染色體G顯帶標(biāo)本的制備

染色體G顯帶標(biāo)本的制備二、實(shí)驗(yàn)原理常規(guī)制備的染色體標(biāo)本經(jīng)烤片后，用熱堿、各種蛋白酶、尿素、去垢劑或其它溶液等預(yù)處理再以Giemsa染色，在油鏡下可看到染色體兩臂顯示出著色深淺不同的橫紋。最常用的是胰蛋白酶法。染色體帶型的形成主要取決于DNA、核酸結(jié)合蛋白及染料三者的相互作用，主要是指DNA的堿基組成及其與結(jié)合蛋白形成的特定結(jié)構(gòu)對(duì)染料分子的作用。可能的機(jī)理是：G帶區(qū)含有較豐富的A-T對(duì)，在間期核呈固縮狀態(tài)，而且是DNA晚復(fù)制區(qū)之一，其與蛋白結(jié)合緊密而不易被胰酶分解，因而深染；而G陰性帶區(qū)富含G-C對(duì)，蛋白與其結(jié)合較疏松，易被胰酶消化分解而不易著色。（。。。深染區(qū)由許多二硫鍵交聯(lián)，淺染區(qū)則缺乏二硫鍵、多硫氫鍵。。。）Giemsa染料是天青-伊紅染料，著色首先取決于二個(gè)天青分子同蛋白結(jié)合，在此基礎(chǔ)上再結(jié)合一個(gè)伊紅分子，通過胰酶的顯帶預(yù)處理可除去陰性G帶區(qū)的蛋白。

試劑及器材試劑：胰蛋白酶、0.4%酚紅、5%NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸鹽緩沖液，0.85%生理鹽水。器材：37℃恒溫水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴頭。實(shí)驗(yàn)步驟取胰酶25mg，溶解于盛有50ml0.85%生理鹽水的染色缸中，置37℃恒溫水浴箱中，加入0.4%酚紅2滴，混勻，以5%NaHCO3調(diào)節(jié)pH為6.6-7.0。實(shí)驗(yàn)步驟待胰酶液溫度升至37℃后，將染色體標(biāo)本片（37℃烘箱烤片）放入胰酶液中，并輕輕擺動(dòng)，數(shù)秒（視烤片時(shí)間而定）后取出，立即自來水沖洗。染色：pH7.4磷酸鹽緩沖液4.5ml

Giemsa原液

0.5ml染色8-10分鐘。自來水沖洗，空氣干燥，鏡檢。注意事項(xiàng)良好的培養(yǎng)效果為，標(biāo)本片上中期分裂相要多，且染色體分散要好。染色體長度應(yīng)能適應(yīng)顯帶分析技術(shù)的要求。G顯帶成敗之關(guān)鍵取決于胰酶液的濃度和處理時(shí)間之搭配。顯帶不夠標(biāo)本的補(bǔ)救（無水乙醇脫色1-2min；甲醇冰醋酸固定液脫色1h后烤片、消化、染色）標(biāo)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果低倍鏡下可看到中期分裂相，進(jìn)而轉(zhuǎn)至高倍鏡及油鏡下觀察，可見染色體較為飽滿，分布均勻，著色較好，沿染色體長軸可顯出深淺不同的G帶橫紋。人類染色體G帶歌謠：一禿二蛇三蝶飄，四像鞭炮五黑腰；六號(hào)像個(gè)小白臉，七蓋八下九苗條，十號(hào)長臂近帶好，十一低來十二高；十三、四、五一二一；十六長臂縊痕大，十七長臂帶腳鐐，十八白頭肚子飽；十九中間一點(diǎn)腰，二