自身抗體的檢測(cè)

1、精選課件精選課件精選課件精選課件抗核抗體（抗核抗體（ANA）的檢測(cè)與臨床應(yīng)用）的檢測(cè)與臨床應(yīng)用 抗核抗體的定義抗核抗體的定義 傳統(tǒng)定義：傳統(tǒng)定義：針對(duì)細(xì)胞核成分抗原總稱。 廣義定義：廣義定義：針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對(duì)ANA的理解不再局限于核成份，而是指核質(zhì)和核蛋白的總稱。精選課件精選課件ANA測(cè)定原理和方法：測(cè)定原理和方法：間接免疫熒光法間接免疫熒光法（IIF):現(xiàn)多以現(xiàn)多以Hep-2細(xì)胞（人喉細(xì)胞（人喉癌上皮細(xì)胞）為底物（癌上皮細(xì)胞）為底物（Ag)，其以核質(zhì)豐富而極，其以核質(zhì)豐富而極大地提高了大地提高了ANA檢測(cè)的陽(yáng)性率和滴度。檢測(cè)的陽(yáng)性率和滴度。 是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（是系統(tǒng)

2、性紅斑狼瘡（SLE）的）的標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗(yàn)。 我們實(shí)驗(yàn)室采用歐蒙熒光檢測(cè)系統(tǒng)，將我們實(shí)驗(yàn)室采用歐蒙熒光檢測(cè)系統(tǒng)，將1:1001:100作作為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的1:1001:100陽(yáng)性，只能視為一個(gè)臨界可疑值，臨床意義不大。陽(yáng)性，只能視為一個(gè)臨界可疑值，臨床意義不大。ANAANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗(yàn)必須作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗(yàn)必須強(qiáng)調(diào)高滴度。強(qiáng)調(diào)高滴度。精選課件精選課件ANA的靶抗原分布的靶抗原分布 整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等。蛋

3、白等。精選課件精選課件ANA檢測(cè)的臨床意義檢測(cè)的臨床意義 ANA可見(jiàn)于多種自身免疫性疾病，可見(jiàn)于多種自身免疫性疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織疾病的診斷，病情判斷和療效組織疾病的診斷，病情判斷和療效觀察的指標(biāo)觀察的指標(biāo)精選課件精選課件 已證實(shí)已證實(shí)ANA對(duì)很多自身免疫性疾病有對(duì)很多自身免疫性疾病有診斷價(jià)值。診斷價(jià)值。ANA的靶抗原為細(xì)胞核內(nèi)的不的靶抗原為細(xì)胞核內(nèi)的不同生化成份，包括核酸、細(xì)胞核蛋白和核同生化成份，包括核酸、細(xì)胞核蛋白和核糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風(fēng)濕性糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風(fēng)濕性疾病，其抗體譜有一定的特意性。在炎癥疾病，其抗體譜

4、有一定的特意性。在炎癥性風(fēng)濕病中性風(fēng)濕病中ANA陽(yáng)性率在陽(yáng)性率在20%-100%之間，之間，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中ANA陽(yáng)性率最低，陽(yáng)性率最低，為為20%-40%。所以，檢測(cè)。所以，檢測(cè)ANA對(duì)于不同類對(duì)于不同類型風(fēng)濕病意義重大。型風(fēng)濕病意義重大。精選課件精選課件 SLE活動(dòng)性：占95%-100%， 非活動(dòng)性：占80%-100%。 （2）藥物誘導(dǎo)的SLE：占100%。 （3）混合性結(jié)締組織疾病：占100%。 （4）其它風(fēng)濕性疾病：占20%-50% （5）進(jìn)行性系統(tǒng)硬化癥：占85%-95%。 （ 6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。 （7）干燥綜合征：占70%-80%。 （8

5、）慢性活動(dòng)性肝炎：占30%-40%。 （9）潰瘍性結(jié)腸炎：占26%。 常見(jiàn)疾病常見(jiàn)疾病精選課件精選課件 其它其它 還可見(jiàn)于：還可見(jiàn)于： 非結(jié)締組織疾病中也可非結(jié)締組織疾病中也可出現(xiàn)陽(yáng)性；正常人（特別是老年人）也出現(xiàn)陽(yáng)性；正常人（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽(yáng)性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為可出現(xiàn)陽(yáng)性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型；高滴度型；高滴度ANA則高度提示自身免則高度提示自身免疫性疾病。疫性疾病。精選課件精選課件ANA（）的原因（）的原因風(fēng)濕性疾病風(fēng)濕性疾病SLE多發(fā)性肌炎多發(fā)性肌炎干燥綜合征干燥綜合征硬皮病硬皮病血管炎血管炎R(shí)A正常的健康人正常的健康人女性男性，出現(xiàn)率女性男性，出現(xiàn)率隨年齡而增加

6、隨年齡而增加風(fēng)濕性疾病患者親屬風(fēng)濕性疾病患者親屬？孕婦？孕婦藥物誘導(dǎo)藥物誘導(dǎo)慢性肝臟疾病慢性肝臟疾病慢性肺部疾病慢性肺部疾病慢性感染慢性感染血液系統(tǒng)異常血液系統(tǒng)異常惡性腫瘤惡性腫瘤精選課件精選課件SLE患者使用患者使用IIF法測(cè)定法測(cè)定ANA陰性的一些解釋陰性的一些解釋 技術(shù)方面技術(shù)方面臨床方面臨床方面經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療。治療。終末期終末期腎病。腎病。隱蔽隱蔽ANA：與循環(huán)中免疫復(fù)合物結(jié)合，：與循環(huán)中免疫復(fù)合物結(jié)合，沉積沉積于組于組織。織。由于大量由于大量蛋白尿蛋白尿而從腎臟丟失。而從腎臟丟失。精選課件精選課件ANA的熒光染色型別的熒光染色型別細(xì)胞核：細(xì)胞核：核均

7、質(zhì)型（核均質(zhì)型（DNA、組蛋白和核小體等）、組蛋白和核小體等） 核顆粒型（核顆粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和和型周期蛋白）型周期蛋白） 核膜型（板層素、核膜型（板層素、gp120等）等） 核仁型（核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纖維蛋白等）多聚酶、原纖維蛋白等） 核漿點(diǎn)型（著絲點(diǎn)、核多點(diǎn)及核少點(diǎn)型）核漿點(diǎn)型（著絲點(diǎn)、核多點(diǎn)及核少點(diǎn)型）細(xì)胞漿：細(xì)胞漿：胞漿顆粒型（線粒體、胞漿顆粒型（線粒體、Jo-1、核糖體等）、核糖體等）胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白等胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白等分裂期細(xì)胞陽(yáng)性：分裂期細(xì)胞陽(yáng)性：紡垂體、中間體

8、、中心體等紡垂體、中間體、中心體等根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分類如下：根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分類如下：精選課件精選課件ANA篩查的方法篩查的方法間接免疫熒光法（間接免疫熒光法（IIF）基質(zhì)組合為：基質(zhì)組合為：HEP-2細(xì)胞細(xì)胞 + 靈長(zhǎng)類肝靈長(zhǎng)類肝（猴）（猴） 精選課件精選課件核顆粒型：核粗顆粒型核顆粒型：核粗顆粒型精選課件精選課件抗核抗體染色類型 核仁型核仁型（nucleolar）精選課件精選課件均質(zhì)性均質(zhì)性 （ homogeneous ）精選課件精選課件ANA的的 熒光類型熒光類型 ANA試驗(yàn)的結(jié)果中一般會(huì)報(bào)告其分型，這些分型可能與某一特定的抗原反應(yīng)活性相關(guān)。分型分

9、型 相關(guān)疾病相關(guān)疾病 核仁型核仁型硬皮病硬皮病著絲點(diǎn)型著絲點(diǎn)型CREST綜合征綜合征周邊型周邊型SLE斑點(diǎn)型斑點(diǎn)型/彌散型彌散型混合性結(jié)締組織混合性結(jié)締組織?。ú。∕CTD）精選課件精選課件抗雙鏈抗雙鏈DNA抗體（抗體（ds-DNA）的檢測(cè)與臨床應(yīng)用的檢測(cè)與臨床應(yīng)用 精選課件精選課件檢測(cè)：測(cè)定抗檢測(cè)：測(cè)定抗ds-DNA以血鞭毛蟲(chóng)屬的綠以血鞭毛蟲(chóng)屬的綠螢短膜蟲(chóng)為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用螢短膜蟲(chóng)為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用HEp-2細(xì)胞及靈長(zhǎng)類肝組織檢測(cè)。細(xì)胞及靈長(zhǎng)類肝組織檢測(cè)。 自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上。精選課件精選課件抗dsDNA抗體熒光模式：綠蠅短膜蟲(chóng)：動(dòng)基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強(qiáng)的熒

10、光。Hep-2細(xì)胞：細(xì)胞核的均質(zhì)型熒光。精選課件精選課件臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 抗雙鏈抗雙鏈DNA抗體（抗體（ds-DNA）是系統(tǒng)性紅）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，其陽(yáng)性率因檢測(cè)方法而斑狼瘡的特異性抗體，其陽(yáng)性率因檢測(cè)方法而異，在異，在40-90%。但抗。但抗ds-DNA陰性并不能排除陰性并不能排除患有患有SLE的可能性?？沟目赡苄?。抗ds-DNA抗體具有預(yù)測(cè)抗體具有預(yù)測(cè)價(jià)值，價(jià)值，85%的出現(xiàn)抗的出現(xiàn)抗ds-DNA抗體的健康人在抗體的健康人在五年內(nèi)發(fā)展為五年內(nèi)發(fā)展為SLE。已證實(shí)抗。已證實(shí)抗ds-DNA抗體參抗體參與與SLE的病理過(guò)程，在疾病形成過(guò)程中，抗的病理過(guò)程，在疾病形成過(guò)程中，抗ds-D

11、NA和其抗體形成的免疫復(fù)合物沉積在皮和其抗體形成的免疫復(fù)合物沉積在皮下毛細(xì)血管、腎和其他器官內(nèi)，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，下毛細(xì)血管、腎和其他器官內(nèi)，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，從而導(dǎo)致組織損傷。從而導(dǎo)致組織損傷。 精選課件精選課件 抗體水平與疾病活動(dòng)度相關(guān)，隨著疾抗體水平與疾病活動(dòng)度相關(guān)，隨著疾病活動(dòng)的控制，抗病活動(dòng)的控制，抗ds-DNA抗體滴度可以抗體滴度可以下降或消失。下降或消失。 精選課件精選課件 ANA ANA譜譜3 3檢測(cè)及臨床應(yīng)用檢測(cè)及臨床應(yīng)用精選課件精選課件抗RNP/Sm抗體熒光模式：Hep-2片：細(xì)胞核粗顆粒，核仁陰性。肝組織切片：同上。熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體Sm。精選課件精選課件抗RNP/Sm

12、抗體自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成，RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。臨床意義：高滴度的抗RNP抗體為 混合結(jié)締組織病（MCTD）的特征，發(fā)生率為95100%。也可出現(xiàn)于SLE，但總是與抗Sm抗體同時(shí)出現(xiàn)?？筍m抗體對(duì)SLE具有高度特異性，發(fā)生率為2040%。精選課件精選課件抗SSASSB抗體熒光模式Hep-2片：細(xì)胞核呈細(xì)顆粒熒光，核仁不發(fā)光。肝組織片：細(xì)顆粒熒光。精選課件精選課件抗SSASSB抗體自身抗原：SSA抗原是一個(gè)小核糖核蛋白，由一個(gè)RNA分子和兩種不同的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)的分子量為52KD和60KD?？贵w直接針對(duì)

13、蛋白質(zhì)的抗原決定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。臨床意義；最常見(jiàn)于干燥綜合征（SS）,也見(jiàn)于SLE、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC），偶見(jiàn)于慢活肝。抗SSA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。精選課件精選課件核仁陽(yáng)性(Nucleolar)核仁熒光增強(qiáng)，核漿均質(zhì)型-Scl-70抗體。 核仁均質(zhì)型-PM-Scl及其他抗原抗體。核仁細(xì)顆粒型-原纖維蛋白抗體。核仁粗顆粒型-RNA多聚酶-1抗體。精選課件精選課件抗Scl-70抗體熒光模式：Hep-2片：細(xì)胞核幾乎均質(zhì)的熒光，核仁熒光加強(qiáng)而且也為均質(zhì)型，胞漿無(wú)熒光。肝組織片；細(xì)胞核顆粒或均質(zhì)型熒光，常見(jiàn)到細(xì)胞核熒光。精選課件精選課件抗S

14、cl-70抗體自身抗原：為DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶1，分子量為100KD。在DNA雙鏈的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中起作用。臨床意義：2570%的系統(tǒng)性硬化癥（PSS）彌漫型患者陽(yáng)性，局限型硬皮病患者陰性。精選課件精選課件細(xì)胞漿陽(yáng)性胞漿均質(zhì)型-抗核糖體抗體 細(xì)顆粒-抗Jo-1抗體 胞漿顆粒型 粗顆粒-AMA抗體 滴狀點(diǎn)狀-溶酶體抗體 核周顆粒-高爾基體抗體胞漿纖維型 細(xì)纖維-波形蛋白抗體 環(huán)狀纖維-原肌球蛋白抗體 針狀纖維-肌動(dòng)蛋白抗體精選課件精選課件抗核糖體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿細(xì)顆粒到均質(zhì)狀、非常致密的熒光 。肝組織片：島狀熒光。臨床意義：SLE的特異性抗體，與精神癥狀有關(guān)。精選課件精選課件抗Jo-1抗體

15、熒光模式：Hep-2：胞漿顆粒到細(xì)塊狀熒光。肝組織片：胞漿中弱熒光。自身抗原：組氨酰tRNA合成酶。臨床意義：見(jiàn)于PM，發(fā)生率2535%。精選課件精選課件抗線粒體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿內(nèi)粗的顆粒型熒光。大鼠腎組織切片：腎小管明顯熒光，腎小球熒光較弱。精選課件精選課件抗線粒體抗體自身抗原：位于真核細(xì)胞線粒體膜的內(nèi)面。線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復(fù)合體的亞單位，為一組自身抗原，其中與PBC有關(guān)的包括：（1）丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC）（2）支鏈2-氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC）精選課件精選課件抗線粒體抗體臨床意義：AMA-M2對(duì)PBC具有診斷意

16、義。AMA亞型與疾病的相關(guān)性：AMA-1：梅毒、干燥綜合征AMA-2：PBCAMA-3：藥物性紅斑狼瘡AMA-4：PBC與AIH重疊AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎AMA -9：藥物性肝炎AMA-10：SLE精選課件精選課件分裂期細(xì)胞陽(yáng)性染色體陽(yáng)性-染色體相關(guān)抗體，相關(guān)疾??？紡錘體纖維陽(yáng)性-紡錘體纖維抗體，如燕麥細(xì)胞型支氣管肺癌中間體陽(yáng)性-中間體抗體，相關(guān)疾??？細(xì)胞兩極陽(yáng)性-中心?？贵w，相關(guān)疾?。恐z點(diǎn)陽(yáng)性-抗著絲點(diǎn)抗體精選課件精選課件抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)熒光模式：Hep-2：細(xì)胞核細(xì)的、相同大

17、小的顆粒熒光，分裂期顆粒熒光帶狀位于細(xì)胞中間。肝組織片：分布于細(xì)胞核的1020個(gè)顆粒，熒光弱，易被忽略。精選課件精選課件抗著絲點(diǎn)抗體自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質(zhì)：著絲點(diǎn)蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點(diǎn)蛋白B。臨床意義：對(duì)進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥亞型（CREST綜合征）有診斷意義。陽(yáng)性率8095%。還可見(jiàn)于PBC、SS等。精選課件精選課件器官/組織特異性自身抗體抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）抗平滑肌抗體抗角蛋白抗體抗肝腎微粒體抗體抗肝細(xì)胞膜抗原抗體抗可溶性肝抗原抗體抗肝特異性蛋白抗體精選課件精選課件抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型）cANCA熒光模式：猴肝：肝血竇區(qū)粒細(xì)胞強(qiáng)熒光，而肝細(xì)胞陰性。甲

18、醛固定的中性粒細(xì)胞：胞漿內(nèi)粗大到細(xì)的熒光顆粒。精選課件精選課件抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型）自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒中。臨床意義：cANCA可見(jiàn)于多種系統(tǒng)性血管炎。主要見(jiàn)于Wengeners肉芽腫，約占ANCA陽(yáng)性率的8095%。cANCA被認(rèn)為是活動(dòng)性Wengeners肉芽腫和微多動(dòng)脈炎的特異和敏感的標(biāo)志性抗體。還見(jiàn)于Churg-Strauss綜合征。精選課件精選課件抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）pANCA熒光模式：乙醇固定的中性粒細(xì)胞：細(xì)胞核周圍平滑的帶狀熒光，細(xì)胞核陰性。猴肝：肝血竇區(qū)粒細(xì)胞強(qiáng)熒光，而肝細(xì)胞陰性。精選課件精選課件抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）自身抗原：主要抗原為髓過(guò)氧化物酶（MPO），其他抗原還有白細(xì)胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶菌酶及乳鐵蛋白等。臨床意義：見(jiàn)于多種系統(tǒng)性血管炎?？梢?jiàn)于Wengeners肉芽腫、微多動(dòng)脈炎、Churg-Strauss綜合征、炎性腸病、自免肝、系統(tǒng)性風(fēng)濕病（RA、SLE、SS、PM/DM）。精選課件精選課件抗平滑肌抗體（SMA）熒光模式：大鼠胃組織，呈現(xiàn)肌膜、黏膜肌層和肌膜腺體間收縮纖維的明顯細(xì)胞漿熒光 。大鼠腎組織，腎小管細(xì)胞內(nèi)原纖維、腎小球膜細(xì)胞及血管肌層的熒光。精選課件精