




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、采用Fluo-3AM-ester探針研究桃不同組織的Ca論文導(dǎo)讀::以中油桃7號(hào)為試材。采用Fluo-3AM-ester探針研究桃不同組織的Ca。論文關(guān)鍵詞:桃,Ca2+信號(hào),激光掃描共聚焦顯微鏡,F(xiàn)luo-3AM-ester 鈣(Ca)作為植物必需的一種礦質(zhì)元素在自然界含量相當(dāng)豐富,它能夠以Ca2+的形式被根吸收并在植物生長發(fā)育和應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫中處于中心調(diào)控地位1。作為植物信號(hào)傳導(dǎo)中的第二信使2,在植物應(yīng)對(duì)環(huán)境刺激時(shí),胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度的改變是一重要的網(wǎng)絡(luò)信號(hào)。同時(shí)鈣在果實(shí)耐貯性以及品質(zhì)方面有重要作用,如果實(shí)的鈣含量的提高有利于維持細(xì)胞壁的強(qiáng)度和膜的完整性,保持果實(shí)硬度,提高果實(shí)品質(zhì)3
2、45。激光掃描共聚焦顯微鏡 (Laser Scanning Confocal Microscope LSCM)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的細(xì)胞生物學(xué)分析儀,與傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡相比生物論文,它具有更高的分辨率和清晰度,實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r(shí)觀察并可形成清晰的三維圖象等優(yōu)點(diǎn)。利用熒光探針標(biāo)記,LSCM可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)和離子的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行定性、定量、定時(shí)和定位分析,為我們對(duì)組織細(xì)胞的研究提供了新的手段6。Fluo-3 AM是一種長波鈣熒光探針,它的吸收和發(fā)射峰為506和526 nm,能被488nm的氬激光激發(fā),若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的,但是當(dāng)它與鈣離子結(jié)合后熒光會(huì)增加40至200倍,所以
3、Fluo-3-AM 常作為研究Ca2+信號(hào)的熒光染料7-8。本研究建立了采用Fluo-3 AM-ester為探針研究桃不同組織的Ca2+熒光信號(hào)特征分布,為進(jìn)一步研究Ca2+對(duì)果實(shí)品質(zhì)的影響,合理噴施鈣元素提供理論依據(jù)。1、材料、方法1.1 材料材料取自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所桃育種課題組品種資源圃,以中油桃7號(hào)為試材,每10天噴1.0 % CaNO3。我們選取成熟果實(shí)和同時(shí)期的葉柄用來分析鈣離子信號(hào)論文格式模板。1.2 方法1.2.1材料制備及探針雜交 采用徒手切片法,用剃須刀片將果實(shí)切取約1mm的厚度。將Fluo-3-AM(BiotiumUSA)50g溶于45l DMSO (lmM),
4、15l/支分裝,凍存。25gPluronic F-127溶于75l DMSO (25%,40溶解20分鐘)生物論文,室溫保存。用含HEPES的緩沖液將1mM Fluo-3-AM稀釋成10M,每ml染液中再加入5lPluoronic F127。具體操作步驟如下:(1)將切取組織放入1.5ml離心管;(2)用HEPES緩沖液漂洗2次 ;(3)用200l的Fluo-3 AM-ester(10M),37避光孵育60分鐘;(4)再用HEPES緩沖液漂洗3次;(5)放在載玻片上進(jìn)行觀察。1.2.2圖像采集及分析 Ca2+熒光信號(hào)圖像的采集采用Leica SP5 激光共聚焦掃描顯微鏡,制片后立即進(jìn)行觀察。采
5、用Argon激發(fā)光(波長488 nm)和透射光Transmission(DIC)掃描,選擇XYZ掃描模式。熒光掃描參數(shù)設(shè)置為:Gain值:500;分辨率(Resolution):8Bit;像素格式(Pixel Format):512*512 pixels;掃描速度(Scanning Speed)400Hz;針孔大?。≒inhole Size):53;線平均(Line Averaging):1;面平均(Frame Averaging):1;累加(Accumulation):1。圖像文件均儲(chǔ)存于計(jì)算機(jī)中,并以512*512像素類型保存。最大和最小相對(duì)熒光強(qiáng)度采用線定量分析法,2、結(jié)果與分析2.1
6、Ca2+信號(hào)熒光相對(duì)強(qiáng)度我們對(duì)的桃葉柄(圖1、2)和果肉組織(3、4)中Ca2+的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行了線性相對(duì)定量分析,從表1可以看出葉柄中10×物鏡下最大相對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度為218.32,最小相對(duì)強(qiáng)度為36.68, 20×物鏡下最大相對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度為212.21,最小相對(duì)強(qiáng)度為42.79;果肉組織中10×物鏡下最大相對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度為189.9 7,最小相對(duì)強(qiáng)度為45.03;20×物鏡下最大相對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度為176.07,最小相對(duì)強(qiáng)度為40.93。同一組織不同倍性物鏡觀察下相對(duì)最大熒光強(qiáng)度變化不大。2.1在不同組織中的分布通過比較Ca2+在桃葉柄和果肉組織中
7、的熒光信號(hào)特征分布和強(qiáng)度,我們可以看出Ca2+在細(xì)胞壁和胞間均有分布,葉柄組織細(xì)胞中分布相對(duì)較均勻,而在果肉組織中分布相對(duì)不均勻,雖然果實(shí)和葉柄中最大相對(duì)熒光強(qiáng)度相差不大,但在果實(shí)中Ca2+分布相對(duì)葉柄中較少生物論文,這可能與Ca2+在葉柄和果肉組織中的作用有關(guān),葉柄作為重要的礦質(zhì)元素運(yùn)輸通道,Ca2+參與許多重要的生理和代謝途徑。但在果實(shí)中Ca2+作用相對(duì)于葉柄比較小。表1 不同組織及放大倍數(shù)Ca2+信號(hào)強(qiáng)度分析Table 1 Ca2+signalintensity analysis of different tissue and magnification 樣品 最大值 最小值
8、 Sample Maximum Minimum 葉柄(10×) 218.32 36.68 葉柄(20×) 212.21 42.79 果肉(10×) 199.97 45.03 果肉(20×) 204.07 40.93 C A B D 圖1. 桃葉柄中游離Ca2+熒光信號(hào)特征(10×)。A: Argon熒光激發(fā)下Ca2+熒光信號(hào)特征;B:透射光觀察下葉柄組織結(jié)構(gòu);C: A、B的疊加圖;D: 3D成像圖Figure 1.Ca2+ fluorescence signal characteristic (10×)。A: Ca2+ fluores
9、cence signal characteristic excited byargon-ion laser sources, B: Petiole structure scanned in transmitted lightfield, C: Combination of A and B, D: Three dimension imagination. D C A B 圖2. 桃葉柄中游離Ca2+熒光信號(hào)特征(20×)。A: Argon熒光激發(fā)下Ca2+熒光信號(hào)特征;B: 明場透射光觀察下葉柄組織結(jié)構(gòu);C: A、B的疊加圖;D: 3D成像圖 B A C D 圖3. 桃果實(shí)
10、中游離Ca2+熒光信號(hào)特征(10×)。A: Argon熒光激發(fā)下Ca2+熒光信號(hào)特征;B: 明場透射光觀察下葉柄組織結(jié)構(gòu);C: A、B的疊加圖;D: 3D成像圖 D B A C 圖4. 桃果實(shí)中游離Ca2+熒光信號(hào)特征(20×)。A: Argon熒光激發(fā)下Ca2+熒光信號(hào)特征;B: 明場透射光觀察下葉柄組織結(jié)構(gòu);C: A、B的疊加圖;D: 3D成像圖 0.5-20-2-3 3、討論細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)定量技術(shù)有多種,主要有熒光探針法9、Ca2+敏感微電極法10以及發(fā)光蛋白熒光染色法等11論文格式模板。目前,熒光探針法是最常用的定量方法,而且已廣泛應(yīng)用
11、于細(xì)胞內(nèi)鈣的測定,特別用于測定動(dòng)植物細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度7,12-13。Fluo-3 AM-ester熒光探針一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料,主要是通過與細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間游離的鈣離子結(jié)合對(duì)Ca2+信號(hào)分布進(jìn)行定量分析11,它可以靈敏反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度變化。Fluo-3 AM進(jìn)入細(xì)胞后經(jīng)非特異性酯酶脫去AM,成為Fluo-3留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3與細(xì)胞內(nèi)游離鈣結(jié)合后,其熒光強(qiáng)度是本身的40倍以上。一般在活體細(xì)胞中進(jìn)行,所以很難采用組織石蠟切片的方法進(jìn)行,因此切片的厚度是獲得清晰圖像的關(guān)鍵,本研究中采用徒手切片的方法能夠很清晰的觀察到熒光信號(hào)及植物細(xì)胞的基本架構(gòu)。作為植物最重要的礦質(zhì)元素之一
12、,鈣離子在植物細(xì)胞壁、細(xì)胞膜以及液泡中分布比較廣泛,并行使著重要功能14,植物主要通過根吸收周圍環(huán)境中的游離的鈣生物論文,在植物的不同部位起著不同的作用。齊開杰等15研究表明植物不同部位鈣的含量不同,葉片的鈣含量最高,認(rèn)為長距離運(yùn)輸?shù)闹饕獎(jiǎng)恿κ钦趄v作用,而葉片是主要的蒸騰器官,葉柄是連接莖和葉片之間的營養(yǎng)物質(zhì)和同化物質(zhì)的重要通道,這也可能是葉柄積累大量鈣的原因。在桃果肉中,Ca2+信號(hào)主要分布在細(xì)胞壁,有研究表明內(nèi)源鈣含量的提高有利于維持細(xì)胞壁的強(qiáng)度和膜的完整性, 提高果實(shí)品質(zhì)3。Biggs等16研究表明采前噴施鈣能有效減少桃果實(shí)腐爛、保持果實(shí)硬度和改善果實(shí)外觀等作用。這些研究結(jié)果都表明細(xì)胞壁
13、是果肉中鈣的主要分布區(qū)。本研究中,雖然葉柄和果肉中Ca2+的最大熒光相對(duì)量相差不大,但葉柄中鈣的含量和分布明顯大于果肉中的,這與前人研究結(jié)果一致。參考文獻(xiàn)Reference1Hepler P K. Calcium, a central regulator of plantgrowth and development. Plant Cell,2005,17: 2142 - 2155.2NicolaH. Evans, Martin R. McAinsh, Alistair M. Hetherington and Marc R. Knight. ROSperception in Arabidopsis thaliana: the ozone-induced calcium response. ThePlant Journal, 2005, 41: 615 - 626.3朱竹,孟祥紅,田世平.采前
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 企業(yè)財(cái)務(wù)報(bào)表分析與投資價(jià)值評(píng)估咨詢合同
- 2025年大數(shù)據(jù)技術(shù)工程師考試試題及答案
- 2025年的基層治理理論與實(shí)踐考核試卷及答案
- 2025年心理健康與疾病管理職業(yè)資格考試試題及答案
- 果樹病蟲害綜合防治與綠色防控
- 【課件】命題、定理、證明 課件 2024-2025學(xué)年人教版數(shù)學(xué)七年級(jí)下冊(cè)
- 2型呼衰患者的護(hù)理查房
- 旅游車隊(duì)租賃運(yùn)營管理擔(dān)保協(xié)議
- 新材料研發(fā)基地廠房轉(zhuǎn)租及科研成果轉(zhuǎn)化合同范本
- 工傷死亡賠償協(xié)議書
- 炎黃職業(yè)技術(shù)學(xué)院輔導(dǎo)員考試試題2024
- 馬工程《藝術(shù)學(xué)概論》
- 蘇教版小學(xué)語文第一冊(cè)電子課本
- (2024年)保安員培訓(xùn)(44張)課件
- 責(zé)任成本管理(案例)
- 中醫(yī)養(yǎng)生與植物療法
- 手術(shù)機(jī)器人原理講解
- 新一代5G網(wǎng)絡(luò)-全網(wǎng)部署與優(yōu)化
- 故障測距-牽引網(wǎng)故障測距(鐵路牽引供電系統(tǒng)繼電保護(hù))
- 前列腺癌診治新進(jìn)展課件
- 廣州市輕工技師學(xué)院招聘真題
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論