柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸功能的影響

柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸功能的影響

hpa是一個重要的蛋白質(zhì)軸，是神經(jīng)分泌物網(wǎng)絡(luò)的中心，在維持身體和環(huán)境之間的平衡方面發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn),HPA軸功能紊亂與抑郁癥的發(fā)生有密不可分的關(guān)系。HPA軸的功能亢進(jìn)是抑郁癥患者的主要神經(jīng)內(nèi)分泌改變,這種HPA軸功能亢進(jìn)隨著抑郁癥的加重或緩解也隨之發(fā)生改變。本實驗采用慢性應(yīng)激法造成大鼠HPA軸功能紊亂模型即抑郁癥模型,以柴胡疏肝散進(jìn)行干預(yù)觀察各組大鼠HPA軸功能的差異,探索柴胡疏肝散治療抑郁癥的作用機(jī)理。1材料表面1.1scxk豫SPF級雄性SD大鼠100只,體質(zhì)量(200±20)g,由河南省實驗動物中心提供(動物許可證號SCXK(豫)2010-0002)。1.2elisa試劑大鼠(Rat)促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒,大鼠(Rat)皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒,中藥(飲片)由河南東升藥業(yè)有限公司提供。1.3主要實驗設(shè)備酶標(biāo)儀。2方法2.1動物分組、應(yīng)激SPF級SD雄性大鼠,open-field法進(jìn)行行為學(xué)評分,水平運(yùn)動和垂直運(yùn)動總得分低于30分或高于120分的動物予以剔除。選擇60只動物按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組、模型組、柴胡疏肝散組3組,每組20只。采用慢性應(yīng)激造模方法,應(yīng)激刺激參考文獻(xiàn)改進(jìn),冰水游泳、熱應(yīng)激、束縛、夾尾、禁水、禁食及晝夜顛倒共7種刺激,每日隨機(jī)安排1種刺激方式,整個刺激實驗每種刺激給予3次共21d。柴胡疏肝散組大鼠在應(yīng)激開始時灌胃給藥,每日1次,模型組蒸餾水ig共21d。2.2大鼠的生藥濃度柴胡疏肝散方藥參照中國中醫(yī)藥出版社《中醫(yī)方劑學(xué)》第七版教材。按原方比例水提,生藥濃度為1g/ml。大鼠按生藥量7.875g/kg/d灌胃,相當(dāng)于成人(60kg)臨床用量的15倍。從應(yīng)激刺激開始灌胃至應(yīng)激結(jié)束止共用藥21d。2.3腹主動脈取血制備血清大鼠腹腔麻醉(25%烏拉坦,0.75mg/kg),腹主動脈取血8ml,其中4ml用于制備血漿,另4ml用于制備血清,-70℃保存。2.4指標(biāo)檢測2.4.1血清抗體檢測從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條;設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;樣本孔先加血清10μL,再加血清稀釋液40μL,空白孔不加;除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋溫育60min;棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,重復(fù)洗板5次;每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min;每孔加入終止液50μL,15min內(nèi)在450nm波長處測定各孔的OD值。2.4.2以彈性法檢測大鼠血漿的cort濃度2.5標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±s)表示,SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-wayANOVA),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3結(jié)果3.1大鼠血清acth濃度比較表1顯示,與正常對照組比較,模型組大鼠血清ACTH濃度顯著升高(P<0.05);與模型組比較,柴胡疏肝散組大鼠血清ACTH濃度顯著降低(P<0.05)。3.2鼠血漿cort濃度的變化表2顯示,與正常對照組比較,模型組大鼠血漿CORT濃度顯著升高(P<0.05);與模型組比較,柴胡疏肝散組大鼠血漿CORT濃度顯著降低(P<0.05)。4抑郁癥患者皮質(zhì)醇及血清acth的變化HPA軸是神經(jīng)內(nèi)分泌的重要組成部分,下丘腦分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)作用于腺垂體,調(diào)控腺垂體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的分泌,ACTH又可作用于腎上腺皮質(zhì),影響HPA軸終末激素(靈長類為皮質(zhì)醇,嚙齒類為皮質(zhì)酮)的分泌。研究發(fā)現(xiàn),抑郁癥患者的血漿皮質(zhì)醇濃度增加,失去了正常人夜間自發(fā)性分泌抑制的規(guī)律,整日處于腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)狀態(tài)。Rubin等研究發(fā)現(xiàn),與健康對照組比較,抑郁癥患者的腎上腺皮質(zhì)增生約38%,增生程度與皮質(zhì)醇濃度有關(guān),且隨著抑郁的恢復(fù),這種增生似乎隨皮質(zhì)醇濃度恢復(fù)而逐漸消失。唐萍等對23例抑郁癥患者治療前后皮質(zhì)醇和促皮質(zhì)醇激素變化研究中發(fā)現(xiàn),抑郁癥患者血漿ACTH水平顯著升高,血漿皮質(zhì)醇水平也有顯著升高。徐虹等研究亦證實,抑郁癥患者HPA軸功能亢進(jìn)是狀態(tài)依賴。動物實驗也發(fā)現(xiàn),慢性應(yīng)激可使大鼠血漿CORT濃度增高。抑郁癥是西醫(yī)病名,類似中醫(yī)“郁證”、“癲證”、“臟躁”及“百合病”等疾病。雖然很多醫(yī)家認(rèn)為抑郁癥就是中醫(yī)的“郁證”,是由情志不舒、氣機(jī)郁滯所致,以心情抑郁、情緒不寧、胸部滿悶、胸脅脹滿,易哭易怒、咽中如物阻等癥狀為主要臨床表現(xiàn)的一類病癥,但抑郁癥不單純屬于中醫(yī)“郁證”范疇,在“百合病”等其他古代文獻(xiàn)中亦有記載。所以抑郁癥的表現(xiàn)形式可在多種中醫(yī)病名的癥狀中出現(xiàn),與郁證二者不是簡單的等同關(guān)系。抑郁癥病因繁多、病機(jī)復(fù)雜,但從肝論郁為大多數(shù)醫(yī)家所認(rèn)同,認(rèn)為其基本病機(jī)為肝氣郁結(jié)并貫穿疾病始終,因此疏肝解郁是中醫(yī)治療抑郁癥的基本法則。本實驗結(jié)果顯示,模型組大鼠血清ACTH和血漿CORT的濃度均顯著高于正常對照組,而柴胡