PH示差法測量花青素含量

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 PH示差法測定火棘果花青素含量原理：花青素是具有2-苯基苯并吡喃陽離子結(jié)構(gòu)的衍生物，廣泛存在于植物中的水溶性天然色素?；ㄇ嗨卦谧匀粻顟B(tài)下常與各種單糖形成糖苷，稱為花色苷。溶液PH不同，花色苷的存在形式也不同。對于一個給定的PH值，在花色苷的4種結(jié)構(gòu)之間存在著平衡：藍色的醌式（脫水）堿，紅色的花烊正離子，無色的甲醇假堿和查爾酮?；ㄉ赵赑H值很低時，其溶液呈現(xiàn)最強的紅色。隨著PH值的增大，花色苷的顏色將褪至無色，最后在高PH值時變成紫色或藍色。PH示差法測定花色苷含量的依據(jù)是花色苷發(fā)色團的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換是PH的函數(shù)，起干擾作用的褐色降解物的特性不隨PH變化。因此在花青素最大

2、吸收波長下確定兩個對花青苷吸光度差別最大但是對花色苷穩(wěn)定的PH值。原料與儀器原料：火棘果花青素提取液，乙醇95%（AR），鹽酸儀器：PHs-3B型酸度計，紫外分光光度計實驗步驟：1，火棘果的定性分析 取提取液稀釋至一定的體積，用稀氫氧化鈉和稀鹽酸調(diào)節(jié)PH，觀察提取液在不同PH下的顏色變化。對提取液進行200800nm全波長掃描，繪制光譜圖PH1.02.0原液4.59.5溶液顏色2，測定波長的選擇取火棘果花青素提取液用5%HCL-EtOH（15:85）溶液稀釋至一定體積，進行光譜掃描，確定最大吸收波長。紫外可見吸收光譜3，PH示差法中PH的選擇 在選定PH時應考慮以下因素：在此兩個PH處測定的花

3、青素的吸收值差異應是最顯著的；單一PH的輕微變動，對花青素吸光值的影響是極小的；花青素在所處的兩個PH下，應是相當穩(wěn)定的。由于花青素只有在酸性介質(zhì)中是穩(wěn)定的，因此只測定PH小于7條件下花青素吸光值的變化。PH為1.0時，花青素以紅色的2-苯基苯并吡喃的形式存在PH為4.5時，花青素以無色的甲醇假堿的形式存在。因此選擇PH為1.0和4.5。4，平衡時間的確定 因為花青素在溶液介質(zhì)中存在4種結(jié)構(gòu)形式，這4種結(jié)構(gòu)形式在某一PH下處于動態(tài)平衡，當PH改變時，動態(tài)平衡發(fā)生轉(zhuǎn)移，總的趨勢是PH降低時，平衡向紅色的2-苯基苯并吡喃陽離子移動；PH升高時平衡向藍色醌式移動。一定時間后達到一個新的平衡。因此提取

4、液用緩沖液稀釋后，必須靜置一段時間，等動態(tài)平衡處于穩(wěn)定后，才能測定吸光值?；ㄇ嗨卦诰彌_液中的吸光度值與時間的變化關(guān)系（= nm）T(min)01020305080110PH1.0buffer A值PH4.5buffer A值結(jié)果表明，花青素在緩沖液中的吸光度值隨時間變化，在PH1.0 基本穩(wěn)定，在PH4.5時 基本穩(wěn)定。所以綜合考慮，選擇平衡時間為 5，火棘果花青素含量的測定移取濃縮液2ml，用5%HCL-EtOH稀釋、定容至100ml，分別移取10ml，用PH1.0和PH4.5的緩沖液稀釋至100ml，平衡 min，在波長 處測定吸光值。根據(jù)Fuleki T經(jīng)驗公式花青素含量（mg/100g)=TO.D/(avE%1cm ×W ×10);TO.D=A×DV×VF;A=A(pH1.0)-A(pH4