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文檔簡介

1、免疫組化IHC抗體常見染色問題問題原因解決方案邊緣效應(yīng)組織邊緣貼附不牢，邊緣組織松脫漂浮于液體中APES/多聚賴氨酸處理玻片；組織切片盡量??；盡量避免選用壞死較多的組織試劑未充分覆蓋組織滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織非特異性染色體抗體質(zhì)量問題使用質(zhì)量有保證的抗體抗體孵育時間長減少孵育時間抗體濃度過高降低抗體濃度一抗為多抗使用單克隆抗體內(nèi)源性過氧化物酶及生物素延長滅活時間封閉不足延長封閉時間DAB孵育時間過久或濃度過高按說明書配置試劑，鏡下控制反應(yīng)時間抗體孵育后洗滌不充分每次孵育之后洗3*5次滴加試劑時干片及時滴加試劑切片在緩沖液中浸泡過久抗原修復(fù)之后及時封閉加一抗，不能過夜陰性結(jié)果抗體濃度及質(zhì)量

2、選擇有質(zhì)量保證的抗體，先做預(yù)實驗摸索抗體使用濃度抗原修復(fù)不全摸索合適的抗原修復(fù)方式及修復(fù)時間抗原豐度正常陰性封閉時間過長減少封閉時間DAB孵育時間短鏡下控制顯色時間細胞通透不全，抗體未能進入細胞反應(yīng)選擇合適的通透劑及其反應(yīng)時間一抗二抗不匹配選擇正確來源的二抗脫片玻片未處理好玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理切片厚薄不均勻更換刀片；調(diào)整好切片機狀態(tài)烤片時間或溫度不夠60攝食度2小時組織自身問題腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片抗原修復(fù)時溫度迅速變化抗原修復(fù)后讓其自然冷卻操作時用力過猛有脫片嫌疑的切片不要用力甩，用吸水紙吸干殘余液體染色弱抗體濃度低，孵育時間短提高抗體濃度，延長反應(yīng)時間試劑使用超過有效期試劑定時更新滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋滴加試劑前盡量減少殘余液體封閉過度減少封閉時間著色不均勻切片厚度不一致更換刀片；調(diào)整好切片機狀態(tài)試劑配制未混勻使局部濃度不一致試劑充分混勻后滴加試劑未完

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