AB液質(zhì)操作規(guī)程完整

1、第一局部開(kāi)關(guān)機(jī)A A、開(kāi)機(jī)1 .翻開(kāi)UPS電源,翻開(kāi)氮?dú)獍l(fā)生器氣瓶,確認(rèn)Curtain gas的輸入壓力為0.4MPa, gas1/2為 0.7MPa, exhuast為 0.4MPa.2 .翻開(kāi)機(jī)械泵電源開(kāi)關(guān)5500系列直接翻開(kāi)質(zhì)譜主機(jī)電源,儀器自動(dòng)啟動(dòng)機(jī)械泵3 .等機(jī)械泵工作至少30min5 .翻開(kāi)質(zhì)譜主機(jī)電源開(kāi)關(guān)6 .過(guò)夜抽真空B B、關(guān)機(jī)1 .停止輸液：關(guān)停針泵或液相泵,或斷開(kāi)輸液管線一般質(zhì)譜主機(jī)Standby后液相系統(tǒng)也自動(dòng)待機(jī),輸液泵自動(dòng)關(guān)停,但建議操作人員再次確認(rèn),必須保證沒(méi)有任何 液體再泵入質(zhì)譜2 .使儀器待機(jī),并滅活配置3 .關(guān)閉質(zhì)譜儀主機(jī)電源開(kāi)關(guān)5500系列只需按下電源開(kāi)關(guān)

2、旁的VENT按鍵排放 真空4 .機(jī)械泵繼續(xù)工作至少30min5 .關(guān)閉機(jī)械泵上的電源開(kāi)關(guān)5500系列會(huì)自動(dòng)關(guān)停機(jī)械泵,待機(jī)械泵停止后即可 關(guān)閉5500系列主機(jī)上的電源開(kāi)關(guān)6 .關(guān)閉氣體發(fā)生器或氣瓶第二局部調(diào)諧1、PPG就是正離子校正液,PPG3000負(fù)離子調(diào)諧液,本臺(tái)儀器只用兩瓶校正液,正離子一瓶,負(fù)離子一瓶.洗液一瓶50%的甲醇水.調(diào)諧前先用洗液洗針兩次.吸校正液的時(shí)候慢慢吸,防止吸入氣泡,吸好以后將針泵卡住.再將高度調(diào)到5,將管路重新連接.不再連接六通閥,由質(zhì)譜直接進(jìn)樣,且將針泵的速度調(diào)到10pL/ml.2、調(diào)諧液弄好后在儀器面板工具欄上：TOOl一工程一創(chuàng)立工程.此工程為一個(gè)文件夾,文件

3、夾里面包括所有此次采集的信息,方法、 序列等,且所有采集的工程都固定在一個(gè) 文件夾下面：D:/Analyst Data/Project.新建工程的時(shí)候,彈出窗口中有個(gè) Add All ,可以創(chuàng) 建孫文件夾.3、聯(lián)機(jī)：軟件翻開(kāi)后在左上方硬件配置單機(jī)選中,雙擊翻開(kāi)一只需選中儀器MA active profi le.圖標(biāo)變?yōu)榫G色,表示聯(lián)機(jī)成功.調(diào)諧只需要選中質(zhì)譜.儀器的實(shí)時(shí)狀態(tài) 可以點(diǎn)擊右下方的圖標(biāo),質(zhì)譜和液相都是單獨(dú)觀察,質(zhì)譜要注意真空度,為0.5.4、調(diào)諧一手動(dòng)調(diào)諧一工程文件夾選中下拉菜單中的為系統(tǒng)默認(rèn)的調(diào)諧文件夾,先Qbstart syring pump 翻開(kāi)針泵一start 質(zhì)譜,開(kāi)始采集以

4、后觀察基線是否平衡,假設(shè) 等兩分鐘還未平衡好,那么手動(dòng)將針泵往上抬.5、平衡好后基線平穩(wěn)那么為平衡好,重新進(jìn)樣,重新點(diǎn)擊start syring pump o Resolution 分辨率一advanced 高級(jí)選項(xiàng)看到結(jié)果后調(diào)節(jié)質(zhì)量軸和分辨率做準(zhǔn)備,只能先翻開(kāi)這個(gè),再翻開(kāi)譜圖一實(shí)時(shí)質(zhì)譜圖右鍵 一open file 燧便點(diǎn)一個(gè)框一軟件上方的從譜圖校正一 PPGPOS正離子- start出現(xiàn)三行：1、質(zhì)量軸.2、分辨率.3、兩次調(diào)諧的差異一假設(shè)質(zhì)量軸有差異一右上角一yes一假設(shè)分辨率飛離出虛線 一offset 偏大調(diào)大,偏小調(diào)小輸入校正的數(shù)值,再重新進(jìn)樣,如此反復(fù),直到點(diǎn)落在虛線以內(nèi),實(shí)線代表最

5、適宜.6、校正好后儀器會(huì)自動(dòng)保存,直接關(guān)掉窗口即可.負(fù)離子調(diào)諧和正離子調(diào)諧步驟一樣,只是在選擇方法的時(shí)候要注意選擇負(fù)離子模式.還有看結(jié)果時(shí)要選擇PPG3000.此為負(fù)離子調(diào)諧液.調(diào)諧因針泵流速很小,10L/ml,所以不需要設(shè)定離子源溫度及輔助氣,直接設(shè)定噴霧器流速為50,就可以將樣品霧化,氣簾氣也不需要設(shè)置,由于沒(méi)有多余的溶劑需要吹 走.第三局部：方法優(yōu)化1 .在 Analyst 軟件 Tools 菜單中選擇 Project - Create Projec在 Project name項(xiàng)下 輸入新建的Project名稱.注意,不要點(diǎn)選窗口中的其他按鈕！點(diǎn)擊 OK,確認(rèn)新 建 Projecto2

6、.在Analyst軟件界面下,雙擊導(dǎo)航欄內(nèi) Hardware Configuration.在彈出窗口中 選擇MassOnly,點(diǎn)擊Activate Profile,激活 MassOnly 只聯(lián)接質(zhì)譜主機(jī).3 .在導(dǎo)航欄內(nèi)單擊Tune and Calibrate進(jìn)入調(diào)諧模式.點(diǎn)擊上方工具條中的T鈕. 此時(shí),應(yīng)注意到主機(jī)有 撲聲音,說(shuō)明進(jìn)入調(diào)諧狀態(tài).此時(shí)右下角質(zhì)譜狀態(tài)顯示 綠色.雙擊Manual Tuning,進(jìn)入質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置及運(yùn)行窗口.4 .使用1mL玻璃進(jìn)樣針吸取適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于進(jìn)樣針座上.點(diǎn)擊MS Method下拉菜單,選擇 Syringe Pump Method,設(shè)定針泵流速 Flow

7、Rate為10仙L/mirt 5.點(diǎn)擊Start Syringe Pump按鈕開(kāi)針泵進(jìn)樣.6 .返回MS Method,選擇掃描模式 Scan Type為Q1 MS,設(shè)定掃描速度Scan Rate 為10Da/s,設(shè)定掃描范圍Start-Stop設(shè)定為50化合物分子量.DP預(yù)輸入 60.7 .點(diǎn)擊start開(kāi)始采集數(shù)據(jù).運(yùn)行穩(wěn)定后,注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn),并限制其響應(yīng)值在約E4以下.點(diǎn)擊stop,選擇第一個(gè)峰(后面是同位素峰)的平 穩(wěn)段,雙擊,選中母離子.點(diǎn)擊右鍵,選擇 Delete Pane8 .設(shè)定Scan type為產(chǎn)物離子掃描 Product Ion (Ms2),掃描速度200

8、Da/s,選擇掃 描正/負(fù)離子,輸入母離子(product of),設(shè)定掃描范圍startstop為50MW+20,覆蓋可能的子離子質(zhì)量范圍,點(diǎn)擊 compoud標(biāo)簽,設(shè)定(DP) 60, (CE) 5.9 .點(diǎn)擊start,開(kāi)始采集數(shù)據(jù),注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn).手動(dòng)調(diào)節(jié)CE,以5eV為步長(zhǎng),逐漸增加.每次增加后稍作等待,直至目標(biāo)化合物的子離子清 晰看見(jiàn).選擇平穩(wěn)的一段,雙擊,選擇子離子.10 .選才¥ Scan Type為MRM.設(shè)定參數(shù)表格中的Q1對(duì)應(yīng)的母離子,Q3對(duì)應(yīng)的子 離子,time (ms)為50, ID值設(shè)為 名稱1 (定量),名稱2 (定性).11 .點(diǎn)擊 E

9、dit Ramp,在 Paramete嚇選擇 Collision Energy,點(diǎn)擊 OK.點(diǎn)擊 start 開(kāi)始采集數(shù)據(jù),記錄每個(gè) MRM通道的最正確CE電壓.在MRM參數(shù)設(shè)定表中, 右鍵點(diǎn)擊.選擇 Collision Energy CE,調(diào)出表格中的CE歹輸入每個(gè) MRM通 道的最正確CE電壓值,精確到個(gè)位數(shù).重復(fù)以上步驟,在 Parameter項(xiàng)下選擇 Declustering Potential,優(yōu)化并保存DP.完成后選擇菜單File/Save保存采樣方法, 文件名.dam.第四局部：方法建立一、LCMS方法的建立：1、連接儀器：翻開(kāi)HPLC質(zhì)譜電源,將HPLC系統(tǒng)接上柱子,將6號(hào)出口

10、管線與離子源連好.調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處,雙擊HardwareConfigure ,在硬件配置菜單下單擊 LCMS 液相與質(zhì)譜聯(lián)用,單擊Activate profile激活儀器,會(huì)聽(tīng)到笛的一聲,說(shuō)明儀器已經(jīng)連接上.2、確認(rèn)液質(zhì)同步：選擇工程之前優(yōu)化方法的時(shí)候已經(jīng)建立的工程；雙擊 Build acquisition method新建方法,彈出新建方法模板.在模板左側(cè)點(diǎn)擊 acquisition method, 模板右邊顯示對(duì)應(yīng)的參數(shù), 確認(rèn) synchronization mode選擇 LC Sync,表示液質(zhì)同步.3、設(shè)置MRM參數(shù)：點(diǎn)擊方法模板左側(cè)的 MRM ,在模板右側(cè)Scan Ty

11、pe 下選擇 MRM ；在polarity下選擇化合物極性：Positive正離子、Negative 負(fù) 離子；Duration為15min 與液相別離相同的時(shí)間；表格中Q1:母離子分子量, Q3Da:子離子分子量,Time msec: 50, ID欄：化合物名稱離子對(duì)名稱 后空格加1為定量,空格加2為定性,在表格中右鍵分別單擊 DP、CE ,點(diǎn)擊 工具欄的OPEN翻開(kāi)之前優(yōu)化的方法參數(shù),調(diào)出DP,CE值,選中整行,Ctrl+c 復(fù) 制參數(shù),關(guān)閉窗口,再Ctrl+v 粘貼參數(shù)；最后點(diǎn)擊Edit parameter設(shè)置離子 源參數(shù)：Source/Gas項(xiàng)用以下推薦值：CUR 35 , IS:55

12、00正離子或-4500 負(fù)離 子,TEM 600 , GS1 60, GS2 70,點(diǎn)擊 OK.4、設(shè)置液相參數(shù)：點(diǎn)擊模板左邊的shimadzu LC system ,在右邊的pumps 欄下,設(shè)置stop time 運(yùn)行時(shí)間為15min , flow流速為1mL/min , A為水 相設(shè)為95%, B為有機(jī)相設(shè)為5% 設(shè)置時(shí)改B, A自動(dòng),泵最大壓力為50; 點(diǎn)擊time program設(shè)置液相梯度：例咪口坐類梯度設(shè)置：Time(min)AB95%5%55%95%105%95%10.195%5%1595%5%接著在右邊的Auto sampler欄下,設(shè)置清洗時(shí)間,在Rinse mode下選擇

13、Before and after 前后都洗,并設(shè)置清洗時(shí)間為5s,清洗液用50%甲醇水.最后點(diǎn)擊保 存按鈕,在保存窗口輸入該方法的名稱.二、建立批處理：1、雙擊Build acquisition batch ,在右邊窗口 set欄為批處理保存的文件夾 命名以便識(shí)別,冉點(diǎn)擊add set,最后點(diǎn)擊add sample,再選擇之前建立的LC-MS 方法,在彈出的窗口內(nèi)的number 進(jìn)樣樣品數(shù)處填入需要進(jìn)樣的 樣品個(gè)數(shù), 點(diǎn)擊OK.2、在參加的樣品列表內(nèi)依次填寫 sample name 樣品名稱、via position 樣 品瓶的位置、inj.volunme 進(jìn)樣體積：一般5微升或10微升.3、

14、在submit項(xiàng)下點(diǎn)擊submit按鈕以提交樣品序列.4、點(diǎn)擊工具條上左上角的view queue按鈕,可查看已提交的樣品.此時(shí)將儀器從校正狀態(tài)退出,進(jìn)入分析模式.確認(rèn)泵已翻開(kāi),首次進(jìn)樣液相 先排氣,再平衡儀器：先點(diǎn)擊工具條上的equilibrate平衡按鈕,在彈出的平衡 窗口中輸入平衡時(shí)間10min,點(diǎn)擊ok.右下角圖標(biāo)會(huì)變黃,待平衡結(jié)束后此處 圖標(biāo)會(huì)變成綠色,此時(shí)即可點(diǎn)擊start sample按鈕采集樣品信息,儀器會(huì)自動(dòng)對(duì) 已提交的全部樣品進(jìn)行采集.第五局部數(shù)據(jù)處理1 .雙擊翻開(kāi)Multiquilt ,選擇工程,點(diǎn)擊File下的熒光棒型圖標(biāo)：點(diǎn)擊 sample, 選擇需要的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)

15、據(jù),點(diǎn)擊 next, create new method為方法命名, 點(diǎn)擊next,選擇一個(gè)有代表性的樣品一般選擇濃度較大的標(biāo)品數(shù)據(jù),設(shè)置 分組同一物質(zhì)定量離子和定性離子設(shè)置為一組,并指定內(nèi)標(biāo),next,對(duì)每 個(gè)物質(zhì)進(jìn)行積分.2 .設(shè)置積分參數(shù)：a、Causian Smoth 平滑：一般是0,如有毛刺可改成1或2；b、 Expeceted Time 保存時(shí)間：一般不動(dòng)c、Expected time范圍：一般30s,表示在保存時(shí)間 土5s范圍d、 最小峰寬e、最小峰高f、背景噪音扣除：可調(diào)整目標(biāo)峰基線以下被積分的面積,比例越高積分越往下,必要時(shí)調(diào)整.g、分峰因子：峰有分叉時(shí)設(shè)置,如有兩個(gè)分叉,設(shè)

16、置為2,峰分叉不能大于2h、單位：設(shè)置單位,勾選 Apply units to all可將此單位用于所有化合物 點(diǎn)擊next,點(diǎn)擊finish 0在新跳出窗口內(nèi)將標(biāo)準(zhǔn)品選定,輸入濃度.查看各化合 物積分是否正常,點(diǎn)擊第三個(gè)圖標(biāo)查看標(biāo)準(zhǔn)曲線.報(bào)告打?。狐c(diǎn)擊 File, create report Report template 選擇報(bào)告模板,般用 samplel 和標(biāo) 線,內(nèi)標(biāo)報(bào)告只能用sample1,2,3,命名,選擇存儲(chǔ)報(bào)告位置,點(diǎn) ok.信噪比：選擇工程,雙擊open date file,點(diǎn)擊sample,選擇低濃度樣品,點(diǎn)擊 ok,點(diǎn)擊 XIC ,選擇定量離子,點(diǎn)擊ok,選中峰,按住sh

17、ift,選峰附近的一段時(shí)間,點(diǎn) Script,點(diǎn)擊S-To NScript,即可得到結(jié)果.第六局部：LC-MS離子阱原理及其應(yīng)用原理：在進(jìn)行多級(jí)質(zhì)譜分析MS-MS時(shí),首先限定目標(biāo)質(zhì)量的離子.通過(guò)調(diào)整交 變電壓,將大于以及小于目標(biāo)質(zhì)量的離子射出,從而使得僅有一個(gè)質(zhì)量的離子存 在于離子阱中并將其富集.目標(biāo)質(zhì)量的范圍被稱為 Isolation Width.之后通過(guò)向 離子阱內(nèi)注入氣體通常為氮?dú)饣虻獨(dú)?與離子發(fā)生碰撞使其被打成碎片.操作方法：首先在Analyst中翻開(kāi)一個(gè)成熟的MRM采樣方法,然后右鍵單擊 Acquisition Method 中的 MRM ,在彈出菜單中選擇 Add IDA Crit

18、eria Level.在新增的IDA-First Level Criteria頁(yè)面中設(shè)置相關(guān)邏輯選項(xiàng)其中四項(xiàng)尤 為重要1Select"X" to "Y" most internseOks個(gè)組分色譜共流出時(shí),指定觸發(fā)最強(qiáng)的假設(shè)干個(gè)母離子,“1 to 2表示最強(qiáng)和次強(qiáng)的兩個(gè)母離子,“ 1 to 3襲示最強(qiáng)和次強(qiáng)和第三位三個(gè)母離子,以此類推.請(qǐng)注意,如果 選擇了 “1 to 2< “1 to 3,'那么后續(xù)的EPI個(gè)數(shù)應(yīng)調(diào)整為對(duì)應(yīng)的兩個(gè)或三 個(gè).一般選擇兩個(gè)以下2)After Dynamic Background Subtraction of Survey Scan 表示執(zhí)行動(dòng)態(tài)背景 扣除,使得感興趣的母離子都盡可能的獲得觸發(fā)EPI的時(shí)機(jī).該選項(xiàng)尤為重要,為必選項(xiàng).3)Exclude former target ions在某些情況下,一次數(shù)據(jù)采集中,如果同一 個(gè)