植物組織過氧化氫含量的測定

1、配制 100ml 、 100umol/L 的過氧化氫溶液需要多少 30%的過氧化氫原液？請寫出計算過程。 答：首先計算其摩爾濃度：假設(shè) 30%為其質(zhì)量百分?jǐn)?shù)雙氧水 30%濃度的試劑上海國藥集團(tuán)出品 ，室溫時實(shí) 測密度為： 1,122 g/L ，所以， 1L 30%含量的雙氧水中過氧化 氫含量為：1122g/L XLX30%=337g又H2O2的分子量為，那么1L 30%含量的雙氧水中過氧化氫 濃度為： 337/34.0146=9.908 mol/L .100ml x 10-3 x 100 umol/L x 10-6 mol/L x VV=10-6L=1 ul假設(shè) 30%為體積分?jǐn)?shù)100% H2

2、O2 密度是 1,440 g/L, 30 ml H 2O2 的質(zhì)量為 1440 g/L X0 ml X0-3=43.2g，30%含量的雙氧水中過氧化氫濃度 為： = mol/L .100ml x 10-3 x 100 umol/L x 10-6 mol/L x Vx 10-7 ul植物組織中過氧化氫含量測定植物在逆境下或衰老時，由于體內(nèi)活性氧代謝加強(qiáng)而使H2O2發(fā)生累積。H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害， 從而加速細(xì)胞的衰老和解體。過氧化氫酶可以去除H2O2,是植物體內(nèi)重要的酶促防御系統(tǒng)之一。因此，植物組織中H2O2含量和過氧化氫酶活性與植物的抗逆

3、性密切相 關(guān)。本實(shí)驗(yàn)用分光光度法測定過氧化氫含量，利用高錳酸鉀滴定法和紫外吸收法測 定過氧化氫酶活性。【原理】H2O2與硫酸鈦或氯化鈦生成過氧化物一鈦復(fù)合物黃色沉淀，可被H2 SO4溶解后，在415nm波長下比色測定。在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與H2O2濃度呈線性關(guān)系?！緝x器和用具】研缽；移液管X 2支，5ml X 1支；容量瓶10ml X 7個，離心管5ml X 8支；離 心機(jī)；分光光度計?！驹噭?00 mol/L H 2O2丙酮試劑：取30%分析純H2O2 57卩I,溶于100ml，再稀釋100 倍；2mol/L硫酸；5%W/V丨硫酸鈦；丙酮；濃氨水。【方法】1制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：取10ml離心

4、管7支，順序編號，并按表參加試劑。測定H2O2濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線配置表試劑ml離心管號1234567100 g mol/L H 2O204'C下預(yù)冷丙酮05%硫酸鈦濃氨水3000r/min 離心 10min，棄去上清夜，留沉淀2mol硫酸待沉淀完全溶解后，將其小心轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中，并用蒸餾水少量屢次沖洗離心管， 將洗滌液合并后定容至10ml刻度，415nm波長下比色。2樣品提取和測定：1稱取新鮮植物組織 2g，按材料與提取劑 1 : 1的比例加 入4 C下預(yù)冷的丙酮和少許石英砂研磨成勻漿后，轉(zhuǎn)入離心管3000 r/min下離心10min，棄去殘?jiān)?，上清液即為樣品提取液?用移液管吸取樣品

5、提取液1ml，按表1參加5%硫酸鈦和濃氨水，待沉淀形成后5000rpm/min離心10min，棄去上清液。沉淀用丙酮反復(fù)洗滌 35次，直到去除植物色素。3向洗滌后的沉淀中參加2mol硫酸5ml，待完全溶解后，與標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的方法定容并比色。3結(jié)果計算：C Vt植物組織中H2O2含量卩mol/g Fw= FW Vi式中 C標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品中H2O2濃度卩mol;Vt樣品提取液總體積ml；Vi測定時用樣品提取液體積 ml； FW 植物組織鮮重g。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1234567H2O2濃度0吸光度A0615578得出標(biāo)準(zhǔn)曲線如以下圖:過氧化氫與吸光值關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線值光吸9876543210.20.40.60.81.2y = 0.7643xR2 = 0.9942100umol/L過氧化氫量體積ml測定所得樣品的吸光度為，帶入得，考慮到稱取鮮重g代入公式含