實驗九孚爾根（Feulgen）核反應染色法

1、實驗九實驗九 孚爾根孚爾根（FeulgenFeulgen）核反應染色法核反應染色法o一、實驗目的一、實驗目的 1 1、學習孚爾根核反應染色法，鑒、學習孚爾根核反應染色法，鑒定染色體、定染色體、DNADNA的存在。的存在。 2 2、探究水解時間及溫度對孚爾根、探究水解時間及溫度對孚爾根核反應的影響。核反應的影響。 二、實驗原理二、實驗原理o 堿性品紅原呈品紅色，當與亞硫酸作用時還原，使堿性品紅原呈品紅色，當與亞硫酸作用時還原，使醌型結構變?yōu)楸叫徒Y構，由品紅色變?yōu)闊o色透明的醌型結構變?yōu)楸叫徒Y構，由品紅色變?yōu)闊o色透明的亞硫酸品紅堿亞硫酸品紅堿( (即即SchiffSchiff試劑試劑) )，當它與醛

2、基作用時，當它與醛基作用時，其分子式又恢復為醌型結構，呈現(xiàn)紫紅色。其分子式又恢復為醌型結構，呈現(xiàn)紫紅色。o 水解時水解時DNADNA中嘌呤堿基與去氧核糖之間的糖苷鍵打中嘌呤堿基與去氧核糖之間的糖苷鍵打斷，使嘌呤脫下，并使去氧核糖斷，使嘌呤脫下，并使去氧核糖C-1C-1位置釋放醛基位置釋放醛基與席夫試劑反應顯紫紅色。細胞中只有與席夫試劑反應顯紫紅色。細胞中只有DNADNA才具有才具有這種專一反應，因此可鑒定這種專一反應，因此可鑒定DNADNA的存在。的存在。 三三 、實驗方法和步驟、實驗方法和步驟o （一）材料準備（一）材料準備 取一洋蔥鱗莖，置于盛滿水的小燒杯取一洋蔥鱗莖，置于盛滿水的小燒杯上

3、使其長出新根。待根尖長上使其長出新根。待根尖長2cm 2cm 時，于時，于上午上午8 8時剪下根尖進行預處理、固定、保時剪下根尖進行預處理、固定、保存（請參考實驗一）。存（請參考實驗一）。 （二）水解（二）水解 取準備好的洋蔥根尖，裝到青霉素瓶中，水洗三取準備好的洋蔥根尖，裝到青霉素瓶中，水洗三次，換次，換1M HCl1M HCl洗一次，傾去，換入預熱洗一次，傾去，換入預熱6060的的1M 1M HClHCl，覆蓋樣品即可，放入恒溫水浴鍋中在，覆蓋樣品即可，放入恒溫水浴鍋中在6060下下水解水解1010分鐘，然后吸去熱分鐘，然后吸去熱1M HCl1M HCl，換入冷，換入冷1M HCl1M H

4、Cl洗洗一次，再水洗三次。一次，再水洗三次。 水解是本實驗成敗的關鍵。重要的是溫度和時間。水解是本實驗成敗的關鍵。重要的是溫度和時間。如果溫度過高或時間過長，造成水解過度，核糖與如果溫度過高或時間過長，造成水解過度，核糖與醛基之間的鍵被破壞，醛基流失到水解液中，不能醛基之間的鍵被破壞，醛基流失到水解液中，不能呈現(xiàn)顏色反應。呈現(xiàn)顏色反應。 （三）染色（三）染色 加入適量的加入適量的SchiffSchiff試劑，避光染色試劑，避光染色3030分分鐘，然后用漂洗液漂洗鐘，然后用漂洗液漂洗2 23 3次，水洗后壓片。次，水洗后壓片。（四）壓片、鏡檢（四）壓片、鏡檢 取一根尖置于載玻片，切下取一根尖置于載玻片，切下0.3cm0.3cm生長生長區(qū)部位，加一滴亮綠液對染一分鐘，吸去亮區(qū)部位，加一滴亮綠液對染一分鐘，吸去亮綠液，加一滴清水或醋酸水溶液壓片，鏡檢，綠液，加一滴清水或醋酸水溶液壓片，鏡檢，觀察有絲分裂各個時期的染色體。觀察有絲分裂各個時期的染色體。 以小組為單位，探究溫度高低與酸水解以小組為單位，探究溫度高低與酸水解時間長短對孚爾根核反應的影響。時間長短對孚爾根核反應的影響。 實驗結束后，將探究結果報告老師并組實