兒茶藥材化學(xué)成分分析_反相高效液相色譜法測定兒茶中兒茶素和表

1、88藥物分析雜志兒茶藥材化學(xué)成分分析反相高效液相色譜法測定兒茶中兒茶素和表兒茶素的含量3王鋼力于健東田金改張繼(中國藥品生物制品檢定所北京100050)摘要目的:測定兒茶中主要成分兒茶素及表兒茶素的含量。方法:采用反相高效液相色譜法,以兒茶素及表兒茶素為對照品。結(jié)果:按選定的色譜條件,兒茶素及表兒茶素分別在012561128、0172831641g范圍內(nèi)線性良好。2種成分的平均加樣回收率分別為10011%和9610%,RSD分別為214%和217%(n=5)。結(jié)論:本方法操作簡便、快捷,重現(xiàn)性好。關(guān)鍵詞兒茶兒茶素表兒茶素反相高效液相色譜法兒茶(Catechu)為傳統(tǒng)藥物,中國藥典(1995年版

2、一部)收載的兒茶為豆科金合歡屬植物兒茶樹Acaciacatechu(L1)Willd1去皮后的枝干煎汁濃縮而成的干燥浸膏1,衛(wèi)還有茜草科鉤藤屬植物Ugambier1燥浸膏,后者稱為棕兒茶2。項均為測定兒茶中總鞣質(zhì)的含量,操作繁瑣,不能很好地控制藥材質(zhì)量。藥理研究表明,兒茶素類化合物具有明顯的清除體內(nèi)自由基、阻斷N-亞硝基化合物形成、抑制脂氧化酶活性和脂質(zhì)過氧化物作用,并有防突變、防癌等藥理活性3。本文采用反相高效液相色譜法,按選定的色譜條件,同時測定豆科和茜草科(進(jìn)口)兒茶藥材中兒茶素(cate2chin)及表兒茶素(epicatechin)的含量。該法操作簡便,靈敏度高,分離度好,適用性強,

3、可用于檢測和控制該藥的內(nèi)在質(zhì)量。1儀器和試藥PELC-200高效液相色譜儀;LC295紫外可見檢測器;HP3295積分儀。檸檬酸、N、N-二甲基甲酰胺,四氫呋喃均為分析純。兒茶素對照品(純度>98%)及表兒茶素對照品(純度96%)公司。22:ODS(5,6mm×150mm);理論塔兒茶素計算大于3000。流動相:0104molL-1檸檬酸-N,N2二甲基甲酰胺-四氫呋喃(4582),流速:018mLmin-1。柱溫:35。檢測波長:280nm。進(jìn)樣量:510L。靈敏度:6。在本色譜條件下,對照品與樣品色譜圖見圖1。圖1兒茶HPLC色譜圖A1對照品B1樣品11兒茶素21表兒茶素2

4、12線性關(guān)系試驗精密稱取兒茶素對照品1128mg及表兒茶素對照品3164mg,分別置于10mL容量瓶中,加甲醇超聲溶解并稀3本項研究由九五國家重點科技攻關(guān)項目資助(編號962903202202)19(2),199989表1兒茶中兒茶素及表兒茶素的含量進(jìn)樣量編號種類/L釋至刻度,搖勻,各吸取2、4、6、8、10L,進(jìn)樣測定,以對照品的含量X(g)對峰面積積分值Y作圖,各得到一條直線。結(jié)果表明:兒茶素及表兒茶素分別在012561128、0172831641g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,2種成分的回歸方程分別為:64Y=61111×10X+215×10r=01999953Y=71296&

5、#215;10X-218×10r=019998213精密度考察取同一樣品溶液反復(fù)進(jìn)樣5次(每次5L)進(jìn)行測定,計算。結(jié)果兒茶素、表兒茶素峰面積積分值的RSD分別為319%、412%。214重現(xiàn)性考察取兒茶樣品6份,每份0102g,分別精密稱定,置50mL容量瓶中,加甲醇-水(11)40mL超聲20min溶解,并以甲醇-水(11)稀釋至刻度,溶液過0145m濾膜,精密吸取此溶液5L,測定,RS12%、119%215精密稱取兒茶素對照品16107mg及表兒茶素對照品13121mg,置25mL容量瓶中,以甲醇-水(11)超聲溶來源含量/%兒茶素表兒茶素豆科云南西雙版納茜草科云南藥材公司(進(jìn)

6、口)茜草科安國藥市(進(jìn)口)茜草科安國藥市(進(jìn)口)豆科海南茜草科云南藥材公司(進(jìn)口)豆科藥材自制茜草科江西樟樹(進(jìn)口)茜草科長沙制藥二廠提供(進(jìn)口)豆科云南豆科成都藥材公司豆科云南思茅茜草科本所館藏(進(jìn)口496025)豆科緬甸豆科緬甸茜草科友誼醫(yī)院(進(jìn)口)茜草科天壇醫(yī)院(進(jìn)口)解并稀釋至刻度,搖勻即得對照品溶液。取已知含量的兒茶樣品5份,每份0101g,分別精密稱定,精密加入對照品溶液3mL,按“214”項下從“置50mL容量瓶中”起操作,進(jìn)樣10L,測得兒茶素及表兒茶素的平均回收率分別為10011%和9610%,RSD分別為214%和217%,n=5。3樣品測定注:表中樣品均經(jīng)中國藥品生物制品

7、檢定所中藥標(biāo)本館張繼主管藥師鑒定的溶解度,而且兒茶藥材本身為水煎液的濃縮浸膏,因而采用強極性溶劑提取。曾采用甲醇、水、甲醇-水(11)作為提取溶劑,結(jié)果表明采用甲醇-水(11)作為溶劑的提取效果最佳,并可將兒茶樣品充分溶解。提取方法的選擇:由于兒茶素及表兒茶素為同分異構(gòu)體,兒茶素經(jīng)長時間加熱易發(fā)生差向立體異構(gòu)化反應(yīng)4,使表兒茶素向兒茶素轉(zhuǎn)化。實驗也表明,加熱回流提取后提取液中的兒茶素含量較高,表兒茶素的含量較少。故采用室溫條件下超聲提取,避免了取實驗用樣品各2份,每份0102g,照“214”項下方法操作,進(jìn)樣510L,測定結(jié)果見表1。4討論411提取方法的確定提取溶劑的選擇:雖然兒茶素及表兒茶

8、素同為黃酮化合物,但它們的母核上連有5個酚羥基,增加了它們在水和強極性溶劑中90藥物分析雜志因加熱對樣品測定產(chǎn)生的影響。412曾采用甲醇-水(2872,冰醋酸調(diào)pH至310),乙腈-011%磷酸(2080)等作為流動相,但分離效果不好,以0104molL-1檸檬酸-N,N2二甲基甲酰胺-四氫呋喃(4582)為流動相,樣品可以得到較好的分離。413由于兒茶素類化合物在加熱條件下不穩(wěn)定,我們曾對對照品溶液和供試品溶液的穩(wěn)定性進(jìn)行考察。結(jié)果表明:為保證測定工作的準(zhǔn)確性,對照品溶液最好在制備的當(dāng)天使用,如果測定工作不能在當(dāng)天完成,應(yīng)將對照品溶液在低溫冰箱中保存(23d)。但時間不宜過長,因長時間放置后

9、,溶液顏色會逐漸變深(可能系由于化合物發(fā)生締合反應(yīng)所致);由于供試品溶液的提取方法較為簡單,測定周期較短(40min),通常在1作日內(nèi)可完成34,品采取的方法為制備的當(dāng)天測定。414據(jù)從事兒茶產(chǎn)地加工的人員介紹:該藥材加工方法系選用新鮮砍伐的植物樹干,立即砍成碎塊,加水煎煮8h,濃縮水煎液后制成。如木材放置一段時間后加工,藥材質(zhì)量明顯下降。表1中7號樣品系我們選用陳舊木材(放置1年以上)按上述方法加工提取所制,其兒茶素類化合物的含量明顯較其它樣品低得多?？梢妰翰杷仡惢衔锏暮颗c兒茶藥材質(zhì)量有著直接的關(guān)系。參考文獻(xiàn)1中國藥典119951一部:62衛(wèi)生部進(jìn)口藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)119863于健東,王鋼力

10、,田金改,24():頁碼待定411:,1997.(本文于1998年5月26日收到)onChemicalCompositionofCatechuQuantitativeDeterminationofCatechinandEpicatechinbyRP-HPLCWangGangli,YuJiandong,TianJingaiandZhangJi(NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts,Beijing100050)AbstractObjective:TodeterminetwocomponentscatechinandepicatechininCatechu.Method:UsingRP-HPLCwithcatechinandepicatechinasstandards1Results:Accordingtotheselectedchromatographicconditions,thelinearrangeofthesetwocompoundsare012561128gand0172831641grespectively1Theaveragerecoveriesofcatechi