沙眼衣原體和或淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

1、 沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則目 錄TOC o 1-2 h u HYPERLINK l _Toc16935 一、適用范圍 PAGEREF _Toc16935 h 2 HYPERLINK l _Toc8408 二、注冊(cè)申報(bào)資料要求 PAGEREF _Toc8408 h 5 HYPERLINK l _Toc14583 （一）綜述資料 PAGEREF _Toc14583 h 5 HYPERLINK l _Toc29881 （二）主要原材料研究資料 PAGEREF _Toc29881 h 5 HYPERLINK l _Toc4869 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

2、 PAGEREF _Toc4869 h 8 HYPERLINK l _Toc7921 （四）分析性能評(píng)估資料 PAGEREF _Toc7921 h 10 HYPERLINK l _Toc11102 （五）陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間確定資料 PAGEREF _Toc11102 h 14 HYPERLINK l _Toc14746 （六）穩(wěn)定性研究資料 PAGEREF _Toc14746 h 15 HYPERLINK l _Toc2443 （七）臨床評(píng)價(jià)資料 PAGEREF _Toc2443 h 15 HYPERLINK l _Toc10809 （八）產(chǎn)品技術(shù)要求 PAGEREF _Toc10809 h

3、 20 HYPERLINK l _Toc21854 （九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告 PAGEREF _Toc21854 h 21 HYPERLINK l _Toc12369 （十）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) PAGEREF _Toc12369 h 21 HYPERLINK l _Toc16010 三、參考文獻(xiàn) PAGEREF _Toc16010 h 27本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。本指導(dǎo)原則是對(duì)沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述

4、理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一、適用范圍沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)試劑是指基于分子生物學(xué)相關(guān)方法的核酸檢測(cè)技術(shù)，以沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌核酸序列為檢測(cè)靶標(biāo)，對(duì)來(lái)自人泌尿生殖道（如女性的宮頸或陰道拭子、男性的尿道拭子、男性或女性的尿液等）中的沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌進(jìn)行體外定性

5、檢測(cè)的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，本類產(chǎn)品可用于泌尿生殖道相關(guān)病原體感染的鑒別診斷。衣原體是一種革蘭陰性微生物，具有特殊發(fā)育周期，鏡檢可觀察到原體（EB）和始體（RB）兩種形態(tài)結(jié)構(gòu)。根據(jù)主要外膜蛋白抗原表位的差異，已發(fā)現(xiàn)多種引起人類疾病的沙眼衣原體血清型，包括沙眼血清型（A、B、Ba、C）、生殖血清型（D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、Ja、K）以及罕見(jiàn)變異型（L1、L2、L2a、L3）等。生殖道沙眼衣原體感染是常見(jiàn)的性傳播疾病。沙眼衣原體引起的疾病范圍廣泛，可累及眼、生殖道、直腸等多個(gè)臟器，也可發(fā)生母嬰傳播。根據(jù)臨床表現(xiàn)分為具有泌尿生殖道癥狀體征的患者，無(wú)癥狀感染者和新生兒感染

6、。男性常見(jiàn)的表現(xiàn)是尿道炎、附睪炎，女性則為宮頸炎、尿道炎、盆腔炎，也可誘發(fā)生育能力下降，新生兒結(jié)膜炎等。實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括：1.顯微鏡檢查：適用于新生兒眼結(jié)膜刮片的檢查；2.培養(yǎng)法：沙眼衣原體細(xì)胞培養(yǎng)陽(yáng)性；3.抗原檢測(cè)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、直接免疫熒光法或免疫層析試驗(yàn)檢測(cè)沙眼衣原體抗XX性；4.抗體檢測(cè)：新生兒衣原體肺炎中沙眼衣原體IgM抗體滴度升高；5.核酸檢測(cè)：沙眼衣原體核酸檢測(cè)陽(yáng)性。淋病奈瑟菌是一種革蘭陰性的專性需氧雙球菌，細(xì)胞色素氧化酶陽(yáng)性，部分菌株具有質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性。淋病是我國(guó)性傳播疾病的主要病種之一，由淋病奈瑟菌感染所致，特點(diǎn)為潛伏期短、傳染性強(qiáng)，如不及時(shí)治愈可出現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥和后

7、遺癥。根據(jù)臨床表現(xiàn)分為有癥狀的泌尿生殖系統(tǒng)感染（常見(jiàn)表現(xiàn)為化膿性炎癥），無(wú)癥狀的泌尿生殖系統(tǒng)感染，眼、咽、皮膚、直腸、盆腔等部位的感染，以及血行播散式感染。男性常見(jiàn)的表現(xiàn)是尿道炎，并發(fā)癥有附睪炎、前列腺炎、精囊炎等；女性常見(jiàn)的表現(xiàn)是宮頸炎、尿道炎、前庭大腺炎、肛周炎，并發(fā)癥有盆腔炎；也可誘發(fā)生育能力下降，新生兒結(jié)膜炎等。實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括：1.顯微鏡檢查：取男性尿道分泌物涂片做革蘭染色，革蘭陰性雙球菌為陽(yáng)性；2.淋病奈瑟菌分離培養(yǎng)：為淋病的確診試驗(yàn)，通過(guò)菌落特征、氧化酶試驗(yàn)、Superoxol試驗(yàn)和革蘭染色初步鑒定，也可結(jié)合糖發(fā)酵試驗(yàn)或熒光抗體試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)；3.抗原檢測(cè)：淋病奈瑟菌抗XX性；

8、4.核酸檢測(cè)：淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)陽(yáng)性。本指導(dǎo)原則適用于基于實(shí)時(shí)熒光PCR（Real-time polymerase chain reaction， qPCR）等核酸檢測(cè)方法的沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌檢測(cè)試劑。對(duì)于其他方法，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)適用部分進(jìn)行評(píng)價(jià)或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)資料進(jìn)行相應(yīng)性能的驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并說(shuō)明替代方法的科學(xué)合理性。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，

9、其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及不同型別檢出能力等方面寫(xiě)明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。對(duì)于本類申報(bào)產(chǎn)品，應(yīng)著重從樣本類型、樣本采集與制備方式、目標(biāo)基因片段的選擇、可檢出的沙眼衣原體血清型、淋病奈瑟菌菌株類型、方法學(xué)特征等方面描述。（二）主要原材料研究資料應(yīng)提交申報(bào)產(chǎn)品主要原材料的研究資料，內(nèi)容包括主要原材料的來(lái)源、選擇、制備方法的研究資料及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂資料、評(píng)價(jià)結(jié)果和質(zhì)量分析證書(shū)，并詳細(xì)描述原材料的技術(shù)指標(biāo)和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。1.企業(yè)內(nèi)部參考品和質(zhì)控品：企業(yè)內(nèi)部參考品建議采用標(biāo)準(zhǔn)/參考菌株或者臨床分離培養(yǎng)物，基質(zhì)與臨床樣本收集/保存介質(zhì)一致；例如沙眼衣原體血

10、清型D型、E型、F型或G型、淋病奈瑟菌CMCC參考菌株、ATCC參考菌株或WHO標(biāo)準(zhǔn)菌株等。參考品和質(zhì)控品與待測(cè)臨床樣本在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)保持相同的檢測(cè)方式，包括同步參與核酸提取、基因擴(kuò)增和檢測(cè)過(guò)程等。應(yīng)采用臨床參考標(biāo)準(zhǔn)或其他合理方法（如已上市同類產(chǎn)品）對(duì)企業(yè)參考品和質(zhì)控品進(jìn)行陰陽(yáng)性確認(rèn)。1.1陽(yáng)性參考品陽(yáng)性參考品的設(shè)置應(yīng)考慮檢出能力的驗(yàn)證。建議采用多個(gè)菌株或者臨床分離培養(yǎng)物添加至陰性樣本進(jìn)行制備。1.2陰性參考品陰性參考品的設(shè)置應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià)?？刹捎媒?jīng)確認(rèn)無(wú)目標(biāo)靶基因序列或者易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本，適當(dāng)納入其他病原體樣本。1.3靈敏度參考品可采用系列梯度濃度樣本，基質(zhì)應(yīng)與適用的樣本一致

11、。應(yīng)至少包含接近產(chǎn)品最低檢出限的水平，并明確被測(cè)物的具體量值。其中沙眼衣原體的量值建議以EB/ml或者IFU/ml表示，淋病奈瑟菌的量值建議以個(gè)/ml（Cells/ml）或者CFU/ml表示。如涉及，還應(yīng)明確與拷貝數(shù)的換算關(guān)系。如沙眼衣原體的不同血清型或者淋病奈瑟菌的不同菌株的最低檢出限存在差異，應(yīng)分別設(shè)置靈敏度參考品。1.4精密度參考品至少包括弱陽(yáng)性、中等陽(yáng)性兩個(gè)濃度水平。1.5質(zhì)控品陽(yáng)性質(zhì)控品應(yīng)包含目標(biāo)基因，用于模擬臨床陽(yáng)性樣本。陰性質(zhì)控品可為樣本收集/保存介質(zhì)，用于對(duì)污染造成的假陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。應(yīng)對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果（如Ct值）做出明確的范圍要求。2.試劑盒主要組成成分2.1核酸分離

12、/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。2.2 PCR反應(yīng)組分的主要原料（包括引物、探針、各種酶及其他主要原料）的研究資料，主要包括以下內(nèi)容：2.2.1引物和探針應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，包括對(duì)包容性和特異性的考慮情況?？稍O(shè)計(jì)兩套或以上的引物、探針以供篩選，針對(duì)所有預(yù)期可檢出的菌株進(jìn)行檢出能力和特異性的評(píng)價(jià)；在此基礎(chǔ)上選擇最佳組合，并提供引物、探針的靶位點(diǎn)以及核酸序列。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)至少包括純度、濃度、標(biāo)記的熒光素及功能性實(shí)驗(yàn)等，提供驗(yàn)證資料或合成機(jī)構(gòu)出具的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或高效液相色譜法（HPLC）分析圖譜等。2.2.2酶DNA聚合酶，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括DNA

13、聚合酶活性、無(wú)核酸內(nèi)切酶活性、熱啟動(dòng)能力、熱穩(wěn)定性等；尿嘧啶糖基化酶（UNG），質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括尿嘧啶糖基化活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。如使用其他工具酶，應(yīng)提供相應(yīng)的質(zhì)檢證明或驗(yàn)證資料。2.2.3脫氧三磷酸核苷（dNTP）提供純度、濃度、穩(wěn)定性等的質(zhì)檢證明或驗(yàn)證資料。2.2.4內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）與目的核酸共同參與提取和擴(kuò)增的非目標(biāo)核酸序列（如人的管家基因、外源加入的質(zhì)粒），作用為對(duì)試劑和反應(yīng)體系的有效性、設(shè)備功能的完整性以及樣本中可能存在的抑制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照的引物、探針設(shè)計(jì)和模板濃度進(jìn)行驗(yàn)證，并明確其檢測(cè)結(jié)果（如Ct值）的上下限范圍要求。（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料應(yīng)提

14、交申報(bào)產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的研究資料，如工作液的配制、分裝和凍干等。檢驗(yàn)方法（包括反應(yīng)體系）確認(rèn)的研究資料，包括樣本的制備方式（包括采集及處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法、結(jié)果判讀方式等。主要包括以下內(nèi)容：1.產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝以及關(guān)鍵質(zhì)量控制環(huán)節(jié)的描述：可以圖表方式表示，并說(shuō)明確定依據(jù)。2.反應(yīng)原理的描述（如試劑盒中包含核酸提取組分，應(yīng)涉及）。3.適用的樣本類型3.1應(yīng)描述適用的樣本類型及添加劑，進(jìn)行適用性確認(rèn)并提交研究資料。包括對(duì)樣本的收集、制備或處理、運(yùn)輸（如涉及）和儲(chǔ)存的方式進(jìn)行驗(yàn)證，必要時(shí)進(jìn)行選擇和確認(rèn)并提供相關(guān)的研究資料。不同類型的樣本應(yīng)分別進(jìn)行研究

15、。3.2鑒于此類產(chǎn)品的樣本采集方法不易標(biāo)準(zhǔn)化，并且對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。因此，如產(chǎn)品采用不止一種樣本采集方法（包括收集/保存介質(zhì)），應(yīng)針對(duì)不同的樣本采集方法進(jìn)行同源樣本的比較研究試驗(yàn)。4.核酸提取純化方法的研究資料：無(wú)論申報(bào)產(chǎn)品是否含有DNA分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法中核酸提取的環(huán)節(jié)做充分的驗(yàn)證，包括配合使用的核酸分離/純化試劑的提取效率，提取后DNA的濃度、純度和靶核酸序列的完整性。建議對(duì)核酸分離/純化過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，盡可能增加PCR模板溶液均一性、去除PCR抑制物，不建議采用煮沸法進(jìn)行DNA提取。內(nèi)對(duì)照、質(zhì)控品均應(yīng)全程參與提取純化。5.確定最佳PCR反應(yīng)體系的研究資料，包括酶

16、濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體積等。6.確定PCR各階段反應(yīng)條件的研究資料，包括溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)。7.如涉及不同的適用機(jī)型，應(yīng)列表對(duì)比檢驗(yàn)方法，如有差異應(yīng)分別評(píng)價(jià)。（四）分析性能評(píng)估資料申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在主要原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過(guò)選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，制訂產(chǎn)品的性能指標(biāo)以及明確驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)產(chǎn)品的分析性能進(jìn)行研究。試驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)必要的培訓(xùn)，熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的操作程序、樣本制備方式和試驗(yàn)方案，嚴(yán)格執(zhí)行校準(zhǔn)和質(zhì)量控制方法，定期對(duì)設(shè)備進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)。使用多批產(chǎn)品，采用科學(xué)合理的試驗(yàn)方法進(jìn)行性能評(píng)估，在對(duì)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)檢查后，選擇

17、適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行檢驗(yàn)或分析，并形成報(bào)告。樣本數(shù)量應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。針對(duì)不同的樣本類型（如宮頸拭子或尿道拭子）、取樣部位（如宮頸或陰道），可能有不同的采樣方法和樣本收集/保存介質(zhì)。對(duì)于不同類型的樣本、不同的收集/保存介質(zhì)，申請(qǐng)人應(yīng)分別完成性能評(píng)估，至少包括最低檢測(cè)限和精密度評(píng)價(jià)等。各項(xiàng)性能評(píng)估應(yīng)符合下述要求：1.準(zhǔn)確度應(yīng)使用企業(yè)內(nèi)部參考品或者臨床樣本進(jìn)行陽(yáng)性/陰性參考品符合率或者方法學(xué)比對(duì)研究。2.分析靈敏度（最低檢測(cè)限）應(yīng)覆蓋中國(guó)人群中常見(jiàn)的沙眼衣原體血清型和/或淋病奈瑟菌菌株，并明確代表性標(biāo)準(zhǔn)/參考菌株或臨床分離培養(yǎng)物的最低檢出限。然后，應(yīng)在最低檢出限或接近最低檢出限的濃度對(duì)說(shuō)明書(shū)聲稱可檢

18、出的所有菌株/血清型進(jìn)行驗(yàn)證。申請(qǐng)人需充分考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響，保證人工制備樣本與預(yù)期適用樣本的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著偏差。應(yīng)與預(yù)期適用的臨床樣本使用相同的基質(zhì)。另外，應(yīng)提供上述菌株或臨床分離培養(yǎng)物的來(lái)源、血清型確認(rèn)及量值確認(rèn)等試驗(yàn)信息。方法可為選取至少兩種菌株或臨床分離培養(yǎng)物，分別配制系列稀釋的樣本建立最低檢測(cè)限，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3-5份，每份進(jìn)行不少于20次的重復(fù)檢測(cè)，采用95%（n20）的陽(yáng)性檢出率作為最低檢出限確定的標(biāo)準(zhǔn)。建議在不同的日期、不同的運(yùn)行進(jìn)行上述試驗(yàn)，以充分模擬實(shí)際使用時(shí)的變異來(lái)源。另外，應(yīng)在最低檢測(cè)限或接近最低檢測(cè)限的滴度對(duì)至少五種菌株或臨床分離培養(yǎng)物進(jìn)行驗(yàn)證。其中沙眼衣原體旨

19、在驗(yàn)證試劑盒聲稱覆蓋的所有血清型均可以在適當(dāng)?shù)臐舛缺豢煽康臋z測(cè)到。淋病奈瑟菌旨在驗(yàn)證不同變異來(lái)源的菌株（如耐青霉素、四環(huán)素、喹諾酮等）均可以在適當(dāng)?shù)臐舛缺豢煽康臋z測(cè)到。3.分析特異性3.1交叉反應(yīng)建議使用略高于最低檢測(cè)限的弱陽(yáng)性樣本（如2至3倍最低檢出限水平），在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證，通常細(xì)菌感染的水平為106 CFU/mL或更高，病毒為105 PFU/mL或更高。應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來(lái)源、種屬和濃度/滴度確認(rèn)等資料。用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮下述的可能性（具體項(xiàng)目見(jiàn)表1）：3.1.1對(duì)靶位點(diǎn)與人基因組及可能存在于人類泌尿、生殖道的微生物

20、基因組進(jìn)行基因序列比對(duì)，如存在同源性序列則應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)驗(yàn)證。3.1.2人類泌尿、生殖道寄生的微生物，可經(jīng)性傳播的其他病原體，易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體，其他常見(jiàn)病原體等。3.1.3 臨床需進(jìn)行鑒別診斷的其他情形。表1用于交叉反應(yīng)研究的病原體常見(jiàn)高危型人乳頭瘤病毒（16、18等）單純皰疹病毒型梅毒螺旋體解脲脲原體、人型支原體、生殖支原體表皮葡萄球菌/腐生葡萄球菌大腸埃希菌陰道加德納菌白念珠菌陰道毛滴蟲(chóng)卷曲乳桿菌/惰性乳桿菌/克氏動(dòng)彎桿菌/陰道陌生菌/普雷沃菌屬/纖毛菌屬腺病毒巨細(xì)胞病毒乙型鏈球菌HIV病毒干酪乳桿菌注：“/”表示選擇其中一種進(jìn)行研究。另外，對(duì)于沙眼衣原體和淋病奈瑟菌還應(yīng)

21、驗(yàn)證相互之間可能存在的交叉反應(yīng)，避免混合感染產(chǎn)生的干擾。3.2干擾物質(zhì)應(yīng)針對(duì)不同樣本類型，分別評(píng)價(jià)可能存在的干擾情況。建議在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）進(jìn)行評(píng)價(jià)，并在待測(cè)物的醫(yī)學(xué)決定水平進(jìn)行檢測(cè)。潛在的干擾物質(zhì)包括內(nèi)源性、外源性和其他已報(bào)道的干擾物質(zhì)。拭子樣本應(yīng)至少選取全血（或血紅蛋白和白細(xì)胞）、宮頸粘液、粘蛋白、陰道常用藥物（如避孕、抗真菌藥物）、女性衛(wèi)生用品、陰道栓劑、陰道潤(rùn)滑劑等進(jìn)行驗(yàn)證，尿液樣本應(yīng)至少選取血液、粘蛋白、膽紅素、抗生素等進(jìn)行驗(yàn)證，并注明對(duì)被測(cè)物不產(chǎn)生干擾的最高限值。4.精密度應(yīng)對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，評(píng)估重復(fù)性和重現(xiàn)性，包括運(yùn)行內(nèi)的變異和運(yùn)行

22、間、日內(nèi)、日間、批次間、操作者間、儀器間和地點(diǎn)間的變異。建議，注意應(yīng)包括核酸分離/純化步驟?？刹捎脴?biāo)準(zhǔn)菌株、臨床分離培養(yǎng)物、臨床樣本或質(zhì)控物質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，至少包含3個(gè)濃度水平：陰性樣本、略高于最低檢測(cè)限的弱陽(yáng)性樣本、中等陽(yáng)性樣本。建議對(duì)不同水平的沙眼衣原體和淋病奈瑟菌樣本排列組合進(jìn)行研究。（五）陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間確定資料申請(qǐng)人應(yīng)考慮不同地理區(qū)域流行病學(xué)背景以及人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征（包括性別、地域、種族等因素）的差異，選擇具有代表性的樣本建立陽(yáng)性判斷值，注意應(yīng)納入一定數(shù)量的弱陽(yáng)性樣本。建議申請(qǐng)人從臨床意義的角度出發(fā)，合理設(shè)定灰區(qū)范圍并詳細(xì)說(shuō)明確定的依據(jù)，并提供灰區(qū)的確定資料。如采用其他研究方法，應(yīng)說(shuō)明

23、其合理性。對(duì)于熒光實(shí)時(shí)PCR方法即為用于結(jié)果判讀的Ct值的確定資料，包括確定基線閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）的研究資料等。另外，建議申請(qǐng)人考慮建立陽(yáng)性判斷值時(shí)使用的受試者樣本對(duì)于目標(biāo)人群的代表性，通過(guò)臨床評(píng)價(jià)進(jìn)一步驗(yàn)證和確認(rèn)陽(yáng)性判斷值的準(zhǔn)確性。（六）穩(wěn)定性研究資料包括申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性以及適用樣本的穩(wěn)定性研究。產(chǎn)品的穩(wěn)定性包括至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性，以及試劑開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等。適用樣本的穩(wěn)定性應(yīng)針對(duì)不同的樣本收集/保存介質(zhì)（樣本保存液及保存容器）、不同的樣本運(yùn)輸和保存條件（如涉及），對(duì)不同類型的樣本分別進(jìn)行研究

24、。如在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)，每間隔一定的時(shí)間對(duì)儲(chǔ)存的樣本進(jìn)行性能評(píng)估（包括略高于最低檢測(cè)限的弱陽(yáng)性樣本），從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。對(duì)于冷凍保存的樣本還應(yīng)評(píng)價(jià)凍融次數(shù)。上述研究結(jié)果應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中載明。（七）臨床評(píng)價(jià)資料臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫(xiě)等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求。1.試驗(yàn)方法對(duì)于沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)試劑而言，臨床試驗(yàn)可采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明兩者具有等效性，從而間接證明試驗(yàn)用

25、體外診斷試劑臨床性能能夠滿足預(yù)期用途的要求。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測(cè)性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性。對(duì)于樣本類型包含尿液的情況，除與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)外，還應(yīng)與檢測(cè)中常用的樣本類型（如尿道拭子、宮頸拭子）進(jìn)行同源樣本的比較研究試驗(yàn)。對(duì)于比較研究試驗(yàn)中測(cè)XX果不符的樣本，應(yīng)采用臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室已建立的參考方法（如病原體分離培養(yǎng)鑒定）或者其他合理的方法（如第三方試劑、臨床普遍認(rèn)為靈敏度和特異性較好的核酸序列測(cè)定方法）進(jìn)行復(fù)核。2.試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途，結(jié)合流行病學(xué)背景，選擇具有一定地域代表性的試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和受試者。原則上應(yīng)具有分子生物

26、學(xué)方法檢測(cè)以及相關(guān)學(xué)科（如婦科、產(chǎn)科、生殖、皮膚性?。┑膬?yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評(píng)價(jià)方案。3.試驗(yàn)方案臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。受試人群應(yīng)盡可能全面地代表預(yù)期適用人群。體外診斷試劑的比較研究試驗(yàn)中應(yīng)對(duì)受試者樣本設(shè)盲，并使檢測(cè)順序隨機(jī)，以避免因操作者和檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)者知曉受試者的疾病診斷或?qū)Ρ仍噭z測(cè)結(jié)果等信息而引入偏倚。對(duì)于沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌核酸檢測(cè)試劑，如果試驗(yàn)用體外診斷試劑與對(duì)比試劑由于樣本類型不同或者樣本采集、處理、保存方式的

27、差異而不能使用同一份樣本進(jìn)行檢測(cè)，此時(shí)可針對(duì)每位受試者分別采集樣本并進(jìn)行試驗(yàn)用試劑或?qū)Ρ仍噭┑臋z測(cè)，采集樣本的順序應(yīng)遵循固定原則。試驗(yàn)用體外診斷試劑檢測(cè)應(yīng)與對(duì)比試劑的檢測(cè)同步進(jìn)行，以避免因疾病進(jìn)程不同或樣本采集時(shí)間不同而造成臨床試驗(yàn)結(jié)論偏離真值。不同臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)在臨床試驗(yàn)中應(yīng)盡可能統(tǒng)一試驗(yàn)操作和判讀標(biāo)準(zhǔn)等。應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，如評(píng)價(jià)試驗(yàn)用體外診斷試劑與對(duì)比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)，并提出適合的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法。建議根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)檢測(cè)樣本的類型和數(shù)量提出要求。4.受試者沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌檢測(cè)應(yīng)與臨床癥狀、體征及其他診斷方法相結(jié)合，用于相關(guān)病原體感染的輔助診斷。臨床試驗(yàn)受試者應(yīng)包括各種可能

28、接受沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌感染檢查的人群，例如具有生殖道沙眼衣原體感染和/或淋病癥狀的患者、性伴淋病感染史、性伴沙眼衣原體感染史、有不安全性接觸史或多性伴史、與患者密切接觸史以及無(wú)相關(guān)臨床癥狀的患者/人群、有眼部感染癥狀的新生兒患者（如涉及）。男性和女性受試者應(yīng)盡量均勻分布。另外，建議根據(jù)流行病學(xué)證據(jù)納入不同地區(qū)的患者/人群，以驗(yàn)證本產(chǎn)品的臨床檢出能力。5.樣本類型及數(shù)量對(duì)于男性，樣本類型通常為尿道拭子，可能涉及尿液（如尿沉渣、晨尿等）或其他泌尿道樣本類型。對(duì)于女性，樣本類型通常為宮頸拭子或陰道拭子，可能涉及尿液或其他生殖道樣本類型。如為新生兒，樣本類型可為眼結(jié)膜刮片或眼部分泌物。對(duì)于檢測(cè)

29、中常用的樣本類型（如尿道拭子和宮頸拭子），建議沙眼衣原體陽(yáng)性例數(shù)不少于150例，淋病奈瑟菌陽(yáng)性例數(shù)不少于75例，或者滿足陽(yáng)性符合率和總符合率95%置信區(qū)間的下限均高于90%。如申報(bào)產(chǎn)品具有多種適用的樣本類型，應(yīng)在一種常用的樣本類型滿足上述要求的基礎(chǔ)上，增加一定數(shù)量的其他樣本類型（如陰道拭子）。建議沙眼衣原體陽(yáng)性例數(shù)不少于60例，淋病奈瑟菌陽(yáng)性例數(shù)不少于30例，或者滿足陽(yáng)性符合率和總符合率95%置信區(qū)間的下限均高于90%。其中對(duì)于樣本類型包含尿液的情況，建議與檢測(cè)中常用的樣本類型進(jìn)行同源比較研究的總例數(shù)不少于500例。用于上述試驗(yàn)的來(lái)源于男性和女性的樣本比例應(yīng)相近，其XX性樣本應(yīng)包含一定數(shù)量的弱

30、陽(yáng)性樣本或灰區(qū)樣本，并在檢測(cè)范圍內(nèi)的不同水平均有分布。在病例選擇時(shí)可考慮具有不同臨床癥狀、體征的患者，是否曾經(jīng)或近期接受藥物（如抗生素）治療的患者等。陰性樣本主要考慮可能存在的交叉反應(yīng)以及臨床需要鑒別診斷的情況：如生殖道支原體感染，單純皰疹病毒感染、滴蟲(chóng)感染、人乳頭瘤病毒感染、梅毒感染、真菌感染等其他病原體引起的陰道炎、子宮頸炎、尿道炎等。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)于此類定性檢測(cè)試劑的比較研究試驗(yàn)，常選擇配對(duì)四格（22）表或列聯(lián)表的形式總結(jié)試驗(yàn)用體外診斷試劑與對(duì)比試劑的檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率以及95%置信區(qū)間。并對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行配對(duì)2

31、檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)。注意結(jié)果不符樣本的復(fù)核結(jié)果不應(yīng)納入上述統(tǒng)計(jì)。另外，應(yīng)對(duì)不同性別的受試者、不同的樣本類型進(jìn)行分層，并針對(duì)不同亞組的檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)于樣本類型包含尿液的情況，建議同源樣本比較研究試驗(yàn)陽(yáng)性符合率和陰性符合率95%置信區(qū)間的下限均高于85%。7.結(jié)果不符的樣本在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)進(jìn)行第三方復(fù)核，并結(jié)合受試者的臨床診斷信息對(duì)差異原因進(jìn)行分析。如無(wú)需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明理由。（八）產(chǎn)品技術(shù)要求申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)，按照醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指

32、導(dǎo)原則（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求。沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌檢測(cè)試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽(yáng)性參考品符合率、最低檢測(cè)限、精密度等。陽(yáng)性參考品主要考察對(duì)試劑盒覆蓋范圍內(nèi)不同血清型或菌株類型的檢測(cè)能力，陰性參考品則重點(diǎn)對(duì)申報(bào)試劑的分析特異性進(jìn)行驗(yàn)證。如果申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢驗(yàn)要求。按照辦法的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑。申請(qǐng)人應(yīng)按照醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則的規(guī)定，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫(xiě)規(guī)范的要求，主要原材料部分建議

33、包括目標(biāo)物的基因位點(diǎn)區(qū)域，引物/探針的設(shè)計(jì)及來(lái)源（包括目標(biāo)物和內(nèi)對(duì)照），各種酶的來(lái)源、技術(shù)指標(biāo)和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，企業(yè)參考品的來(lái)源、組成、陰陽(yáng)性或量值的確認(rèn)，內(nèi)對(duì)照和質(zhì)控品的設(shè)置和驗(yàn)證情況等內(nèi)容。（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告根據(jù)辦法的要求，申請(qǐng)注冊(cè)的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。（十）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管

34、理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。下面對(duì)沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。1【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：1.1該產(chǎn)品用于定性檢測(cè)人宮頸拭子、陰道拭子、尿道拭子、尿液或其他類型樣本中的沙眼衣原體和/或淋病奈瑟菌，適用樣本類型應(yīng)結(jié)合申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能的確認(rèn)情況進(jìn)行描述。1.2目標(biāo)物的特征：

35、簡(jiǎn)要描述病原體生物學(xué)特征及致病性，沙眼衣原體血清型、淋病奈瑟菌菌株類型的劃分依據(jù)，感染后臨床表現(xiàn)，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室診斷方法等。1.3目標(biāo)人群：例如具有生殖道沙眼衣原體感染和/或淋病癥狀的患者、性伴淋病感染史、性伴沙眼衣原體感染史、有不安全性接觸史或多性伴史、與患者密切接觸史以及無(wú)相關(guān)臨床癥狀的患者/人群。1.4產(chǎn)品功能：結(jié)合目標(biāo)人群的臨床表現(xiàn)和其他診斷指標(biāo)，可用于泌尿生殖道相關(guān)病原體感染的鑒別診斷。2.【檢驗(yàn)原理】2.1 描述試劑盒檢測(cè)能夠覆蓋的沙眼衣原體血清型、淋病奈瑟菌菌株類型，目標(biāo)基因序列特征，引物及探針的設(shè)計(jì)，反應(yīng)體系（管）組合形式，內(nèi)對(duì)照和質(zhì)控品的設(shè)置及熒光信號(hào)標(biāo)記等。2.2 描述核酸提

36、取純化的方法、原理等。2.3 描述試劑盒的技術(shù)原理，可結(jié)合圖示進(jìn)行說(shuō)明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染組分（如尿嘧啶DNA糖基化酶），也應(yīng)介紹其作用機(jī)理。3.【主要組成成分】3.1詳細(xì)說(shuō)明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息，如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說(shuō)明其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。3.2 如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，應(yīng)在此明確經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的核酸分離/純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、注冊(cè)證號(hào)（如有）以及配合使用的儀器等信息。3.34.【儲(chǔ)存條件及有效期】試劑盒的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開(kāi)瓶或復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)

37、要求等。5.【適用機(jī)型】注明所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。6.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容6.1樣本采集要求：包括樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響等；6.2樣本采集方法：根據(jù)不同的樣本類型，分別詳細(xì)說(shuō)明采集方法和設(shè)備的要求，包括對(duì)采樣拭子、樣本保存容器和保存液的要求等。6.3樣本處理、運(yùn)輸及保存條件：樣本核酸提取前的預(yù)處理、運(yùn)輸條件、保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）等，冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。如適用，應(yīng)說(shuō)明高于檢測(cè)范圍的樣本是否可以進(jìn)行稀釋，并明確稀釋方法和最高稀釋倍數(shù)。上述描述均應(yīng)建立在相關(guān)性能評(píng)價(jià)及穩(wěn)定性研

38、究的基礎(chǔ)上。相關(guān)要求若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循并在此處引用。7.【檢驗(yàn)方法】描述自動(dòng)分析的工作流程或者詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，例如：7.1試劑準(zhǔn)備及配制方法、注意事項(xiàng)。7.2詳細(xì)描述待測(cè)樣本、質(zhì)控品的核酸提取/純化方法，包括條件、步驟及注意事項(xiàng)。7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。7.4 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)設(shè)置及注意事項(xiàng)。7.5儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況設(shè)置目標(biāo)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道。7.6基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法。7.7質(zhì)量控制方法：試劑盒內(nèi)陰/陽(yáng)性質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)的Ct值范圍要求。8.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】結(jié)XX性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）以及目標(biāo)基因的檢測(cè)結(jié)果，以列表形式詳細(xì)描述所有