無菌檢查操作規(guī)程

1、；.；修 訂 記 錄序號修訂內(nèi)容摘要版本變更日期1無菌檢驗操作規(guī)程2016-02-22；1. 目的 建立無菌檢查的標準操作規(guī)程，確保檢驗結(jié)果的準確性。2. 范圍本規(guī)程適用于本公司一次性使用體腔熱灌注治療管道組件的無菌檢測3. 職責負責對一次性使用體腔熱灌注治療管道組件的無菌檢測4.內(nèi)容4.1檢驗依據(jù)中華人民共和國藥典2015年版1101 無菌檢查法4.2儀器、設(shè)備超凈工作臺、電熱干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、集菌儀、電子天平、PH計、冰箱、恒溫水浴鍋、酒精燈、三角燒瓶，接種環(huán)、鑷子，試管架，大試管若干等。4.3.培養(yǎng)基4.3.1需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基）4.3.2 霉菌

2、培養(yǎng)基（胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基）4.3.3 培養(yǎng)基的無菌性檢查每批配制的培養(yǎng)基均應進行無菌性檢查（可與產(chǎn)品無菌檢驗同步進行）。檢查時，每批培養(yǎng)基隨機取不少于5支（瓶）培養(yǎng)14天，應無菌生長。4.4.無菌檢驗室的環(huán)境要求4.4.1無菌檢驗應在環(huán)境潔凈度10000級下的局部百級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。4.4.2 緩沖區(qū)與外界環(huán)境、無菌檢驗室與緩沖區(qū)之間空氣應保持正壓，陽性對照室與緩沖區(qū)之間空氣應保持負壓。無菌檢驗室與室外大氣之間靜壓差應大于10Pa。無菌檢驗室的室溫應保持1826，相對濕度：4565%。4.4.3 無菌檢驗室的單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子和醫(yī)藥工業(yè)

3、潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標準進行懸浮粒子每月檢測一次，沉降菌的監(jiān)測每周檢測一次。6.4 無菌檢驗過程中應同時檢查超凈工作臺單向流空氣中的菌落數(shù)：每次操作時在層流空氣所及臺面的左中右置3個營養(yǎng)瓊脂平板，暴露30min，于3035培養(yǎng)48小時，菌落數(shù)平均應不超過1CFU/平板。4.5.無菌檢驗前的準備4.5.1 器具滅菌、消毒：壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121蒸汽滅菌30分鐘后使用。4.5.2 人員、物料進入無菌檢驗室4.5.2.1 開啟紫外線燈或臭氧發(fā)生器進行空間滅菌處理，消毒時間不得少于30min。4.5.3 物料進入無菌檢驗室流程4.5.3.1 消毒：進入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等

4、的外表都應采用適用的方法進行消毒處理，以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗室。4.5.4 人員進入無菌檢驗室流程4.5.4.1 更鞋脫衣：在一更區(qū)脫去一般區(qū)工作鞋，穿上無菌檢驗室工作鞋；脫去一般區(qū)工作服。4.5.4.2 洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水連續(xù)沖洗20秒，洗凈泡沫。4.5.4.3 更衣：在二更區(qū)按照要求穿衣，要求鞋子套在褲子外面，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有頭發(fā)。4.5.4.4 手消毒：用75%酒精消毒液的棉球擦拭雙手。消毒液可用、新潔爾滅、碘伏、75%酒精等。4.5.4.5 人員進入：經(jīng)緩沖間進入無菌檢驗室。4.5.5 人員進入無菌檢驗室后，進一步用消毒液擦拭工作臺面

5、，戴無菌手套。4.6無菌檢驗操作要求4.6.1 全過程必須嚴格執(zhí)行無菌操作，防止微生物污染。4.6.2 使用玻璃器皿應輕取輕放，避免破損，以防培養(yǎng)物擴散。4.6.3 所有操作不得有大幅度或快速動作，以免攪動空氣中的塵埃微粒。4.6.4 使用金屬接種器具時，用前、用后均需灼燒滅菌。4.6.5 在接種培養(yǎng)物時，動作應輕、準，防止培養(yǎng)物濺出，產(chǎn)生汽溶膠，造成污染。4.6.6 操作過程中所有的帶菌物品，用后均應作消毒、滅菌處理。可在檢驗過程中隨用隨時放入消毒液缸內(nèi)浸泡或消毒桶內(nèi)，或在檢驗完成后經(jīng)傳遞窗傳至一般區(qū)，立即用壓力蒸汽滅菌鍋121滅菌30分鐘。4.7.稀釋液、沖洗液的制備4.7.1 pH7.0

6、 氯化鈉-蛋白胨緩沖液4.7.2微溫溶解，分裝后置入壓力蒸汽滅菌器內(nèi)，121滅菌30分鐘后，于4保存?zhèn)溆谩?.7.3 沖洗液：0.9%無菌氯化鈉溶液4.8. 對照菌液制備4.8.1 無菌檢驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代。4.8.2取金黃色葡萄球的普通瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種金黃色葡萄球至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，在3035培養(yǎng)1824h后備用，同時制備0.9%氯化鈉溶液加入在6支小試管內(nèi)，每支試管內(nèi)加9.0ml的0.9%氯化鈉溶液，在壓力鍋內(nèi)經(jīng)121滅菌30min備用。將已配好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)菌液取1.0ml加入第一支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:10的菌液；取第一支試管內(nèi)1.0m l菌液加入第二支小試管

7、內(nèi)，稀釋成濃度1:100的菌液，同法稀釋成濃度1:106（每ml含菌量100CFU）即可。10.3 采用平皿計數(shù)法測定活菌數(shù)。4.9 無菌檢驗培養(yǎng)溫度4.9.1硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，置3035培養(yǎng)。4.9.2胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，置2328培養(yǎng)。12. 無菌檢驗12.1 抽樣根據(jù)GB14233.2-2005抽樣的規(guī)定，隨機抽取同一個滅菌批產(chǎn)品檢驗3套產(chǎn)品。4.10檢驗方法4.10.1 直接接種法每個包裝以無菌操作拆開把各導管中的帽子，直接投入含100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的容器中，接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。4.10.2 培養(yǎng)、觀察4.10.3薄膜過濾法 每

8、個包裝以無菌操作拆開包裝注入500ML的0.90.9%無菌氯化鈉溶液啟動循環(huán)泵沖洗循環(huán)管壁并收集沖洗液，用集菌儀濾過，加入100ML適宜的培養(yǎng)基培養(yǎng)。其中一份作陽性對照，一份做陰性對照。4.10.3.1上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中，除陽性對照管培養(yǎng)4872小時外，其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。4.10.3.2如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生產(chǎn)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天，觀察是否再出現(xiàn)渾濁或斜面有無菌生長；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。4.11 結(jié)果判斷4.11.1培養(yǎng)結(jié)束后，陽性對照管應有菌生長，陰性對管應澄清。否則，就判結(jié)果無效。