艾滋病檢測(cè)規(guī)范化操作

艾滋病檢測(cè)規(guī)范化操作HIV抗體檢測(cè)的意義HIV感染的診斷疾病進(jìn)展的監(jiān)測(cè)抗病毒療效觀察耐藥性監(jiān)測(cè)HIV血清學(xué)檢測(cè)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室SOP根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略HIV感染的抗體實(shí)驗(yàn)診斷檢測(cè)方法HIV培養(yǎng)，P24抗原檢測(cè)，核酸測(cè)定，血清抗體測(cè)定金標(biāo)準(zhǔn)血清HIV抗體測(cè)定，HIV感染后平均25天檢出，待12周時(shí)幾乎全檢出HIV抗體檢測(cè)兩個(gè)階段（篩查和確證）三個(gè)程序（篩查－復(fù)檢－確證）五種標(biāo)本（血清，血漿，濾紙干血斑，唾液，尿液，）酶聯(lián)試驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作1、收樣及校核信息2、處理樣品3、準(zhǔn)備試驗(yàn)所需器材實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作目的：是為臨床提供準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)診斷依據(jù)。我們?yōu)榱吮ＷC實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中必須堅(jiān)持全面質(zhì)量控制（TQCtotalqualitycontrol）.對(duì)影響臨床檢驗(yàn)結(jié)果可靠性的各方面因素及各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制,全過(guò)程質(zhì)量控制包括實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中、和實(shí)驗(yàn)后三個(gè)階段的質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)前誤差約占70%，因而實(shí)驗(yàn)前質(zhì)量保證對(duì)減少實(shí)驗(yàn)誤差顯得尤其重要。外部質(zhì)控購(gòu)買（推薦）自備（血清樣本的收集）試劑準(zhǔn)備在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)在室溫下放置30分鐘以上后，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測(cè)定要求來(lái)杜絕假陰性結(jié)果的出現(xiàn)加血清樣品的注意事項(xiàng)加樣品的速度：加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性，要慢吸輕放加樣品的位置：加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附不允許濺出和產(chǎn)生氣泡：濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染，出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面會(huì)有差異，影響酶標(biāo)儀讀數(shù)結(jié)果加樣移液器不能混合使用：不可用加血液樣品的移液器和加試劑用的移液器混用：加入的樣品量要精準(zhǔn)：選擇合格廠家生產(chǎn)的移液器，查看產(chǎn)品校準(zhǔn)證書記錄，認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室每半年都要做自校準(zhǔn)記錄移液器的使用垂直加樣吸頭尖端需浸入液面3mm以下慢吸慢放，控制好彈簧的伸縮速度放液時(shí)吸頭尖端靠在容器內(nèi)壁2/3移液器的使用反向吸液：適用于粘稠液體和易揮發(fā)的液體多吸入的液體可以補(bǔ)償吸頭內(nèi)部的表面吸附，因此定量實(shí)驗(yàn)都采用此方法酶標(biāo)儀的安置

避光室溫在15~30℃

預(yù)熱儀器10分鐘酶免試驗(yàn)結(jié)果判讀1、儀器讀取打印，禁止肉眼斷判酶免結(jié)果2、對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)3、對(duì)高度懷疑為“窗口期”結(jié)果在報(bào)告上備注艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備使用注意事項(xiàng)移液器定期檢定校準(zhǔn)恒溫箱定期檢定避免金屬部件生銹洗板機(jī)保持管道暢通酶標(biāo)儀定期檢定避免濾光片損傷標(biāo)本的采集和分離工作

使用一次性真空采血管（一管一針），按照采血管規(guī)格采集，通常采血量以采血管規(guī)格50％~75%為宜，但要保證擁有足夠的標(biāo)本量用于ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。真空采血管大致分為：

1肝素納

2肝素理

3促凝管

4血沉管

5PT管

6血常規(guī)管

7分離膠／促凝劑

8EDTA-K2，K3，Na2

往上級(jí)確證單位送檢時(shí)請(qǐng)轉(zhuǎn)管

統(tǒng)一血清凍存管規(guī)格保存血清標(biāo)本1、2ML2、螺口3、帶內(nèi)密封圈對(duì)所有做HIV抗體檢測(cè)標(biāo)本要求轉(zhuǎn)管一、便于凍存二、劃分法律責(zé)任反復(fù)凍融標(biāo)本不做WB確認(rèn)實(shí)驗(yàn)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意因停電等造成的反復(fù)凍融，標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。技術(shù)誤差

實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)技術(shù)誤差是難免的，特別是在一次做大批量檢測(cè)時(shí)。血清標(biāo)本或試劑稀釋或配備不正確加樣器污染或不正確加錯(cuò)標(biāo)本臨近孔交叉污染洗滌程序錯(cuò)誤吸光檢測(cè)不正確假陽(yáng)性結(jié)果一些含有針對(duì)人類白細(xì)胞抗原HLA的抗體患自身免疫性疾?。ㄈ缦到y(tǒng)性紅斑狼、風(fēng)濕病等寄生蟲（如瘧疾等）其他病毒（如病毒性肝炎等）近期疫苗接種（如流感疫苗接種等）高丙種球蛋白癥假陰性結(jié)果“窗口期”感染者嚴(yán)重的HIV相關(guān)免疫紊亂者血清轉(zhuǎn)換期：一些病人在病程的晚期發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換，可能由于免疫系統(tǒng)的崩潰所致；也可能于HAART治療導(dǎo)致免疫重建的病人IgG抗體缺乏者抗原量過(guò)量對(duì)確證結(jié)果的解釋

HIV抗體不確定：是一個(gè)比較令人困惑的問(wèn)題。不僅篩查陽(yáng)性的標(biāo)本可以出現(xiàn)不確定的結(jié)果，篩查陰性的標(biāo)本做WB檢測(cè)時(shí)也有出現(xiàn)不確定結(jié)果，（性病感染者WB檢測(cè)～30%不確定）早期感染：有過(guò)HIV感染危險(xiǎn)行為的個(gè)體。處在血清轉(zhuǎn)換的過(guò)程，2—3個(gè)月以后可以顯示確切的陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)不確定結(jié)果如何處理

隨訪期間可根據(jù)需要，檢測(cè)病毒核酸或P24抗原作為輔助診斷。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，根據(jù)實(shí)際情況需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)或HIV-2核酸檢測(cè)，以進(jìn)一步明確HIV-2感染狀態(tài)，疑難樣品送湖南省艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步分析。無(wú)反應(yīng)不確定有反應(yīng)無(wú)反應(yīng)有反應(yīng)有反應(yīng)無(wú)反應(yīng)有反應(yīng)無(wú)反應(yīng)無(wú)反應(yīng)無(wú)反應(yīng)艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童12個(gè)月進(jìn)行HIV抗體篩查試驗(yàn)用另一種篩查試劑再次檢測(cè)18個(gè)月時(shí)再進(jìn)行HIV抗體篩查試驗(yàn)試劑1雙份或雙孔檢測(cè)，或原有試劑加另一種試劑抗體補(bǔ)充試驗(yàn)報(bào)告HIV抗體陰性報(bào)告HIV抗體陽(yáng)性提供咨詢，繼續(xù)隨訪，進(jìn)行核酸檢測(cè)等補(bǔ)充試驗(yàn)圖12艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童HIV抗體檢測(cè)流程WB試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析信息采集的重要性每一份做HIV檢測(cè)的標(biāo)本，檢測(cè)的結(jié)果涉及到病人的后續(xù)治療，包括流行病學(xué)追蹤、免疫功能檢測(cè)和抗病毒治療，做好樣品登記工作可以避免患者延誤治療。報(bào)告的發(fā)放陰性反應(yīng)發(fā)HIV抗體陰性報(bào)告陽(yáng)性反應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢發(fā)HIV抗體待復(fù)查報(bào)告填寫HIV抗體復(fù)檢檢測(cè)單送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)（篩查陽(yáng)性不能發(fā)陽(yáng)性報(bào)告，需確證試驗(yàn)完成后才可報(bào)告陽(yáng)性）國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口快速試劑的性能比較（2003-2010）快速試劑敏感性（2003-2010）快速試劑特異性（2003-2010）2011～2013年HIV抗體快速檢測(cè)試劑臨床質(zhì)量評(píng)估結(jié)果匯總試劑簡(jiǎn)稱2011年2012年2013年

敏感性(%)特異性(%)功效率(%)敏感性(%)特異性(%)功效率(%)敏感性(%)特異性(%)功效率(%)北海新升98.1983.2288.72------北京金豪10010010010097.998.6799.3998.6198.89北京金偉凱10098.9599.3410098.2598.8910097.9198.67北京庫(kù)爾---10098.699.12---北京藍(lán)十字---10096.1597.5710098.9599.34北京萬(wàn)泰98.899.6599.3410097.5598.4510098.2698.89廣州萬(wàn)孚10098.9599.3410098.699.1299.3998.9599.12韓國(guó)SD98.810099.5698.1910099.3410099.6599.78杭州艾康10098.9599.34------杭州艾博---10099.399.5610094.7796.68加拿大麥美華96.3910098.6798.1998.2598.2310099.399.56南通伊士---95.1810098.2310098.6199.12日本Determine10099.399.5698.898.698.6710099.399.56日本PA10098.9599.3410098.9599.3410096.5297.79汕頭潤(rùn)和---95.7899.398.01---上海科華98.899.399.12---10099.6599.78天津中新科炬10097.998.6710098.9599.3410097.5698.45濰坊康華10099.6599.7810099.399.5610099.399.56廈門英科新創(chuàng)98.899.399.1210099.399.5610098.9599.34鄭州安圖綠科98.899.6599.3499.499.6599.5610099.399.56珠海麗珠99.498.9599.1210098.699.1210097.9198.67《全國(guó)HIV抗體診斷試劑臨床質(zhì)量評(píng)估》試劑評(píng)價(jià)需要有權(quán)威的血清考核盤（Panel）進(jìn)行檢測(cè)，由于Panel一般實(shí)驗(yàn)室不易取得，每進(jìn)行一次試劑評(píng)價(jià)也很麻煩?？梢酝ㄟ^(guò)間接的信息對(duì)試劑進(jìn)行選擇。根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評(píng)價(jià)結(jié)果，了解市場(chǎng)上試劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。試劑盒選擇必須使用經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢合格、在有效期內(nèi)的試劑，試劑應(yīng)從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡(jiǎn)便性，安全性及經(jīng)濟(jì)性作出全面的評(píng)價(jià)。敏感性:是該方法能夠檢測(cè)出最弱陽(yáng)性標(biāo)本的能力，

真陽(yáng)性數(shù)敏感度=×100%

真陽(yáng)性數(shù)+假陰性數(shù)試劑盒選擇特異性：是該方法能夠檢測(cè)出真陰性標(biāo)本的能力。

真陰性數(shù)特異度=×100%

真陰性數(shù)+假陽(yáng)性數(shù)試劑包被抗原或抗體類型及來(lái)源窗口期方法檢測(cè)抗體描述第一代HIV-1型抗原

(病毒裂解產(chǎn)物)30-60天間接法lgG假陽(yáng)性較多，血清要高度稀釋，靈敏度低，僅能檢測(cè)HIV-1第二代HIV（1+2型）抗原（基因重組或合成多肽）28-35天間接法lgG靈敏度和特異性優(yōu)于第一代，但只能檢測(cè)HIV-lgG第三代HIV（1+2型）抗原（基因重組）14-25天雙抗夾心法LgG+lgM可檢測(cè)HIV不同的抗體亞類（lgG、lgM、lgA等）靈敏度、特異性均較高第四代HIV（1+2型）抗原（基因重組+抗-p24抗體）10-18天雙抗原夾心法和雙抗體夾心法LgG+lgM+Ag檢測(cè)