《植物組織培養(yǎng)》課件 模塊四－2 器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)

任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)任務(wù)六植物液體培養(yǎng)常見植物組配方法與易發(fā)問題處理項(xiàng)目四常見植物組培方法與易發(fā)問題的處理任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)

掌握離體葉片的培養(yǎng)步驟；掌握花器和種子的選擇、處理；一般掌握胚胎培養(yǎng)的類型與各自的注意事項(xiàng)。123能夠根據(jù)不同植物及種類選擇合適的外植體進(jìn)行啟動培養(yǎng)；能夠根據(jù)不同的植物器官及器官狀態(tài)，選擇合適的滅菌劑和適宜的滅菌時間，對外植體進(jìn)行表面處理與滅菌；會通過觀察試管苗的長勢，大體判斷采取何種措施改善培養(yǎng)條件；熟練外植體滅菌的工藝操作流程；熟練各種試管苗繼代培養(yǎng)過程中的切割方式與技術(shù)；熟練無菌操作技術(shù)。123456

葉的組織培養(yǎng)再生成植株的方式有二種：一種是直接誘導(dǎo)形成芽，另一種是先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化成植株。后一種方式比較普遍。第四節(jié)葉的培養(yǎng)一、培養(yǎng)程序和方法1.取材與滅菌

取植物的幼嫩展開葉片沖洗干凈，用70%酒精漂洗約10秒，再在1-2%次氯酸鈉中浸10～15分鐘，或在0.1%升汞中浸5～8分鐘，用無菌水沖洗數(shù)次，無菌的干濾紙上吸干水分。對一些粗糙或帶茸毛的葉片要延長滅菌時間。一般地說，同一葉片的柵欄組織比海綿組織處于較成熟狀態(tài)。2.接種

把滅菌過的葉組織切成約0.5cm見方小塊或薄片（如葉柄和子葉），接種在MS或其它培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基中附加BA1～3mg/L，NAA0.25～1mg/L，有些植物的葉片需要加2，4-D0.5-1.0mg/L。葉片的切割方式3.培養(yǎng)

葉接種后培養(yǎng)條件為每天10～12小時光照，光強(qiáng)1500～3000Lx。培養(yǎng)約2周至4周，葉切塊開始增厚腫大，進(jìn)而形成愈傷組織。這時應(yīng)轉(zhuǎn)移到再分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)，分化培養(yǎng)基的細(xì)胞分裂素含量為2mg/L左右，約10天左右，愈傷組織開始轉(zhuǎn)綠出現(xiàn)綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)將發(fā)育成無根苗。幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)。其次要添加適當(dāng)?shù)纳L素和細(xì)胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。驅(qū)蚊草葉片愈傷組織分化出芽

影響的主要因素是激素的種類和濃度。但葉片的培養(yǎng)常常需要多種激素的配合使用，不同培養(yǎng)階段需要更換不同的激素組合。如杏離體葉培養(yǎng)使用1/2MS培養(yǎng)基，ZT與2，4-D的組合可誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，BA與NAA的組合可從愈傷組織中誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生。但有些植物比較簡單，可以一步直接產(chǎn)生芽，如驅(qū)蚊草在MS+6-BA0.5-1.0+IAA0.1-0.2mg/L中可以直接使葉片產(chǎn)生愈傷組織并分化出芽。二、影響離體葉培養(yǎng)的因素視頻4-2-1再生培養(yǎng)一、花器官培養(yǎng)二、種子培養(yǎng)第五節(jié)花器和種子培養(yǎng)

花器官培養(yǎng)是指對植物的整朵花或花的組成部分（如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等）的無菌培養(yǎng)。一、

花器官培養(yǎng)1．取材從健壯植株上取未開放的花蕾，已經(jīng)開花的不宜用，因?yàn)橄纠щy。先用75%酒精消毒約30秒鐘，再用次氯酸鈉浸10～15分鐘，取出用無菌水沖洗數(shù)次[或氯化汞]。2．接種培養(yǎng)

用整個花蕾培養(yǎng)時，只要把花梗插入培養(yǎng)基中。若用花器的某個部分，則分別取下，切成小片，放入培養(yǎng)基中。要把花器官部分培育成小植株，要加入生長素和細(xì)胞分裂素，誘導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀體，再分化培養(yǎng)成植株。如菊花的花瓣切片接種在含6-BA

2mg/L、NAA

0.2mg/L的MS培養(yǎng)基上，在26℃、1500Lx光照，每天光照10小時，培養(yǎng)約2周，形成少量愈傷組織。再經(jīng)1個月就分化出綠色芽點(diǎn)。非洲菊花托形成愈傷組織非洲菊花托分化出芽接種后生長

種子培養(yǎng)是指對受精后發(fā)育完全的成熟種子和發(fā)育不完全的未成熟種子的無菌培養(yǎng)。利用種子培養(yǎng)可以打破種子休眠，特別對一些休眠期長的植物，可以作為大量生產(chǎn)試管苗的好材料，它具有植株分化容易，無菌操作方便等特點(diǎn)。二、種子培養(yǎng)

1．種子滅菌

種皮厚或不飽滿的種子，宜用0.1%升汞消毒10～20分鐘。幼嫩的或發(fā)育不全的種子，宜用飽和漂白粉消毒15～30分鐘。若種子上有絨毛或蠟質(zhì)，應(yīng)先用95%酒精或吐溫--40處理，提高消毒效果。對殼厚難萌發(fā)的種子，可去殼培養(yǎng)。

馬藺種子的去殼培養(yǎng)2．培養(yǎng)基

若以促進(jìn)種子萌發(fā)為目的的種子培養(yǎng)，培養(yǎng)基的成分要求較簡單，可不加或少加生長激素。當(dāng)然，對某些發(fā)育不全的無胚乳的種子培養(yǎng)，應(yīng)提供適當(dāng)?shù)纳L激素。種子培養(yǎng)的糖濃度可稍低，一般1～3%。3．接種培養(yǎng)

種子培養(yǎng)的接種較容易，把種子按每瓶3～5粒放入培養(yǎng)瓶中，均勻排列，放在20～28℃的條件下暗培養(yǎng)，發(fā)芽后盡快轉(zhuǎn)移光下，要求1000～2000Lx光強(qiáng)，每天光照10小時。一、胚胎培養(yǎng)的意義二、胚珠、子房和胚乳的培養(yǎng)

第六節(jié)胚培養(yǎng)１．克服遠(yuǎn)緣雜種的不親和性

２．使胚發(fā)育不全的植物獲得后代３．打破種子休眠，縮短育種年限一、胚胎培養(yǎng)的意義培養(yǎng)部位取材時間培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件胚珠球形胚Nistch，White，2，4-D，BA，IAA子房開花前1-5天N6，Nistch，2，4-D，BA，IAA胚乳授粉后4～8天MS、White，0.5-