微生物的無(wú)菌操作及接種技術(shù)

微生物的無(wú)菌操作及接種技術(shù)第1頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四一、微生物無(wú)菌操作技術(shù)無(wú)菌操作目的：保證待檢物品不被環(huán)境中微生物污染；防止被檢微生物在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。無(wú)菌操作技術(shù)：指在微生物實(shí)驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施。第2頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀一、微生物無(wú)菌操作技術(shù)無(wú)菌操作材料：接種工具第3頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四一、微生物無(wú)菌操作技術(shù)無(wú)菌操作材料：材料器械和用品：酒精燈、記號(hào)筆、標(biāo)簽、火柴、滅菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌水、試管架菌種培養(yǎng)基：第4頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四二、原理：無(wú)菌技術(shù)：指在微生物實(shí)驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施。接種：將微生物接到適于它生長(zhǎng)繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過(guò)程。微生物無(wú)菌操作技術(shù)與接種技術(shù)第5頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四接種的準(zhǔn)備工作無(wú)菌環(huán)境的要求與保持進(jìn)入無(wú)菌室前的準(zhǔn)備無(wú)菌操作的要求接種的操作方法二、微生物接種技術(shù)第6頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四無(wú)菌環(huán)境無(wú)菌室超凈工作臺(tái)無(wú)菌環(huán)境的要求與保持（一）接種的準(zhǔn)備工作第7頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（1）無(wú)菌室的結(jié)構(gòu)：應(yīng)有更衣間、緩沖間、操作間應(yīng)有良好的通風(fēng)條件，安裝空調(diào)設(shè)備及過(guò)濾設(shè)備無(wú)菌環(huán)境的要求與保持1、無(wú)菌室第8頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四無(wú)菌室的結(jié)構(gòu)第9頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（2）無(wú)菌室的消毒和防污染無(wú)菌室內(nèi)空氣測(cè)試應(yīng)基本達(dá)到無(wú)菌。每日（使用前）紫外線照射（1~2小時(shí)）.每周用甲醛、乳酸、過(guò)氧乙酸熏蒸（2小時(shí)）.每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。定期作實(shí)驗(yàn)室沉降菌計(jì)數(shù)，以檢查無(wú)菌室微生物生長(zhǎng)繁殖動(dòng)態(tài)。無(wú)菌環(huán)境的要求與保持第10頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2、超凈工作臺(tái)

超凈工作臺(tái)是為實(shí)驗(yàn)室工作提供無(wú)菌操作環(huán)境的設(shè)施，以保護(hù)實(shí)驗(yàn)免受外部環(huán)境的影響，同時(shí)為外部環(huán)境提供某些程度的保護(hù)以防污染并保護(hù)操作者。

原理：超凈工作臺(tái)的潔凈環(huán)境是在特定的空間內(nèi)，潔凈空氣(進(jìn)濾空氣)按設(shè)定的方向流動(dòng)而形成的。以氣流方向來(lái)分，現(xiàn)有的超凈工作臺(tái)可分為垂直式，由內(nèi)向外式以及側(cè)向式。無(wú)菌環(huán)境的要求與保持第11頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四垂直流超凈工作臺(tái)水平流超凈工作臺(tái)垂直流超凈工作臺(tái)第12頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四超凈臺(tái)的使用與維護(hù)風(fēng)速保持在0.32-0.48米/秒使用前打開紫外燈照射40~60min開啟超凈工作臺(tái)工作電源，關(guān)閉紫外燈，并用75%的酒精或0.5%過(guò)氧乙酸噴灑擦拭消毒工作臺(tái)面。使用中，有機(jī)玻璃罩受到污染，嚴(yán)禁用酒精棉球擦拭，請(qǐng)用含水棉布檫拭；請(qǐng)保持超凈臺(tái)整潔、干燥，不要堆積雜物；使用完畢，關(guān)閉煤氣開關(guān)或酒精燈；使用完畢后，用消毒液擦拭工作臺(tái)面，關(guān)閉工作電源，重新開啟紫外燈照射15min.定期做無(wú)菌試驗(yàn)，以測(cè)定凈化臺(tái)是否符合無(wú)菌要求。無(wú)菌環(huán)境的要求與保持第13頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四3、無(wú)菌器材準(zhǔn)備滅菌器材：玻璃器皿、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣等.消毒器材：接種試管、無(wú)菌室內(nèi)的凳子、試管架、天平、工作臺(tái)等無(wú)菌環(huán)境的要求與保持第14頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（1）定期檢查無(wú)菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；（2）用紫外線滅菌處理30~60min；（3）檢查無(wú)菌器材是否完備；（4）實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入無(wú)菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛?。?）緩沖室內(nèi)換上洗凈并經(jīng)紫外線燈照射過(guò)的工作衣、帽、鞋。進(jìn)入無(wú)菌室前的準(zhǔn)備第15頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作；（2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放。（3）在火焰上方操作；（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；（5）在接種培養(yǎng)物時(shí)，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。無(wú)菌操作要求第16頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四無(wú)菌操作要求第17頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四無(wú)菌操作要求第18頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四接種的基本程序常用接種方法斜面接種劃線接種液體接種穿刺接種

（二）接種的操作方法第19頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四1、接種的基本程序滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本接種滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的微生物，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的微生物，以免污染環(huán)境操作需在無(wú)菌室或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌室、超凈工作臺(tái)使用前后需進(jìn)行消毒。實(shí)驗(yàn)使用的物品使用前后需嚴(yán)格滅菌（二）接種的操作方法第20頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2、常用的接種方法斜面接種劃線接種液體接種穿刺接種

（二）接種的操作方法第21頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四※斜面接種：從已生長(zhǎng)好的菌種斜面上挑取少量菌種移植至另一新鮮斜面培養(yǎng)基上的接種方法。用于好氣性微生物的接種。2、常用的接種方法第22頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四標(biāo)記：接種前在試管上注明菌名、接種日期、接種人姓名點(diǎn)燃酒精燈。接種：（1）手持試管

將菌種管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于兩管之間。斜面向上，盡量放平。（2）旋松管塞（3）接種環(huán)灼燒滅菌※斜面接種第23頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四※斜面接種（4）拔管塞：

用右手的無(wú)名指、小指和手掌邊先后取下菌種管和待接試管的管塞，讓試管口緩緩過(guò)火滅菌(切勿燒得過(guò)燙)第24頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四※斜面接種（5）取菌:接種環(huán)冷卻，輕沾取少量菌體或胞子，然后將接種環(huán)移出菌種管，注意不要使接種環(huán)碰到管壁，取出后帶菌接種環(huán)不可通過(guò)火焰。

第25頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四※斜面接種

（6）接種:

在火焰旁迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入待接斜面管。從斜面培養(yǎng)基底部向上作“Z”形來(lái)回密集劃線，勿劃破培養(yǎng)基。有時(shí)也可用接種針僅在斜面培養(yǎng)基的中央拉一條直線作斜面接種，直線接種可觀察不同菌種的生長(zhǎng)特點(diǎn)。第26頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四※斜面接種

(7)塞管塞：

取出接種環(huán)，灼燒試管口，并在火焰旁將管塞旋上。不要用試管去迎棉塞，以免試管在移動(dòng)時(shí)納入不潔空氣。

(8)將接種環(huán)灼燒滅菌。放下接種環(huán)，再將棉花塞旋緊。第27頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四斜面接種示意圖第28頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四由斜面菌接種到液體培養(yǎng)基（如試管或三角瓶等）中的方法。操作方法：與斜面法基本一致，只是在將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基時(shí)使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，塞上棉塞再輕輕搖勻。如果菌種是培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基中時(shí)，一般用移液管或滴管接種2、常用的接種方法※液體接種第29頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2、常用的接種方法※劃線接種目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌、活菌計(jì)數(shù)。方法：★分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本★連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本第30頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2、常用的接種方法※劃線接種第31頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)2、常用的接種方法※劃線接種第32頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四連續(xù)劃線法2、常用的接種方法※劃線接種第33頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四用接種針從菌種斜面上挑取少量菌體并把它穿刺到固體或半固體的深層培養(yǎng)基中的接種方法。用于厭氣性細(xì)菌培養(yǎng)、檢查細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力、保藏菌種。只適宜于細(xì)菌和酵母的接種培養(yǎng)2、常用的接種方法※穿刺接種第34頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四穿刺接種方法：

1)

標(biāo)記

2)點(diǎn)燃酒精燈

3）接種（1）手持試管（2）旋松棉塞（3）接種針灼燒滅菌，把在穿刺中可能伸入試管的其他部位也