2019版高考生物總復(fù)習(xí)第一部分非選擇題必考五大專題專題五選修部分第15講基因工程及克隆技術(shù)學(xué)案

1、第 15 講基因工程及克隆技術(shù)考試要求1.工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生(/a)。2.基因工程的原理和技術(shù)(/b)。3. 基因工程的應(yīng)用(/a)。4.提出生活中的疑難問(wèn)題， 設(shè)計(jì)用基因工程技術(shù)解決的方案(/c)o5. 植物的克隆(/b)o6.動(dòng)物的克隆(/a)o|真題感悟|1.(2018 浙江 4 月選考)回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題：(1) 將含某抗蟲(chóng)基因的載體和含卡那霉素抗性基因的載體PBI121 均用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI酶切，在切口處形成 _。選取含抗蟲(chóng)基因的DNA 片段與切割后的 pBI121用 DNA 連接酶連接，在兩個(gè)片段相鄰處形成 _，獲得重組質(zhì)粒。(2) 已知用 Ca

2、CL 處理細(xì)菌，會(huì)改變其某些生理狀態(tài)。取CaCL 處理過(guò)的農(nóng)桿菌與重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)進(jìn)行混合等操作，使重組質(zhì)粒進(jìn)入農(nóng)桿菌，完成_ 實(shí)驗(yàn)。在離心管中加入液體培養(yǎng)基，置于搖床慢速培養(yǎng)一段時(shí)間，其目的是從而表達(dá)卡那霉素抗性基因，并大量增殖。(3)_取田間不同品種水稻的幼胚，先進(jìn)行，然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，幼胚發(fā)生_形成愈傷組織，并進(jìn)行繼代培養(yǎng)。用含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染愈傷組織，再培養(yǎng)愈 傷組織，以便獲得抗蟲(chóng)的轉(zhuǎn)基因水稻。影響愈傷組織能否成功再生出植株的因素有：培養(yǎng)條件如光溫、培養(yǎng)基配方如植物激素配比、以及躬勺(答出 2 點(diǎn)即可)。解析(1)構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI剪切得到的是粘性末端

3、，DNA 連接酶連接兩個(gè) DNA 片段之間形成的是磷酸二酯鍵。目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。用 Ca2+處理細(xì)菌以增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，讓其處于感受態(tài)細(xì)胞，以利于重組質(zhì)粒導(dǎo)入。(3)不同種類植物或同種植物的不同基因型個(gè)體之間存在遺傳的差異，細(xì)胞全能性的表達(dá)程度大小不同，小麥水稻等作物在多次繼代培養(yǎng)后，會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力。2答案(1)粘性末端磷酸二酯鍵轉(zhuǎn)化 使 CaCl2處理過(guò)的農(nóng)桿菌恢復(fù)細(xì)胞的正常狀態(tài)(3)消毒脫分化水稻的基因型、愈傷組織繼代的次數(shù)2.(2017 浙江 11 月選考)回答與植物克隆和動(dòng)物克隆有關(guān)的問(wèn)題：(1)利用植物愈傷組織獲得再生植株主要有兩條途徑：一是由愈

4、傷組織的細(xì)胞先分化產(chǎn)生芽和根后再形成一個(gè)完整植株的 _途徑，二是由愈傷組織細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體后再萌發(fā)形成完整植株的胚胎發(fā)生途徑。另外也可不通過(guò)愈傷組織階段而直接采用帶腋芽的莖段培養(yǎng)成叢 狀苗，再誘導(dǎo)生根獲得再生植株，其原因是腋芽中存在利用植物克隆培育新品種，一方面可利用帶有目的基因的 _ 侵染植株，或?qū)⒛康幕蛲ㄟ^(guò)_ 的方法導(dǎo)入植物細(xì)胞、組織或器官獲得轉(zhuǎn)基因植株，另一方面利用異源植株的_ 進(jìn)行融合產(chǎn)生雜種植株， 或利用異源植物在試管內(nèi)進(jìn)行 _ ，對(duì)其產(chǎn)生的胚進(jìn)行培養(yǎng)產(chǎn)生雜種植株。(3)下列屬于植物克隆和動(dòng)物克隆共有的培養(yǎng)方法是 _。A.懸浮培養(yǎng)、器官培養(yǎng)B.貼壁培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)C.器官培養(yǎng)、愈傷組織

5、培養(yǎng)D.原生質(zhì)體培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)解析(1)外植體經(jīng)脫分化后形成愈傷組織，由愈傷組織形成再生植株主要有兩條途徑：一 是由愈傷組織的細(xì)胞先分化產(chǎn)生芽和根后再形成一個(gè)完整植株是植物組織培養(yǎng)的器官發(fā)生 途徑， 二是由愈傷組織的細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體后再萌發(fā)成完整植株是植物組織培養(yǎng)的胚胎發(fā)生途 徑。 不通過(guò)愈傷組織階段而直接采用帶腋芽的莖段培養(yǎng)成叢狀苗，這說(shuō)明腋芽中含有分生組織，而分生組織中含較高的細(xì)胞分裂素，細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素之比較高可促進(jìn)芽的生長(zhǎng)。(2) 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，可以用含有目的基因的農(nóng)桿菌直接侵染，或者用顯微注射法7導(dǎo)入；用異源植物可以利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)或者受精之后的胚胎進(jìn)行培養(yǎng)，也可以獲

6、得雜種植株。(3) 貼壁生長(zhǎng)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的特性；愈傷組織是指植物細(xì)胞在組織培養(yǎng)過(guò)程中形成的一種排列疏松而無(wú)規(guī)則的無(wú)定形狀態(tài)、高度液泡化的薄壁細(xì)胞，動(dòng)物細(xì)胞無(wú)愈傷組織培養(yǎng)；傳代培養(yǎng)應(yīng)用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中。答案(1)器官發(fā)生分生組織(2)農(nóng)桿菌顯微注射原生質(zhì)體受精(3)A33.(2016 浙江 10 月選考節(jié)選)某小組欲進(jìn)行煙草原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)的研究。請(qǐng)回答：(1)原生質(zhì)體的分離： 在無(wú)菌條件下，取煙草無(wú)菌苗的葉片，放入含有0.5mol/L 甘露醇(維持較高滲透壓)的_ 混合液處理，經(jīng)過(guò)離心純化后獲得原生質(zhì)體。(2) 原生質(zhì)體的培養(yǎng)：將原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，重新長(zhǎng)出細(xì)胞壁，形成胚性細(xì)胞。此時(shí)，

7、應(yīng)該培養(yǎng)基中甘露醇濃度， 以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)， 然后經(jīng)兩條途徑形成 再生植株。途徑一：細(xì)胞團(tuán)經(jīng)球形胚、 _ 和胚狀體，最后發(fā)育成植株。途徑二：細(xì)胞團(tuán)增殖為愈傷組織， 然后在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出芽， 切割芽經(jīng)過(guò)生根后形成完整植株。 上述 發(fā)芽培養(yǎng)基中含量相對(duì)較高的激素是 _，胚性細(xì)胞的主要特點(diǎn)是 _(A. 液泡小、細(xì)胞核小B.液泡大，細(xì)胞核大C.液泡大，細(xì)胞核小D.液泡小、細(xì)胞核大)。(3) 為了對(duì)煙草的某些性狀進(jìn)行改良，分離兩種煙草的原生質(zhì)體后，通過(guò) _ 方法將他們的遺傳物質(zhì)組合在一起，經(jīng)培養(yǎng)獲得具有新性狀的再生植株。提取再生植株的DNA，采用 _擴(kuò)增相關(guān)基因，來(lái)鑒定遺傳物質(zhì)是否成

8、功重組。解析 (1) 去除植物細(xì)胞壁，獲得植物細(xì)胞的原生質(zhì)體，常用的方法是利用纖維素酶和果膠 酶處理植物細(xì)胞。 (2) 在獲取原生質(zhì)體時(shí)甘露醇是作為維持細(xì)胞膜內(nèi)外滲透壓平衡的穩(wěn)定劑 使用的。其具體作用是提高滲透壓， 防止水分滲入細(xì)胞內(nèi)部， 造成細(xì)胞破裂。在原生質(zhì)體形 成新細(xì)胞壁后，有細(xì)胞壁支持與保護(hù)作用，所以要稀釋甘露醇的濃度；從胚性細(xì)胞T細(xì)胞團(tuán)T球形胚T心形胚T胚狀體，然后再生出完整的小植株；為快速誘導(dǎo)芽的分化， 培養(yǎng)基中往往添加細(xì)胞分裂素；胚性細(xì)胞的特點(diǎn)是液泡小、細(xì)胞核大。(4) 植物細(xì)胞工程中，利用原生質(zhì)體融合的方法獲得雜種細(xì)胞；體外擴(kuò)增DNA 技術(shù)常用的是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，即PCR 技術(shù)

9、。答案 (1) 纖維素酶和果膠酶 (2) 稀釋 ( 降低 ) 心形胚 細(xì)胞分裂素 D (3) 原生質(zhì)體融 合 PCR4.(2016 浙江 4 月選考節(jié)選)兔肝細(xì)胞中的基因 E 編碼代謝甲醛的酶，擬利用基因工程技術(shù) 將基因E 轉(zhuǎn)入矮牽牛中，以提高矮牽牛對(duì)甲醛的代謝能力。請(qǐng)回答：(1) 從兔肝細(xì)胞中提取 mRNA 在_酶的作用下形成互補(bǔ)的 DNA 然后以此 DNA 為模板擴(kuò)增得到基因 E。在相關(guān)酶的作用下，將基因 E 與 Ti 質(zhì)粒連接在一起，形成 _，再導(dǎo)入用氯化鈣處理的 _ ，浸染矮牽牛葉片。 將被浸染的葉片除菌后進(jìn)行培養(yǎng)， 最終得到轉(zhuǎn)基因矮牽牛。其中培養(yǎng)過(guò)程正確的是 _ (A. 葉片在含合適

10、濃度生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上分化形成愈傷組織 B. 愈傷組織在含細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽4C.再生的芽在細(xì)胞分裂素含量高的培養(yǎng)基上生根D.愈傷組織在含合適濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上脫分化形成再生植株 )。(2) 取轉(zhuǎn)基因矮牽牛葉片，放入含 MS 夜體培養(yǎng)基和適量濃度甲醛且密封的試管中。將試管置于_ 上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)。一段時(shí)間后測(cè)定培養(yǎng)基中甲醛的含量，以判斷基因E5是否在轉(zhuǎn)基因矮牽牛中正常表達(dá)。培養(yǎng)過(guò)程中液體培養(yǎng)基的作用：一是提供營(yíng)養(yǎng)；二是_，從而使葉片保持正常的形態(tài)。解析（1）以 mRNA 為模板合成 DNA 勺過(guò)程為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，這一過(guò)程需要在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下 進(jìn)行。獲得目的基

11、因后，需在限制性核酸內(nèi)切酶和 DNA 連接酶的作用下， 將目的基因與運(yùn)載 體（Ti 質(zhì)粒）連接形成重組質(zhì)粒（重組 DNA 分子），再將其導(dǎo)入受體細(xì)胞。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，先將重組 DNA 導(dǎo)入經(jīng)氯化鈣處理的農(nóng)桿菌，再用導(dǎo)入目的基因的農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞， 最終實(shí)現(xiàn)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞內(nèi)。導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞經(jīng)組織培養(yǎng)過(guò)程形成轉(zhuǎn)基因植物。 組織培養(yǎng)過(guò)程中，葉片在含適宜濃度的生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上脫分 化形成愈傷組織，然后在含細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽，繼而在生長(zhǎng)素含量高的培養(yǎng)基上生根，最后形成完整的植株，愈傷組織形成植株的過(guò)程中發(fā)生細(xì)胞的分化。（2）植物組織培養(yǎng)過(guò)

12、程中，將愈傷組織等細(xì)胞置于搖床上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)，形成多個(gè)分散的細(xì)胞。培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液一方面為植物細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，另一方面維持一定的滲透壓，從而使葉片保持正常的形態(tài)。答案（1）逆轉(zhuǎn)錄重組 DNA 分子農(nóng)桿菌 B （2）搖床維持滲透壓2 1.正誤判斷（1）基因工程的載體有質(zhì)粒、 入噬菌體、動(dòng)植物病毒，其中物細(xì)胞內(nèi)。（X）構(gòu)建重組 DNA 分子時(shí)必須使用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體 的基因和載體 DNA 的兩端形成相同的粘性末端。（X）（3）轉(zhuǎn)入了人胰島素原基因的大腸桿菌，可以合成出具有生物活性的胰島素。（X）（4）轉(zhuǎn)基因技術(shù)育種克服了傳統(tǒng)育種的育種時(shí)間長(zhǎng)、遠(yuǎn)緣親本難以雜交的缺陷。（V）

13、（5）植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是植物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)，其理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞的全能性。（V）動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)，其理論基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞的全能性。（X）（7）細(xì)胞克隆的要求必須保證分離出來(lái)的細(xì)胞是一個(gè)或多個(gè)分離的細(xì)胞。（V）（8）細(xì)胞系是泛指可傳代的細(xì)胞， 細(xì)胞株是具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系。（V）入噬菌體可將外源基因載入動(dòng)DNA 以在目62.讀圖析圖（1）的構(gòu)建需要_ 酶參與。（2）T過(guò)程依據(jù)的原理是 _，關(guān)鍵步驟包括_ （3）要確定抗蟲(chóng)基因?qū)胫参锛?xì)胞后，是否賦予了植物抗蟲(chóng)特性，在個(gè)體水平上還需要做_實(shí)驗(yàn)；若要檢測(cè)具有抗蟲(chóng)基因的棉花是否產(chǎn)生了相應(yīng)毒蛋白，在分子水平上可利用_方法進(jìn)行檢測(cè)

14、。提示（1）限制性核酸內(nèi)切酶和 DNA 連接（2）植物細(xì)胞的全能性脫分化、再分化（3）抗蟲(chóng)接種抗原一抗體雜交|考點(diǎn)憲圖：訓(xùn)考I】找觀吟考點(diǎn) 1 基因工程的工具1.已知一雙鏈 DNA 分子，用限制性核酸內(nèi)切酶I切割得到長(zhǎng)度為40 kb 和 80 kb 兩個(gè)片段；同時(shí)用限制性核酸內(nèi)切酶I10 kb、80 kb 和 30 kb 3 個(gè)片段。據(jù)此分析該雙鏈DNA解析 根據(jù)題意，該 DNA 用限制性核酸內(nèi)切酶I切割后得1 條片段，故為環(huán)狀 DNA 根據(jù)兩酶的作用結(jié)果，可知酶切圖譜為Db答案 D2.某一質(zhì)粒載體如圖所示， 外源 DNA 插入Amp或Tet中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活（Ampr表示氨 芐青霉素抗性

15、基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因）。有人將此質(zhì)粒載體用BarHI 酶切后，與用BarHl酶切獲得的目的基因混合，加入 DNA 連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化120 kb（kb :千堿基對(duì)）片段；用限制性核酸內(nèi)切酶n切割得到和限制性核酸內(nèi)切酶n切割時(shí)，得到分子結(jié)構(gòu)及酶切位點(diǎn)情況為（I形戰(zhàn)翠E _T】質(zhì)粒合抗蛀用的DMA7大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化， 有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。回答下列問(wèn)題:并且 _和 _的細(xì)胞也是不能區(qū)分的， 其原因是_A .。在上述篩選的基礎(chǔ)上， 若要篩選含有插入了目的基

16、因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使I用含有的固體培養(yǎng)基。解析未轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞都不能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，故這兩種不可區(qū)分。含有質(zhì)粒載體和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)胞在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上都能生長(zhǎng)， 這兩種也不可區(qū)分。 因目的基因插入位點(diǎn)在四環(huán)素抗性基因上， 四環(huán)素 抗性基因被破壞，在獲得的單個(gè)菌落中各挑取少許分別接種到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，不能生長(zhǎng)的為要篩選的菌落，即含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。要篩選的菌答案二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體 含有重組質(zhì)粒二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素O歸

17、納概括質(zhì)粒上的抗生素抗性基因的作用用作基因工程載體的質(zhì)粒一般含有一些抗生素抗性基因（如青霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因等），供重組 DNA 分子的鑒定和篩選。通常情況下，受體細(xì)胞自身沒(méi)有抵抗相關(guān)抗生素的能力，當(dāng)含有抗生素抗性基因的質(zhì)粒與目的基因構(gòu)建形成的重組DNA 分子導(dǎo)入受體細(xì)胞后，如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中,環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的未被轉(zhuǎn)化的和僅含其原/iffmH I昆副莊點(diǎn)8抗生素抗性基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素，從而在受體細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入該種抗生素，就可以淘汰未導(dǎo)入重組DNA 分子的受體細(xì)胞，保留導(dǎo)入了重組DNA9分子的受

18、體細(xì)胞。考點(diǎn) 2 基因工程的原理、技術(shù)和應(yīng)用3.（2018 嘉興 3 月選考測(cè)試）絲素蛋白是家蠶的一種分泌性復(fù)合蛋白，由絲素蛋白重鏈（FibH）、絲素蛋白輕鏈（Fibl）和 P25 糖蛋白組成。將 Fibl 基因?qū)氪竽c桿菌（不含質(zhì)粒 A）并實(shí)現(xiàn)表達(dá)的過(guò)程如圖所示。（i）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)要用到的工具酶是 _（2）導(dǎo)入時(shí)，為了增加大腸桿菌的通透性，常用 _ 處理大腸桿菌。接種在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上的大腸桿菌，有的不能形成菌落，原因是（4）影印接種就是用絲絨做成與平板大小相近的印章，然后把長(zhǎng)有菌落的母平板倒置在絲絨印章上，輕輕印一下，再把此印章在新的培養(yǎng)基平板上輕輕印一下。經(jīng)培養(yǎng)后，比較新平板上長(zhǎng)出

19、的菌落與母平板上的菌落位置，推測(cè)可能導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的菌落是_ （用字母表示）。（5）_ 目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是 _ 。解析 重組質(zhì)粒的構(gòu)建過(guò)程：通常先用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，然后用 DNA 連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，因成功率問(wèn)題，大腸桿菌有四種可能：導(dǎo)入了重組質(zhì)粒（可在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但不能在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)）、導(dǎo)入了質(zhì)粒（既能在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，也能在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)）、導(dǎo)入了環(huán)狀目的基因或未轉(zhuǎn)化（既不能在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，也不能在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)）。答案（1）限制性核酸內(nèi)切酶和DNA 連接酶（2）氯

20、化鈣（3）沒(méi)有導(dǎo)入質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒（4）b、c （5）大腸桿菌合成絲素蛋白輕鏈（Fibl）MX業(yè)tu碗村含虬*當(dāng)毒*培禪早匕住舍兇環(huán)#皓捍卑上生眩購(gòu)歯帶.護(hù)蠟一丄程曲104.人血清蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價(jià)值。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。（1）如果 HSA 基因序列未知，可以采用 _ 的方法獲取該目的基因，為了使目11的基因能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制和穩(wěn)定保存，通常要先構(gòu)建 _后才能導(dǎo)入宿主細(xì)胞。(2)方框中的“？” 一般選用的生物是 _，為了提高n過(guò)程的導(dǎo)入成功率，通常用_處理大腸桿菌。(3)人體合成的初始 HSA 多肽，需要經(jīng)過(guò)膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活

21、性，所以選擇_ 途徑(填I(lǐng)或n)獲取 rHSA 更有優(yōu)勢(shì)。(4)為了鑒定宿主細(xì)胞中是否產(chǎn)生rHSA,可以用_方法來(lái)進(jìn)行檢驗(yàn)。A.檢驗(yàn) HSA 基因是否導(dǎo)入B.檢驗(yàn)細(xì)胞中是否產(chǎn)生相應(yīng)的 mRNAC.抗原一抗體雜交D.檢測(cè)是否有標(biāo)記基因解析 若目的基因序列已知，可用化學(xué)方法合成目的基因或用PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因；若目的基因序列未知， 可從基因文庫(kù)中獲取。 目的基因不能夠直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，而是必須與載體構(gòu)建重組 DNA 分子后再導(dǎo)入，以使目的基因能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制和穩(wěn)定保存。(2)如果受體細(xì)胞是植物細(xì)胞，一般選用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入目的基因；為增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，利于目的基因?qū)耄栌寐然}

22、處理大腸桿菌。(3)大腸桿菌屬于原核生物，細(xì)胞(一內(nèi)缺少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，無(wú)法對(duì)合成的初始 HSA 多肽進(jìn)行加工。(4)rHSA 是一種抗原蛋白,可以利用相應(yīng)的抗體進(jìn)行檢測(cè)。答案從基因文庫(kù)中提取DNA 分子農(nóng)桿菌氯化鈣(3)I(4)C。歸納槪括 ,基因工程操作的“五步曲”TL(1)獲取目的基因若目的基因的序列已知，可用化學(xué)方法合成或用PCR 擴(kuò)增；若目的基因的序列未知,可從基因文庫(kù)中分離。(2)形成重組 DNA 分子通常是用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA 形成相同粘性末端，然后用 DNA 連接酶將目的基因和載體 DNA 連接形成重組 DNA 分子(如下圖)。但在實(shí)際操作中，

23、 可形成 3 種不同的連接物：目的基因一載體連接物、 載體一載體連接物、 目的基因一目的基因連接物。1213因?yàn)橥N限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體DNA 所得粘性末端全部相同，在 DNA1 接用兩種不同的限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒(如下圖)。(3)將重組 DNA 分子導(dǎo)入受體細(xì)胞受體細(xì)胞植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞或原生質(zhì)體微生物常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)CaCb 處理法轉(zhuǎn)化過(guò)程目的基因插入 Ti 質(zhì)粒的 TDNA 上T導(dǎo)入農(nóng)桿菌T侵染植物細(xì)胞T目的 基因穩(wěn)定維持和表達(dá)將重組 DNA 分子提純T顯微注射入受體細(xì)胞T培養(yǎng)、發(fā)育T獲得具有新 性狀的生物CaCb 處理增大細(xì)胞壁通 透性T重組

24、DNA 分子與 處理后的受體細(xì)胞混合T重組 DNA分子進(jìn)入受 體細(xì)胞篩選含有目的基因的受體細(xì)胞篩選原因：并不是所有的細(xì)胞都接納了重組DNA 分子，還有部分細(xì)胞接納了載體一載體連接物、目的基因一目的基因連接物，甚至有的細(xì)胞既沒(méi)有接納重組 DNA 分子，也沒(méi)有接納載體一載體連接物、目的基因一目的基因連接物。篩選方法：主要是利用載體上的抗生素抗性基因的作用借助一定方法(如影印接種)用選擇(5)目的基因的表達(dá)酶的作用下，目的基因和載體 DNA 貝 V 可任意連接。 為了使目的基因與質(zhì)粒能定向連接，可使培養(yǎng)基篩選。14若目的基因成功表達(dá)，則轉(zhuǎn)基因生物細(xì)胞中會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)（可用抗原一抗體法檢測(cè)）,轉(zhuǎn)基

25、因生物會(huì)表現(xiàn)相應(yīng)的性狀（如可接種病原體觀察轉(zhuǎn)基因生物的抗性）?？键c(diǎn) 3 結(jié)合植物的克隆考查科學(xué)實(shí)踐能力5.下面是關(guān)于植物克隆的問(wèn)題。請(qǐng)回答：（1）為培育能高效吸收和富集重金屬鎘的轉(zhuǎn)基因植物，將野外采得的某植物幼葉消毒后，用酶混合液處理，獲得了原生質(zhì)體。酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是-。（2）_ 將目的基因?qū)氲皆|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再通過(guò) _ 得到分散的胚性細(xì)胞，發(fā)育成_，生長(zhǎng)發(fā)育后獲得轉(zhuǎn)基因植株。/*（3）愈傷組織繼代次數(shù)過(guò)多會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力，下列原因錯(cuò)誤的是_。A. 愈傷組織發(fā)生染色體畸變B. 愈傷組織不能分散成單細(xì)胞C. 愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變ID. 愈傷

26、組織對(duì)外源激素敏感性發(fā)生改變解析（1）甘露醇可以維持溶液的滲透壓，以防止失去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體吸水脹破。（2）將愈傷組織放在搖床上，通過(guò)液體懸浮培養(yǎng)可以得到分散的單細(xì)胞，這些單細(xì)胞具有細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小、細(xì)胞核大等胚性細(xì)胞的特征，胚性細(xì)胞發(fā)育成胚狀體，進(jìn)一步形成植株。（3）在長(zhǎng)期的培養(yǎng)過(guò)程中，愈傷組織可能發(fā)生染色體畸變、內(nèi)部激素平衡改變、對(duì)外源激素敏感性改變等變化，而喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力。答案（1）維持滲透壓 （2）液體懸浮培養(yǎng) 胚狀體 （3）B6.植物葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體的分離和培養(yǎng)的主要過(guò)程可用下圖所示圖解簡(jiǎn)單表示，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：15純枷勺雌質(zhì)體I時(shí)基中杠更亟胚狀體16（1）_ 培育胚

27、狀體利用了這一項(xiàng)生物技術(shù)，胚狀體再繼續(xù)培養(yǎng)，則可培育出完整的植株，這體現(xiàn)了植物細(xì)胞的 _ 。（2）要獲得植物葉肉細(xì)胞的原生質(zhì)體，_ 需要在_ 溶液環(huán)境下，用酶和_酶去除細(xì)胞壁。（3）_ 培養(yǎng)基中除了含有一定的營(yíng)養(yǎng)外， 還必須含有 _ 等植物激素，還需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的_ 。如果愈傷組織是三七葉肉細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的，為了獲得三七的次生代謝產(chǎn)物，則只需要培養(yǎng)到_ 。如果愈傷組織是棉花葉肉細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的，通過(guò)基因工程要獲取抗蟲(chóng)棉，重組 DNA 分子導(dǎo)入棉花愈傷組織細(xì)胞常用的方法是 _法。（5）從葉片的葉肉細(xì)胞到獲得胚狀體的過(guò)程中，必須要經(jīng)過(guò)_ （不定項(xiàng)選擇：A.有絲分裂 B.減數(shù)分裂C.原生質(zhì)體融合D

28、.脫分化 E.再分化）。解析（1）離體植物細(xì)胞通過(guò)脫分化形成愈傷組織，通過(guò)再分化形成具有根和芽的胚狀體，再通過(guò)細(xì)胞分裂、分化發(fā)育成一個(gè)完整的植株。該技術(shù)稱為植物組織培養(yǎng)，其原理為植物細(xì) 胞的全能性。（2）制備葉片原生質(zhì)體的酶混合液中，一般含較高濃度的甘露醇，其目的是避 免制備的原生質(zhì)體吸水脹破；根據(jù)酶的專一性，去除植物細(xì)胞壁需用纖維素酶和果膠酶。（3）培養(yǎng)基的成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、維生素、氨基酸、蔗糖、植物激素（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等）等；培養(yǎng)基要求進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。（4）三七的細(xì)胞產(chǎn)物為細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，將三七葉肉細(xì)胞培養(yǎng)到愈傷組織即可；目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。（5）離體葉肉細(xì)胞培養(yǎng)到

29、胚狀體的過(guò)程中必須經(jīng)過(guò)脫分化和有絲分裂形成愈傷組織，再分化和有絲分裂形成胚狀體。答案（1）植物組織培養(yǎng)全能性 （2）0.50.6 mol/L 的甘露醇纖維素果膠（3）細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素滅菌（4）愈傷組織農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 （5）ADEO 特別提醒植物細(xì)胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)統(tǒng)稱為植物組織培養(yǎng)，最終都能得到完整植株，但由于培養(yǎng)目的不同，有時(shí)需對(duì)愈傷組織進(jìn)行特殊處理。它們之間的關(guān)系如圖所示：離休細(xì)織股井化愈飭細(xì)筑！我體耗評(píng)培斥1718考點(diǎn) 4 動(dòng)物的克隆7.（2018 浙江“超級(jí)全能生”聯(lián)考）如圖表示動(dòng)物細(xì)胞克隆和制備單克隆抗體的相關(guān)過(guò)程,請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題:臨唏謚血干細(xì)胞、晦肪1-亠細(xì)胞.骨細(xì)胞等1

30、-甲細(xì)胞.-乙緲胞廠單肛隆抗體一兩狐胞（i）過(guò)程常應(yīng)用_方法導(dǎo)入重組誘導(dǎo)基因后得到干細(xì)胞；部分干細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)可分化成全身的不同組織或器官，說(shuō)明這些細(xì)胞具有 _ 性。該過(guò)程利用了甲細(xì)胞具有的 _ 能力，甲和乙細(xì)胞可經(jīng)過(guò)生物誘導(dǎo)劑 _的作用形成丙細(xì)胞。取一個(gè)丙細(xì)胞，放在含大量失去 _ 的小鼠成纖維細(xì)胞的特定培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，最后產(chǎn)生大量的細(xì)胞群，這種方法為 _ 法。八（3）下列關(guān)于經(jīng)和過(guò)程得到單克隆抗體的敘述，錯(cuò)誤的是（）A. 該過(guò)程應(yīng)用了細(xì)胞膜具有流動(dòng)性的原理A .B. 丙細(xì)胞要具有分泌多種抗體的能力C. 該過(guò)程應(yīng)用了動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)D. 丙細(xì)胞的形成先通過(guò)篩選得到雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)行

31、抗體檢驗(yàn)答案（1）顯微注射發(fā)育全能（2）連續(xù)增殖（滅活的）仙臺(tái)病毒 增殖力克隆培養(yǎng)（3）B8.（2018 金麗衢十二校聯(lián)考）生物技術(shù)已經(jīng)滲入到了我們生活的方方面面。請(qǐng)回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)問(wèn)題：Ay（1）_動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是 _ ，需要將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)。（2）_培養(yǎng)過(guò)程中需要用胰蛋白酶消化組織中的。（3）_傳代培養(yǎng)得到的細(xì)胞系往往具有核型。關(guān)于細(xì)胞系和細(xì)胞株下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是_（A.原代培養(yǎng)得到的細(xì)胞也可以是細(xì)胞系B.細(xì)胞株是特殊的細(xì)胞系C連續(xù)細(xì)胞 系都獲得了不死性D.連續(xù)細(xì)胞系不一定都發(fā)生了轉(zhuǎn)化）。小凰直纖 扎譜基 1 卅縮母細(xì)胞H必病注入小鼠悴內(nèi)19（4）細(xì)胞克隆又稱為克隆培養(yǎng)法，

32、它的最主要用途之一就是從普通細(xì)胞系中分離出_的突變細(xì)胞系。答案（1）細(xì)胞增殖CO 培養(yǎng)箱（2）膠原纖維（3）異倍體 D （4）缺乏特殊基因O歸納概括20(1)原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)含義兩者的界疋原代培從機(jī)體取出后立即進(jìn)行的細(xì)胞、組織培嚴(yán)格地說(shuō)，將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移或養(yǎng)養(yǎng)移植到另一個(gè)培養(yǎng)瓶就是傳代培養(yǎng)。有傳代培將原代培養(yǎng)細(xì)胞分成若干份，接種到若時(shí)為了方便，也將取初的右十次傳代歸養(yǎng)干份培養(yǎng)基中，使其繼續(xù)生長(zhǎng)、繁殖入原代培養(yǎng)范圍(2)細(xì)胞株、細(xì)胞系種類來(lái)源特點(diǎn)細(xì)胞系有限細(xì)胞系由二倍體細(xì)胞傳代培養(yǎng)建成有接觸抑制；不能連續(xù)培養(yǎng)連續(xù)細(xì)胞系由傳代細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)建成發(fā)生了轉(zhuǎn)化，多數(shù)具有異倍體核型； 有些具有異體致

33、瘤性；有些具有不 死性，但不致癌細(xì)胞株有限細(xì)胞株通過(guò)一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞傳代次數(shù)有限一般具有恒定染色 體組型、同功酶類 型、病毒敏感性和生 化特性等連續(xù)細(xì)胞株可連續(xù)多次傳代(3)單克隆抗體制備中的兩次篩選項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還 有未融合的細(xì)胞由于小鼠在生活中受到多種抗原的刺激，所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選。其中未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“ BB細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞)都會(huì)死亡， 只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“B瘤”細(xì)胞)才能生長(zhǎng)用多孔培養(yǎng)皿培

34、養(yǎng)，在每個(gè)孔中只有一個(gè) 雜交瘤細(xì)胞的情況下開(kāi)始克隆化培養(yǎng)和抗 體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗Cy體的細(xì)胞群21篩選結(jié)果得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞隨堂自測(cè)1W宀世1.(2018 紹興 3 月選考適應(yīng)性考試)基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的基因工程制藥行業(yè)在最近10年發(fā)展迅速，其中構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株是最重要的環(huán)節(jié)，常見(jiàn)過(guò)程為：獲得目的基因T將目的基因?qū)胨拗骷?xì)胞T初步篩選T擴(kuò)增T單克隆化T篩選T馴化T工業(yè)生產(chǎn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)_如果該目的基因的序列是未知的，我們可以建立一個(gè) _ ，然后在這里面尋找到要研究的目的基因。為了實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)蛋白質(zhì)類藥物，常用CHOffl胞(中國(guó)倉(cāng)鼠卵

35、巢的成纖維母細(xì)胞)作為哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)的宿主細(xì)胞，這種細(xì)胞應(yīng)該具有 _ 能力，從而可以反復(fù)傳代使用。/為了得到 CHC 細(xì)胞，可以直接將組織從機(jī)體中取出后立即進(jìn)行細(xì)胞、組織培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞從組JFjto*織塊中遷移出來(lái)，形成 _ 并增大后，再傳代培養(yǎng)。(3)利用“裹有重組質(zhì)粒的脂質(zhì)體與動(dòng)物細(xì)胞融合”、“病毒侵染細(xì)胞”是將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的兩種常用方法， 前者所用的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)上由 _ 分子構(gòu)成，后者不能用噬菌體的原因是_(4)_ 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行單克隆化培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中往往需要添加血清、激素、滋養(yǎng)細(xì)胞等，這些措 施的目的是_ 。確定生產(chǎn)用的細(xì)胞株后， 需要對(duì)細(xì)胞馴化使其適應(yīng)生產(chǎn)規(guī)模下的培養(yǎng)條件,工業(yè)生

36、產(chǎn)使用的22培養(yǎng)基大多是無(wú)血清培養(yǎng)基，這對(duì)生物制品的好處有答案（1）基因文庫(kù)（2）無(wú)限增殖（不死性）生長(zhǎng)暈（3）雙層磷脂噬菌體不能侵染動(dòng)物細(xì)胞（4）提高細(xì)胞克隆形成率有利于生物制品的純化（提取的基因表達(dá)產(chǎn)物純度高）2.（2018 浙江新高考研究聯(lián)盟）青蒿素是從黃花蒿莖葉中提取的抗瘧疾藥物。通過(guò)組織培養(yǎng)獲得青蒿素的途徑如圖所示。請(qǐng)回答：（1）圖中和分別表示黃花蒿組織培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞的 _ 和_ 過(guò)程。配制生芽培養(yǎng)基時(shí)生長(zhǎng)素比細(xì)胞分裂素的比值應(yīng)較 _ （填“高”或“低”）。配制培養(yǎng)基時(shí)通常加入凝固劑 _ 。配制后還須用_ 法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。外植體在接種前通?？捎皿w積分?jǐn)?shù)為 _ 的酒精進(jìn)行消毒。（3

37、）為了得到高產(chǎn)細(xì)胞系，通常要用酶解法獲得原生質(zhì)體，用_酶和_ 酶在0.50.6 mol/L 的_ 溶液環(huán)境（較高滲透壓）下去壁?？蒲腥藛T利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)用細(xì)菌作為工程菌獲得青蒿素的前體青蒿酸。先將目的基因與含有抗青霉素基因的質(zhì)粒形成 _,再與細(xì)菌菌液混合導(dǎo)入目的基因。 用玻璃刮刀將稀釋后的菌液用 _ 法接種到含 _ 的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)形成 _,再進(jìn)一步篩選和培養(yǎng)。若最終能從細(xì)菌中提取到 _ 則說(shuō)明轉(zhuǎn)基因成功。答案（1）脫分化再分化 （2）低瓊脂高壓蒸汽滅菌法70% （3）果膠纖維素甘露醇（4）重組質(zhì)粒（重組 DNA 分子）涂布青霉素單菌落青蒿酸3.（2017 嘉興 9 月選考模擬）下圖表示細(xì)

38、胞融合技術(shù)的部分過(guò)程，請(qǐng)回答:23（1）若甲、乙細(xì)胞是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合時(shí)，首先需將_消化除去。獲得的丁細(xì)胞24在植物組織培養(yǎng)時(shí)通過(guò)平衡 _ 配比進(jìn)行調(diào)控，從而實(shí)現(xiàn)植物器官、組織的發(fā)生和形態(tài)建成。（2）若該過(guò)程是制備癌胚抗原單克隆抗體的部分過(guò)程，實(shí)驗(yàn)中首先將_ 注入小鼠體內(nèi)，然后從產(chǎn)生免疫反應(yīng)的小鼠脾臟中獲取經(jīng)免疫的 _細(xì)胞，將其與骨髓瘤細(xì)胞融合， 篩選出_細(xì)胞。若甲、乙細(xì)胞到丙細(xì)胞過(guò)程是哺乳動(dòng)物體外受精過(guò)程，甲、乙細(xì)胞能夠結(jié)合的基礎(chǔ)是細(xì)胞膜表面有特異性_ 功能的蛋白。若丁細(xì)胞為囊胚的外表扁平細(xì)胞，由其組成的結(jié)構(gòu) 一稱為_(kāi)。jifVXu,答案（1）細(xì)胞壁植物激素（2）癌胚抗原 B 淋巴雜交瘤

39、（3）識(shí)別滋養(yǎng)層猱后限時(shí)訓(xùn)竦限討演給丸加（時(shí)間：30 分鐘）一、選擇題1限制性核酸內(nèi)切酶Muni和限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI 的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是A .AATT和一&AATTG-。如圖表示四種質(zhì)粒和目的基因，其中，箭頭所指部位為限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)，質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因。下列質(zhì)粒適于作為圖示目的基因載體的是（）旦的描因不適合作為載體；質(zhì)粒和的標(biāo)記基因上都有限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。只有質(zhì)粒上既有標(biāo)記基因，且 上。答案 A2.如圖是表達(dá)新基因用的質(zhì)粒的示意圖，若要將目的基因插入到質(zhì)粒上的A 處，則切割基因時(shí)可用的是（）Muni的切割點(diǎn)不在標(biāo)記基因CtTAAGGAA !

40、 1CC.ITAACGAA TIC含目的皐閃的 DN 為片段解析 由圖可知，質(zhì)粒上無(wú)標(biāo)記基因，25A.Hind 川C.EcoB解析 A 處有BanHI、EcoB、ClaI限制性核酸內(nèi)切酶的切點(diǎn)，使用AD 中的EcoB 切割時(shí)，才能讓目的基因插入到 A 處。答案 C3. 下列有關(guān)克隆技術(shù)的敘述正確的是（）A. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，保留接觸抑制的連續(xù)細(xì)胞系獲得不死性，但不致癌B. 由于植物細(xì)胞具有全能性，水稻等在多次傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞全能性的表達(dá)能力不變C. 從個(gè)體中分離出單個(gè)組織進(jìn)行培養(yǎng)是細(xì)胞克隆最基本要求D. 原生質(zhì)體的獲取需在較低滲透壓的環(huán)境下進(jìn)行解析細(xì)胞多次傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞全能性的表達(dá)能力降低；

41、從個(gè)體中分離出單個(gè)細(xì)胞或多個(gè) 分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)是細(xì)胞克隆最基本要求；原生質(zhì)體的獲取需在較高滲透壓的環(huán)境下進(jìn) 行。答案 A4. 下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是（）A. 培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞B. 克隆培養(yǎng)法培養(yǎng)過(guò)程中多數(shù)細(xì)胞的基因型會(huì)發(fā)生改變C. 二倍體細(xì)胞的傳代培養(yǎng)次數(shù)通常是無(wú)限的D. 惡性細(xì)胞系的細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)解析 動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中有接觸抑制現(xiàn)象，細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中會(huì)貼壁生長(zhǎng)， 形成一層細(xì)胞，相互接觸后停止生長(zhǎng)；克隆培養(yǎng)法培養(yǎng)過(guò)程中，僅有極少數(shù)細(xì)胞的基因型會(huì)發(fā)生改變；二倍體細(xì)胞的傳代培養(yǎng)一般傳至10 代后就不易傳下去了；惡性細(xì)胞系的細(xì)胞具有不死性，可以進(jìn)

42、行傳代培養(yǎng)。答案 D二、非選擇題5.新一代基因編輯工具由Cas9（ 種限制性核酸內(nèi)切酶）和向?qū)?RNA構(gòu)成。該復(fù)合體能與DNA 分子上的特定序列結(jié)合，并在合適位點(diǎn)切斷DNA 雙鏈（如下圖所示）。DNA 被切斷后,細(xì)胞會(huì)啟動(dòng) DNA 損傷修復(fù)機(jī)制，在此基礎(chǔ)上如果為細(xì)胞提供一個(gè)修復(fù)模板，細(xì)胞就會(huì)按照 提供的模板26在修復(fù)過(guò)程中引入片段插入或定點(diǎn)突變，從而實(shí)現(xiàn)基因編輯。7 CasO 向?qū)?RNA HLH 基閔紅 1 DNA切點(diǎn)-請(qǐng)回答：（1）在將編碼 Cas9的基因?qū)胝婧思?xì)胞的轉(zhuǎn)基因操作中，若控制合成Cas9 的基因序列已知，可用_方法合成目的基因， 再構(gòu)建_導(dǎo)入真核細(xì)胞，該過(guò)程中需要使用的酶是_

43、（A.限制性核酸內(nèi)切酶B.DNA 連接酶 C.限制性核酸內(nèi)切酶和 DNA 連接酶 D.DNA 聚合酶）。上述轉(zhuǎn)基因操作成功的標(biāo)志是。（2）如圖所示，基因編輯工具發(fā)揮作用時(shí)，向?qū)NA 分子的序列與基因組 DNA 中特定堿基序列因?yàn)?_所以能結(jié)合在一起， 然后由 Cas9 催化_ 鍵斷裂，從而使 DNA分子斷裂。（3）一般來(lái)說(shuō)， 在使用基因編輯工具對(duì)不同基因進(jìn)行編輯時(shí)，應(yīng)使用Cas9 和_（填“相同”或“不同”）的向?qū)?RNA 進(jìn)行基因的相關(guān)編輯。（4）_ 通過(guò)上述介紹， 你認(rèn)為基于 Cas9 系統(tǒng)的基因編輯技術(shù)在_ 等方面有廣闊的應(yīng)用前景。（至少答出兩點(diǎn)）解析 若目的基因序列已知，可用化學(xué)方法

44、合成目的基因，再利用限制性核酸內(nèi)切酶和DNA 連接酶構(gòu)建含目的基因的重組DNA 分子，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞。 轉(zhuǎn)基因操作成功的標(biāo)志是目的基因成功表達(dá)獲得目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。如題圖所示，Cas9 系統(tǒng)發(fā)揮作用時(shí)，向?qū)?RNA 分子的序列與基因組 DNA 中特定堿基序列 因?yàn)閴A基序列互補(bǔ)所以能結(jié)合在一起。要使DNA 分子斷裂，需要由 Cas9 催化脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵水解。（3）根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在使用Cas9 系統(tǒng)對(duì)不同基因進(jìn)行編輯時(shí)，應(yīng)使用Cas9 和不同的向?qū)?RNA 進(jìn)行基因的相關(guān)編輯答案（1）化學(xué) 含目的基因的重組DNA 分子 C 控制 Cas9 的基因成功表達(dá)（或合成了27Cas

45、9） （2）堿基序列互補(bǔ)磷酸二酯（3）不同（4）基因治療、基因水平進(jìn)行動(dòng)植物的育28種、研究基因的功能等（合理即可）6.研究人員將抗蟲(chóng)基因（SCK 基因）導(dǎo)入水稻培育抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因水稻，在該工程中所用的基因“剪刀”能識(shí)別的序列是一 GGATC，切點(diǎn)在 GG 之間。同時(shí)卡那霉素抗性基因（ka nr）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。下面為培育轉(zhuǎn) 基因水稻過(guò)程示意圖，請(qǐng)回答:抗蟲(chóng)矗闔蟲(chóng)紐Ti訪粒的磺抨藺開(kāi)花后水強(qiáng)加人蟻非皋丿篩選培春（1）畫(huà)出質(zhì)粒的切割點(diǎn)被切割后形成的粘性末端的示意圖（2）_ 培養(yǎng)基 2 除含有必要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素外，還必須加入 _。（3）某些抗蟲(chóng)植

46、株體細(xì)胞含兩個(gè)SCK 基因， 假設(shè)這兩個(gè)基因在染色體上隨機(jī)整合，出現(xiàn)如下圖所示三種情況。屮乙甲圖個(gè)體自交，F(xiàn)i中抗蟲(chóng)植株和非抗蟲(chóng)植株之間的比例為 _，乙圖個(gè)體自交，子代中抗蟲(chóng)植株和非抗蟲(chóng)植株之間的比例為 _，丙圖個(gè)體自交，F(xiàn)i中抗蟲(chóng)植株和非抗蟲(chóng)植株之間的比例為_(kāi) 。解析 甲圖植株相當(dāng)于是 SCK 基因純合子，其產(chǎn)生的配子均含有 SCK 基因；乙圖植株相當(dāng)于 是 SCK基因雜合子，其產(chǎn)生的配子中有 1/2 含有 SCK 基因；丙圖植株相當(dāng)于是 SCK 基因雜合 子，其產(chǎn)生的配子中有 3/4 含有 SCK 基因。答案GGATC GGATC-CCTAGG CCTAG G29卡那霉素（3）1：03：1

47、15：17.人的血清白蛋白在臨床上需求量很大，通常從人血中提取。由于艾滋病病毒（HIV）等人類感染性病原體造成的威脅與日俱增，使人們對(duì)血液制品顧慮重重。如果將人的血清白蛋白基30因?qū)肽膛＜?xì)胞中，那么利用牛的乳汁來(lái)生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能。大致過(guò)程如下:a. 將人的血清白蛋白基因?qū)氪颇膛Ｅ咛ゼ?xì)胞，形成重組細(xì)胞；b. 取出重組細(xì)胞的細(xì)胞核，注入牛去核卵細(xì)胞中形成重組細(xì)胞；c. 電脈沖刺激重組細(xì)胞，促使其形成早期胚胎；d. 將胚胎移植到母牛的子宮中，最終發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小牛。重組細(xì)胞的獲得是利用了 _技術(shù)，它實(shí)現(xiàn)了奶牛胚胎細(xì)胞中的DNA 與_的重組。（2）重組細(xì)胞的獲得是利用了克隆技術(shù)中的 _ 技術(shù)

48、，使重組細(xì)胞的細(xì)胞核與牛的A ._融合。由圖可知，動(dòng)物克隆技術(shù)的基礎(chǔ)是_ _ （A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.動(dòng)物細(xì)胞的全能性C.動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)D.核移植）。（4）利用轉(zhuǎn)基因牛乳汁提取藥物工藝簡(jiǎn)單，甚至可直接飲用治病。如果將藥物蛋白基因移到 動(dòng)物（如牛）的膀胱上皮細(xì)胞中，利用轉(zhuǎn)基因牛的尿液生產(chǎn)提取藥物比乳汁提取藥物的更大優(yōu)關(guān)系的是 _ （A.細(xì)胞全能性的揭示B.噬菌體的研究C.細(xì)胞周期調(diào)節(jié)控制機(jī)理的分析 D.對(duì)癌變機(jī)理和衰老原因的研究）。解析（1）基因工程可將目的基因一一人的血清白蛋白基因與受體細(xì)胞牛胚胎細(xì)胞的DNA 進(jìn)行重組。（2）克隆技術(shù)中的細(xì)胞核移植技術(shù)可將去核的牛卵細(xì)胞與含有目的基因的供體細(xì)

49、胞核融合構(gòu)建重組細(xì)胞。（4）建立膀胱生物反應(yīng)器的好處是可以不分動(dòng)物的性別及不同生長(zhǎng) 發(fā)育期，越性是：_ 込_（5）重組細(xì)胞培養(yǎng)成早期胚胎利用了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)無(wú)密切31均可產(chǎn)生所需藥物。（5）噬菌體是細(xì)菌病毒，無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)， A、C、D 項(xiàng)所述的內(nèi)容都與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)密不可分。答案（1）基因工程人的血清白蛋白基因（2）核移植 去核卵細(xì)胞（3）C（4）處于不同發(fā)育時(shí)期的動(dòng)物都可生產(chǎn)雌性和雄性動(dòng)物都可生產(chǎn)（5）B8.鼠源單克隆抗體用于疾病的治療時(shí)，易發(fā)生不良反應(yīng)，科學(xué)家通過(guò)對(duì)鼠和人控制抗體產(chǎn)生的基因進(jìn)行拼接，實(shí)現(xiàn)了對(duì)鼠源單克隆抗體的改造，生產(chǎn)出對(duì)人體不良反應(yīng)小、效果更好的單克隆

50、抗體。請(qǐng)回答：（1）_ 鼠源單克隆抗體是將經(jīng)過(guò)免疫的小鼠細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，然后篩選出_ 的雜交瘤細(xì)胞，并通過(guò)體內(nèi)或體外培 養(yǎng)生產(chǎn)的抗體。（2）_ 動(dòng)物細(xì)胞融合常用等物質(zhì)介導(dǎo)， 細(xì)胞融合體現(xiàn)了細(xì)胞膜的_。在體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時(shí)， 為提高細(xì)胞克隆形成率， 可采取的措施有（A.添加生長(zhǎng)素B.添加甘露醇C.添加胰島素 D.添加胎牛血清）。（3）_ 單抗比一般抗血清優(yōu)越得多，原因是 _ 基因拼接用到的工具酶有 _ 和_答案（1）B 淋巴 既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生特異抗體（2）滅活的仙臺(tái)病毒、聚乙二醇流動(dòng)性 CD （3） 一般抗血清中的抗體是一群識(shí)別不同抗原部位的抗體混合物，而單抗單一，識(shí)別抗原部位具有專一性（4）限制性核酸內(nèi)切酶DNA 連接酶9.下圖為科學(xué)家利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗病番茄植株過(guò)程的示意圖，請(qǐng)回答以下問(wèn)題:32（1）_ 圖中所選的 Ti 質(zhì)粒中往往需含有（A.抗蟲(chóng) B.胰島素 C.抗生素抗性 D.抗凍）基因，有利于重組質(zhì)粒的篩選。 A 過(guò)程中常用的酶有 _。（2）B 過(guò)程中常用氯化鈣處理，_ 其目的是, C 過(guò)程中為篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，需要對(duì)農(nóng)桿菌進(jìn)行分離培