4）親和層析法（affinity chromatography）大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)，如酶與底物（或抑制劑）、抗原與抗體、激素與受體等，它們之間有特異的親合作用，利用該性質(zhì)設(shè)計的特異層析分離技術(shù)稱為親和層析。親和層析分離專一性強，操作簡便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方法之一。休掖簿銘緘哉憫阻眨法豬晉禱晉沸瀾散橡踞標(biāo)酥

10、肩曳廚椽蔗僵窿薦碴仔晤第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備親和色譜（affinity chromatography） 1）基本概念（basic concept）親和層析是利用待分離物質(zhì)與其特異性配基之間特異性的親和力進行分離的一類特殊的層析技術(shù)。配基（ligand） ：被固定在基質(zhì)上的分子稱為配基，配基和基質(zhì)是以共價鍵結(jié)合的。基質(zhì)（matrix）：亦稱為載體（vector），是構(gòu)成固定相的骨架 。貌敢丫芒循雞智甕曹甄畸臺緯獲扎柜靈玄殊姓猜多聘噴樣塹冰囪顱誣避臭第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備2）親和層析有如下特點（Characteristics of Affinity Chroma

11、tography）純化過程簡單、迅速；分離效率高；產(chǎn)物純度高；必須針對某一分離對象制備專一的配基及尋求穩(wěn)定的層析條件。因此應(yīng)用范圍受到一定的限制。鈾沙氰心涯索肖男梢胞浚鹽式乓氈納漢溪嚷膽蕩哭翰躺裙孜森尿犬偶夠賃第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備3）親和層析的基本原理（Mechanism of Affinity Chromatography）親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑。當(dāng)含有混合組份的樣品（流動相）通過此固定相時，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，其它沒有親和力的無關(guān)組份就隨流動相流出。然后改變流動相成份，將結(jié)合的親和物洗脫下

12、來。（見Fig1、Fig2）。曳視喝蛹盔馴剎竿簽贓貳鞋析猛旭佯捂希陌凍酷碘祭股咋水鵑埋獵狹漲靡第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（ Fig1. Mechanism of AC）除栗坎丈藻謊耀猩甩盆垛謬圾屈款狐崗薔粵辨垂篙鳴捉土鼠憶酒納忍屈豹第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（Fig2. Mechanism of AC）抗原專一抗體基質(zhì)戮脊男睦辦甚嘛牧蘸工杜次撼形妥誕脯釩懾卸牙謠程者院目汀炸奉翱耍仁第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備具有特異性親和作用的生物分子4）配基的種類 (sorts of ligand)抗原與抗體。DNA與互補DNA或RNA（cDNA、mRNA)。酶與其底

13、物。激素與其受體。維生素與結(jié)合蛋白。糖蛋白與植物凝集素。市寺世痰壟疙膿離寒撲岔賴訂朱濤彭腿孔獻柏萍毅檄騙賴燦廬抉程氛決謬第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備5）親和層析載體的性質(zhì)與選擇親和層析載體的選擇（selection of vectors）多孔的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能使被親和吸附的大分子自由通過。顆粒均勻，具有良好的流速。具有惰性，盡量減少非專一性吸附。在溫和的條件下 能與配基共價偶聯(lián)。悶倡孫扳迭娛浙昆棚啃痢階幣鎂渴皋蕭蠱彼磷嘎牢嘿閱杯幣寧磐畢帛結(jié)燴第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備6）常用的親和層析載體 （Vectors of Affinity Chromatography）纖維素

14、（cellulose）葡聚糖凝膠（Sephadex）瓊脂糖凝膠（Sepharose）聚丙烯酰胺凝膠（Bio-gel）多孔玻璃珠（Bio-Glass）其它新型載體（Other gels）胃爪芒?？鞈羟蚪g全汗淚奠界駒考掛層獺蕊嬰跌點掏穎鈍哦坤駭幢玩適酞第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備7）親和層析配基的選擇（Selection of ligand）1.純化對象和配基之間必須有較強的親和力。2.但親和力太高也是有害的，因為在解離配 基復(fù)合物時所 需的條件就要強烈，這樣可能使生物分子變性。3.配基必須具有適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)基團，可用于和載體相連，同時又不影響配基與生物分子之間的親和力。崎棒道噓付次湃瘩冶

15、胯巍常凜郵窗鋸工跌慢憋戌安噪賠瞅椅鏟秸數(shù)孿履師第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備8）載體、配基、目的物的連接（Conjunction of vector、ligand and target material）載體（Vectors or Matrix） +配基（Ligand） +目的物（target material）疑盒話礦嫡癥遵摧床痙霍苫俗何龐咳產(chǎn)轎濘麗慢拘拙畦翼竟吧吸宵銹增舉第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備Fig AC relies upon a reversible highly specific binding reaction.酚榨擒椽翁尉怒幻跋茹東壘仿酥稿子社剿墾范毯

16、迷仕賃聳是惠力到訊沼嬰第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備Fig Spacer arm principle A spacer is sometimes used to ensure full accessibility of the affinity ligand.麓歲敘淄寂尊閏晝豫予藏糊脊緝豎槐刻程蕪楊擄初捎涼吉減尸罪浙略朋衙第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備Fig Principle of preparing AC media搭寞涎錐甫霍媚誡笑沃善母麓鈕訃鉀藉享盎廟揣素血空具屯春豌脊俗佐賓第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備9）親和層析的基本操作方法：平衡（ Equilibr

17、ation） 用平衡Buffer沖洗柱體，至基線平穩(wěn).毋崎茄斡軀琳眺爛懸嗽騎摟磚溺泅巡遍熏期醉硬盈斜酌芽巍合絕刮撾埃者第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備樣品上柱和沖洗（Sample application and wash） 樣品中的目的物與層析介質(zhì)選擇性的吸附，雜質(zhì)不被吸附。用上樣Buffer沖洗柱體，雜質(zhì)被沖洗下來。形成雜質(zhì)峰（見下圖）。島鎳辰寫鉆誓湛詭超院額趙麗纓嚴(yán)因茍霸師揮腦吧腰昨國眶脆慕近牟犁鞠第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備蛛翠尖釘衙鎢邢淌喳絮貸巫啼膏奴撮費樓液仍狹叉憎蔑駭禾蘊俊痹柏孟勉第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備洗脫（Elution） 選擇適當(dāng)?shù)臈l件，將

18、吸附在親和介質(zhì)上的目的物解吸下來（見下圖）。糊瀾鞭禽競撮浴孰改牢艷彥鄧敖海不伊螟某羨論摧節(jié)矗擁驚場屹滇敦杉究第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備四、核酸類制品的分離純化方法（Isolation and depuration of nucleic acid ）核酸類藥物生產(chǎn)方法主要有提取法和發(fā)酵法。提取法生產(chǎn)DNA和RNA，先提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離RNA與DNA。發(fā)酵法主要用于生產(chǎn)單核苷酸。沮暈瘡糧啄榔米初鈣雪奇滓頃乃裙襲邢扛鉀宣梳鎖耍逆邪譜訴黑陜涌升懾第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備高RNA含量酵母搖瓶發(fā)酵種子培養(yǎng)物連續(xù)發(fā)酵發(fā)酵液過濾酵母菌體NaOH2

19、0攪拌破壁氨水處理離心上清液沉淀蛋白三氯乙酸酸調(diào)pH核酸粗品乙醇洗滌干燥RNA干品革哉匿虎頃岸懦墾燼昆庶佛敏享鋇裝龜列嗽謀樟啪蹤鏟嫁罐涌史失草蘊琢第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備五、糖類制品的分離純化方法（ Isolation and depuration of sugar ） 由于各種糖類制品的性質(zhì)和原料來源不同，沒有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝。這里只介紹多糖和粘多糖的一般分離純化方法。 裙渠佛芹囚餾飽藝魂傷說廬龜塞訟竭秉繳裂汽曲阻鼓譜昧別頸蹦興紋冠詐第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（1）提取方法 （extraction） 非降解法適用于從含一種粘多糖的動物組織中提取粘多糖，提

20、取采用的溶劑是水或鹽溶液。 降解法（degradation）適用于從組織中提取結(jié)合比較牢固的粘多糖（mucoitin）。如從軟骨中分離提取硫酸軟骨素（chondroitin sulfate），就是用堿處理進行降解。又如用酶處理法可提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖。砰學(xué)躺撮膏益館則袱鋁攣簡爭升委忘磅禾判咬負(fù)揉冀動朋凡底搔蔓甸檄哀第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 （2）分離方法 （isolation） 常用的分離方法是沉淀法和離子交換層析法。乙醇沉淀法（alcohol precipitation）：是從提取液中沉淀多糖的最簡易方法，也適用于分級分離。4-5倍體積的乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全

21、沉淀。用季銨化合物也可沉淀粘多糖。粘多糖的聚陰離子能與某些陽離子表面活性劑結(jié)合成不溶于水的鹽，如十六烷基三甲基銨（CTA）等。 蒸湯克姐放當(dāng)臆棲賢餾衷猩撼白鯨憨涸腿瓊唯葡拌綠諷啃拙誰磁不吵羚姜第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 離子交換層析法（ion exchange chromatagraphy)：粘多糖的聚陰離子能夠很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如Dowex I-X2（商品名）離子交換樹脂、DEAE-離子交換纖維素（二乙胺乙基）等。洗脫可用NaC1溶液進行梯度洗脫。搐躍贏秉堂教膿詛安否躇凱亮郊橢伸餓汕朋怨隆瓤休搖薊飯莆氨呻以翔弓第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備六、脂類制品的

22、分離純化方法 （isolation and depuration of lipoid）（1）提取方法（extraction ） 脂類自然狀態(tài)下是以結(jié)合形式存在的。非極性脂是與其他脂質(zhì)分子或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的。提取脂質(zhì)就是要選擇適當(dāng)?shù)娜軇﹣砥茐倪@種結(jié)合鍵，將脂質(zhì)溶解出來。常用的溶劑有組合溶劑，醇是其中的主要成分，此外還有氯仿、甲醇、水等。 脫架林含壺咯姬屆昧咨磕灌蘊午懊裸撾腔降奇抱蹤出閻摟彼伍溫很望舷歹第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（2）純化方法（depuration） 沉淀法(precipitation) ：由于不同脂質(zhì)在丙酮中溶解度不同，故常用它進行沉淀。吸附層析法(ads

23、orption chromatography)：常用吸附劑有硅膠、氧化鋁等。它是通過極性和離子力等把各種化合物結(jié)合到固體吸附劑上。洗脫一般是采用極性逐漸增大的洗脫液來進行，非極性的先流出，極性的后流出。 騾鹼盲祿胃輛口渠瘸圾饑政頭扳泌沼炸杜恰橙乳恃剿謅卞劫覆撬慰捶遍席第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備離子交換層析法（Ion exchange chromatography） : 脂質(zhì)分子的存在有非解離、兩性離子和酸式解離三種狀態(tài)。根據(jù)它們在一定pH條件下的解離情況，選擇適當(dāng)?shù)碾x子交換劑可將它們提純。如TEAE纖維素對分離脂肪酸和膽汁酸等特別有效。 減窘戀磊大皆餃苫渙疏渙借娩群擇匡紫桿侈詭煎

24、每窯戳暑軸矗獄瀑袖黔坦第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備七、氨基酸類制品的分離純化方法 （isolation and depuration of Aa）（1）氨基酸的生產(chǎn)方法（production of Aa）蛋白質(zhì)水解法（protein hydrolysis）：水解法有酸水解（acid hydrolysis）、堿水解（base hydrolysis）和酶水解（enzyme hydrolysis）三種。 孟祁賦汾答獵搖猶群權(quán)魚望煞游研共岸衙祿低閃聘搶湊塘淳跑娟烏伏箋烏第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 用鹽酸水解為常用方法，其優(yōu)點是水解迅速、完全，產(chǎn)物全部是L型氨基酸，缺點是色氨酸

25、全部被破壞，絲氨酸等部分被破壞。堿水解法易產(chǎn)生消旋作用，較少應(yīng)用。酶水解法水解不夠完全。 裙能兌拙淡獵滴拷蠢閑麗勢姚銳嘲而蛆煽形勘介非奉苫劊尹展搞痊濰援過第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備發(fā)酵法（fermentation）：菌株經(jīng)過發(fā)酵后，從培養(yǎng)液中提純氨基酸。 化學(xué)合成與酶促合成法化學(xué)合成法一般得到的是DL型氨基酸，尚需要對異構(gòu)體拆分；酶促合成法也是酶工程在醫(yī)藥工業(yè)上的應(yīng)用，優(yōu)點是技術(shù)工藝簡單，轉(zhuǎn)化率高，副產(chǎn)物少和易提純等。盅殖薛密召遁透袱覽卻汲捉枉提袒捍懦吝疑簾賴笨湊桌棗素模疏妮瞞誡贓第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（2）氨基酸的分離方法（isolation of Aa） 有

26、沉淀法（percipitation）、吸附法（adsorption）和離子交換法（ion-exchange ) 。沉淀法(percipitation)：根據(jù)形成沉淀的原理不同分為兩種：是依據(jù)不同氨基酸在水中或其他溶劑中的溶解度差異進行沉淀分離。是用特殊試劑沉淀某種氨基酸，如用鄰二甲苯-4-磺酸與亮氨酸形成不溶性鹽沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游離出來。均從杏洱鈾些多副章錫沁搜裴兜孜掩濟職濾頗沏帥棺秋梁鑄謗冊賀艾窺澳第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 吸附法(adsorption)：這是利用吸附劑根據(jù)氨基酸吸附力的差異進行氨基酸分離的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分離就是利用活性炭對其吸附

27、的原理。 離子交換法（ion-exchange )：氨基酸是兩性電解質(zhì)，在一定pH條件下，不同氨基酸帶電性質(zhì)及解離狀態(tài)是不相同的，因此在離子交換劑上被吸附的強度不同。常用的離子交換劑為強酸型陽離子交換樹脂，洗脫主要用pH梯度洗脫。 炔響胎滔釁吏舟基塵鑲篷敲換則潦鬃司隴想蹬仆粉挪謄雞皚毒諺僑納叼猜第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備第二節(jié) 人體來源生物制品制備實例 （Example of bio-preparation application to human）一、人血漿白蛋白制劑的制備（preparation of human blood plasma albumin）（1）結(jié)構(gòu)和性質(zhì) （

28、structure and character）人血是一種紅色混濁的、具有一定腥味與粘滯性的液體。用適當(dāng)?shù)目鼓齽┏テ渲械挠行纬煞郑ㄈ缂t血球）而得到淡黃色、半透明的液體叫血漿。離憤陡到放鄲數(shù)血蘋頗麗僚騾撩匯廣李稿唉婁鑿雨蛾弛喬蔭穢招眷吠詳拔第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備血漿中除含有大量的水分以外，還含有血漿蛋白等溶質(zhì)。白蛋白（albumin）又稱清蛋白，白蛋白是血漿蛋白中含量最高（3.84.8%）、分子量最小、分子數(shù)最多的一類蛋白質(zhì)。白蛋白對治療因失血、創(chuàng)傷、燒傷等引起的休克，腦水腫和大腦損傷性所致的腦壓增高，防止低蛋白血癥，肝硬化或者由腎病引起的水腫與腹水等嚴(yán)重疾病具有良好療效。瞪

29、紳溪逞行騾斑羔瑞象雅羚逾砍引涵倘懾?fù)v鹽劑遍犯冕切寅樁設(shè)棒吱王娠第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備白蛋白為單鏈分子，由584個氨基酸殘基組成，N端為天門冬氨酸，C端為亮氨酸，分子量為6.6104，在離子強度為0.15時，pI為4.7，易溶于水，在60%硫酸銨飽和度以上沉淀。對酸較穩(wěn)定，受熱變性。從人體中分離的白蛋白有兩種：一種是從健康人血漿中分離制得的人血清白蛋白，另一種是從健康產(chǎn)婦胎盤中分離制得的胎盤白蛋白。慫傀鴨俐迂諧捧蕪坪青蕊陽吭喂輔記損引趙浸卒鴕癰洋渭殉沫纂刃燃暖響第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 血（無抗凝劑）自然凝固分離出血清（無纖維蛋白酶原、凝血因子等）血+混合抗凝劑

30、 草酸銨草酸鉀離 心上清血漿總蛋白：6.2-7.9%白蛋白：3.8-4.8%水：90-92%（現(xiàn)常用肝素、檸檬酸鈉）喝尼彪停肇署淳艾挑嚙宮釉遙舊榨嗎著禾桶邀祈瑚顱徒孟禽鼠飄獰小良丑第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（2）工藝路線 利凡諾,NaHCO3pH8.6,離心分離絡(luò)合物蒸餾水，NaCl，HCl弱酸性，40，離心離心液濃 縮超 濾濃縮液滅活病毒 65，1h；60，10h熱處理液除菌除菌過濾白蛋白液干燥冷凍干燥白蛋白去雜蛋白人血漿（%）估漬蔽拍凹葡睫欺豐嚷到嫡象透虹吻檀膨乎濕治這錢纜鉸嬰換所飛攜渭垂第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備男性尿 沉淀10下，pH8.5上清尿液酸 化 p

31、H5.0-5.5酸化尿吸 附硅藻土，5硅藻土吸附物洗滌5，水硅藻土柱洗脫0.02%氨水，0.1mol/L NaCl洗脫液去熱源、色素DEAE-SephadexA50柱，pH8.0,（二乙氨乙基葡聚糖）流出液（活性部分）濃 縮羧甲基纖維素（CMC柱，pH4.2)CMC柱洗脫（HAC-NaAC)NH3+NaCl,pH11.5-11.8洗脫液透 析H2O,4透析液凍 干成品二、尿激酶（urokinase）的制備一噸可制成90克粗品，治療各種新血栓形成或血栓梗塞疾病。 暖襲滇炯靶擂臼州履增憶慈淖曙逞竭踞渡膠篙漬半鷹晴鹵四敬李蹦稍耙稈第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備孕婦尿粗制尿：苯甲酸：乙醇/1

32、：0.075：5）用HCl調(diào)pH 4-5HCG(粗品）提取NaAC pH4.8提取液透析水，5以下透析內(nèi)液吸附（CM SepharoseCI-6B）羧甲基瓊脂糖凝膠吸附后交換劑洗滌，峰NaAC,pH4.8,pH5.9洗滌后交換劑洗脫NaAC,pH8.5洗脫液冷凍干燥 30HCG精品 溶解蒸餾水，10以下HCG溶液透析pH6.8, 5以下透析內(nèi)液吸附羥基磷灰石，pH6.8吸附物解吸0.5mmol/L,1.0mmol/L磷酸鹽緩沖液（PBS),pH6.8解吸液干燥30HCG純品三、絨膜促性激素（HCG,懷孕4570天含量高）的制備治療女性不育癥，神經(jīng)性皮炎,子宮出血和習(xí)慣性流產(chǎn)舵穢揮懷逗院炭盤昨訣

33、邀化渙葵舌韌啃僧西瞞椅供畫村尋偏都順鐮巋獨莆第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備四、人體來源藥物的研究前景 （prospect）人體來源的原料雖只限于血液、胎盤、尿液、毛發(fā)等有限幾種，但利用前景很廣闊。1、可進一步開發(fā)新產(chǎn)品 exploitation of new productio）（1）血液的利用，血漿蛋白可分離為I-V5個成分。目前僅利用了其中的I（纖維蛋白原）、II（免疫球蛋白）和V（白蛋白）3個組分，III和IV，目前基本未加以利用。適映伺抬潦繃統(tǒng)耶皋賜囪緝惺疼乓斡甄琉瑚彼孿輸估路焊絳輔經(jīng)惦靖拴碰第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（2）對其他原料的利用，胎盤是重要的人類原料

34、之一，較好利用的只有胎盤球蛋白、胎盤白蛋白等少數(shù)品種。 誦俐微蛹冗佰沿鹽咨競泄金揪燙臍蚊砧辨蘊酶救釉茬輝拄憾禿橙紛人忌惋第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備一、動物來源生物制品制備的實例1、胰島素的制備 （production of insulin）（1）胰島素的性質(zhì)：pI=5.3-5.4，由A鏈、B鏈通過兩個二硫鍵連接；A鏈含21個氨基酸，B鏈含30個氨基酸；是所有蛋白質(zhì)中研究得最多，也是研究得最清楚的蛋白。 第三節(jié) 動物來源生物制品的制備贊栓篇埔知耘筷羨鞍倪囊舌授屏絢爭摔汕泊嘴芥很俱迸曉廉冤寄啊礫諾鎖第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備（2）工藝路線豬胰臟提取乙醇，草酸，10-15

35、提取液堿化氨水，pH8-8.4堿化液酸化硫酸，pH3.6-3.8,5 酸化液濃縮30 以下，減壓濃縮液去脂速熱速冷去脂溶液鹽析NaCl,pH2-2.5鹽析物水、丙酮、氨水（pH4.24.3）除酸性蛋白濾液鋅沉淀氨水，Zn（Ac）2，pH6.0沉淀除堿性蛋白，結(jié)晶Zn（Ac）2，丙酮、氨水，pH8.0，5以下，檸檬酸調(diào)pH6.0結(jié)晶洗滌，干燥水、丙酮、乙醚胰島素精品餌塘得祈忿疥湖賤潛硼入柏凸咖膝極笨縷鄒谷鱗止我儲頌韭署矯宅弱滋礙第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備2、超氧化物歧化酶（SOD）的制備超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）與機體抗衰老、腫瘤發(fā)生、自身

36、免疫疾病和輻射防護等有關(guān)。用于炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎及放射治療后的炎癥等。SOD存在于動物、植物、微生物中，有Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等。牛紅細(xì)胞SOD為Cu-Zn-SOD，由兩個亞基組成，每個亞基含1個Cu和1個Zn。在pH7.6-9.0時穩(wěn)定。它催化超氧負(fù)離子歧化為H2O2。 降旺碰拄宅俐諺殉的究他鏈轉(zhuǎn)硫沉龍秋雜席藐奈獵晾挪磺挖粹履我智漏兇第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備新鮮豬血去血漿，離心紅細(xì)胞0.9%NaCl,反復(fù)洗滌3次收集工藝路線浮洗凈紅細(xì)胞溶血血去離子水，5,30min溶血物去血紅蛋白乙醇，氯仿,15min上清液沉淀丙酮，0沉淀物去離

37、子水55-65，10-15min黃綠色澄清液沉去不溶蛋白，透析丙酮，去離子水，0，6-8h透析液吸附、吸脫、超濾、濃縮、干燥DEAE-SephadexA50,磷酸緩沖液（K3PO4），pH7.6SOD成品酗卒誤徐枚淳餾蔭瘍拿捉擊創(chuàng)臆買和景陌始飛焉掇噶詳傅效舟課紐捎安桔第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備第四節(jié) 基因工程生物制品的制備 先確定與某種疾病有關(guān)的具有預(yù)防或治療作用的蛋白質(zhì)，然后將控制該蛋白合成的基因分離或進行人工合成，利用重組DNA技術(shù)將該基因加以改造，再將改造后的基因?qū)肟梢圆粩喾敝车氖荏w細(xì)胞，從而大規(guī)模生產(chǎn)具有預(yù)防和治療這種疾病的蛋白質(zhì)。通過這種方法生產(chǎn)的新型生物制品稱為基因

38、工程生物制品。上游技術(shù)：工程菌的構(gòu)建下游技術(shù)：目的基因產(chǎn)物的分離純化蹤只踞酚獅龐遁涕括攔膊膩微蓉瘦擂叢首墾酪昂框仇錦津殆圍齊炊穆糙英第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備一、上游技術(shù)：工程菌的構(gòu)建1、目的基因的分離制備與鑒定2、重組載體的選擇與制備3、目的基因與載體的重組4、構(gòu)建的重組載體轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞（表達載體）5、篩選含有重組子的細(xì)胞進行擴增黍臨汁況鼠龜限滲隋閨奶嬰拄爐哎慮磕付厘盞玫呼央疤茸死驚么啄掃識咱第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備1、目的基因的分離制備與鑒定（1）目的基因所處染色體的確定（2）目的基因的獲取 目的基因可以是染色體DNA、cDNA或人工合成的DNA，目的基

39、因不同，獲取方法也不同。A、限制性內(nèi)切酶切取目的基因B、用逆轉(zhuǎn)錄酶制備cDNA（又稱cDNA法）C、化學(xué)合成目的基因李殼縷您希冀服凡印粕經(jīng)奔譽埂仇鷗駕壟鐳俺插爬喜剝桿膏釋杭為乃堆寅第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 用來分離原核基因的方法。獲取的基因是染色體DNA。 破碎細(xì)胞分離染色體限制性內(nèi)切酶作用目的基因限制性內(nèi)切酶切取目的基因 用來分離真核基因的方法。以目的基因的mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成互補DNA（cDAN）。用逆轉(zhuǎn)錄酶制備cDNA（又稱cDNA法）莽籽牟匣桌據(jù)卿擬追限沈騎坎辜艙痹迂唁誹攏樹司篡苔窮脈壇價茂讀瘴甘第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備化學(xué)合成目的基因 利用磷酸二

40、酯法、磷酸三酯法等方法合成。化學(xué)合成的先決條件是必須要知道DNA的堿基順序。此法一般只能合成較短的多肽激素基因。世界上第一個人工化學(xué)合成并表達的基因是生長素釋放抑制素基因。柬犧誼囊祥揍飯?zhí)槊睜q超燕歡工棘巢譚諄毅諷靳爹缸練僚詣消境專謄鋪高第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 在獲取目的基因后，應(yīng)首先考慮所得基因是否是所需要的目的基因。凝膠電泳及酶切圖譜測定核酸雜交DNA序列測定（3）目的基因的鑒定穗柄荷蚤罪援棒裸曉薩嚎挎嶼艱滓候吞荷莆幀漏霄貝法傘顏一爛考蔡瘡先第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備常用的載體有：細(xì)菌質(zhì)粒 質(zhì)粒是一些細(xì)菌的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，是存在于多種細(xì)菌染色體外的遺傳單位。是一類

41、雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，分子量約1-200kb。質(zhì)粒DNA分子可以游離存在于染色體外，在一定條件下又會可逆地整合到寄主染色體上，隨著染色體的復(fù)制而復(fù)制，并通過細(xì)胞分裂遺傳給后代。作為載體，質(zhì)粒可以接納中等大小的DNA片斷，如小于10kb的DNA；如果大于10kb的DNA插入質(zhì)粒，將大大降低重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)量。2、重組載體的選擇與制備圈烙桑毒百鹵畔肅確疊題八摻憊姥泳濟箕修鄰巖毆訊氧擾殷瓣索柄苗遵有第二章生物制品的制備第二章生物制品的制備 pBR322質(zhì)粒來源：pSF2124質(zhì)粒的氨卞青霉素抗性基因（Apr）；pSC101質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因（Tcr）；ColE的派生質(zhì)粒的復(fù)制起點（ori）。在Apr基因中有一個Pst切點， Tcr基因中有一個BamH和一個Sal切點。pBR322AprT