食源性污染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)

寄生蟲昆蟲及病毒食品產(chǎn)儲(chǔ)運(yùn)銷污染食品摻假食品放射性污染生物性污染01化學(xué)性污染02物理性污染03食品污染按性質(zhì)分類環(huán)境污染食品容器，包裝材料濫用食品添加劑食品摻假1食物中毒應(yīng)急物資準(zhǔn)備1.食物中毒事故應(yīng)急處理專用車輛：配備救護(hù)頂燈、車載電話、儲(chǔ)物小冰箱、打印傳真機(jī)等。2.采樣用物品

（食品、現(xiàn)場(chǎng)涂抹樣品、便樣、患者嘔吐物、血樣等）

3.音像取證工具：錄音機(jī)（筆）、照相機(jī)、攝像機(jī)各1部。4.現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)、測(cè)量設(shè)備：食物中毒快速檢樣箱，食品溫度測(cè)試計(jì)、消毒劑濃度檢測(cè)試紙等。5.法律文書：食物中毒事故個(gè)案調(diào)查登記表、現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生監(jiān)督筆錄、現(xiàn)場(chǎng)檢查筆錄、調(diào)查筆錄、樣品采集記錄表、采樣記錄、樣品送檢單、先行登記保存證物通知書及存根、衛(wèi)生監(jiān)督意見書、責(zé)令改正通知書、衛(wèi)生行政控制決定書、封條、送達(dá)回執(zhí)等。6.參考資料：食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)、有關(guān)衛(wèi)生部規(guī)章、參考書籍等。7.其它有關(guān)物品：如便攜式電腦、手機(jī)或?qū)χv機(jī)等通訊設(shè)施以及用于保存運(yùn)送培養(yǎng)基的冰箱、冰塊等2現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查參與搶救病人患者調(diào)查可疑食物調(diào)查從業(yè)人員健康調(diào)查臨床癥狀進(jìn)餐史采樣加工制售環(huán)節(jié)環(huán)境衛(wèi)生采樣醫(yī)務(wù)室查詢病假情況采樣3病因初步判斷微生物食物中毒大多為急性胃腸炎癥狀。如霍亂弧菌中毒表現(xiàn)為嘔吐、瀉水、脫水、體溫下降等；沙門菌、志賀菌中毒表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、發(fā)熱等；變形桿菌中毒以上腹部刀絞樣疼痛及急性胃腸炎癥狀為主；葡萄球菌腸毒素引起胃腸炎，神經(jīng)系統(tǒng)癥狀（肉毒毒素、真菌毒素、化學(xué)毒物）；呼吸道癥狀（鏈球菌等）；甲醇中毒主要表現(xiàn)：視覺障礙、復(fù)視、失明；亞硝酸鹽中毒主要表現(xiàn)：缺氧癥狀，呼吸淺表、窒息；毒鼠強(qiáng)、氟乙酰胺中毒主要表現(xiàn)：惡心、頭痛、痙攣、肌肉震顫、流涎、大小便失禁等；有機(jī)磷中毒主要表現(xiàn)：毒蕈堿樣和煙堿樣中毒癥狀；氰化物中毒主要表現(xiàn)：閃電樣擊倒，迅速死亡；安眠鎮(zhèn)靜藥、一氧化碳、嗎啡中毒主要表現(xiàn)：昏睡，等等。4病因初步判斷季節(jié)性:微生物食物中毒具有季節(jié)性，多發(fā)生在夏秋季。而化學(xué)性食物中毒沒有季節(jié)性相關(guān)食品肉奶蛋（沙門菌、彎曲菌、金葡）水產(chǎn)品（弧菌、河豚魚、貝類毒素）剩米飯（蠟樣芽孢桿菌）變質(zhì)甘蔗、酵米面、變質(zhì)銀耳、扁豆、魚膽…5細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn)食源性疾病病原菌或其毒素常見食品潛伏期病程（d）主要癥狀重點(diǎn)檢查材料沙門氏菌肉類、雞蛋產(chǎn)品

最短6~8h，長(zhǎng)可達(dá)2~3d，平均12~24d3~7惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、發(fā)熱（38~40℃）、出冷汗、頭痛、全身痛糞便食品血液志賀氏菌冷盤、涼拌菜短6h，長(zhǎng)24h，一般10~20h3~7劇烈腹痛、腹瀉、水樣便、伴有血液和黏液、里急后重糞便食品血液副溶血性弧菌水產(chǎn)品、腌制品8~24h，平均10h1~3惡心、嘔吐、腹痛（以上腹部為主）腹瀉、多為水樣便糞便食品變形桿菌、普羅威登氏菌、摩根菌肉、蛋、水產(chǎn)品短1~3h長(zhǎng)60h，一般12~16h1~3嘔吐、腹痛、腹瀉、發(fā)熱（約38℃）、摩根菌可有血便或純血液食品糞便血液小腸結(jié)腸炎椰爾森菌乳、蛋、肉水產(chǎn)品一般約10d左右，經(jīng)飲水和食物型爆發(fā)多為3~5d3~14惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、頭痛、發(fā)燒、結(jié)節(jié)性紅斑糞便食品6細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn)大腸埃希菌（急性胃腸炎型）涼拌菜、肉類食品短6h、長(zhǎng)72h、一般10~15h1~3惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、水樣便或粘液便、發(fā)熱不超過39℃糞便食品血液大腸埃希菌（急性菌痢型）涼拌菜、肉類食品48~72h1~3腹痛、腹瀉、發(fā)燒少數(shù)嘔吐、血便、里急后重糞便食品血液空腸彎曲菌家禽、肉、牛奶、水1~10d，平均3~5d12h~7d發(fā)燒、頭痛、眩暈、背痛、肌肉痛、戰(zhàn)栗、嘔吐、腹痛、腹瀉家禽肉牛奶、水等椰毒假單孢菌、酵米面亞種酵米面、變質(zhì)銀耳1~48h，一般1~10h1~14惡心、嘔吐、發(fā)熱、黃疸、昏迷、譫語(yǔ)、四肢抽搐、少尿、血尿、尿閉、休克、酵米面、變質(zhì)銀耳醋、涼粉7細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn)蠟樣芽胞桿菌（嘔吐型）米飯、肉、乳、淀粉類食品短0.5h、長(zhǎng)5h、一般1~3h約1h嘔吐、腹痛為主、其次是腹瀉、發(fā)熱食品嘔吐物蠟樣芽胞桿菌（腹瀉型）米飯、肉、乳、淀粉類食品短6h、長(zhǎng)16h、一般10~12h約1h腹痛、腹瀉為主、少數(shù)嘔吐、不發(fā)熱食品糞便嘔吐物

葡萄球菌（腸毒素）

肉、乳、淀粉類食品

30min~6h

1~2d惡心、嘔吐（頻繁而劇烈）、腹痛、腹瀉

食品嘔吐物溶血性鏈球菌肉類（特別是豬頭肉）6~12h2~7d惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、尿急、尿頻、關(guān)節(jié)炎、膝關(guān)節(jié)痛、頭痛、中度發(fā)熱、咽頭及扁桃體紅腫有白膜食品喉頭涂抹腸球菌肉、乳、水產(chǎn)品、冷凍食品短者2~3h、長(zhǎng)者20h、一般5~10h1~2d上腹不適、惡心、嘔吐、腹痛（多呈痙攣性疼痛）、腹瀉、少數(shù)發(fā)熱食品嘔吐物、糞便8細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn)肉毒梭菌（肉毒毒素）罐頭、香腸、魚類、豆制品2h~14d、平均1~2d2~20d咽食困難、復(fù)視、失音、呼吸困難食品嘔吐物產(chǎn)氣莢膜梭菌肉類食品8~22h，平均1~2d1~2d腹痛、腹瀉、少數(shù)嘔吐食品糞便河弧菌水產(chǎn)品、腌制品短6h、長(zhǎng)19h，一般13~14h1~3d腹痛、腹瀉、嘔吐、發(fā)熱、類似霍亂病的表現(xiàn)食品糞便嘔吐物氣單孢菌水產(chǎn)品、水短1.5h，長(zhǎng)20h，一般8~13h1~3d以腹瀉為主，其次嘔吐、腹痛、發(fā)熱食品糞便嘔吐物類志賀菌水、水產(chǎn)品、禽畜肉短2.5h，長(zhǎng)19h，一般7h1~2d腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、伴有全身不適食品糞便李斯特菌生奶及奶制品、肉制品、水產(chǎn)品、果蔬？？腹痛、腹瀉、敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)、死胎食品糞便嘔吐物9細(xì)菌性食源性疾病有關(guān)癥狀與病原學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目、檢驗(yàn)樣品關(guān)系

10食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查處理

現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)、簡(jiǎn)易動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

可在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行快速檢驗(yàn)，也可進(jìn)行簡(jiǎn)易動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行快速檢驗(yàn)時(shí)一定要設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，并由有一定檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的調(diào)查人員進(jìn)行操作。樣品還應(yīng)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步按照標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)。簡(jiǎn)易動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)快速查明含有毒性很強(qiáng)致病物質(zhì)的中毒食品可以起到很大幫助。11現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查中的實(shí)驗(yàn)室支持

121.食品樣品采集可疑食品是食物中毒檢驗(yàn)最重要的樣品，由于食物中毒是群發(fā)性的，所以患者共同食用，且在加工、儲(chǔ)藏過程中，最有可能受到細(xì)菌污染的食物是首選的采集樣品。包括成品、半成品、調(diào)料、生鮮原料、蘑菇等。（1）調(diào)查人員應(yīng)對(duì)食品加工場(chǎng)所進(jìn)行認(rèn)真全面搜查，以客觀結(jié)果判斷是否還存在剩余食品或者原料。

（2）餐桌上的剩余食物為最好的樣品，應(yīng)及時(shí)采??；殘余食物將殘余食物用滅菌鑷子或勺采取，置入滅菌之容器內(nèi).（3）如無(wú)剩余食物時(shí)，可用滅菌棉拭涂擦盛可疑食物的容器表面或采取容器的滅菌生理鹽水洗液作為樣品。（4）體積較大的肉食與魚類等，應(yīng)將表面消毒后，取內(nèi)部樣品置于無(wú)菌容器內(nèi)；（5）采集同一加工場(chǎng)所加工的其它直接入口食品；（6）必要時(shí)也可采取半成品或原料。若是化學(xué)性、有毒動(dòng)植物食物中毒采集食品原料尤為重要。（7）罐頭檢樣直接采取，若僅?？蘸校蓪⒖蘸兴蜋z。132.炊具、食具、容器：對(duì)于刀、墩、容器、冰箱、水池、下水道口、設(shè)備、工具等可能直接或間接接觸可疑中毒食品的物品表面，可用滅菌棉拭蘸取滅菌鹽水反復(fù)涂檫后，將棉拭置于滅菌容器內(nèi)。菜墩表面用滅菌刀刮取木屑置于滅菌容器內(nèi)。抹布可用滅菌剪刀剪取一塊置于滅菌容器內(nèi)。這類采樣主要針對(duì)細(xì)菌性食源性疾?。?/p>

143.大便樣品采集（1）最好用便盒或采便管采集腹瀉病人大便；（2）無(wú)論中毒病人是否已經(jīng)服藥，均應(yīng)進(jìn)行大便采集。（3）應(yīng)選擇發(fā)病初期具有同樣癥狀且較嚴(yán)重病例的大便。（4）采集時(shí)應(yīng)避免混入其他物質(zhì)。154.嘔吐物采集嘔吐物已被處理掉時(shí)，涂抹被嘔吐物污染的物品,或采集洗胃液。165.血液采集如懷疑是沙門菌、變形桿菌、致瀉大腸艾希菌食物中毒時(shí)，應(yīng)分別在患者急性期（3天以內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各采取血液2-3毫升，待凝固時(shí)分離血清，做抗體滴度測(cè)定。同時(shí)采集正常人靜脈血作為對(duì)照。

176.食品加工人員帶菌情況在細(xì)菌性食物中毒的調(diào)查、檢驗(yàn)過程中，除必須確定致病菌外，還必須追蹤這些致病菌的來(lái)源，應(yīng)根據(jù)食物中毒情況，采集售貨員或制做食品的工作人員及直接或間接接觸食品的有關(guān)人員的檢樣，特別是那些在中毒發(fā)生前或正在患有腸炎、發(fā)燒、化膿及可疑帶菌者進(jìn)行采樣。可采樣手、鼻、咽和有感染灶的皮膚等涂抹樣、便樣。

187.水樣采集在調(diào)查水域污染狀況時(shí)，需進(jìn)行綜合分析判斷，抓住基本點(diǎn)（如水流入前、流入后充分混合的地點(diǎn)，用水地點(diǎn)，流出地點(diǎn)等），以取得代表性水樣。對(duì)江河、湖泊、泉水、井水等水源采樣時(shí)，將容器浸入水體中，待水至容器2／3處時(shí)取出。在采集管網(wǎng)系統(tǒng)水樣前，先消毒，再放水5分鐘，以保證樣品具有代表性。嚴(yán)格按無(wú)菌采樣規(guī)范要求采樣。198.組織器官標(biāo)本：組織器官采集包括尸解或手術(shù)后采取的胃、肝、腎、肺等重要器官標(biāo)本,尸解最好在病人死亡后48h內(nèi)進(jìn)行,要注意防止所用器械帶來(lái)污染。每一采集部位應(yīng)更換消毒器械,每種組織應(yīng)多部位采集,每份標(biāo)本應(yīng)采集50～100g于無(wú)菌潔凈容器中,分別保存冷藏送檢。

209.其它采樣對(duì)廚房、倉(cāng)庫(kù)、儲(chǔ)藏室中發(fā)現(xiàn)的鼠及糞便、貓、狗等亦需采樣。在肉毒中性毒素中毒時(shí)，對(duì)做食品的原料和周圍的土壤亦需采樣。

21食物中毒采樣數(shù)量樣品種類檢驗(yàn)?zāi)康臉悠妨匡嬘盟治黾爸虏【?gt;5L液體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200ml固體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200g嘔吐物致病菌或毒物分析>50g(ml)洗胃液致病菌或毒物分析>200ml腹瀉物致病菌或毒物分析>50g(ml)血液病原分離、抗體分析>5ml腦脊液病原分離>2ml皮損分泌物病原分析滅菌生理鹽水浸泡棉簽涂取22什么時(shí)間采？氟乙酰胺在體內(nèi)數(shù)小時(shí)后就開始轉(zhuǎn)化為氟乙酸，血中在十余小時(shí)或數(shù)天后就檢不出了氟乙酰胺，這個(gè)階段體內(nèi)氟乙酸濃度仍較高，所以應(yīng)該采集患者的血樣或尿樣來(lái)檢測(cè)氟乙酸；毒鼠強(qiáng)在體內(nèi)代謝緩慢，中毒后數(shù)月后采集的血樣對(duì)病因確定仍有重要價(jià)值。血清：如懷疑是沙門菌、變形桿菌、致瀉大腸艾希菌食物中毒時(shí)，應(yīng)分別在患者急性期（3天以內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各采取血液2~3毫升，待凝固時(shí)分離血清，做抗體滴度測(cè)定。如做血液細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)將采取的血液直接注入含有玻璃株的無(wú)菌小燒瓶中進(jìn)行振搖，然后加入相應(yīng)培養(yǎng)基或直接將血液注入培養(yǎng)基中。如懷疑副溶血性弧菌食物中毒時(shí)，應(yīng)分別在患者中毒1~2天和1周時(shí)采取血液做抗體滴度測(cè)定。（因1周后抗體就降低或消失）。病毒分離標(biāo)本最好在發(fā)病初期（1-2天）采23采多少？所有標(biāo)本在采集時(shí)立即分裝。一式N份(不同檢驗(yàn)項(xiàng)目、重復(fù)實(shí)驗(yàn)、其它實(shí)驗(yàn)室復(fù)核、留樣)24采什么樣？

對(duì)照

陰性對(duì)照

陽(yáng)性對(duì)照25怎么采？不同檢驗(yàn)?zāi)康牡臉悠芳?xì)菌分離

病毒分離抗原-抗體檢測(cè)化學(xué)毒物檢測(cè)無(wú)菌部位基因檢測(cè)——木制的棉拭子？26食物中毒事件怎么采？①糞便可直接采取或采便管插入直腸采集；嘔吐物可注入滅菌試管內(nèi)，由于胃酸能使樣品為酸性，不利于細(xì)菌的存活，所以應(yīng)在采集的嘔吐物內(nèi)加入10％蘇打予以中和，以保持細(xì)菌的活性。咽喉涂抹樣可用棉簽涂擦咽喉部采?、谙次敢褐苯映槿∽⑷霚缇萜鲀?nèi)。③血液血樣的采集應(yīng)盡早抽取患者的血液，在中毒患者急性期必要時(shí)可作血樣培養(yǎng)，但主要是用來(lái)檢測(cè)患者血液中的抗體。一般需采血二次以上，第一次在發(fā)病初期(3天以內(nèi))，第二次是在恢復(fù)期(2周左右)，若患者血中抗體呈明顯上升趨勢(shì)，即可證實(shí)其受到過相應(yīng)致病菌的感染。方法是從肘靜脈采取血液2—3ml，注入干熱滅菌試管內(nèi)，使成斜面，待凝固后，分出血清送檢。如做血液細(xì)菌培養(yǎng)，可直接注入滅菌并帶有玻璃珠的三角瓶中，立即振搖數(shù)分鐘，以防凝固，然后送檢。27樣品采集注意事項(xiàng)采樣用的試管、瓶子、盛器、剪刀、鑷子、棉拭等均應(yīng)無(wú)菌采樣用的生理鹽水、培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無(wú)菌的要求，同時(shí)應(yīng)符合采樣所需要的試劑量采樣量須滿足必須開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，食品采樣應(yīng)盡量多于25g（ml）以上采樣的同時(shí)，應(yīng)及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣單。立即將檢樣送檢驗(yàn)室，并有交接手續(xù)

28樣品采集注意事項(xiàng)疑為百草枯中毒患者的血液不能用玻璃試管，因?yàn)椴ＡЭ梢允拱俨菘葩g化，鈍化后的百草枯實(shí)驗(yàn)室是不能檢出的。疑為一氧化碳中毒者應(yīng)盡早抽血5-15毫升注入玻璃試管內(nèi)，量要直裝至瓶口，必須用密封玻璃塞塞緊，避免瓶中殘留空氣，血液是分析一氧化碳中毒的唯一檢體。其他易揮發(fā)毒物樣本也要盡量密封保存，盡快檢測(cè)。如氰化物。29樣品采集程序

采樣用物品準(zhǔn)備采樣程序方法采樣紀(jì)錄樣品編號(hào)樣品保存30影響采樣的主要因素1

缺乏代表性：由于食源性疾病多是突發(fā)性的，如細(xì)菌性食物中毒都有特定的潛伏期，最短1h

～3h，一般5h～

10h，但當(dāng)相關(guān)部門接到疫情到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后，往往時(shí)間周期間隔較長(zhǎng)，可疑食物已清理，即使采到幾份剩余食物，也可能不是當(dāng)日餐桌上剩余菜肴，因此，常常出現(xiàn)食品中檢出的細(xì)菌與病人排泄物中檢出的細(xì)菌不相符，影響了結(jié)果的分析。

31影響采樣的主要因素2

缺乏及時(shí)性：由于一些消費(fèi)者對(duì)《食品安全法》觀念淡薄，缺乏自我保護(hù)意識(shí)，食源性疾病發(fā)生后他們不是首先及時(shí)向相關(guān)部門報(bào)告疫情，而是自己先與經(jīng)營(yíng)者交涉，在不能如愿的情況下才向衛(wèi)生監(jiān)督部門舉報(bào)，因此造成一是經(jīng)營(yíng)者在得知發(fā)生食源性疾病的情況后，首先處理掉一切可疑剩余食品，對(duì)加工經(jīng)營(yíng)現(xiàn)場(chǎng)、工具、容器作了相應(yīng)的處理；二是延誤了報(bào)告的時(shí)間，從而影響了對(duì)可疑食品和病人排泄物的采集。食品加工制作現(xiàn)場(chǎng)各環(huán)節(jié)的采樣往往能提供一些線索，但常常見到現(xiàn)場(chǎng)已被清掃，食具和用具已清洗干凈，同樣也影響了食品加工工具、容器、場(chǎng)所的采樣和檢驗(yàn)。32影響采樣的主要因素3缺乏典型性：中毒病人發(fā)病后，患者一般開始時(shí)自行用抗菌毒，嚴(yán)重時(shí)才去當(dāng)?shù)蒯t(yī)院治療，由于一些醫(yī)務(wù)人員對(duì)食源性疾病報(bào)告制度意識(shí)不強(qiáng)，導(dǎo)致了只管用藥治療，忽視了對(duì)病人嘔吐物和排泄物的留取，大量的抗菌素抑制了致病菌繁殖，從而影響了致病菌的檢出率。

33影響采樣的主要因素

4缺乏完整性：一般中毒病人發(fā)病期的血液能采集到，但是采集恢復(fù)期的血液，由于病人的不配合或外出經(jīng)常采不全．也影響了檢驗(yàn)結(jié)果的全面分析。

34樣品采集無(wú)菌采樣方法采集及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣送檢申請(qǐng)單詳細(xì)填明檢樣名稱、來(lái)源、送檢時(shí)間、中毒情況、患者主要臨床癥狀、檢驗(yàn)項(xiàng)目等

35樣品檢驗(yàn)的能級(jí)分工一般食源性細(xì)菌性突發(fā)事件由事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)承擔(dān)重大食源性細(xì)菌性突發(fā)事件以事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)承擔(dān)為主，市疾控檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)共同參與檢驗(yàn)工作特大食源性細(xì)菌性突發(fā)事件由市疾控檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)組成的現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)小組共同承擔(dān)

36樣品的處理(1)固體食物如系大塊魚肉、組織臟器等，先用烙鐵燒灼表面，或在沸水中燙3—5秒鐘，然后再取內(nèi)部檢樣5—10克，按無(wú)菌要求，剪碎后置無(wú)菌乳缽內(nèi)，加人適量滅菌海沙研細(xì)，再加人無(wú)菌生理鹽水作1：5稀釋，混勻沉淀后，取上清液進(jìn)行接種和涂片染色鏡檢。(2)液體食物可將液體食物直接接種培養(yǎng)基，或離心(每分鐘3000轉(zhuǎn)以上)半小時(shí)后，采取沉淀物進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。(3)罐頭食品如罐頭尚未打開，先用溫水洗凈表面，并以95％酒精燃燒消毒，然后用滅菌開口刀將罐頭打開，以無(wú)菌操作將檢樣取出進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)。如罐頭為空盒，可用肉湯培養(yǎng)基沖洗盒內(nèi)壁，以洗液做細(xì)菌培養(yǎng)。37樣品的處理(4)糞便和嘔吐物以無(wú)菌生理鹽水，充分?jǐn)嚢杌靹?、靜置，待其中粗塊下沉后，取上清液進(jìn)行接種及涂片染色鏡檢。(5)洗胃液用無(wú)菌試管低速離心后，取沉淀物進(jìn)行檢驗(yàn)。(6)血液檢樣用做細(xì)菌培養(yǎng)的抗凝血，以滅菌吸管吸取，注入肉湯或其他培養(yǎng)基內(nèi)增菌。用于測(cè)定患者血清效價(jià)的血樣，可用離心沉淀法或自然析出法將血清分出，與可疑中毒菌株作試管凝集試驗(yàn)(7)炊事用具擦洗水等可直接接種培養(yǎng)基。38樣本標(biāo)簽內(nèi)容樣本編號(hào)：唯一性樣本來(lái)源：從什么物質(zhì)、材料中采集的，如病理采集的肝臟就可標(biāo)注為某某患者肝臟；樣本數(shù)量：包裝中樣本的數(shù)量，如此包裝中同時(shí)采集了2塊肝臟樣就要標(biāo)注為2

采樣時(shí)間：采樣地點(diǎn)：采樣人：樣本處理情況：抗凝劑、運(yùn)送培養(yǎng)基、標(biāo)本狀況（開封食品）最小包裝：（每個(gè)標(biāo)本）每個(gè)包裝箱每批樣本后要附上一個(gè)樣本清單，詳細(xì)列出此批樣本的名稱、狀態(tài)和注意事項(xiàng)39樣品的包裝感染性樣本放射性樣本易腐性樣本揮發(fā)性樣本40樣品的運(yùn)送標(biāo)本應(yīng)由專業(yè)人員專人運(yùn)送，最好使用專車。郵寄樣品除患者檢測(cè)血漿外，其他樣本不宜通過郵寄方式轉(zhuǎn)運(yùn)。檢測(cè)血漿用帶蓋的小塑料管盛裝，外襯緩沖包裝和吸附材料，通過EMS郵寄。在送郵件時(shí)要明確向郵局說明郵寄物品的成分及安全性。在運(yùn)送過程中，要保證條件能夠持續(xù)保障41樣品的保存運(yùn)送安全性樣品的安全環(huán)境的安全（不泄漏、不污染）交接手續(xù)42樣品送檢檢樣采取后立即由專人在3小時(shí)內(nèi)送區(qū)縣疾病預(yù)防控制中心或（和）市疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)送檢檢樣時(shí)，應(yīng)附送采樣送檢申請(qǐng)單，并按要求注意冷藏樣品送檢人員應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室收樣或檢驗(yàn)人員履行樣品交接手續(xù)43樣品送檢注意事項(xiàng)1）采集的樣品一般應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)接種完畢，故必須及時(shí)送檢2）夏季送檢樣品時(shí)，應(yīng)注意冷藏。不得加入任何防腐劑。3）應(yīng)附詳細(xì)送檢單，應(yīng)填明樣品名稱、份數(shù)、重量、來(lái)源、中毒表現(xiàn)、送檢時(shí)間、有范圍的檢驗(yàn)項(xiàng)目、采樣條件（容器是否滅菌、有無(wú)封條）、送樣人。4）樣品必須有牢固的標(biāo)簽，包裝嚴(yán)密封閉。5）注意無(wú)菌操作，防止污染，以免影響結(jié)果。6）采樣過程中履行必要的采樣手術(shù)。（發(fā)生中毒單位負(fù)責(zé)人簽封與開具收據(jù)等）7）采集肛拭人數(shù)，中毒事件規(guī)模較小，患者人數(shù)10人以下的，全部采樣；中毒事件規(guī)模較大，患者人數(shù)較多，至少應(yīng)對(duì)30%-50%臨床癥狀典型的患者進(jìn)行采集。44檢什么？病原分離

細(xì)菌——需氧菌、厭氧菌、兼性厭氧菌、L型菌病毒寄生蟲血清學(xué)檢查：抗原抗體急性期IgM抗體急性期和恢復(fù)期雙份靜脈血測(cè)定特異性IgG抗體。核酸檢測(cè)特征基因、毒力基因、溯源比較定性/定量45怎么檢？靈敏度、準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性、不同方法結(jié)果的可比較性用什么標(biāo)本用什么方法用什么試劑

對(duì)重大事件的毒物鑒定或樣本檢測(cè)要同時(shí)送數(shù)家具有鑒定檢驗(yàn)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室同步開展工作，避免因?qū)嶒?yàn)室管理和技術(shù)因素對(duì)結(jié)果的影響。46檢測(cè)項(xiàng)目和方法的確定

1分析方法的選用要考慮待測(cè)樣品（原形、代謝物）、分析要求（定性、定量）、樣品類型、實(shí)驗(yàn)室條件，分析目的等因素，還要考慮時(shí)效性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性等要求。2有時(shí)毒物有定性結(jié)果即可說明問題，而對(duì)于那些有環(huán)境或內(nèi)源性本底的毒物，或需用于現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)、應(yīng)急處理方法選擇或用于患者治療效果評(píng)價(jià)的要用定量分析。臨床治療藥物監(jiān)測(cè)必須進(jìn)行定量分析。47檢驗(yàn)程序樣品采集及送檢分離培養(yǎng)全面鑒定純培養(yǎng)初篩試驗(yàn)初步檢測(cè)直接鏡檢（涂片→染色→鏡檢涂片→染色→鏡檢）活菌數(shù)增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng)48快速靈敏方法的應(yīng)用1.細(xì)菌培養(yǎng)的前、后處理方法的自動(dòng)化培養(yǎng)法的前處理包括采樣、稱量、分樣、勻漿、制作瓊脂培養(yǎng)基、樣品與培養(yǎng)基混釋等。這些操作自動(dòng)化儀器有：自動(dòng)稱量分注裝置、均化器、培養(yǎng)基制作裝置、菌液自動(dòng)涂抹裝置等。培養(yǎng)后，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)的自動(dòng)化裝置有：筆型手動(dòng)式計(jì)數(shù)器、用圖像將平板內(nèi)菌落攝錄下來(lái)的自動(dòng)計(jì)數(shù)儀、彩色圖像菌種鑒定儀。492各種簡(jiǎn)易培養(yǎng)基：簡(jiǎn)易培養(yǎng)基是食品微生物檢驗(yàn)中應(yīng)用較為普遍的一種快速簡(jiǎn)便的方法。培養(yǎng)基有印花型、平板型、濾膜型等多種類型。例如，日本幾家公司生產(chǎn)的含有酶顯色底物的印花型培養(yǎng)基，由于有酶顯色底物，因而有快速易判斷等特點(diǎn)。液體樣品檢測(cè)用培養(yǎng)基有多種形式，有的在孔板上固定有無(wú)菌液體培養(yǎng)基，檢測(cè)時(shí)只要注入液體樣品即可判斷結(jié)果；顆粒狀培養(yǎng)基加入液體樣品培養(yǎng)即可判斷結(jié)果；而干燥型培養(yǎng)基是將培養(yǎng)基成分和膠體化物質(zhì)涂布在培養(yǎng)基墊上，它便于攜帶，操作簡(jiǎn)便?？焖凫`敏方法的應(yīng)用50快速靈敏方法的應(yīng)用3.亞硝酸鹽的測(cè)定（1）試劑：亞硝酸鹽試劑粉（2）儀器：三角燒瓶，濾紙，白瓷板（3）操作：取0.1-1.0g固體樣品于三角燒瓶，加水溶解，過濾于白瓷板，加亞硝酸鹽試劑粉。若濾液變紅色為陽(yáng)性。51快速靈敏方法的應(yīng)用4.揮發(fā)性毒物的測(cè)定

（1）試劑：苦味酸試劑條，飽和碳酸鈉溶液，10%鹽酸，堿性醋酸鉛棉花（2）儀器：三孔膠塞，三角瓶（3）操作及結(jié)果判斷：52快速靈敏方法的應(yīng)用5.蔬菜表面農(nóng)藥殘毒量的測(cè)定

（1）擦去蔬菜表面泥土，滴3-4滴浸提液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。（2）取一片速測(cè)卡，將蔬菜上的滴液滴在白色藥片上。放置10min進(jìn)行預(yù)反應(yīng)。（3）將速測(cè)卡對(duì)折（紅色藥片與白色藥片疊合），用手捏3分鐘，打開速測(cè)卡，與同時(shí)操作的空白對(duì)照色測(cè)卡（白色藥片上只加浸提液的速測(cè)卡）比較。（4）白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果。（5）白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同，為陰性結(jié)果。5354細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序1樣品采集以無(wú)菌容器采集可疑樣品及病人的排泄物。2分離培養(yǎng)在病原菌不明確的情況下，多準(zhǔn)備一些各類菌的選擇性培養(yǎng)基，如ss平板，伊紅美蘭平板作沙門菌、志賀菌；血平板、P-K瓊脂平板作金黃色葡萄球菌分離用；氯化鈉蔗糖瓊脂或TCBS瓊脂作副溶血性弧菌及溶藻性弧菌用；甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂作蠟樣芽孢桿菌分離用等等。3

接種：取適量可疑樣品放置無(wú)菌平皿中，加入與樣品等量的無(wú)菌生理鹽水，將樣品與生理鹽水充分混勻，用取菌環(huán)分別接種于各種平板培養(yǎng)基上，置37℃培養(yǎng)20h左右，觀察各平皿菌落特征，進(jìn)一步鑒定55細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序4.取優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行系統(tǒng)鑒定對(duì)優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行涂片鏡檢，革蘭染色，以形態(tài)特征、菌落特點(diǎn)做出意向性判斷進(jìn)行下步鑒定，接種克氏雙糖含鐵瓊脂培養(yǎng)，然后做血清凝集，生化實(shí)驗(yàn)，毒性實(shí)驗(yàn)等，報(bào)結(jié)果

5.活菌數(shù)的測(cè)定某些細(xì)菌在食品中須達(dá)到一定量時(shí)才可引起中毒癥狀(如金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等)。方法是取樣品的各個(gè)稀釋液（包括1:10）0.1mL接種2只相應(yīng)的平板，用滅菌玻璃棒在每只平板表面涂布均勻。將平板置30℃培養(yǎng)24小時(shí)，數(shù)出可疑菌落數(shù)，然后挑取典型菌落5個(gè)或更多的可疑菌落，經(jīng)過證實(shí)試驗(yàn)后，計(jì)算出菌落數(shù)。56細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序6.毒素測(cè)定

有些細(xì)菌性食物中毒并不是細(xì)菌本身所引起，而是由其所產(chǎn)生的毒素引起的，如金黃色葡萄球菌腸毒素、肉毒梭菌毒素，故須做其毒素的測(cè)定。7動(dòng)物試驗(yàn)

將可疑食物制備浸出液，或分離所得的上清液，皮下或腹腔注射動(dòng)物(小白鼠)體內(nèi)，觀察數(shù)日，看有無(wú)中毒。57細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序8.血清凝集試驗(yàn)將中毒患者急性期和恢復(fù)期的血清，與自中毒檢樣中分離的致病菌所制成的菌體抗原(將分離菌接種培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，待其生長(zhǎng)旺盛后，刮取菌苔至滅菌鹽水中，混散均勻，用生理鹽水稀釋成6億，毫升即成)做試管凝集試驗(yàn)，觀察凝集價(jià)有無(wú)上升趨勢(shì)，如恢復(fù)期的血清效價(jià)比發(fā)病初期有明顯增高（增高4倍或以上）即有診斷價(jià)值。58結(jié)果的報(bào)告、解釋、分析1實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果是確定病因的重要依據(jù)，但實(shí)驗(yàn)室結(jié)果要和現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況、患者的臨床表現(xiàn)一起分析，才能確定病因。2檢驗(yàn)結(jié)果的正確性不僅取決于實(shí)驗(yàn)室的條件和技術(shù)水平，同時(shí)還與檢驗(yàn)樣品的采集、保存、送樣方法等方面有關(guān)。因此在分析檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，除了應(yīng)考慮結(jié)果是否符合有關(guān)實(shí)驗(yàn)室判定標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)綜合考慮各種困難影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素。3陽(yáng)性結(jié)果不一定能說明病原因子在爆發(fā)事件中的致病作用；反之陰性結(jié)果也不一定能完全否定某種病原因子的病因假設(shè)59細(xì)菌性食物中毒的實(shí)驗(yàn)室診斷要點(diǎn)：從相關(guān)食品及發(fā)病者中分離到相同的致病菌從同批發(fā)病者中分離到相同的致病菌從食品中分離到致病菌的致病特點(diǎn)與發(fā)病者的臨床癥狀相符60檢出限值和檢驗(yàn)結(jié)果的表達(dá)每個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)已經(jīng)建立的檢測(cè)方法都要進(jìn)行準(zhǔn)確性和靈敏性評(píng)價(jià)，還要爭(zhēng)取開展與其它檢測(cè)方法之間進(jìn)行比較的工作。每批樣本都要對(duì)方法進(jìn)行檢出限值（最低檢出濃度）測(cè)算，并將最低檢出限值在發(fā)出的檢測(cè)報(bào)告中注明。對(duì)定量檢測(cè)，如樣本中毒物濃度超過檢出限值，應(yīng)標(biāo)注出實(shí)際測(cè)出的數(shù)值；如在樣本中檢測(cè)出所檢測(cè)的毒物，但毒物的量（或濃度）低于檢出限值，應(yīng)在檢測(cè)報(bào)告中報(bào)告“檢出”；對(duì)在樣本中未發(fā)現(xiàn)目標(biāo)毒物，應(yīng)該檢測(cè)報(bào)告上注明“未檢出”。對(duì)定性檢測(cè)，樣本中檢出目標(biāo)毒物時(shí)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明“陽(yáng)性”；對(duì)未檢出目標(biāo)毒物者在檢驗(yàn)報(bào)告上注明“陰性”。61結(jié)合流調(diào)資料分析檢測(cè)結(jié)果62沖突結(jié)果的處理每個(gè)重大中毒事件病因確定或中毒患者診斷的過程中都會(huì)有一次或多次毒物鑒定檢測(cè)，各次檢測(cè)結(jié)果應(yīng)該有一致性，這些結(jié)果共同指向某一種（或多種）毒物。沖突的原因分析a.檢測(cè)方法、所用的儀器不同，其靈敏度、精確度不同，每種方法都有其局限性。一種方法能夠檢出的另外一種方法可能檢不出。b.每個(gè)實(shí)驗(yàn)室采用的實(shí)驗(yàn)方法不同，包括樣本前處理、實(shí)驗(yàn)條件等對(duì)結(jié)果也有影響。c.用于分析的樣本是來(lái)自不同的個(gè)體、材料、位置及同一不均勻樣本的不同部位，這些都帶來(lái)不同的分析結(jié)果。d.樣本采集、運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)室操作過程中的污染63分離不到病原性微生物可能的原因有檢測(cè)項(xiàng)目（如農(nóng)藥和病原體品種、厭氧菌）L型細(xì)菌病原性微生物的數(shù)量很少，培養(yǎng)不出來(lái)細(xì)菌處于非可培養(yǎng)的狀態(tài)現(xiàn)有的培養(yǎng)基和培養(yǎng)技術(shù)不適合這種微生物的生長(zhǎng)技術(shù)、設(shè)備、試劑的原因新的病原微生物？未知毒物？64流行病學(xué)——實(shí)驗(yàn)室樣本采集方案與檢測(cè)人員溝通，便于以后實(shí)驗(yàn)室分析處理。共同商定分析方案：現(xiàn)場(chǎng)工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者要和毒物分析人員多溝通，對(duì)現(xiàn)場(chǎng)情況、所收集樣本的情況、現(xiàn)場(chǎng)工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定分析工作方案共同討論對(duì)結(jié)果