《植物組織培養(yǎng)》課件 模塊四－4 花卉的組織培養(yǎng)

任務一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)任務二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)任務三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進措施任務四花卉的組織培養(yǎng)任務五水果作物的組織培養(yǎng)任務六植物液體培養(yǎng)常見植物組配方法與易發(fā)問題處理項目四常見植物組培方法與易發(fā)問題的處理任務四花卉的組織培養(yǎng)掌握百合生物學特性和快速繁殖方法；掌握蘭科植物組培的大致過程；掌握胡蝶蘭花梗組培的方法。123大花蕙蘭的繼代增殖示意圖任務導入第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)第二節(jié)蘭花的組織培養(yǎng)技術第三節(jié)蝴蝶蘭的培養(yǎng)

全世界已發(fā)現(xiàn)百合約89余種，主要分布地區(qū)是中國、日本、北美和歐洲等溫帶地區(qū)。北美百合協(xié)會將百合園藝品種劃分為10個種系，觀賞栽培的主要是4個種系，即亞洲百合雜種系；茶香百合雜種系；東方百合雜種系；麝香百合雜種系。株形端正，花色清白給人以清純、高雅的印象，是切花中的佳品。第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)

我國近年來，昆明、上海、深圳的百合切花生產發(fā)展較快，已形成三大生產基地。目前國內切花栽培的百合大多是亞洲型，主要從荷蘭、日本引進，經過幾年的栽培試驗，已篩選出一批適合我國生產的品種。第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)一、形態(tài)特性和生物學習性

百合是百合科百合屬植物的統(tǒng)稱，為多年生的草本植物。鱗莖無皮，廣卵形，直徑5~8cm，白色或黃白色，莖高30~90cm，直立，葉多而散生，披針形，光滑?；▎紊驍?shù)花橫向著生莖頂，花朵呈喇叭狀、筒狀，有清香。花被先端外卷，花被筒深處淡綠色。百合屬于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鱗莖發(fā)育膨大。二、繁殖方法1.分球百合老鱗莖(母球)生長過程中，于莖軸上逐漸形成小鱗莖，稱"莖生小球"，經一年栽培，可分生1~3個甚至7~9個小球，適當深栽及摘除花蕾，均有助于子球發(fā)生，小鱗莖待明春播于苗床，大者1年，小者培養(yǎng)2~3年可當種球。2.鱗片扦插取成熟健壯的老鱗莖，陰干數(shù)日后剝下鱗片，斜插于濕潤木屑或顆粒泥炭中，溫度以20~25℃為適，一般8~9月插，經2~4個月生根發(fā)葉，并在鱗片基部生長出小磷片，基質含水量在60％~80％，前期高水分，后期低水分，過分濕潤易腐爛。為防止病菌感染，應盡量除去外層鱗片，1片鱗片可獲50～60個子球，自鱗片扦插、生根、發(fā)芽至植株開花，一般需2~3年。三、百合的組織培養(yǎng)

百合的組織培養(yǎng)繁殖自20世紀70年代后期開始，日本人以葉片為外植體誘導出大花卷丹的小植株，我國于80年代初由蘭洲百合的花藥、花絲等培育出完整小植株。80年代以后，培養(yǎng)出去病毒的百合種苗和通過胚培養(yǎng)獲得遠緣雜交的新品種。1.花器的組織培養(yǎng)(1)取材和滅菌采取開花前數(shù)日的花蕾?；ɡ俚谋砻嬗镁凭珳缇僭诰凭珶羯献茻龜?shù)秒鐘，以后放在無菌培養(yǎng)皿內剝開花蕾，花絲，子房，花柱等分別切取3～5mm長，接種到培養(yǎng)基上。也可用花瓣和萼片培養(yǎng)。

(2)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件采用MS，KC等培養(yǎng)基，蔗糖濃度以7.0％為適，這樣發(fā)芽和子球形成率可達90％左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保溫20℃。

培養(yǎng)條件

花柱、花梗、莖段等用MS+IAAl+BA0.2培養(yǎng)基，葉片用MS+NAAI+BA0.1；分化植株時，MS+NAA2+IBA0.4+Kt0.05，培養(yǎng)基內均加蔗糖3％和瓊脂0．7％，pH值5.8—6.5。

(3)生長情況花器部位從百合花器不同部位的培養(yǎng)來看，以花絲的部位為好，成活率很高，發(fā)芽較多，再是子房和花柱部分?？蓮母鞑课话l(fā)芽，形成子球，通常是經過兩個途徑，一個是從切中處形成愈傷組織，以后再發(fā)芽；再是從切口直接產生芽。麝香百合花器培養(yǎng)得到的植株，生長約6個月即可開花，未發(fā)現(xiàn)不正?，F(xiàn)象，只是母株的花較大，且全株無病毒癥狀。

百合鱗片等培養(yǎng)，對于擴大培養(yǎng)材料來源，加快繁殖速度和培養(yǎng)得到無病毒苗等皆有重要意義。2.鱗片組織培養(yǎng)

初代培養(yǎng)：

由于其鱗莖材料都生長在土中，受土壤微生物的影響，所以污染率相當高。為此外植體消毒要嚴加注意，可應用幾種消毒劑并用的方法。取0．5cm2鱗片小塊接人MS+2，4-D1+IAAI+Kt0．5誘導培養(yǎng)基中，置于20土2℃，照光9-10h／d，光強1200Lx條件下培養(yǎng)。

接種后2周，即有98％左右的鱗片切塊在近軸面或邊緣上有淡黃色的不定芽原基呈環(huán)狀突起，多數(shù)每塊上有2~4個，這些不定芽原基繼續(xù)生長4周后，可形成中間抽出綠色的白色小鱗莖，在小鱗莖基部發(fā)生一些粗壯的根。將幼苗切成1.5~2cm長的片斷，接種到誘導愈傷組織的培養(yǎng)基上。3周后葉子的基部、葉脈、葉緣上均可誘導出一團團淡黃色的愈傷組織。初代培養(yǎng)

繼代培養(yǎng)（分化培養(yǎng)）可用MS+NAA2+IBA0．4+Kt0.05培養(yǎng)基。將愈傷組織轉移到分化培養(yǎng)基上，10周后，愈傷組織逐漸膨大，分化出許多大小不等的鱗莖，并在小鱗莖的基部長出許多粗壯的根。有少數(shù)的小鱗莖中間可長出綠芽。將小鱗莖分離出以后，留下的愈傷組織轉移到相同的新鮮分化培養(yǎng)基上，一段時間后仍能分化出小鱗莖。

試管苗移栽時首先應把根部的培養(yǎng)基清洗干凈。移栽前，放在4~10℃低溫條件下鍛煉2～3周，這樣移栽后的幼苗生長更加健壯。移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基質，育苗盤必須清洗消毒。同時，移栽后注意濕度管理，相對濕度控制在80％~90％。同時要防止烈日曝曬，后期幼苗不宜澆水過多，并及時噴灑藥劑預防病蟲危害。繼代培養(yǎng)（分化培養(yǎng)）

百合切花栽培中首先要解決的技術問題是：避免因球根的休眠而導致發(fā)芽率不高及盲花。由于同一圃場生產的球根，其休眠狀態(tài)各種各樣，尤其休眠深的球根，僅靠貯藏無法打破休眠。

需要人工打破休眠

四、打破休眠的方法1.冷藏

13～15℃預冷，3～5℃冷藏6-7周。2.溫水浸泡開始于48℃的溫水中，每隔2～3min提起再泡入，反復2～3次，然后在45℃溫水中浸泡1h。嚴格掌握水溫。3.激素處理采用1000xGA溶液浸泡，為避免發(fā)根阻礙，可先將球根倒置浸泡一半，而后恢復正常位置予以靜置。四、打破休眠的方法第二節(jié)蘭花的組織培養(yǎng)技術

蘭花系蘭科植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無法大量繁殖生產，而且由于長期進行無性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長。

法國Morel(1952年)等以大麗花莖尖進行培養(yǎng)試驗，得到了無病毒植株。后來他觀察到虎頭蘭的莖尖在無菌培養(yǎng)基上能形成扁圓形的小球體，這些小球體與種胚發(fā)育成的原球體非常相似，故稱為原球莖。原球莖增殖很快，并可形成幼苗。這一方法和技術很快在蘭花生產上得到了廣泛的應用，成為“蘭花工業(yè)”。

蘭花培養(yǎng)成功的關鍵，首先是形成無性繁殖系原球莖。國蘭原球莖的增殖國蘭原球莖發(fā)芽圖

蘭科植物可以培養(yǎng)的部位主要是頂芽和側芽，個別可從葉片培養(yǎng)得植株。

1.新芽的莖尖莖尖是細胞分裂最旺盛的部分，也是培養(yǎng)成功率最高的部位。

2.花梗當蘭花開花約一個月后，剪取其花梗頂端及若干個花梗腋芽。一、培養(yǎng)部位1.芽的準備和滅菌取2～6cm大小切取下來，流水沖洗，并把最外面的1～2片苞葉去掉，再用10％次氯酸鈉或漂白粉溶液(10g漂白粉溶解于140ml水中，充分攪拌勻后，靜置約20min，取上清液)中浸10～15min。剝離和切割。容易產生褐變的，在切割時應將芽放在無菌水中操作，這樣會比在空氣中褐變的機會少些。以消除病毒為目的時要盡量小些，可以小到0.1mm：若以繁殖為目的，培養(yǎng)物可在2～5mm左右。二、莖尖的選取、滅菌和接種2.接種

莖尖接種以固體培養(yǎng)基為好，但因屬而異，如蕙蘭屬在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)形成原球莖后則用固體培養(yǎng)基進行繼代培養(yǎng)，而卡德蘭屬和石斛屬這一類易變褐枯死的屬，以在液體培養(yǎng)基為好。2.接種3.繼代培養(yǎng)接種后1～2個月培養(yǎng)的莖尖即可形成原球莖球狀體，以后即發(fā)芽生根長葉。應在其發(fā)芽前把它切成小塊進行轉移，讓它繼續(xù)不斷地形成原球莖球狀體。這樣連續(xù)的進行繼代培養(yǎng)，短時間可以得到大量的原球莖球狀體。4.培養(yǎng)基對于許多蘭花來說，MS培養(yǎng)基最好。另外KnudsonC(KC)培養(yǎng)基也不錯。

5.試管苗的移栽苗有3～4葉大小，根2～3條時可移植。(1)從試管內取的苗用水將瓊脂沖洗掉，沖洗不徹底會發(fā)生霉菌腐爛。(2)經水沖洗的苗放在舊報上，吸干水分陰晾1h再定植。(3)管理上，50％的弱光，溫度20～25℃，保持一定的濕度，不能完全密閉，也要注意通風。根在開始生長后可1周澆一次1000倍的復合肥料。第三節(jié)蝴蝶蘭的培養(yǎng)(1)將芽除去葉后，用水沖洗，10％的漂白粉滅菌15min。除去葉原基后，用5％的漂白粉滅菌l0min，以后用無菌水沖洗3~5次。(2)切取莖尖和各葉基部的腋芽，約2~3mm大小，接種到培養(yǎng)基中。(3)培養(yǎng)基采用VW培養(yǎng)基，添加15％CM進行液體培養(yǎng)，或進行固體培養(yǎng)。1.莖尖的培養(yǎng)莖尖圖示(4)培養(yǎng)條件為溫度25℃，光照強度2000Lx，照明16～24h。液體培養(yǎng)基用60r／min的速度進行振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)7～10d再轉移到新的培養(yǎng)基，培養(yǎng)1個月后轉移到固體培養(yǎng)基。在這種條件下培養(yǎng)1個月即可形成原球莖球狀體，以后再進行繼代培養(yǎng)，不斷繁殖原球莖球狀體。1.莖尖的培養(yǎng)(1)采芽將帶腋芽的花梗進行沖洗，用10％的漂白粉溶液表面滅菌20min，除去腋芽的苞葉，再在5％的漂白粉溶液中表面滅菌3min，無菌水沖洗凈。

(2)不帶花梗組織，僅取腋芽，接種到培養(yǎng)基上。2.花梗腋芽的培養(yǎng)蝴蝶蘭圖示(3)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：誘芽培養(yǎng)基：MS+BA3誘導原球莖：MS+BA5+NAA0.5增殖：MS+BA3+NAA0.2+炭1