醫(yī)學免疫學試驗教學大綱

?醫(yī)學免疫學?實驗教學大綱實驗名稱：醫(yī)學免疫學學時：6學時學分：適應專業(yè)：護理學專業(yè)執(zhí)筆人：邊藏麗審定人：王愷兵一、實驗目的與任務實驗教學是醫(yī)學免疫學教學的重要組成局部,通過實驗教學加深對根底理論知識的理解,了解常用的免疫學檢查方法,掌握免疫學根本實驗技術〔試管凝集、玻片凝集、對流免疫電泳、免疫細胞形態(tài)觀察、淋巴細胞別離、ELISA等〕,培養(yǎng)學生嚴謹求實的科學態(tài)度以及觀察、分析、綜合水平、創(chuàng)造思維水平和初步的科研水平.、教學根本要求醫(yī)學免疫學實驗對象多為具有傳染性的材料,要求學生在實驗教學中嚴格遵守實驗室規(guī)那么,牢固樹立無菌觀念,認真操作與觀察實驗結(jié)果,實事求是的記錄實驗結(jié)果,并對實驗結(jié)果進行認真分析和討論.三、實驗工程與類型序號實驗工程學時實驗類型備注驗證設計綜合創(chuàng)新必做選做1凝集反響〔試管凝集、玻片凝集〕3V????,?2對流免疫電泳、血型鑒定2V????,?3小鼠吞噬細胞及轉(zhuǎn)化細胞形態(tài)觀察2???,?,?4酶聯(lián)免疫吸附試驗一ELISA〔HBsAg檢測〕3?,????,5豚鼠過敏試驗2?,????,四、實驗教學內(nèi)容及學時分配實驗一凝集反響〔試管凝集、玻片凝集〕3學時.目的要求掌握體外抗原抗體反響的特點和影響因素；掌握凝集反響原理、方法和用途..方法原理顆粒性抗原與相應抗體在一定條件下特異性結(jié)合而出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象..主要實驗儀器及材料試管、玻片、水浴箱、吸管、傷寒桿菌"H〞"O'診斷菌液、大腸埃希菌、大腸埃希菌診斷血清等..掌握要點掌握凝集反響原理、方法和用途；血清效價；凝集現(xiàn)象的觀察..實驗內(nèi)容：(1)玻片凝集(抗原定性試驗)(2)試管凝集(抗體定量試驗)實驗二對流免疫電泳、血型鑒定2學時.目的要求掌握沉淀的反響原理、方法和用途；了解對流免疫電泳的操作步驟,結(jié)果觀察；掌握血型鑒定的反響原理、方法及結(jié)果判斷..方法原理對流免疫電泳是將經(jīng)典沉淀反響與電泳技術結(jié)合而設計的一項實驗.沉淀反響是指可溶性抗原與相應抗體在一定條件下發(fā)生結(jié)合并出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物的一種血清學反響.帶電的膠體顆粒可在電場中移動,其移動方向與膠體顆粒所帶電荷有關.抗原在的緩沖帶負電荷,將抗原加于瓊脂板陰極端的小孔中,由陰極向陽極移動；抗體為球蛋因電滲作用而流向陰極.當抗原抗體在兩孔間相遇時,在兩者比例適當處形成白色沉淀線.此種在雙向瓊指擴散根底上加電泳的方法,稱為對流免疫電泳.血型鑒定屬直接凝集反響.將標準抗A和抗B血型抗體分別與待測紅細胞混合.如果抗原與抗體相對應,那么引起紅細胞凝集,反之那么不凝集,據(jù)其凝集現(xiàn)象可判斷血型..主要實驗儀器及材料標準白^抗A和抗B單克隆抗體(抗A為藍色,抗B為黃色)、酒精棉球、采血針、載玻片、待測血清、甲胎蛋白診斷血清,肝癌病人陽性血清,L巴比妥緩沖液,瓊脂對流免疫板、打孔器、加樣器、電泳儀等..掌握要點(1)對流免疫電泳的操作步驟,結(jié)果觀察；(2)血型鑒定的方法及結(jié)果判斷..實驗內(nèi)容：(1)講述沉淀的反響原理、方法和用途；對流免疫電泳的操作步驟,結(jié)果觀察；血型鑒定的反響原理、方法及結(jié)果判斷；(2)對流免疫電泳的操作及結(jié)果觀察；(3)血型鑒定的操作及結(jié)果觀察；實驗三小鼠吞噬細胞及轉(zhuǎn)化細胞形態(tài)觀察2學時.目的要求觀察吞噬細胞的吞噬現(xiàn)象；了解機體的非特異性免疫功能.觀察轉(zhuǎn)化細胞、淋巴母細胞的形態(tài)了解機體的特異性免疫功能..方法原理巨噬細胞可吞噬異種或異體細胞等體積較大的異物,中性粒細胞可吞噬多種細菌.觀察這兩類細胞的吞噬現(xiàn)象,可計算出吞噬異物的細胞數(shù)和吞噬細胞中吞入的異物數(shù),用以評價機體的免疫狀態(tài).淋巴細胞,在受抗原的刺激后,可轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞,淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的上下可反映機體細胞免疫水平..主要實驗儀器及材料昆明小白鼠、表皮葡萄球菌、瑞氏染液、顯微鏡、玻片等..掌握要點小白鼠腹腔解剖；觀察吞噬細胞的吞噬現(xiàn)象；觀察轉(zhuǎn)化細胞、淋巴母細胞的形態(tài)..實驗內(nèi)容：(1)小白鼠腹腔解剖；(2)標本片制作(3)瑞氏染液、(4)油鏡下觀察轉(zhuǎn)化細胞、淋巴母細胞的形態(tài).實驗四酶聯(lián)免疫吸附試驗一ELISA(HBsAg檢測)2學時.目的要求了解ELISA的類型,雙抗體夾心法的操作方法,掌握結(jié)果觀察及實際應用..方法原理酶聯(lián)免疫吸附試驗是一種用酶標化抗原或抗體,以提升抗原抗體反響的靈敏度的免疫學檢測方法.本技術肯有敏感性高,特異性強,易觀察結(jié)果,便于大規(guī)模檢測的特點.ELISA的類型有間接法、雙抗體夾心法、抗原競爭法等.雙抗體夾心法是將抗原結(jié)合于已預先包被的抗體上,再以酶標抗體與抗原結(jié)合,通過觀察酶對底物的摧化反響所產(chǎn)和的顏色變化,來判斷抗原的存在及含量..主要實驗儀器及材料HBAg酶標試劑盒,內(nèi)含：已包被抗-HBs微量反響板、陽性限制血清、陰性限制血清、酶標抗-HBs、酶底物A、酶底物以中止液、洗滌液.待檢血清、微量加樣器、吸頭等..掌握要點準確加樣；準確掌握每步操作時間；認真觀察分析結(jié)果.實驗內(nèi)容：ELISA檢測HBsAg(或抗一HBsAg)實驗五豚鼠過敏試驗2學時.目的要求了解實驗性過敏性休克的方法及結(jié)果觀察；在此根底上掌握I型超敏反響的機制、臨床表現(xiàn)及特點..方法原理豚鼠過敏反響屬I型超敏反響,與人類的青霉素和異種血清所引起的過敏性休克相似.先給豚鼠注射異種蛋白,經(jīng)過一定時間,動物產(chǎn)生IgE后處于致敏狀態(tài).當?shù)诙蜗嗤^大量抗原注射時,抗原與IgE結(jié)合,導致肥大細胞和堿性粒細胞脫顆粒,釋放活性介質(zhì),作用于效應器官,產(chǎn)生嚴重的過敏性休克..主要實驗儀器及材料豚鼠：體重150g左右的幼小豚鼠、馬血清(或人血清)、注射器、剪刀、酒精棉球等..掌握要點掌握抗原注射劑量；第二次相同抗原注射時間；豚鼠發(fā)敏、過敏性休克現(xiàn)象觀察..實驗內(nèi)容：(1)豚鼠致敏注射(2)豚鼠發(fā)敏、過敏性休克現(xiàn)象觀察.五、考核方法考勤、實驗操作50%實驗報告