實(shí)驗(yàn)室水質(zhì)檢驗(yàn)含取樣作業(yè)指導(dǎo)書2025

文件編號:NJSP/ZY-2025受控狀態(tài)：R受控□非受控版本:A/0發(fā)放編號：實(shí)驗(yàn)室水質(zhì)檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書編制：maszhc審核：×××批準(zhǔn)：×××南京××可嘉食品有限公司2025年3月31日發(fā)布2025年4月31日實(shí)施⑤染色法將培養(yǎng)18h-24h的培養(yǎng)物涂片。將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min,水洗。滴加革蘭氏碘液，作用1min,水洗。滴加脫色劑，搖動(dòng)玻片，直至無紫色脫落為止，約30s水洗。滴加復(fù)染劑，復(fù)染1min,水洗，待干，鏡檢。(2)儀器培養(yǎng)箱：36±1℃、冰箱：0℃-4℃、天平、顯微鏡、平皿：直徑為90mm、試管、分度吸。管：1mL,10mL、錐形瓶、小導(dǎo)管、載玻片。(3)檢測步驟1)乳糖發(fā)酵試驗(yàn)取10mL水樣接種到10mL雙料乳糖蛋白凍培養(yǎng)液中，取1mL水樣接種到10mL單料乳糖蛋白凍培養(yǎng)液中，另取1mL水樣注入到9mL滅菌生理鹽水中，混勻后吸取1mL（即0.1mL水樣）注入到10mL單料乳糖蛋白胨營養(yǎng)液中，每一種稀釋度接種5管。檢驗(yàn)水源水時(shí)，如污染較嚴(yán)重，應(yīng)加大稀釋度，可接種1,0.1,0.01mL甚至0.1,0.0.1,0.001mL每個(gè)稀釋度接種5管，每個(gè)水樣共接種15管。接種1mL以下水樣時(shí)，必須作10倍遞增稀釋后，取1mL接種，每遞增稀釋一次，換用一支1mL滅菌刻度吸管。將接種管置36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h±2h,如所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)酸，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則按下列步驟進(jìn)行。2)分離培養(yǎng)將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h-24h，觀察菌落形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落作革蘭氏染色、鏡檢和證實(shí)試驗(yàn)。深紫黑色、具有金屬光澤的菌落；紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色、中心較深的菌落。3)證實(shí)試驗(yàn)經(jīng)上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽胞桿菌，同時(shí)接種乳糖蛋白凍培養(yǎng)液，置36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h±2h,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有總大腸菌群存在。4)結(jié)果報(bào)告根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN(mostprobablenumber,最可能數(shù))檢索表，報(bào)告每100mL水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）值。5管法結(jié)果見表2；15管法結(jié)果見表3。稀釋樣品查表后所得結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。如所有乳糖發(fā)酵管均陰性時(shí)，可報(bào)告總大腸菌群未檢出。表2用5份10mL水樣時(shí)各種陽性和陰性結(jié)果組合時(shí)的最可能數(shù)（MPN）5個(gè)10mL管中陽性管數(shù)最可能數(shù)（MPN）0＜2.212.225.139.24165＞16表3總大腸菌群MPN檢索表（總接種量55.5Ml,其中5份10mL水樣，5份1mL水樣，5份0.1mL水樣）接種量/mL總大腸菌群/（MPN/100Ml）接種量/mL總大腸菌群/（MPN/100Ml）1010.11010.1000＜210020012101400241026003510380047104100059105120102110401141116012611280137113100149114120151111514020412060216121802271221002391231202411124150251312517030613080317131100329132120331113315034131341703515135190408140110419141130421114215043131431704415144190451714522050915013051111511505213152170531515319054171542205519155242005300820173011120293021320312303162041430420205163052321073101121193111421212312172131431320214173142321519315272209320142211232117222143222022317323242241932427225223253123012330172311433121232173322423320333282342233432235253353624015340212411734124242203422824323343322442534436245283454025017350252512035129252233523225326353372542935441255323554540013500234011750131402215024340325503584043050476405365059541017510334112151146412265126341331513844143651411041542515130420225204942126521704223252294423385231204244452415042550525180430275307943133531110432395321404334553318043452534210435595352504403454013044140541170442475422204435454328044462544350445695454304504155024045148551350452565525404536455392045472554160045581555＞1606.2.1.6耐熱大腸菌群(1)培養(yǎng)基與試劑1)EC培養(yǎng)基成分：胰蛋白胨（20g）、三號膽鹽(1.5g)、乳糖（5g）、硫酸氫二鉀（4g）、氯化鈉（5g）、磷酸二氫鉀（1.5g）；配制方法：稱取本品37克，加入1000ML蒸餾水中，加熱煮沸溶解，分裝到有玻璃小導(dǎo)管的試管中，每管8ml，121℃高壓滅菌15min后備用。2)伊紅美藍(lán)瓊脂（同上）(2)儀器恒溫水?。?4.5℃±0.5℃或隔水式恒溫培養(yǎng)箱、其他同總大腸菌群多管發(fā)酵法。(3)檢驗(yàn)步驟自總大腸菌群乳糖發(fā)酵試驗(yàn)中的陽性管（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）中取1滴轉(zhuǎn)種于EC培養(yǎng)基中，置于44.5℃水浴箱或隔水式恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)（水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培養(yǎng)基液面），培養(yǎng)24h±2h，如所有管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性，如有產(chǎn)氣者，則轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置44.5℃培養(yǎng)18h-24h,凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為耐熱大腸菌群陽性。如檢測未經(jīng)氯化消毒的水，且只想檢測耐熱大腸菌群時(shí)，或調(diào)查水源水的耐熱大腸菌群污染時(shí)，可用直接多管耐熱大腸菌群方法，即在第一步乳糖發(fā)酵試驗(yàn)時(shí)按總大腸菌群接種乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基在44.5℃±0.5℃水浴中培養(yǎng)。(4)結(jié)果報(bào)告根據(jù)證實(shí)為耐熱大腸菌群的陽性管數(shù)，查最可能數(shù)（MPN）檢索表，報(bào)告每1000mL水樣中耐熱大腸菌群的最可能數(shù)(MPN)值。6.2.2水質(zhì)總堿度的測定6.2.2.1原理：用標(biāo)準(zhǔn)濃度的鹽酸溶液滴定水樣，用甲基橙做指示劑，根據(jù)指示劑顏色的變化判斷終點(diǎn)。根據(jù)滴定水樣所消耗的標(biāo)準(zhǔn)濃度的鹽酸溶液用量，即可計(jì)算出水樣的總堿度。6.2.2.2術(shù)語：是指水中能夠接受〔H+〕離子即與強(qiáng)酸發(fā)生中和反應(yīng)的物質(zhì)總量。6.2.2.3儀器50mL移液管；25mL酸式滴定管；250mL錐形瓶。6.2.2.4試劑0.5%甲基橙指示劑；0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.2.2.4試劑甲基橙指示劑（5g/L）；硫代硫酸鈉溶液（0.1mol/L）；鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.02mol/L）。6.2.2.5步驟6.2.2.5.1水樣中余氯可破壞指示劑，當(dāng)水樣中含有余氯時(shí)，需要加入1~2滴0.1mol/L硫代硫酸鈉溶液消除。6.2.2.5.2移取50.00mL水樣于250mL錐形瓶中，加入4滴甲基橙指示劑，搖勻。用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由桔黃色剛剛變?yōu)榻奂t色為止。記錄鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量V1。6.2.2.5.3水樣中總堿度的計(jì)算（1）總堿度ρ（以CaCO3計(jì)，mg/L)=[C(HCL)×0.05005×V1]/V×106式中：ρ(CaCO3)——水樣的總堿度，mg/L；c(HCl)——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；V1——滴定水樣消耗標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積，mL；V——所取水樣的體積，mL；（2）0.05005——與1.0mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液［c(HCl)=1.00mol/L］相當(dāng)?shù)?，以克表示的碳酸鈣（1/2CaCO3）的質(zhì)量。6.2.3水質(zhì)總硬度的測定6.2.3.1原理:水樣中的鈣、鎂離子與鉻黑T指示劑形成紫紅色螯合物，這些螯合物的不穩(wěn)定常數(shù)大于乙二胺四乙酸鈣和鎂螯合物不穩(wěn)定常數(shù)。當(dāng)PH=10時(shí)，乙二胺四乙酸二鈉先與鈣離子，再與鎂離子形成螯合物，滴定至終點(diǎn)時(shí)，溶液呈現(xiàn)出鉻黑T指示劑的純藍(lán)色。6.2.3.2總硬度術(shù)語：水中鈣、鎂離子和其他金屬離子的總含量，因其他金屬離子的含量很少，一般情況下，總硬度表示鈣、鎂離子的含量。6.2.3.3儀器50mL移液管；25mL酸式滴定管；250mL錐形瓶。6.2.3.4試劑鉻黑T指示劑（0.5%）；緩沖溶液(pH=10)；乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.01mol/L）。6.2.3.5步驟6.2.3.5.1吸取50.0mL水樣(若硬度過高，可取適量水樣，用蒸餾水稀釋至50mL，若硬度過低，改用100mL)，置于250mL錐形瓶中。6.2.3.5.2加入1～2mL緩沖溶液(pH=10)和5滴鉻黑T指示劑，立即用乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液從紫紅色成為不變的純藍(lán)色為止，若水樣經(jīng)過稀釋則需做空白試驗(yàn)，記下乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液用量。6.2.3.5.3水樣中鈣、鎂含量較大時(shí)，要預(yù)先酸化水樣，并加熱除去二氧化碳，以防堿化后生成碳酸鹽沉淀，滴定時(shí)不易轉(zhuǎn)化。6.2.3.5.4水樣中總硬度的計(jì)算………(6)式中：ρ(CaCO3)——總硬度(以CaCO3計(jì))，mg/L；V1——滴定中消耗EDTA-2Na溶液體積，mL；V0——空白消耗EDTA-2Na溶液體積，mL；c——EDTA-2Na-標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；V——水樣的體積，單位為毫升（mL）。100.09——與1.0mLEDTA-2Na標(biāo)準(zhǔn)溶液［c（EDTA-2Na)=1.00mol/L］相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜奶妓徕}的質(zhì)量；6.2.4水質(zhì)PH的測定6.2.4.1原理:以玻璃電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極，插入溶液中組成原電池。當(dāng)氫離子濃度發(fā)生變化時(shí)，玻璃電極和甘汞電極之間的電動(dòng)勢也隨著變化，在25℃時(shí)，每單位PH標(biāo)度相當(dāng)于59.1mV電動(dòng)勢變化值，在儀器上直接以PH的讀數(shù)顯示，在儀器上有溫度差異補(bǔ)償裝置。6.2.4.2儀器6.2.4.2.1酸度計(jì)（6173PH）:測量范圍-6.0~20.00PH單位，精密度±0.01PH6.2.4.2.250mL燒杯6.2.4.3步驟6.2.4.3.1酸度計(jì)的操作按儀器使用說明書或操作規(guī)程的要求進(jìn)行。6.2.4.3.2測量時(shí)，用洗瓶緩緩淋洗電極數(shù)次，再用待測水樣淋洗3~5次，然后插入待測水樣中，待儀器數(shù)值顯示穩(wěn)定后，讀出水樣的PH值。6.2.5水質(zhì)電導(dǎo)率的測定6.2.5.1原理:在電解質(zhì)的溶液里，離子在電場的作業(yè)下，由于離子的移動(dòng)具有導(dǎo)電作業(yè)。在相同溫度下測定水樣的電導(dǎo)G它與水樣的電阻R呈倒數(shù)關(guān)系按下式⑴計(jì)算:G=1÷R⑴在一定條件下，水樣的電導(dǎo)隨著離子含量的增加而升高，而電阻則降低。因此，電導(dǎo)率r就是電流通過單位面積A為1cm2距離L為1cm的兩鉑黑電極的電導(dǎo)能力，按式⑵計(jì)算：r=G×1÷R⑵即電導(dǎo)率r為給給定的電導(dǎo)率常數(shù)C與水樣電阻RS的比值，按⑶式計(jì)算：r=C×GS=C÷RS×106⑶只要測定出水樣的RS或水樣的GS，電導(dǎo)率r即可得出，單位表示為μs/cm。6.2.5.2儀器（1）DDS-307A電導(dǎo)率儀：測量范圍：0~1×104μs/cm；（2）50mL燒杯。6.2.5.3步驟6.2.5.3.1電導(dǎo)率儀的操作按儀器使用說明書或操作規(guī)程的要求進(jìn)行。6.2.5.3.2測量時(shí)，用洗瓶緩緩淋洗電極數(shù)次，再用待測水樣淋洗3~5次，然后浸入待測水樣中進(jìn)行電導(dǎo)率的測定，重復(fù)取樣測定2~3次，測定結(jié)果讀數(shù)相對誤差均在±1%以內(nèi)，即為所測的電導(dǎo)率值。6.2.6水質(zhì)濁度的測定6.2.6.1原理:在相同條件下，用無濁度水的散射光的強(qiáng)度與水樣的散射光的強(qiáng)度進(jìn)行比較，散射光強(qiáng)度越大，表明濁度越高。6.2.6.2試劑無濁度水：將蒸餾水通過0.2μm濾膜過濾，收集于用濾過的水淋洗兩次的燒杯中。6.2.6.3儀器：TSZ型臺式濁度儀：量程：0~400NTU，最小分辨：0.001NTU。6.2.6.4步驟6.2.6.4.1TSZ型臺式濁度儀的操作按儀器使用說明書或操作規(guī)程的要求進(jìn)行。6.2.6.4.2裝入待測水樣的測量瓶需擦凈水跡或指印并放入樣品池里。6.2.6.4.3待儀器數(shù)值顯示穩(wěn)定后直接讀取水樣的濁度。6.2.7水質(zhì)游離余氯的測定6.2.7.1術(shù)語游離余氯：以次氯酸，次氯酸離子和溶解的單質(zhì)氯形式存在的氯。6.2.7.2檢測方法PlcketColorimeterTMⅡ口袋型比色計(jì)法；3，3、，5,5、-四甲基聯(lián)苯胺比色法；DPD余氯檢測法。6.2.7.3PlcketColorimeterTMⅡ口袋型比色計(jì)法。6.2.7.3PlcketColorimeterTMⅡ口袋型比色計(jì)的操作按儀器使用說明書或操作規(guī)程的要求進(jìn)行。6.2.7.3.1水樣采樣后應(yīng)立即測定，自始至終避免強(qiáng)光、振搖和溫?zé)?，測定過程應(yīng)在一分鐘內(nèi)完成。6.2.7.3.2假如在水樣中添加試劑后，有短暫黃色產(chǎn)生，表示水中氯濃度過高，請重新稀釋水樣后，再重新分析，讀值后，再乘以稀釋倍數(shù)，得實(shí)際濃度。6.2.7.43,3，5,5-四甲基聯(lián)苯胺比色法。6.2.7.4.1原理在PH小于2的酸性溶液中，余氯與3,3，5,5-四甲基聯(lián)苯胺（以下簡稱四甲基聯(lián)苯胺），生成黃色的醌式化合物，用目視比色法定量，本法可用重鉻酸鉀配制永久性余氯標(biāo)準(zhǔn)色列。6.2.7.4.2試劑氯化鉀-鹽酸緩沖溶液（PH2.2）：稱取3.7g經(jīng)100℃~110℃干燥至恒重的氯化鉀，用純水溶解，再加0.56ml鹽酸（鹽酸密度為1.19g/ml），并用純水稀釋至1000ml。鹽酸溶液（1+4）3,3，5,5-四甲基聯(lián)苯胺溶液（0.3g/L）：稱取0.03g3，3，5,5-四甲基聯(lián)苯胺用100ml鹽酸溶液【c(HCL)=0.1mol//L】分批加入并攪拌使試劑溶解(必要時(shí)可加溫助溶)，混勻，次溶液應(yīng)無色透明，儲存于棕色瓶中，常溫下課保存6個(gè)月。重鉻酸鉀-鉻酸鉀溶液：稱取0.1550g經(jīng)120℃干燥至恒重的重鉻酸鉀及0.4650g經(jīng)120℃干燥至恒重的鉻酸鉀，溶解于氯化鉀-鹽酸緩沖溶液中，并稀釋至1000ml。此溶液生成的顏色相當(dāng)于1mg/L余氯與四甲基聯(lián)苯胺生成的顏色。Na2-EDTA溶液（20g/L）。6.2.7.4.3儀器具色比色管，50ml6.2.7.4.4分析步驟6.2.7.4.4.1永久性余氯標(biāo)準(zhǔn)比色管(0.005mg/L~1.mg/L)的配制。按表2所列用量分別吸取重鉻酸鉀-鉻酸鉀溶液注入50ml具色比色管中，用氯化鉀-鹽酸緩沖溶液稀釋至50ml到刻度，在冷暗處可保存6個(gè)月。表20.005mg/L~1.mg/L永久性余氯標(biāo)準(zhǔn)比色管的配制余氯(mg/L)重鉻酸鉀-鉻酸鉀溶液/ml余氯(mg/L)重鉻酸鉀-鉻酸鉀溶液/ml0.0050.250.4020.00.010.500.5025.00.031.500.6030.00.052.500.7035.00.105.000.8040.00.2010.00.9045.00.3015.01.0050.0注;若水樣余氯大于1mg/L時(shí)，可將重鉻酸鉀-鉻酸鉀溶液的濃度提供10倍，配成相當(dāng)10mg/L余氯的標(biāo)準(zhǔn)色，配制成1.mg/L-10mg/L的永久性余氯標(biāo)準(zhǔn)色列6.2.7.4.4.2于50ml具色比色管中，先加入2.5ml四甲基聯(lián)苯胺溶液，加入澄清水樣至50ml刻度，混合后立即比色，所得結(jié)果為游離余氯；放置10分鐘，比色所得結(jié)果為總余氯，總余氯減去游離余氯即為化合余氯。注：PH值大于7的水樣可先用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH為4再進(jìn)行測定。水樣中鈦離子大于0.12mg/L時(shí)，可在每50ml水樣中加1-2滴Na2-EDTA溶液，以消除干擾。水溫低于20℃時(shí)，可先溫?zé)崴畼又?5℃~30℃，以加快反應(yīng)速度。測試時(shí)，如顯淺藍(lán)色，表明顯色液酸度偏低，可多加1ml試劑，又如加試劑后，出現(xiàn)桔色，表示余氯含量過高，可改用余氯1.mg/L~10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列，并多加1ml試劑。6.2.7.5DPD余氯檢測法6.2.7.5.1試劑DPD余氯檢測試劑盒6.2.7.5.2檢測方法取水樣于15ml試劑瓶至刻度，加入一袋DPD余氯檢測試劑，充分搖勻，10s后與DPD余氯檢測試劑盒內(nèi)的比色卡比色，比色卡余氯濃度范圍為0.05mg/L~1.mg/L，試劑瓶內(nèi)顏色與比色卡上顏色接近的濃度即為水樣的余氯含量。6.2.8測定結(jié)果必須做好質(zhì)量記錄并存檔。6.2.9水質(zhì)異常糾偏措施序號水樣異常情況描述糾正措施1井水檢出大腸菌群停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用2菌落總數(shù)大于100CFU/mL停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用3有異味停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用4pH值大于8.5停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用5總硬度大于450mg/l停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用6總堿度大于150mg/l停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用7濁度大于1NTU停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用8余氯大于0.3mg/l停止用水，排放或更換自來水。然后查明原因，采取相應(yīng)的糾正預(yù)防措施，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用9余氯小于0.05mg/l停止用水，補(bǔ)加余氯或更換自來水，待驗(yàn)證評估井水合格后方可使用10工藝水檢出大腸菌群停止用水，依據(jù)《工藝水處理系統(tǒng)清洗消毒規(guī)范》對水處理設(shè)備進(jìn)行清洗消毒11菌落總數(shù)大于100CFU/mL停止用水，依據(jù)《工藝水處理系統(tǒng)清洗消毒