微生物的實驗室培養(yǎng)知識小結

1、.課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)一、培養(yǎng)基一培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有些微生物需要添加特殊營養(yǎng)物質如培養(yǎng)乳酸桿菌時需添加生長因子：維生素高考警示鐘：自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的營養(yǎng)物質不同1自養(yǎng)微生物所需的碳源來自含碳的無機物如CO2，而異養(yǎng)微生物需要的碳源來自含碳的有機物，因此可根據培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質判斷微生物的代謝類型。2含氮無機物不但能給自養(yǎng)微生物提供氮源，也能作為能源物質，提供能量，如NH3既作為硝化細菌的氮源也作為能源。二培養(yǎng)基的配制原那么 1目的明確。要根據微生物的種類、培養(yǎng)目的等選擇原料、配制培養(yǎng)基。 2營養(yǎng)要協(xié)調。各種營養(yǎng)物質要保證適當?shù)臐舛群捅壤?。營養(yǎng)物質

2、比例過低，不能滿足微生物生長；濃度過高那么會抑制微生物的正常生長。 3pH要適當。不同微生物生長所需pH不同。如細菌為中性或微堿性6.57.5；霉菌等真菌為酸性5.06.0。三培養(yǎng)基的分類及作用： 1.物理性質：根據是否添加瓊脂等凝固劑1液體培養(yǎng)基：不加凝固劑，常用于工業(yè)消費2固體培養(yǎng)基：加凝固劑，常用于微生物別離、鑒定、活菌計數(shù)2.用處或功能1選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中參加或去除某種化學物質，允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他種類微生物生長。常見例子：培養(yǎng)基中參加青霉素，挑選酵母茵或霉菌等真菌；培養(yǎng)基中參加高濃度食鹽，挑選金黃色葡萄球菌；無氮培養(yǎng)基，挑選固氮微生物；無碳培養(yǎng)基，挑選自養(yǎng)微

3、生物；以石油為唯一碳源，選擇能分解石油的微生物；以尿素為唯一氮源，挑選尿素分解菌；以纖維素為唯一碳源，通過是否產生透明圈挑選纖維素分解菌。將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)，別離耐高溫的微生物。2鑒別培養(yǎng)基：根據微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中參加某種指示劑或化學藥品,以鑒別不種類的微生物。伊紅一美藍培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌假設有，茵落呈深紫色，并帶有金屬光澤；培養(yǎng)基中參加酚紅指示劑，鑒定尿素分解菌；培養(yǎng)基中參加剛果紅CR，鑒定纖維素分解菌。注意：病毒為非細胞構造的生物體，專營活細胞寄生，目前不能利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)，需接種在動植物組織中才能增殖。常用于培養(yǎng)病毒的是活雞胚。參加培養(yǎng)基中的凝

4、固劑如瓊脂，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。二、無菌技術一關鍵 獲得純潔培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌入侵。二消毒、滅菌:二者主要區(qū)別中：芽孢和孢子是否存活芽孢是微生物度過不良環(huán)境的體眠體，而孢子是微生物進展無性生殖時的繁殖體即無性生殖細胞。1.消毒:使用較為溫和的物理或化學方法，僅殺死物體外表或內部一部分對人體等有害的微生物不包括孢子和芽孢常用方法應用范圍巴氏消毒法：7075水中煮30min或在80水中煮15min一些不耐高溫的物體如牛奶煮沸消毒法：在100水浴中煮沸56 min一般物品化學藥劑消毒法：用乙醇、氯氣、漂白粉、KMnO4等藥劑來殺死或抑制細菌生長或繁殖可用來對環(huán)境、雙手和衣物

5、等消毒紫外線消毒法：30W紫外燈照射30min接種室、接種箱、超凈工作臺2.滅菌:使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法應用范圍灼燒滅菌法：酒精燈火焰接種工具如接種環(huán)、接種針等干熱滅菌法：在160170加熱12h如玻璃器皿吸管、培養(yǎng)皿和金屬用具高壓蒸汽滅菌：壓力為100 kPa，溫度為12l的條件下，維持1530 min培養(yǎng)基及容器的滅菌注意：1酒精消毒用體積分數(shù)為70%的酒精效果最好，濃度過低。殺菌力弱，濃度過高，會使菌體外表蛋白凝固成一層保護膜，乙醇分子不能進入其中2關于高壓蒸汽滅菌注意以下幾點：壓力為100 kPa，溫度為12l的條件下，維持1530 min；

6、注意同時旋緊相對的兩個螺旋，使螺栓松緊一致；到滅菌時間后，當壓力表的壓力降為零時，才能翻開排氣閥，否那么滅菌鍋的液體會沖出容器，造成污染。3滅菌消毒的原理，就是通過一定理化手段，使病原茵蛋白質變性，失去生命活性。4灼燒滅菌用的是酒精燈火焰的充分燃燒層。三、微生物的純化培養(yǎng)技術一常用細菌培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制流程：計算稱量溶化滅菌注意：據配方計算配制一定體積培養(yǎng)基時各成分的用量注意：倒平板時，燒杯口要通過酒精燈火焰滅菌。平板冷凝后要將平板倒置，既可防止皿蓋上凝結的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染；又可使培養(yǎng)基表面的水分更好的揮發(fā)。（調PH）倒平板注意：牛肉膏較粘稠，應玻棒挑取，在稱量紙上稱量牛肉膏蛋

7、白胨易吸潮，動作要迅速注意：溶化瓊脂時要不斷攪拌，防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂；加熱過程中部分水分蒸發(fā)，待瓊脂完全溶化后應補加蒸餾水，以保持溶液的濃度注意：由于不同微生物適宜的pH不同，因此在熔化后，必須用NaOH或HCl來調節(jié)pH注意：用高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基先調PH再滅菌一般是培養(yǎng)基先滅菌再倒平板二純化大腸桿菌1原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細菌菌落。2微生物接種方法：平板劃線法只可純化和稀釋涂布平板法既可純化又可計數(shù) 1平板劃線法：固體培養(yǎng)上連續(xù)劃線逐步稀釋單個細胞繁殖而成的菌落 如圖注意：a.用接種環(huán)取菌種之前、每次劃線之前和劃線完畢都要

8、進展灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻后再操作；燒灼時期目的取菌種前殺死接種環(huán)上原有微生物每次劃線前殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留菌種，使下次劃線的菌種直接來自于上次劃線末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少，到達別離菌株的目的接種完畢后殺死接種環(huán)上殘存的菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操作者b.劃線時不要劃破培養(yǎng)基，假如采用分段劃線法操作從第二次操作應總在上一次劃線末端開場，首尾區(qū)不能相連；c.操作必須始終在酒精燈火焰旁進展。2稀釋涂布平板法：10倍系列稀釋操作一系列梯度稀釋 稀釋度足夠高的菌液分散成單個細胞單個菌落稀釋涂布平板的操作比較復雜，且各個細節(jié)均需保證“無菌，應特別注意：a.配制系列梯度稀釋液時，必須用無菌水配制；b.涂布器用70%的酒精消毒，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰引燃。不要將過熱的涂布器放入盛有酒精的燒杯中，一面引燃其中的酒精；c. 吸管頭不要接觸任何其他物體；吸管要在酒精燈火焰周圍使用。3菌種的保存保存時間保存方法詳細方法后續(xù)處理頻繁使用臨時保藏法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，長成