細(xì)胞工程期末復(fù)習(xí)資料

1、2021級細(xì)胞工程復(fù)習(xí)資料(僅供參考)名詞解釋1、細(xì)胞工程：是應(yīng)用生命科學(xué)理論,借助工程學(xué)原理與技術(shù),有目的地利用或改造生物遺傳性狀,以獲得特定的細(xì)胞、組織產(chǎn)品或新型物種的一門綜合性科學(xué)技術(shù).2、細(xì)胞全能性：一個(gè)生活細(xì)胞所具有的產(chǎn)生完整生物個(gè)體的潛在水平稱之為細(xì)胞的全能性.3、細(xì)胞分化：是指細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程,包括時(shí)間上和空間上的分化.4、細(xì)胞脫分化：培養(yǎng)條件下使一個(gè)已分化的細(xì)胞回復(fù)到原始無分化狀態(tài)或分生細(xì)胞狀態(tài)的過程就是細(xì)胞脫分化(dedifferentiation).5、細(xì)胞再分化：再分化(redifferentiation)是指在離體條件下,無序生長的脫分化的細(xì)胞在適

2、當(dāng)條件下重新進(jìn)入有序生長和分化狀態(tài)的過程,事實(shí)上是基因選擇性表達(dá)與修飾的人工調(diào)控過程.6、細(xì)胞凋亡：也叫程序性死亡,是機(jī)體維持環(huán)境穩(wěn)定、有基因限制的細(xì)胞自主的有序性死亡7、細(xì)胞壞死：是細(xì)胞受到化學(xué)因素、物理因素和生物因素等環(huán)境因素傷害,引起的細(xì)胞死亡現(xiàn)象.8、體細(xì)胞胚：又叫胚狀體,是指離體培養(yǎng)條件下沒有經(jīng)過受精過程而形成的胚胎類似物.9、胚胎培養(yǎng)：是指對植物的胚及胚器官進(jìn)行人工離體無菌培養(yǎng).使其發(fā)育成幼苗的技術(shù).10、胚乳培養(yǎng)：指處于細(xì)胞期的胚乳組織的離體培養(yǎng).11、人工種子：又稱合成種子或體細(xì)胞種子,是指將植物離體培養(yǎng)的胚狀體或芽包裹在含有養(yǎng)分和保護(hù)功能的人工胚乳和人工種皮中的類似種子的顆粒

3、.12、看護(hù)培養(yǎng)：是指用一塊活潑生長的愈傷組織來看護(hù)單個(gè)細(xì)胞,使其持續(xù)分裂和增殖的一種培養(yǎng)方法.13、細(xì)胞系：是以一種細(xì)胞為主的、能在體外長期生存的不均一的細(xì)胞群體.14、細(xì)胞株：是指從一個(gè)經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞別離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群.15、細(xì)胞固定化：是指將游離的細(xì)胞埋在支持物內(nèi)部或外表、培養(yǎng)液成流動(dòng)狀態(tài)進(jìn)行培養(yǎng)的一門技術(shù)16、亞原生質(zhì)體：在原生質(zhì)體別離過程中,有時(shí)會引起細(xì)胞內(nèi)含物的斷裂而形成一些較小的原生質(zhì)體就叫做亞原生質(zhì)體.它可以具有細(xì)胞核或沒有細(xì)胞核.17、胞質(zhì)體：不含細(xì)胞核而僅含有局部細(xì)胞質(zhì)的原生質(zhì)體.18、對稱融合：即兩個(gè)完整的細(xì)胞間融合.19、

4、非對稱融合：利用物理或化學(xué)方法是某親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后在與另外一個(gè)完整的細(xì)胞進(jìn)行融合.20、體細(xì)胞雜交：是指將不同來源的體細(xì)胞融合并使之分化再生、形成新品種的技術(shù).21、植物離體受精：是指在體外無菌條件下培養(yǎng)未受精的子房、胚珠和花粉,使花粉萌發(fā)進(jìn)入胚珠完成受精的技術(shù).22、有限細(xì)胞系：不能連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞系為有限細(xì)胞系.23、無限細(xì)胞系：能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系為無限細(xì)胞系.24、單克隆抗體：經(jīng)過免疫的哺乳動(dòng)物單一的B淋巴細(xì)胞可以分泌單一抗體,這種具有特異性的、同性質(zhì)的抗體為單克隆抗體.25、精子獲能：是指精子獲得穿透卵子帶水平的過程.26、體外受精：是指哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工限制的環(huán)境

5、中完成受精過程的技術(shù).27、干細(xì)胞：是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞.28、成體干細(xì)胞：是成體組織內(nèi)具有更新和進(jìn)一步分化潛能的細(xì)胞.29、細(xì)胞融合：是指使用人工方法使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù).思考題1 .花藥培養(yǎng)時(shí)為什么要較高濃度蔗糖和較低濃度激素答：培養(yǎng)基中蔗糖濃度比其他組織培養(yǎng)高,尤其是早期培養(yǎng),一般5%-10%o原因是花粉母細(xì)胞的滲透壓比花絲等體細(xì)胞高,及高濃度的蔗糖不利于藥壁、花絲等生長,而利于花粉生長.花壁分化程度很高,重新分裂需要較高的激素濃度才能啟動(dòng).因此,花藥培養(yǎng)基的激素水平要相對低一點(diǎn)才能抑制二倍體細(xì)胞的分裂.2 .用于建立懸浮細(xì)胞系的愈傷組織有何要求答：

6、松散性好、增殖快、再生水平強(qiáng)3 .一個(gè)好的懸浮細(xì)胞系有哪些特征答：4 .PEG立合與電融合各有哪些特點(diǎn)答：前者融合頻率高,誘發(fā)融合無特異性,毒性低.后者1融合率高、重復(fù)性強(qiáng)、對原生質(zhì)體傷害小.2裝置輕巧、方便簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像融合過程3免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程、誘導(dǎo)過程可限制性強(qiáng)5 .用于制備人工種子的繁殖體主要有哪些答：體細(xì)胞胚、微芽、微型變態(tài)器官6 .植物組織培養(yǎng)再生途經(jīng)分析答：7 .植物組織培養(yǎng)問題分析1試管苗玻璃化現(xiàn)象；2褐變問題；3微生物污染問題；4其他問題：目前還有許多植物的組織培養(yǎng)沒有成功；在種苗工廠化生產(chǎn)過程中,最突出的一個(gè)問題是本錢高,投入資金較大,加大了種苗本錢

7、.8 .人工種子的概念及人工種子有何優(yōu)點(diǎn)根據(jù)包被的需要程度可分為哪幾類答：優(yōu)點(diǎn)：可以周年生產(chǎn)貯藏；能直接播種,可機(jī)械化操作和常規(guī)治理.包被分類：1裸露的或休眠的繁殖體2人工種皮包被的繁殖體3水凝膠包被皮的繁殖體9 .人工種子制作中胚狀體同步發(fā)育的主要方法1抑制劑法；2低溫法；3滲透壓法；4通氣法；5別離篩選法.10 .莖尖脫毒的根本原理植物脫毒的主要方法答：原理：感染病毒植株的體內(nèi)病毒的分布并不均勻,病毒的數(shù)量隨植株部位及年齡而異,越靠近莖頂端區(qū)域的病毒的感染深度越低,生長點(diǎn)約0.1-1mm區(qū)域那么幾乎不含或含病毒很少.脫毒方法：一物理方法：高溫處理、低溫處理二化學(xué)方法三生物方法：莖尖培養(yǎng)、微

8、體嫁接法、愈傷組織誘導(dǎo)脫毒、珠心胚培養(yǎng)法、花藥培養(yǎng)脫毒11 .脫毒植物鑒定方法1直接檢測法2指示植物法3電鏡法4抗血清檢測法5分子檢測技術(shù)12 .適合于工業(yè)化生產(chǎn)的細(xì)胞株必須滿足的條件1分散性好,適合大規(guī)模懸浮培養(yǎng)2均一性好,細(xì)胞大小、生理性狀一致3生長速度快,培養(yǎng)周期短,不易染菌4目標(biāo)產(chǎn)物含量高,容易別離提取5細(xì)胞遺傳穩(wěn)定13 .一個(gè)成功的懸浮細(xì)胞系必須滿足哪三個(gè)條件答：1懸浮培養(yǎng)物分散性良好,細(xì)胞團(tuán)較小,一般在3050個(gè)細(xì)胞以下,在實(shí)際培養(yǎng)中很少有完全由單細(xì)胞組成的植物細(xì)胞懸浮系.2均一性好,細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同.懸浮系外觀為大小均一的小顆粒,培養(yǎng)基清澈透亮,細(xì)胞色澤呈鮮艷的乳白或

9、淡黃色.3細(xì)胞生長迅速,懸浮細(xì)胞的生長量一般23天甚至更短時(shí)間便可增加一倍14 .細(xì)胞培養(yǎng)中要使培養(yǎng)細(xì)胞同步化有什么方法答：體積選擇法、冷處理法、抑制法、饑餓法15 .通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物與植物栽培提取天然產(chǎn)物方法相比,有什么優(yōu)點(diǎn)主要影響因素是什么答：1減少耕地占用面積,而且不受季節(jié)地域的限制2細(xì)胞培養(yǎng)是在無菌密閉條件下進(jìn)行的,可以排除病菌和害蟲的影響3可以通過選擇優(yōu)良細(xì)胞系和優(yōu)化培養(yǎng)條件的方法得到超過整株植物產(chǎn)量的代謝產(chǎn)物4通過改造生物合成途徑獲得新的作用物質(zhì).影響：細(xì)胞遺傳特性、培養(yǎng)條件培養(yǎng)基、前提、調(diào)節(jié)因子等、放大過程中的影響因素:1通氣和攪拌引起的流體壓力已造成細(xì)胞損傷、有益氣

10、體的散失、大量氣泡的生成等,這些均會對細(xì)胞生長和產(chǎn)物積累產(chǎn)生影響.2高密度引起培養(yǎng)液粘度增加,造成營養(yǎng)吸收、氣體傳遞的抑制3反響器結(jié)構(gòu)缺陷導(dǎo)致細(xì)胞粘附,引起細(xì)胞死亡、腐敗及營養(yǎng)和氣體吸收限制等.4對產(chǎn)物生物合成機(jī)制、途徑等不了解,因此很難維持最正確培養(yǎng)條件.16 .如何進(jìn)行原生質(zhì)體鑒定與活力測定答：鑒定：1低滲爆破法2熒光染色法活力測定：染色法：FDA法、伊文思藍(lán)法、酚藏花紅染色法胞質(zhì)環(huán)流法滲透壓變化4氧電極法17 .原生質(zhì)體培養(yǎng)中如何穩(wěn)定培養(yǎng)基的PH?答：為了維持酶液的PH恒定,常用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液來配制酶液.此外,MES寸保持酶解液的酸堿環(huán)境也有緩沖作用.18 .為什

11、么說細(xì)胞工程是一門承上啟下的技術(shù)舉例說明答：19 .人工種子的應(yīng)用前景如何需要解決哪些問題答：一微器官人工種子可能最先用于無性繁殖植物及天然種子繁殖變異大的植物.二繁殖水平差,結(jié)子困難,發(fā)芽率低等問題.20 .你對動(dòng)物克隆技術(shù)怎樣看待如何正確應(yīng)用動(dòng)物克隆技術(shù)答：首先,違背了倫理學(xué)的自主原那么,被克隆者作為人所享有的獨(dú)特性被粗暴的剝奪了.其次,克隆人違背了倫理學(xué)的平等原那么.二保存優(yōu)良的動(dòng)物品種；拯救瀕臨滅絕的珍惜動(dòng)物；利用克隆動(dòng)物工廠生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物,開展新型的醫(yī)藥工業(yè)；利用克隆技術(shù)生產(chǎn)人體器官,擴(kuò)大器官移植所需的器官來源.21 .目前鑒定雜種植物的方法主要有答：形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀

12、察進(jìn)行鑒定.細(xì)胞學(xué)鑒定：細(xì)胞器鑒定、染色體鑒定.生化鑒定：同功酶鑒定.分子鑒定：RFLP鑒定、RAPEfe記鑒定.22 .舉一例說明體細(xì)胞雜交在植物育種中的應(yīng)用?答:23 .分析植物單倍體與純合二倍體在植物遺傳育種中的意義?答：24 .植物轉(zhuǎn)基因有哪些方法如何鑒定轉(zhuǎn)基因植物答：方法：直接導(dǎo)入法、在體介導(dǎo)法、花粉管通道法、病毒感染法鑒定：選擇性培養(yǎng)鑒定、遺傳標(biāo)記檢測、目的基因檢測25 .根據(jù)培養(yǎng)條件下動(dòng)物細(xì)胞的生長特性,動(dòng)物細(xì)胞可以分為幾個(gè)類型答：貼壁依賴型、非貼壁依賴型、兼性貼壁細(xì)26、胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)具有的特點(diǎn)1動(dòng)物細(xì)胞比微生物細(xì)胞大,無細(xì)胞壁；2動(dòng)物細(xì)胞倍增時(shí)間長,生長緩慢；3培養(yǎng)過程需氧量

13、少,對機(jī)械攪拌或剪切力敏感；4動(dòng)物細(xì)胞間主要以聚集體形式存在；5原代細(xì)胞一般繁殖50代左右即退化死亡；6動(dòng)物細(xì)胞對于營養(yǎng)要求更加苛刻,除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖或半乳糖外,一般還需要血清；7對于培養(yǎng)環(huán)境及其敏感,包括PH溶解氧、溫度、剪切刀等；8細(xì)菌、真菌、病毒、支原體均可導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物的污染；9絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞只有貼附在固體或半固體的外表才能生長.27、單克隆抗體的生產(chǎn)途徑一細(xì)胞融合將免疫動(dòng)物B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合,得到的融合細(xì)胞稱之為雜交瘤.雜交瘤細(xì)胞具有分泌特異性抗體B淋巴細(xì)胞特性以及骨髓瘤細(xì)胞體外無限增殖的特性.二病毒轉(zhuǎn)化通過對脾臟B淋巴細(xì)胞進(jìn)行某一特異性免疫,繼而進(jìn)行誘變

14、或通過病毒轉(zhuǎn)化形成永久生長的細(xì)胞系.28、如何進(jìn)行性別限制答：1免疫別離法：利用H-Y抗體檢測精子質(zhì)膜上是否存在H-Y抗原2離心別離法X精子DNA含量略大于丫精子3電泳別離法：丫精子帶負(fù)電荷略小于X精子4流式細(xì)胞別離法：用流式細(xì)胞別離器別離X精子和Y精子5法學(xué)藥品處理法：X、Y精子嗜酸堿性不同.29、為什么自然界中多倍體植物多而多倍體動(dòng)物少植物多陪表達(dá)象比動(dòng)物廣泛,植物遠(yuǎn)緣雜交水平強(qiáng),異花傳粉.多為異源多倍體.動(dòng)物多倍體少,高度不育.低等動(dòng)物存在,多為同源多倍體.植物的繁殖比擬容易,如果多倍體植物不能形成種子,它還能依靠營養(yǎng)器官的無性繁殖來產(chǎn)生后代,因此在生物進(jìn)化過程中,植物多倍體有可能被保存

15、下來.而動(dòng)物那么不同,尤其動(dòng)物有性別分化后,太多數(shù)動(dòng)物是雌雄異體,染色體稍不平衡,就會造成聯(lián)會紊亂,引起不育,甚至使動(dòng)物個(gè)體不能成活.即使有多倍體的動(dòng)物的個(gè)體的話,通常也只能靠無性生殖來維持.而無性生殖的個(gè)體對環(huán)境的適應(yīng)水平很弱,因此進(jìn)化中很難形成一種穩(wěn)定的遺傳.30、干細(xì)胞的特點(diǎn)答：成體干細(xì)胞具有可塑性,即來源于各種組織的成體干細(xì)胞事實(shí)上并未定型,一旦處于一個(gè)新的環(huán)境中,它們將有可能分化為其它類型的細(xì)胞.成體干細(xì)胞注入體內(nèi)后,有明顯的趨化性,能較明顯地集中到達(dá)受損傷的部位,在局部微環(huán)境的誘導(dǎo)下,發(fā)生明顯地誘導(dǎo)分化,使成體干細(xì)胞向損傷組織修復(fù)所急需的組織細(xì)胞分化,從而促進(jìn)受損傷組織修復(fù).由于成

16、體干細(xì)胞的這種特性,較胚胎性干細(xì)胞更廣泛地應(yīng)用于臨床及研究工作.31、組織工程三要素答：細(xì)胞、支架材料和生長因子32、簡述體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞生長和增殖過程的幾個(gè)主要階段答：培養(yǎng)細(xì)胞一代生長過程：1潛伏期2指數(shù)生長期3穩(wěn)定期4衰退期33、試管苗玻璃化現(xiàn)象的防治舉措.34、試管苗褐變的防治舉措.試管苗褐變的因素1植物基因型.在不同植物或同種植物不同基因型的組培過程中,褐變發(fā)生的頻率和嚴(yán)重程度存在很大的差異,這是由于各種植物所含的單寧及其他酚類化合物的數(shù)量不同.一般木本植物的酚類化合物含量比草本植物高,更易發(fā)生褐變現(xiàn)象.核桃的單寧含量很高,不僅在接種初期發(fā)生褐變,在形成愈傷組織后還會由于褐變而死亡；蘋

17、果進(jìn)行莖尖培養(yǎng)時(shí),不同品種之間褐變的程度也不一樣.對葡萄的研究也發(fā)現(xiàn)類似情況.2外植體的生理狀態(tài)外植體的生理狀態(tài)不同,接種后褐變程度不同.一般外植體的老化程度越高,其木質(zhì)素的含量也越高,也就越容易褐變,成齡材料一般均比幼齡材料褐變嚴(yán)重.另外切口越大,酚類物質(zhì)的被氧化面也越大,褐變程度就會更嚴(yán)重.因此外植體的受傷程度對褐變的產(chǎn)生具有明顯的影響,傷口加劇褐變的發(fā)生.仙客來小葉誘導(dǎo)時(shí),整片葉接種較分成多塊褐變要輕.除機(jī)械損傷外,各種消毒劑對外植體的傷害也會引起褐變,對于不易褐變的種類,用升汞消毒后,一般不會引起褐變,假設(shè)用次氯酸鈉進(jìn)行消毒,那么很容易引起褐變的發(fā)生.3取材時(shí)間和部位在不同的生長季節(jié),

18、植物體內(nèi)酚類化合物含量和多酚氧化酶的活性不同.實(shí)驗(yàn)說明在蘋果和核桃上,冬、春季取材褐變死亡率最低,夏季取材很容易褐變.在取材部位上幼嫩莖尖比其他部位褐變程度低,木質(zhì)化程度高的節(jié)段在進(jìn)行藥劑消毒處理后褐變現(xiàn)象更為嚴(yán)重.4培養(yǎng)基在初代培養(yǎng)中,培養(yǎng)基中無機(jī)鹽濃度過高,會引起酚類物質(zhì)大量產(chǎn)生,導(dǎo)致褐變.BA和KT不僅促進(jìn)酚類化合物合成,而且刺激多酚氧化酶的活性,增加褐變；而生長素類如NAA和2,4-D可延緩多酚合成,減輕褐變.采用液體培養(yǎng)基紙橋培養(yǎng)；可使外植體溢出的有毒物質(zhì)很快擴(kuò)散到液體培養(yǎng)基中,效果也很好.5光照在采取外植體前,如果將材料或母株枝條進(jìn)行遮光處理,然后再切取外植體培養(yǎng),能夠有效地抑制褐變的發(fā)生.將接種后的初代培養(yǎng)材料在黑暗條件下培養(yǎng),對抑制褐變發(fā)生也有一定的效果遮光抑制褐變的原因主要是由于氧化過程中,許多反響受酶系統(tǒng)控制,而酶系統(tǒng)活性受光照影響.但是,暗培養(yǎng)時(shí)間過長會降低外植體的生活水平,甚至引起死亡.6溫度.高溫促進(jìn)酚氧化,培養(yǎng)溫度越高,褐變越嚴(yán)重,而低溫可抑制酚類化合物氧化,降低多酚氧化酶的活性,從而減輕褐變.在15-25C下培養(yǎng)卡特蘭,比在25c以上時(shí)褐變要輕,在17c以下培養(yǎng)天竺葵莖尖比在17