有關(guān)McCoy細(xì)胞1.doc

動物衣原體病及其防制王文泉北京市獸醫(yī)生物藥品廠(100101)動物衣原體病(Chlamydiosis)是由各類衣原體(Chlamydia)感染哺乳動物、禽類、節(jié)肢昆蟲所發(fā)生的一類十分重要的自然疫源性傳染病。該病屬人畜共患，呈地方流行，常造成很大危害及經(jīng)濟(jì)損失。目前已發(fā)現(xiàn)18個(gè)目、29個(gè)科的190余種鳥類(包括70余種觀賞鳥和家禽)以及綿羊、山羊、牦牛、馬屬動物、豬、犬、貓、猴、兔、豚鼠及小鼠等許多哺乳動物、野生動物受到過感染。衣原體可分為沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis)和鸚鵡熱衣原體(Chlamydiapsittaci)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，原列入鸚鵡熱衣原體的獨(dú)特的TWAR株(臺灣株)，在原體形態(tài)結(jié)構(gòu)、核酸組成、天然宿主及致病性等方面與鸚鵡熱衣原體有所不同，因此，將其從鸚鵡熱衣原體中獨(dú)立出來，定名為肺炎衣原體(Chlamydiapneumoniae)。動物衣原體病的研究始于19世紀(jì)末，Marange(1892)在阿根廷首都布宜諾斯艾利斯發(fā)現(xiàn)，與鸚鵡鳥接觸的人會突然發(fā)病，從而最終肯定了鸚鵡鳥在人類感染和罹病中的重要作用，并提出了鸚鵡熱(Psittacosis)這一新病名。l病原學(xué)(見表1)表1三種衣原體的主要區(qū)別種名原體包涵體包涵體吐酸鹽的形態(tài)形態(tài)中糖原生物合成沙眼衣原體圓形卵圓形,有空泡+鸚鵡熱衣原體圓形多形態(tài),致密-肺炎衣原體梨形卵圓形,致密-衣原體只能在細(xì)胞內(nèi)繁殖，繁殖過程會產(chǎn)生兩種大小不同的顆粒，較小的稱為原體(Elementarybody,EB)，直徑約為0.2一0.5m，呈球形或卵圓形，是具有感染性的形態(tài)。較大的稱為網(wǎng)狀體(Reticularbody,RB)，直徑約為0.6一1.5m，呈球形或不規(guī)則形，是具有繁殖性的形態(tài)。在衣原體的發(fā)育周期中，還有一種過渡形態(tài)，稱為中間體(Intermediatebody,IB)。2發(fā)病情況衣原體可以引起哺乳動物的流產(chǎn)、肺炎、腸炎、腦脊髓炎、多漿膜炎、多關(guān)節(jié)炎,角膜結(jié)膜炎、尿道炎及雞的輸卵管炎等。根據(jù)對北京市郊區(qū)畜禽流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn):豬場、雞場(有的是種雞場)、兔場都查出了衣原體病原，引起了種豬的流產(chǎn)和肺炎(鸚鵡熱衣原體)，雞的輸卵管炎(沙眼衣原體)，造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。在觀賞鴿和信鴿中也查到了鸚鵡熱衣原體的存在，甚至在進(jìn)口的種山羊中也出了鸚鵡熱衣原體。由于衣原體病是人畜共患病，可以引起人類(尤其是青少年)的肺炎。婦女感染后可引起輸卵管炎和陰道炎，能造成宮外孕和不孕，男性附辜炎有2/3是由衣原體感染引起，也導(dǎo)致不孕。特別是由沙眼衣原體引起的人類的沙眼，據(jù)估計(jì)已使全球5億患沙眼病。某些人群的感染機(jī)會比較大，如飼養(yǎng)寵物者、寵物店售貨員、養(yǎng)禽場工人、屠宰廠工人等與家畜家禽密切接觸者。根據(jù)Strauss等(1964)統(tǒng)計(jì)分析了捷克斯洛伐克罹患鸚鵡熱的病人，在1072個(gè)病例中，有1014例(94.59%)是養(yǎng)禽場職工，其余病例也有接觸史，患者的職業(yè)及工作場所見表2。表2職業(yè)工作場所與患病的關(guān)系工作場所職業(yè)患病人數(shù)大型養(yǎng)禽場雇員853大型養(yǎng)禽場獸醫(yī)3大型養(yǎng)禽場流行病學(xué)家1大型養(yǎng)禽場參觀人員8小型養(yǎng)禽場工人178小型養(yǎng)禽場參觀人員2禽品商店售貨員4廚房廚師2實(shí)驗(yàn)室工人6不明其他職業(yè)32衣原體傳染性強(qiáng)，能夠耐受多種抗菌藥物，診斷困難，病后恢復(fù)緩慢，免疫水平低，能夠長期帶菌，甚至反復(fù)發(fā)作，對人畜構(gòu)成越來越嚴(yán)重的威脅，引起了許多國家的重視和深入研究，將其列為法定傳染病。3衣原體病的診斷3.1光學(xué)顯微鏡檢查根據(jù)不同的發(fā)病對象及病期采集不同的病料涂片，用姬姆薩氏染色(EB被染成紅色，RB被染成藍(lán)紫色，胞漿內(nèi)包涵體被染成紫紅色)、斯坦帕(Stamp)氏染色(背景呈淡綠色，衣原體被染成鮮紅色)、碘染色(Rice)法(在低倍顯微鏡下觀察，沙眼衣原體的包涵體因含有糖原呈棕褐色,鸚鵡熱衣原體的包涵體不含糖原不著色)。3.2電子顯微鏡觀察將病料處理后在電子顯微鏡下一般可見到兩大顆粒:一類為EB，呈圓形或卵圓形顆粒，中央核心部分電子密度大;另一類為RB，顆粒的電子密度低，形狀不規(guī)則。除上述兩大類顆粒之外，有時(shí)尚可見到介于二者之間的中間體(IB)。3.2免疫熒光試驗(yàn)又可以分為直接法和間接法。直接法是將待檢標(biāo)本(涂片、切片)等浸入冷冰酮中固定10分鐘，取出晾干后，置于無離子水中漂洗10分鐘，干后滴加48UFITC(異硫氰酸熒光素)標(biāo)記的已知衣原體特異性IgG。用0.005%伊文思藍(lán)稀釋熒光抗體作對比染色，置37濕盒染色3060分鐘，漂洗后用緩沖甘油封固檢查，靠近細(xì)胞核一端出現(xiàn)發(fā)亮的黃綠色光點(diǎn)或團(tuán)塊，亮度在+以上的可判為陽性；間接法是將標(biāo)本滴加已知衣原體感染的不同血清型的人陽性或家兔免疫血清，置37濕盒染色4560分鐘，漂洗后吹干，加熒光素結(jié)合物，前素加4-8UFITC標(biāo)記的羊抗人IgG，后者加同單位熒光素標(biāo)記的羊抗兔IgG，同時(shí)也加對比染色液，用直接法沖洗、封固、鏡檢。3.3補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)CF試驗(yàn)是一種特異性強(qiáng)、敏感度高的經(jīng)典血清學(xué)方法，被廣泛用于衣原體感染的診斷和衣原體抗原研究上。3.4間接血凝試驗(yàn)(lHA)IHA試驗(yàn)是將抗原或抗體吸附(包被)于紅細(xì)胞表面，使之成為致敏的載體，然后與其相應(yīng)的抗體或抗原作用，在有適宜的電解質(zhì)存在的環(huán)境中，致敏紅細(xì)胞發(fā)生被動的特異性凝集，又稱為被動血凝試驗(yàn)。IHA又分為正向和反向兩種。用已知抗原致敏紅細(xì)胞，檢測未知特異性抗體稱為正向IHA;以已知抗體包被紅細(xì)胞，檢測未知抗原者稱為反向IHA。另外，還有瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、血凝抑制試驗(yàn)等。綜合防制關(guān)于衣原體病的防制除采取獸醫(yī)綜合措施，如堅(jiān)持衛(wèi)生消毒、全進(jìn)全出、自繁自養(yǎng)不從疫區(qū)引種、隔離制度、消滅場內(nèi)的鼠類等嚙齒類動物外，還有疫苗和藥物治療等措施。應(yīng)用人工免疫方法來控制動物衣原體的發(fā)生與蔓延，國內(nèi)外已進(jìn)行了大量的研究，各國研制衣原體疫苗的技術(shù)及抗原材料大同小異，所生產(chǎn)的疫苗有:(1)胎膜疫苗。以衣原體性流產(chǎn)的胎膜制成懸液，甲醛滅活后，用明礬沉淀制成疫苗。(2)雞胚卵黃囊膜粗制疫苗雞胚卵黃囊純化疫苗。這是目前常用的方法。將感染雞胚卵黃囊膜以pH7.27.6PBS制成10%20%懸液，加甲醛0.1%0.2%乳化。或進(jìn)一步純化制成疫苗。(3)減毒活疫苗。Mitscherlich(1965)用羊胎膜分離株在雞胚上移植64代后制成減毒疫苗。(4)細(xì)胞培養(yǎng)疫苗。原蘇聯(lián)的專家用雞成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，Wills等(1987)用經(jīng)雞胚致弱的貓肺炎菌株為種毒，以McCoy細(xì)胞(雞成纖維細(xì)胞)培養(yǎng)制成凍干疫苗。衣原體病常用的治療藥物有鹽酸四環(huán)素，靜脈、肌內(nèi)注射劑量(日量):每公斤體重，牛、馬510mg，豬、羊715mg，犬1020mg，分作12次注射;片粉劑，內(nèi)服(日量)，每公斤體重，豬2050mg，犬30100mg，分23次服用，家禽拌料濃度0.04%0.06%，連用57天為一療程。氯霉素，每公斤體重，牛、馬、豬、羊510mg，犬、貓20mg。每日二次。家禽拌料濃度0.1%0.2%。連用57天為一療程。螺旋霉素、卡巴霉素對衣原體也有較好的療效。中藥制劑，川芎5克、薏仁米100克、柴胡5克、黃連5克、當(dāng)歸10克、貝母7克、雙花10克、麻黃3克、大青葉50克、甘草5克，大家畜50100克，家禽2