高效液相色譜法測(cè)定普盧利沙星片的含量和有關(guān)物質(zhì)

1、高效液相色譜法測(cè)定普盧利沙星片的含量和有關(guān)物質(zhì)                 作者:王琦，李志峰，徐艷麗，裴月湖【摘要】 目的 采用高效液相色譜法建立普盧利沙星片有關(guān)物質(zhì)檢查及其含量測(cè)定方法。方法 Diamonsil-C18柱（4.6mm×200mm， 5m），以0.01molL三乙胺的水溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.8）-乙腈（73：27）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm；流速1.0mlmin；柱溫30；進(jìn)樣量10l。結(jié)果 制劑中

2、輔料對(duì)主藥測(cè)定無(wú)干擾，普盧利沙星與有關(guān)物質(zhì)完全分離。在10.0200.0g/ml范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。精密度（RSD=0.13%）良好。平均回收率為99.6%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便，迅速，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)?！娟P(guān)鍵詞】 普盧利沙星；片劑；高效液相色譜法；含量測(cè)定；有關(guān)物質(zhì)Determination of prulifloxacin and its related substances in tablets by HPLC【Abstract】 Objective To establish an HPLC-UV method for the determination of pruliflo

3、xacin and its related substances in tablets. Methods Diamonsil-C18 column (4.6mm×200mm， 5m) was used. The mobile phase is consisted of 0.01molLtriethylamine (pH was adjusted to 2.8 using phosphoric acid)-acetonitrile (7327). The flow rate was 1.0 mlmin with UV detection at 278nm. The column tem

4、perature was 30. The injection volume was 10l.Results The linear range for the content of prulifloxacin was 10.0200.0g/ml (r=0.9999 3，n=5). The recoveries of prulifloxacin tablets were 99.6%，and its RSDs were 0.14 %.Conclusion The method is sample， efficient，ac 【Key words】 prulifoxacin； tablets； HPL

5、C；content determination； related substances普盧利沙星是新的廣譜氟喹諾酮抗菌藥NM-394 的前體藥物，可改善口服后的胃腸吸收程度。本品對(duì)革蘭陰性菌和陽(yáng)性菌均有效，特別是對(duì)綠膿桿菌、沙雷氏菌、腸桿菌屬等革蘭陰性菌具有較強(qiáng)的抗菌力，尤其是對(duì)綠膿桿菌的抗菌活性優(yōu)于其他所有同類藥物，也超過(guò)目前上市的其他抗生素藥物。本品毒副作用小，口服吸收好，反復(fù)給藥在體內(nèi)無(wú)蓄積性。有文獻(xiàn)報(bào)道其原料和膠囊含量的高效液相測(cè)定方法1，采用其方法測(cè)定本品其分離及峰形均不理想，遂在其基礎(chǔ)上略加調(diào)整制定本法，本文采用高效液相色譜法測(cè)定普盧利沙星片劑的含量及其有關(guān)物質(zhì)，方法專屬性強(qiáng)，靈敏

6、度高，重復(fù)性好。1 儀器、試藥與實(shí)驗(yàn)樣品高效液相色譜儀(HITACHI UV-VIS Detector L-7420，Pump L-7110)；普盧利沙星對(duì)照品（純度：99.6%，歸一化法），普盧利沙星片劑：132.1mg（批號(hào)：20050801、20050802、20050803，自制 ）；乙腈為色譜純，磷酸和三乙胺為分析純，水為二次蒸餾水。2 實(shí)驗(yàn)方法2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil-C18 (4.6mm×200mm， 5m)；流動(dòng)相：0.01 mol/L三乙胺的水溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.8）-乙腈（73：27）；流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm；柱溫3

7、0；進(jìn)樣量10l。2.2 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 取流動(dòng)相10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。取處方量輔料適量和普盧利沙星片，按“2.9”項(xiàng)下操作，記錄色譜圖。另取普盧利沙星對(duì)照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相配成濃度約為100g/ml的溶液，取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。取普盧利沙星適量，分別進(jìn)行酸、堿、高溫（熱）、光照破壞處理后，各進(jìn)樣10l，色譜圖見(jiàn)圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在“2.1”項(xiàng)的色譜條件下，流動(dòng)相、輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，普盧利沙星經(jīng)酸、堿、高溫、光照破壞后，均有明顯的分解產(chǎn)物峰，但分解產(chǎn)物均與主峰有良好的分離度，不影響測(cè)定。色譜柱理論塔板數(shù)按普盧利沙星計(jì)算不得少于5000。A-空白溶液；B-對(duì)照

8、品溶液；C-片劑溶液；D-堿破壞；E-酸破壞；F-高熱破壞；G-光照破壞；1-普盧利沙星2.3 線性實(shí)驗(yàn) 精密量取對(duì)照品約25mg，置25ml棕色量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液適量，以乙腈分別稀釋至濃度為10.0、20.0、40.0、80.0、120.0、160.0、200.0g/ml的溶液，各取10l進(jìn)樣，記錄色譜圖，以濃度（C，g/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A=21549C+191，r=0.9999，可見(jiàn)在普盧利沙星10.0200.0 (此 資 料 轉(zhuǎn) 貼 于 ) g/ml范圍內(nèi)線性良好。2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 配制濃度

9、約為100g/ml的普盧利沙星對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10l，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，RSD為0.14%。2.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取20050801批樣品，按“2.9”項(xiàng)下操作平行測(cè)定6次，計(jì)算其含量分別為標(biāo)示量的100.2%、100.2%、100.1%、100.1%、100.0%、99.9%，平均值為100.1%，RSD為0.13%。2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 按“2.9”項(xiàng)下方法，取供試品溶液一份，于室溫下放置，每隔1h進(jìn)樣1次，連續(xù)進(jìn)樣6h，進(jìn)樣量為10l，記錄峰面積，RSD=0.66%，說(shuō)明樣品溶液在6h內(nèi)較穩(wěn)定。2.7 回收率實(shí)驗(yàn) 按處方，取高（120%）、中（100%）、低（80%）三種量的普盧利沙

10、星對(duì)照品，分別加入處方量的輔料于同一100ml棕色量瓶中，加乙腈適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密取溶液10l進(jìn)樣，記錄峰面積，并計(jì)算回收率，每個(gè)濃度測(cè)定3份，結(jié)果分別為98.5、99.7、101.6，RSD分別為0.83%、0.89%、0.63%（n=3）。2.8 最低檢測(cè)限 在選定的色譜條件下，按信噪比為3對(duì)最低檢測(cè)限進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，最小檢出量0.05g/ml。2.9 含量測(cè)定 取普盧利沙星對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品適量(約相當(dāng)于普盧利沙星10mg)，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，用乙腈溶解，并稀釋至刻

11、度，搖勻，作為供試品溶液。精密吸取對(duì)照溶液和供試品溶液各10l，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。3批樣品的含量分別為標(biāo)示量的99.7%、100.3%、100.0%。2.10 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 取本品適量，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中約含500.0g的溶液作為供試品溶液。取供試品溶液加流動(dòng)相稀釋成每1ml中約含5.0g的溶液作為對(duì)照溶液。精密吸取對(duì)照溶液10l注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰高約為滿量程的20%。精密吸取供試品溶液10l注入高效液相色譜儀， 記錄色譜圖（圖2）至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍，用峰面積歸一化法計(jì)算雜質(zhì)含量2。供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1.0%。用自身對(duì)照法2計(jì)算三批樣品雜質(zhì)峰面積總和分別為0.36%、0.36%、0.33%。3 討論3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 對(duì)各輔料和普盧利沙星分別在200400nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普盧利沙星在波長(zhǎng)為278nm處有最大紫外吸收，而在此波長(zhǎng)下輔料沒(méi)有吸收，不會(huì)干擾測(cè)定'' >高效液相色譜法測(cè)定普盧利沙星片的含量和有關(guān)物質(zhì)(3) 圓?78nm。3.2 流動(dòng)相的選擇 由于普盧利沙星具有酸性，單獨(dú)用乙腈-水作流動(dòng)相時(shí)色譜峰拖尾嚴(yán)重、峰形不好、分離效果差。加入0.01mol/