高速逆流色譜技及應(yīng)用領(lǐng)域ppt課件

1、高速逆流色譜技術(shù)及運(yùn)用領(lǐng)域高速逆流色譜技術(shù)及運(yùn)用領(lǐng)域上海同上海同田生物技術(shù)田生物技術(shù)報(bào)告內(nèi)容報(bào)告內(nèi)容 1 1 高速逆流色譜原理高速逆流色譜原理2 2 高速逆流色譜優(yōu)點(diǎn)高速逆流色譜優(yōu)點(diǎn)3 3 高速逆流色譜運(yùn)用高速逆流色譜運(yùn)用4 4 關(guān)于上海同田生物關(guān)于上海同田生物1.1.高速逆流色譜原理高速逆流色譜原理 液液分配色譜利用一種特殊的流體動(dòng)力學(xué)景象使互不混溶的兩相溶劑(固定相和流動(dòng)相)在螺旋管中高效地接觸、混合、分配和傳送其中固定相以一種相對(duì)均勻的方式分布在一根聚四氟乙烯管繞成的螺旋管中流動(dòng)相以一定的速度經(jīng)過固定相，并按照被分別物質(zhì)分配系數(shù)的不同依次洗脫而獲得分別特殊的流體動(dòng)力學(xué)？特殊的流體動(dòng)力學(xué)？

2、固定相的保管固定相的保管利用螺旋管的方向性和同步行星式運(yùn)動(dòng)利用螺旋管的方向性和同步行星式運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的二維產(chǎn)生的二維 離心力場(chǎng)構(gòu)成的單向性流體動(dòng)力學(xué)平離心力場(chǎng)構(gòu)成的單向性流體動(dòng)力學(xué)平衡衡HDESHDES從而實(shí)現(xiàn)流動(dòng)相高速挪動(dòng)時(shí)固定相的保從而實(shí)現(xiàn)流動(dòng)相高速挪動(dòng)時(shí)固定相的保管管混合區(qū)：在接近離心混合區(qū)：在接近離心軸心大約有四分之一軸心大約有四分之一的區(qū)域，兩相的猛烈的區(qū)域，兩相的猛烈混合混合靜置區(qū)：兩相溶劑分靜置區(qū)：兩相溶劑分成兩層，重相在外部，成兩層，重相在外部，輕相在內(nèi)部輕相在內(nèi)部 以以10001000轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)/ /分的速率進(jìn)展旋分的速率進(jìn)展旋轉(zhuǎn)，在二維力場(chǎng)的作用下轉(zhuǎn)，在二維力場(chǎng)的作用下分別管柱內(nèi)混合

3、和傳送的分別管柱內(nèi)混合和傳送的頻率可到達(dá)頻率可到達(dá)1717次次/S/S，從而，從而實(shí)現(xiàn)高效的分別實(shí)現(xiàn)高效的分別K Cs/Cm CsCmHSCCC的任務(wù)流程的任務(wù)流程2.2.高速逆流色譜優(yōu)點(diǎn)高速逆流色譜優(yōu)點(diǎn) 不用固態(tài)載體的高效液不用固態(tài)載體的高效液- -液分配色譜技術(shù)液分配色譜技術(shù)不存在樣品的不可逆吸附，實(shí)際回收率不存在樣品的不可逆吸附，實(shí)際回收率100%100%樣品負(fù)載才干強(qiáng)，制備量大，重現(xiàn)性好樣品負(fù)載才干強(qiáng)，制備量大，重現(xiàn)性好操作本錢低，無制備柱耗費(fèi)，后續(xù)投入較低操作本錢低，無制備柱耗費(fèi)，后續(xù)投入較低可采用廣泛的溶劑體系和多樣性的操作條件可采用廣泛的溶劑體系和多樣性的操作條件操作簡(jiǎn)單，無需太

4、多樣品前處置操作簡(jiǎn)單，無需太多樣品前處置 3.3.高速逆流色譜運(yùn)用高速逆流色譜運(yùn)用 高速逆流色譜技術(shù)的運(yùn)用領(lǐng)域高速逆流色譜技術(shù)的運(yùn)用領(lǐng)域1 高速逆流色譜在中藥現(xiàn)代化中的運(yùn)用高速逆流色譜在中藥現(xiàn)代化中的運(yùn)用2 高速逆流色譜在抗生素分別純化中的運(yùn)用高速逆流色譜在抗生素分別純化中的運(yùn)用3 高速逆流色譜在異構(gòu)體分別純化中的運(yùn)用高速逆流色譜在異構(gòu)體分別純化中的運(yùn)用4 高速逆流色譜在食品行業(yè)中的運(yùn)用高速逆流色譜在食品行業(yè)中的運(yùn)用5 高速逆流色譜在化學(xué)合成中的運(yùn)用高速逆流色譜在化學(xué)合成中的運(yùn)用6 高速逆流色譜在生物領(lǐng)域中的運(yùn)用高速逆流色譜在生物領(lǐng)域中的運(yùn)用7 高速逆流色譜在發(fā)酵產(chǎn)物分別純化中的運(yùn)用高速逆流色

5、譜在發(fā)酵產(chǎn)物分別純化中的運(yùn)用成藥質(zhì)量控制成藥質(zhì)量控制 指紋圖譜指紋圖譜指點(diǎn)原藥材種植指點(diǎn)原藥材種植/GAP基地建立基地建立單體化合物單體化合物用于制藥中間體的質(zhì)用于制藥中間體的質(zhì)量控制量控制實(shí)例實(shí)例1 1 大黃有效成分的分別大黃有效成分的分別01002003004005002004006008001000 VIVIVIIIIIIAbsorbance(mV)Time/min0102030400100200300400500600 physcionchrysophanolemodinrheinaloe-emodincinnamic acidAbsorbance(mAU)Time/minHSCCC條

6、件：條件：固定相：乙醚固定相：乙醚流動(dòng)相：流動(dòng)相：1%NaH2PO4-1%NaOH 梯度梯度洗脫洗脫(500min內(nèi)內(nèi),由由100:0-0:100) 流速流速: 2.0 ml min-1轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速：800 rpm樣品量：樣品量：120 mg 粗提物粗提物固定相保管：固定相保管：40%機(jī)型：機(jī)型：TBE-300A：rhein大黃酸大黃酸19 mg: cinnamic acid苯乙烯酸苯乙烯酸19 mg: emodin大黃素大黃素18 mg: aloe-emodin蘆薈大黃素蘆薈大黃素14 mg: chrysophanol 大黃酚大黃酚10 mg: physcion大黃素甲醚大黃素甲醚6 mg純度

7、均在純度均在98以上以上Journal of Chromatography A,2019,Volume 1052, Issues 1-2, Pages 217-221HSCCCHSCCC在分別中藥單體中的運(yùn)用蒽醌類在分別中藥單體中的運(yùn)用蒽醌類實(shí)例實(shí)例2 2 蛇床子有效成分的分別蛇床子有效成分的分別HSCCC條件：條件：溶劑系統(tǒng)溶劑系統(tǒng): 石油醚石油醚-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-水水流動(dòng)相：梯度洗脫流動(dòng)相：梯度洗脫0-150 min:5:5:5:5下相下相150-250 min:5:5:6:4下相下相250 min后后: 5:5:6.5:3.5下相下相流速流速: 2.0 ml min-1轉(zhuǎn)速：

8、轉(zhuǎn)速：800 rpm樣品量：樣品量：150 mg 粗提物粗提物機(jī)型：機(jī)型：TBE-300A固定相保管：固定相保管： 60%：花椒毒素：花椒毒素 95.0 7.6 mg: 異茴芹素異茴芹素 99.6 7.6 mg: 佛手苷內(nèi)酯佛手苷內(nèi)酯 99.7 9.7 mg: 歐前胡素歐前胡素 100 60.5 mg: 蛇床子素蛇床子素 100 50.6 mg:未知化合物未知化合物 98.1 10.2 mg051015202530350200400600800UnknownOstholeImperatorinBergaptenIsopimpinellinXanthotoxin Asorbance (mAU)T

9、ime (min)01002003004005002004006008001000VIVIVIIIIII Absorbance (mV)Time (min)Journal of Chromatography A, 2019, Volume 1055, Issues 1-2, 71-76 HSCCCHSCCC在分別中藥單體中的運(yùn)用香豆素類在分別中藥單體中的運(yùn)用香豆素類Journal of Chromatography A,1102(2019)44-50實(shí)例實(shí)例3 3 白花敗醬異戊烯基黃酮的分別白花敗醬異戊烯基黃酮的分別溶劑系統(tǒng)溶劑系統(tǒng):正己烷正己烷-乙酸乙酯甲醇乙酸乙酯甲醇-水水 (5:6:6:

10、6)流動(dòng)相：下相流動(dòng)相：下相流速流速: 1.0-2.0 ml min-1轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速：850 rpm樣品量：樣品量：400 mg 粗提物粗提物固定相保管：固定相保管： 65%分別溫度分別溫度: 25C機(jī)型：機(jī)型：TBE-300A: orotinin 牡荊苷牡荊苷99.2 38.2 mg: orotinin-5-methyl ether 98.5 19.8 mg: licoagroachalcone B 97.6 21.5 mgHSCCCHSCCC在分別中藥單體中的運(yùn)用在分別中藥單體中的運(yùn)用( (黃酮類黃酮類) )實(shí)例實(shí)例4 4 吳茱萸生物堿的分別吳茱萸生物堿的分別溶劑系統(tǒng)溶劑系統(tǒng):正己烷正己烷-

11、乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-水水 (5:5:7:5)流速流速: 2.0 ml/min轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速：900 rpm樣品量：樣品量：180 mg 粗提物粗提物固定相保管：固定相保管：50%機(jī)型：機(jī)型：TBE-300A:吳茱萸堿吳茱萸堿 98.7 28 mg:吳茱萸次堿吳茱萸次堿 98.4 19 mg:吳茱萸新堿吳茱萸新堿 96.9 21 mg: 1-methy-2-(6Z,9Z)-6,9-pentadecadienyl-4-(1H)-quinolone. 98.0 16 mg: 1-methyl-2-dodecyl-4-(1H)-quinolone 97.2 12 mg010203040506002

12、00400600800A1-Methyl-2-dodecyl-4-(1H)-quinolone1-Methy-2-(6Z,9Z)-6,9-pentadecadienyl -4-(1H)-quinoloneEvocarpineRutaecarpineEvodiamine Absorbance (mAU) / 254 nmTime (min)01002003004005006002004006008001000VIVIIIIII Absorbance (mV) / 254 nmTime (min) J. Chromatogr. A, 2019, vol 1074/1-2 pp. -144HSCCC

13、HSCCC在分別中藥單體中的運(yùn)用生物堿類在分別中藥單體中的運(yùn)用生物堿類蘆薈苷蘆薈苷B B蘆薈苷蘆薈苷A A蘆薈未知物蘆薈未知物蘆薈提取物蘆薈提取物HSCCC分別圖譜分別圖譜丹參提取物的丹參提取物的HSCCC分別圖譜分別圖譜丹酚酸丹酚酸 B B沙棘提取物的沙棘提取物的HSCCC圖譜圖譜異鼠李素異鼠李素山奈酚山奈酚槲皮素槲皮素-10.00033.60077.200120.800164.400208.0000.0024.0048.0072.0096.00120.00144.00 168.00192.00 216.00240.00mvmin高車前素高車前素未知物未知物澤蘭黃酮澤蘭黃酮荔枝草提取物的荔枝

14、草提取物的HSCCC圖譜圖譜小結(jié)：小結(jié)： HSCCC在中藥中各類單體的制備均有運(yùn)在中藥中各類單體的制備均有運(yùn)用，經(jīng)用，經(jīng)過簡(jiǎn)單的前處置提取、萃取或大孔樹脂過簡(jiǎn)單的前處置提取、萃取或大孔樹脂柱后柱后直接上樣，一次分別就能得到高純度和高直接上樣，一次分別就能得到高純度和高得率的得率的單體，已成為天然產(chǎn)物分別純化中有效的單體，已成為天然產(chǎn)物分別純化中有效的不可替不可替代的分別方法。代的分別方法。HSCCCHSCCC在中藥指紋圖譜中的運(yùn)用在中藥指紋圖譜中的運(yùn)用 中藥指紋圖系指中藥經(jīng)適當(dāng)處置后，采用一定的分析手段光中藥指紋圖系指中藥經(jīng)適當(dāng)處置后，采用一定的分析手段光譜和色譜得到的可以標(biāo)示該中藥特性的共有

15、峰的圖譜譜和色譜得到的可以標(biāo)示該中藥特性的共有峰的圖譜 中藥成分復(fù)雜，指紋圖譜是中藥質(zhì)量控制的有效方法中藥成分復(fù)雜，指紋圖譜是中藥質(zhì)量控制的有效方法 20002000年年8 8月國(guó)家藥品監(jiān)視管理局規(guī)定中藥注射劑必需建立藥材月國(guó)家藥品監(jiān)視管理局規(guī)定中藥注射劑必需建立藥材和制劑的指紋圖譜規(guī)范，美國(guó)和制劑的指紋圖譜規(guī)范，美國(guó)FDAFDA及歐共體藥審委也要求采用及歐共體藥審委也要求采用指紋圖譜技術(shù)指紋圖譜技術(shù) 色譜法是指紋圖譜的首選，傳統(tǒng)的色譜指紋圖譜方法存在缺陷色譜法是指紋圖譜的首選，傳統(tǒng)的色譜指紋圖譜方法存在缺陷比如比如HPLCHPLC法前處置要求嚴(yán)厲，會(huì)有死吸附或樣品的變性，對(duì)法前處置要求嚴(yán)厲，

16、會(huì)有死吸附或樣品的變性，對(duì)有些樣品不能準(zhǔn)確反響其特征有些樣品不能準(zhǔn)確反響其特征 高速逆流色譜法是中藥指紋圖譜開展的一個(gè)新方向高速逆流色譜法是中藥指紋圖譜開展的一個(gè)新方向02040608010012014001234567891011121314Time (h)Absorbance (OD280nm)0102030400100200mAU (280nm)Time (min) 01020304004080120160mAU (280nm)Time (min) 0102030400100200mAU (280nm)Time (min) B1B2B305010015020025001234567891

17、011121314Time (h)Absorbance (OD280nm)02040608010001234567891011121314Time (h)Absorbance (OD280nm)A1A2A3HSCCCHSCCC圖譜圖譜 HPLC HPLC圖譜圖譜不同產(chǎn)地丹參提取物不同產(chǎn)地丹參提取物實(shí)例實(shí)例溶劑體系：石油醚溶劑體系：石油醚-丙酮丙酮-水水3:3:2,v/v樣品：樣品：250mg 環(huán)孢菌素粗品環(huán)孢菌素粗品檢測(cè)條件：檢測(cè)條件：ELSD環(huán)孢菌素環(huán)孢菌素 A98.6%，90.2%(收率收率)環(huán)孢菌素環(huán)孢菌素 C99.3，85.0%(收率收率)環(huán)孢菌素環(huán)孢菌素 B98.7，88.5%(收率

18、收率)環(huán)孢菌素環(huán)孢菌素 D98.5，86.3%(收率收率)實(shí)例實(shí)例1 1 環(huán)孢菌素粗品環(huán)孢菌素粗品 HSCCC在抗生素分別純化中的運(yùn)用在抗生素分別純化中的運(yùn)用溶劑體系：正己烷溶劑體系：正己烷-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-0.5氨水氨水3:7:5:6,V/V，檢測(cè)器：檢測(cè)器：ELSD；進(jìn)樣量：；進(jìn)樣量：300mg紅霉素紅霉素A和和C含量均在含量均在98以上以上實(shí)例實(shí)例2 2 紅霉素紅霉素HSCCC在抗生素分別純化中的運(yùn)用在抗生素分別純化中的運(yùn)用 實(shí)例實(shí)例1 1 藤黃酸異構(gòu)體的分別藤黃酸異構(gòu)體的分別溶劑系統(tǒng)溶劑系統(tǒng):正己烷正己烷-甲醇甲醇-水水 (5:4:1)流動(dòng)相：下相流動(dòng)相：下相流速流速: 2

19、.0 ml min-1轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速：900 rpm樣品量：樣品量：50 mg固定相保管：固定相保管： 50%分別溫度分別溫度: 25CA. gambolic acid 97.2% B. epigambolic acid 97.5%閉合回路系統(tǒng)閉合回路系統(tǒng)Journal of Chromatography A, 2019, Volume 1127, 298-301 HSCCCHSCCC在異構(gòu)體分別純化中的運(yùn)用在異構(gòu)體分別純化中的運(yùn)用實(shí)例實(shí)例1 1 利用利用HSCCCHSCCC分別規(guī)范蛋白質(zhì)混合物分別規(guī)范蛋白質(zhì)混合物010020030002468Signal (mV)Time (min)123溶劑體

20、系：溶劑體系：PEG1000-PEG1000-磷酸鹽體系磷酸鹽體系- -水水14-16-70(%,w/w)14-16-70(%,w/w)樣品：樣品：1mg 1mg 細(xì)胞色素細(xì)胞色素C C、 20mg 20mg 溶菌酶、溶菌酶、5mg 5mg 血紅蛋白血紅蛋白1.Cytochrome C; 1.Cytochrome C; 2.Lysozyme ; 2.Lysozyme ; 3.Hemoglobin 3.Hemoglobin ( (反轉(zhuǎn)出峰，上相反轉(zhuǎn)出峰，上相為流動(dòng)相為流動(dòng)相) )色譜，色譜，2019,Vol.23 No.1 122019,Vol.23 No.1 121717HSCCC在蛋白質(zhì)分別

21、純化中的運(yùn)用在蛋白質(zhì)分別純化中的運(yùn)用溶劑體系：溶劑體系：PEG1000-PEG1000-磷酸二氫鉀磷酸二氫鉀- -水水15-17-68(%,w/w)15-17-68(%,w/w)樣品：樣品：1mg 1mg 細(xì)胞色素細(xì)胞色素C C、8mg 8mg 肌紅蛋白、肌紅蛋白、20mg20mg溶菌酶溶菌酶1.Cytochrome C;2.Myoglobin 3.Lysozyme實(shí)例實(shí)例2 2 利用利用HSCCCHSCCC分別規(guī)范蛋白質(zhì)混合物分別規(guī)范蛋白質(zhì)混合物HSCCC在蛋白質(zhì)分別純化中的運(yùn)用在蛋白質(zhì)分別純化中的運(yùn)用 從上面這些實(shí)例可以看出，從上面這些實(shí)例可以看出，HSCCCHSCCC作為作為一種高效的液

22、液分配色譜，擁有寬廣的一種高效的液液分配色譜，擁有寬廣的運(yùn)用空間。運(yùn)用空間。4.4.關(guān)于上海同田生物技術(shù)關(guān)于上海同田生物技術(shù) 公司位于上海張江科技園，占地約公司位于上海張江科技園，占地約3030畝，建筑面畝，建筑面積約積約2000020000平方米，總投資人民幣平方米，總投資人民幣60006000萬元。萬元。 2019 2019年年1111月月2525日，上海市高新技術(shù)企業(yè)認(rèn)定辦公日，上海市高新技術(shù)企業(yè)認(rèn)定辦公室公告，上海同田生物技術(shù)被認(rèn)定為上海市室公告，上海同田生物技術(shù)被認(rèn)定為上海市20192019年第年第一批高新技術(shù)企業(yè)。一批高新技術(shù)企業(yè)。 公司努力于高速逆流色譜儀HSCCC、高純度天然產(chǎn)

23、物有效成分單體、天然藥物原料/中間體的研討開發(fā)、消費(fèi)和銷售。 作為多分別柱高速逆流色譜儀國(guó)家新型專利的擁有者、高速逆流色譜領(lǐng)域的指點(diǎn)者，我們與通用電氣醫(yī)療生物科學(xué)中國(guó)GE Healthcare Bio-sciences co., ltd .建立了長(zhǎng)期的協(xié)作同伴關(guān)系。TBE300BKTA Prime 在高速逆流色譜技術(shù)領(lǐng)域，公司所研制并批量消在高速逆流色譜技術(shù)領(lǐng)域，公司所研制并批量消費(fèi)擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型多分別柱高速逆流色譜儀，費(fèi)擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型多分別柱高速逆流色譜儀，性能穩(wěn)定可靠，有分析型、半制備型、制備型等性能穩(wěn)定可靠，有分析型、半制備型、制備型等7 7種種不同產(chǎn)品：不同產(chǎn)品：國(guó)內(nèi)部分代表客戶名單：國(guó)內(nèi)部分代表客戶名單：香港賽馬會(huì)中藥研討院香