高二生物微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)上

1、高二生物微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)上本節(jié)學(xué)習(xí)目標(biāo) 1 了解了解 2 培養(yǎng)基的種類和成分培養(yǎng)基的種類和成分 3 無菌技術(shù)無菌技術(shù)消毒和滅菌的區(qū)別和方法消毒和滅菌的區(qū)別和方法 4 牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備過程牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備過程 5 分離細(xì)菌方法：純化大腸桿菌分離細(xì)菌方法：純化大腸桿菌是一切肉眼看不見或看不清楚的微小是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。生物的總稱。一、微生物一、微生物微生物微生物病毒病毒細(xì)菌細(xì)菌放線菌放線菌真菌真菌原生動(dòng)物原生動(dòng)物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不見或看不清楚的微小是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。

2、生物的總稱。一、微生物一、微生物 1.1.分類分類特點(diǎn)：小特點(diǎn)：小 簡簡 低低微生物微生物病毒病毒細(xì)菌細(xì)菌放線菌放線菌真菌真菌原生動(dòng)物原生動(dòng)物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。物的總稱。 1.1.分類分類一、微生物一、微生物病病毒毒的的結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu) 2.2.病毒病毒病病 毒毒 SARS冠狀病毒、冠狀病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）病毒的增殖病毒的增殖細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌的外形與大小 3.3.細(xì)菌細(xì)菌 A. A. 球菌球菌 B. B. 桿菌桿菌 C. C.

3、弧菌弧菌 常見的細(xì)菌三種典型形態(tài)常見的細(xì)菌三種典型形態(tài)ABC細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu)芽孢：芽孢：細(xì)菌形成的橢圓形的休眠體細(xì)菌形成的橢圓形的休眠體芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。異養(yǎng)菌：異養(yǎng)菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌細(xì)菌的營養(yǎng)類型細(xì)菌的營養(yǎng)類型根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和

4、碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌：自養(yǎng)菌：異養(yǎng)菌：異養(yǎng)菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌細(xì)菌的營養(yǎng)類型細(xì)菌的營養(yǎng)類型光能自養(yǎng)型：光合細(xì)菌光能自養(yǎng)型：光合細(xì)菌根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌：自養(yǎng)菌：異養(yǎng)菌：異養(yǎng)菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌光能自養(yǎng)型：光合細(xì)菌光能自養(yǎng)型：光合細(xì)菌化能自養(yǎng)型：硝化細(xì)菌，鐵細(xì)菌，硫細(xì)菌化能自養(yǎng)型：硝化細(xì)菌，鐵細(xì)菌，硫細(xì)菌細(xì)菌的營養(yǎng)類型細(xì)菌的營養(yǎng)類型根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，根據(jù)細(xì)菌所利用的

5、能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌：自養(yǎng)菌：菌菌落落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。重要依據(jù)。細(xì)菌的細(xì)菌的菌落特菌落特征因種征因種而異而異 菌落菌落 4.4.放線菌放線菌結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)：單細(xì)胞原核生物單細(xì)胞原核生物分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）（2）繁殖）繁殖孢孢子子絲絲|孢孢子子鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉

6、素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產(chǎn)生的是由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: 5.5.真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生生 殖殖腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖 6.6.營養(yǎng)及功能營養(yǎng)及功能微生物化學(xué)元素組成：微生物化學(xué)元素組成： 6.6.營養(yǎng)及功能營養(yǎng)及功能C、H、O、N、P、S微生物化學(xué)元素組成：微生物化學(xué)元素組成： 6.6.營養(yǎng)及功能營養(yǎng)及功能C、H、O、N、P、S五大營養(yǎng)物質(zhì)五大營養(yǎng)物質(zhì)碳源碳源氮源氮源生長因子生長因子水水無機(jī)鹽無機(jī)鹽微生物化學(xué)元素組成：微生物

7、化學(xué)元素組成：二、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。殖使用的混合營養(yǎng)液。 （1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。 （2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。養(yǎng)基。 （3）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 1.1.培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的類型固體培養(yǎng)基：菌落固體培養(yǎng)基：菌落液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀

8、生長半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基： 2.不同的微生物往往需要采用不不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方同的培養(yǎng)基配方 2.不同的微生物往往需要采用不不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方同的培養(yǎng)基配方 3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、碳源、和氮源、 無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)提供的主要營養(yǎng)牛肉膏牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生

9、素碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨蛋白胨10g氮源和維生素氮源和維生素NaCl 5g無機(jī)鹽無機(jī)鹽H2O定容在定容在1000mL氫元素、氧元素氫元素、氧元素 4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途 4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌、工業(yè)生產(chǎn)液體培養(yǎng)基：增菌、工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基：純化（分離），固體培養(yǎng)基：純化（分離），鑒定、活菌計(jì)數(shù)、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種保藏菌種半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基物理狀態(tài)物理狀態(tài)0101培養(yǎng)基種類工業(yè)生產(chǎn)、連續(xù)培養(yǎng)工業(yè)生產(chǎn)、連續(xù)培養(yǎng)菌種分離、鑒定、計(jì)數(shù)菌種分離、鑒定、計(jì)數(shù)菌種保存菌種保存培養(yǎng)基種類02

10、02鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基目的用途目的用途0303添加某種指示劑后化學(xué)藥劑用于菌種的鑒別添加某種指示劑后化學(xué)藥劑用于菌種的鑒別伊紅伊紅美藍(lán)鑒別大腸桿菌為深紫紅色帶金屬美藍(lán)鑒別大腸桿菌為深紫紅色帶金屬光澤的菌落光澤的菌落,表面濕潤光滑表面濕潤光滑,菌落較大菌落較大,有典型有典型的濃郁酸敗氣味的濃郁酸敗氣味添加或缺少某種化學(xué)成分用于菌種的分離添加或缺少某種化學(xué)成分用于菌種的分離1：加抗生素，用于分離真核生物和原核生物：加抗生素，用于分離真核生物和原核生物2：加高濃度的食鹽獲取金黃色葡萄球菌：加高濃度的食鹽獲取金黃色葡萄球菌3：缺：缺N源，分離固氮微生物源，分離固氮微生物4：缺少有

11、機(jī)：缺少有機(jī)C源，分離自養(yǎng)型微生物源，分離自養(yǎng)型微生物三、無菌技術(shù)三、無菌技術(shù)三、無菌技術(shù)三、無菌技術(shù)1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法操作中，所有防止雜菌污染的方法。1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法操作中，所有防止雜菌污染的方法。成功地培養(yǎng)微生物的關(guān)鍵。成功地培養(yǎng)微生物的關(guān)鍵。 三、無菌技術(shù)三、無菌技術(shù)（1）消毒定義：）消毒定義：2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2）滅菌的定義：）滅菌的定義： 2.

12、 無菌技術(shù)(1)消毒和滅菌的區(qū)別條件結(jié)果常用的方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌滅菌和消毒滅菌和消毒無菌技術(shù)無菌技術(shù)1、對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒、對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒2、將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌、將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌3、為避免周圍微生物污染、實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行、為避免周圍微生物污染、實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火

13、焰旁進(jìn)行4、避免已滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸、避免已滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸消毒方法消毒方法1、日常生活經(jīng)常用到的是煮沸消毒法、日常生活經(jīng)常用到的是煮沸消毒法2、對一些不耐高溫的液體，使用巴氏消毒法（、對一些不耐高溫的液體，使用巴氏消毒法（80中中15min或或70 中中30min，實(shí)際生產(chǎn)中常用于鮮奶的消毒），實(shí)際生產(chǎn)中常用于鮮奶的消毒）3、對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑碳酸和煤酚皂等溶液以增強(qiáng)、對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑碳酸和煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后用紫外線進(jìn)行物理消毒消毒效果，然后用紫外線進(jìn)行物理消毒4、雙手使用酒精進(jìn)行消毒、雙手使用酒精進(jìn)行

14、消毒（1）消毒定義：）消毒定義：2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2）滅菌的定義：）滅菌的定義：3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法滅菌的方法：滅菌的方法：1.灼燒滅菌灼燒滅菌滅菌的方法：滅菌的方法：1.灼燒滅菌灼燒滅菌滅菌的方法：滅菌的方法：2. 干熱滅菌：干熱滅菌：160-170 下加熱下加熱1-2h。3. 高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌100kPa、121 下維下維持持15-30min. 1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？還有什么目的？旁欄思考旁欄思考

15、1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？還有什么目的？ 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。自身被微生物感染。旁欄思考旁欄思考 2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 2.請你判斷以下材料或用具是否需

16、要請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：（答：（1 1）、（）、（2 2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是()化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法A BC D微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1. 1. 器具的滅菌

17、器具的滅菌2. 2. 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制3. 3. 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌4. 4. 倒平板倒平板5. 5. 微生物接種微生物接種6. 6. 恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)7. 7. 菌種的保存菌種的保存三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作四、實(shí)驗(yàn)操作四、實(shí)驗(yàn)操作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g瓊脂瓊脂 20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加自來水，定將上述物質(zhì)溶解后，添加自來水，定容至容至1000mL1計(jì)算、計(jì)算、2 稱量稱量3 溶化溶化調(diào)調(diào)pH4滅菌（滅菌（1）分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾分裝：分裝過程中注意不要使培

18、養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。（燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。（2）加）加塞塞上棉花塞，塞塞上棉花塞， （3）包扎包上牛皮紙（）包扎包上牛皮紙（4）放入高）放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為、溫度為121，滅菌滅菌1530min。（。（5）將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放）將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在入干熱滅菌箱內(nèi)，在160170 下滅菌下滅菌2h。5倒平板倒平板操作步驟操作步驟倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)1.將滅過菌的培將滅過菌的培養(yǎng)皿放

19、在火焰養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，旁的桌面上，右手拿裝有培右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉，左手撥出棉塞。塞。1234倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)2.右手拿錐形瓶右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通，使瓶口迅速通過火焰。過火焰。1234倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)1234倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)12344.等待平板冷卻等待平板冷卻凝固，大約需凝固，大約需510min。然后。然后，將平板倒過來，將平板倒過來放置，使皿蓋在放置，使皿蓋在下，皿底在上。下，皿底在上。倒平板倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 左右時(shí)，在酒精左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀

20、察平板，無雜菌污染才可用來接種后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種. 無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)的溫室中培養(yǎng)2448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？培養(yǎng)基的溫度？問題討論問題討論 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)

21、基的錐形答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。，就可以進(jìn)行倒平板了。問題討論問題討論 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？過火焰？ 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水答：平板冷凝后

22、，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 4.在倒平板的過程中，如果不小心將在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 4.在倒平板的過程中，如果不小心將在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底

23、之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：空氣中的微生物可能在皿蓋答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。四、分離細(xì)菌方法四、分離細(xì)菌方法2、稀釋涂布平板分離、稀釋涂布平板分離法法1、平、平 板劃線分離法板劃線分離法 1、平、平 板劃線分離法板劃線分離法1為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染；每次劃線前灼燒接種環(huán)

24、是為了殺死上次劃線后殘留在接種環(huán)上的菌種，劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 2在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？ 答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3在做第二次劃線以及其后劃線操作時(shí)為什么部是從上一次劃線 的末端開始劃 線？ 使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使菌種的數(shù)目逐漸減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。2、涂布分離法、涂布分離法2、涂布分離法、涂布分離法稀釋涂布涂布平板分離法是涂布平板分離法是樣品經(jīng)過適當(dāng)稀釋樣品經(jīng)過適當(dāng)稀釋后，用無菌玻璃涂后，用無菌玻璃涂棒取稀釋液均勻地棒取稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)皿的瓊涂布在培養(yǎng)皿的瓊脂平板表面，培養(yǎng)脂平板表面，培養(yǎng)后挑取單菌落。后挑取單菌落。2、培養(yǎng)：在、培養(yǎng)：在LB液體培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)液體培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)五、大腸桿菌的培養(yǎng)