食用鹽中亞硝酸鹽測(cè)定方法的探討

1、食用鹽中亞硝酸鹽測(cè)定方法的探討樓雨芝 李洪亞硝酸鹽是潛在的致癌物質(zhì)，人體攝入的亞硝酸鹽含量過高可能使血液中的變性蛋白增加，目前在食品監(jiān)測(cè)中，亞硝酸鹽是一項(xiàng)重要的分析項(xiàng)目。以往一般認(rèn)為食用鹽中亞硝酸鹽的含量很低，因此在現(xiàn)有的食用鹽及相關(guān)鹽產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中均未將亞硝酸鹽列入檢測(cè)項(xiàng)目，也未制定食用鹽中亞硝酸鹽的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)。由于食用鹽與亞硝酸鹽用肉眼及味覺難以區(qū)分，亞硝酸鹽又常作為食品添加劑使用，使得食用鹽與亞硝酸鹽有可能會(huì)同時(shí)出現(xiàn)于廚房灶頭上，故屢有亞硝酸鹽食物中毒事件發(fā)生；另外一些用于食品加工行業(yè)，特別是腌制行業(yè)，加工以后本身會(huì)產(chǎn)生大量的亞硝酸鹽，一旦產(chǎn)品亞硝酸鹽指標(biāo)超標(biāo)，往往要對(duì)原料包括食用鹽進(jìn)行亞

2、硝酸鹽含量的檢測(cè)，但由于沒有合適的檢測(cè)方法，易產(chǎn)生糾紛。目前主要借用食品中亞硝酸鹽的測(cè)定方法（GB/T 5009.33），該方法適用于食品檢測(cè)，食品的成份復(fù)雜，有大量的蛋白質(zhì)、脂肪、纖維等有機(jī)物，前處理復(fù)雜，而食用鹽以氯化鈉為主的無機(jī)鹽產(chǎn)品，相對(duì)成份簡(jiǎn)單，不需要經(jīng)過除去有機(jī)物的過程，有時(shí)候前處理不好反而帶入了較大的誤差；另外加碘食鹽普遍采用的碘劑為碘酸鉀，有報(bào)道4.5碘酸鉀對(duì)用重氮偶合光度法測(cè)定亞硝酸鹽時(shí)有干擾，在對(duì)食物中毒樣品進(jìn)行亞硝酸鹽定性時(shí)4,含有碘酸鉀樣品往往會(huì)出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象,但至今未有解決的辦法。本文通過試驗(yàn)，省去了GB/T5009.33標(biāo)準(zhǔn)方法中前處理的過程，在對(duì)加碘食用鹽檢測(cè)過程

3、通過在標(biāo)樣中同時(shí)加入不含亞硝酸鹽的試劑氯化鈉和碘酸鉀的方法，消除氯化鈉和碘酸鉀的影響,保證了加碘食用鹽中亞硝酸鹽的準(zhǔn)確測(cè)定。一、方法原理在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮后，與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，該染料在545550nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)產(chǎn)生最大的吸收，可用光度法測(cè)定其含量。二、實(shí)驗(yàn)操作1、 試劑與儀器實(shí)驗(yàn)中所用試劑和水未注明要求時(shí)，均使用分析純?cè)噭┖驼麴s水。1.1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.5mg/ml）：稱取0.2500g已于干燥器中放置24小時(shí)的亞硝酸鈉，溶于500ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。1.2亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液（2g/ml）：吸取上述亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml于250ml容量瓶

4、中，加水稀釋至刻度。1.3亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液（5g/ml）：吸取上述亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。1.4對(duì)氨基苯磺酸溶液（4g/L）：分別稱取0.4g溶于100ml20%、30%鹽酸溶液中，置棕色瓶中混勻，避光保存。1.5鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）：稱取0.2g鹽酸萘乙二胺，溶解于100ml水中，混勻后，置于棕色瓶中，避光保存。1.6碘酸鉀溶液（0.04mol/L1/6KIO3）：稱取0.71g KIO3，溶解于500ml水中，混勻。1.7儀器：安捷倫6010型分光光度計(jì)，3cm比色皿。2、 實(shí)驗(yàn)步驟2.1基本操作于50ml比色管中加入適量的標(biāo)液或樣液后，加入適

5、量的對(duì)氨基苯磺酸，混勻靜置35min后再加入適量的鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，靜置適當(dāng)時(shí)間，用3cm比色皿，以試劑空白作參比，在分光光度計(jì)上選取合適的波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度。2.2條件的選擇測(cè)定波長(zhǎng)的確定用加1ml工作標(biāo)液，然后按上述操作程序，用分光光度計(jì)在400600nm范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，見圖1，以獲取最大吸光度的波長(zhǎng)。圖1. 反應(yīng)物的波長(zhǎng)掃描圖。從上圖中可看出當(dāng)波長(zhǎng)在544550nm之間，其吸光度可達(dá)到最大。在實(shí)驗(yàn)中分別選取了545、549nm波長(zhǎng)做試驗(yàn)，結(jié)果無差異。2.2.3空白溶液的選擇分別對(duì)試劑空白（2ml對(duì)氨基苯磺酸溶液+1ml鹽酸萘乙二胺溶液）、5g氯化鈉溶液、5g精制鹽溶液、

6、5g日曬鹽溶液分別加入50ml比色管中加水至刻度，在549nm處進(jìn)行了吸光度測(cè)試，結(jié)果如表1。表1.各種溶液的吸光度測(cè)定值溶液試劑空白氯化鈉精制鹽日曬鹽吸光度A0005000100260040從上表中看純的試劑氯化鈉溶液吸光度很小，幾乎可忽略，食用鹽樣品溶液由于存在一定的懸浮物會(huì)產(chǎn)生較高的吸光度，因此應(yīng)對(duì)樣品采取過濾措施以減少對(duì)結(jié)果的正誤差。空白溶液以選擇試劑空白為宜。2.2.4酸度與顯色劑量的選取試驗(yàn)中分別采用10%、20%、30%的鹽酸溶液溶解對(duì)氨基苯磺酸和加入0.5、1.0、1.5ml的鹽酸萘乙二胺溶液進(jìn)行吸光度的比較，樣液為1.0ml亞硝酸鈉工作液（5g/ml），結(jié)果見表2。表2. 不

7、同酸度和顯色劑的用量對(duì)吸光度的影響試劑的量10%HCl20% HCl30% HCl0.5ml1.5ml2ml1ml鹽酸萘乙二胺溶液+2ml對(duì)氨基苯磺酸1ml鹽酸萘乙二胺溶液+2ml對(duì)氨基苯磺酸吸光度A0.23202340333023502350236從上表可看出鹽酸的濃度及顯色劑的用量在上述試驗(yàn)的范圍內(nèi)對(duì)吸光度結(jié)果影響不大。因此在以下的實(shí)驗(yàn)中選取的鹽酸濃度為20%，顯色劑用量為1ml。2.2.5顯色時(shí)間的選取將同一份標(biāo)液，從加入鹽酸萘乙二胺試劑溶液時(shí)開始計(jì)算，分別在靜置不同時(shí)間后測(cè)定其吸光度，結(jié)果見表3。表3. 不同放置時(shí)間對(duì)吸光度的影響時(shí)間（min）0710154060吸光度A0.2300.

8、2470.2470.2480.2500.250從上表可以看出，在放置7min后其吸光度已趨穩(wěn)定，為了提高工作效率，在實(shí)驗(yàn)中選取放置時(shí)間為10min即可。2.3試驗(yàn)結(jié)果2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線按上述確定的條件，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.5,2.0, 3.0,5.0,7.0,10.0ml 5g/ml標(biāo)準(zhǔn)工作液，于50ml比色管中，分別加入2ml對(duì)氨基苯磺酸（20%鹽酸）溶液，搖勻，放置35min，再加入1ml鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，搖勻，放置10min，在549nm處用蒸餾水作參比，作標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定，結(jié)果見圖2。當(dāng)亞硝酸鈉濃度在01.0g/ml范圍內(nèi)，與吸光度

9、之間呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：A=2.036C+0.0276，R2=0.9982。實(shí)際曲線呈兩邊彎曲，用不同濃度及不同時(shí)間作標(biāo)線時(shí)，其回歸方程斜率K的變化在2.0002.400之間變化，截距在00.03A之間變化。因此在測(cè)試時(shí)盡量選取與實(shí)際濃度相近值來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，這樣可減少誤差，線性、回收較好的濃度范圍在0.050.7g/ml之間?；貧w線實(shí)際線 圖2. 亞硝酸鈉濃度C與吸光度A的標(biāo)準(zhǔn)曲線2.3.2氯化鈉對(duì)吸光度的影響將40克不含亞硝酸鹽的氯化鈉試劑（600灼燒，去除亞硝酸鹽）溶解于250ml蒸餾水中，分別吸取0、15、25ml，置于50ml比色管中，分別加入1ml2g/ml亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工

10、作液，加入2ml對(duì)氨基苯磺酸及1ml鹽酸萘乙二胺溶液，放置不同時(shí)間測(cè)定吸光度，結(jié)果如表4。表4. 氯化鈉對(duì)吸光度的影響加入氯化鈉的量（ml）01525放置時(shí)間（min）103045103045103045吸光度0.0980.0950.0950.1010.0980.0960.1040.1010.100從表4可看出氯化鈉對(duì)溶液的吸光度稍有影響，但總的影響不大。加入氯化鈉后其線性R=0.9998，回歸方程斜率與不加氯化鈉時(shí)的基本一致，兩線截距相差僅0.007，小于0.01，因此應(yīng)該說氯化鈉的影響不大，見表5、圖3。如為了提高準(zhǔn)確度時(shí)，可在標(biāo)液中同時(shí)加入與樣品相同量的不含亞硝酸鹽的氯化鈉試劑作標(biāo)線或通

11、過減空白方式消除氯化鈉的影響。2.3.3加碘食鹽中的碘酸鉀對(duì)測(cè)定的影響在圖3中也可明顯看出碘酸鉀對(duì)測(cè)定過程的影響，同一濃度的亞硝酸鹽溶液中加碘酸鉀與不碘鉀其對(duì)應(yīng)的吸光度呈明顯的變化。在圖3中加入碘酸鉀后其標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率變化不大，其截距比純亞硝酸鹽溶液和加入氯化鈉的亞硝酸鹽溶液的標(biāo)線明顯增加。表5. 氯化鈉、碘酸鉀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定的影響比較表亞硝酸鈉濃度g/mL吸光度ABS.不加其他加NaCl加NaCl加碘酸鉀0.000 0.004 0.010 0.036 0.016 0.042 0.049 0.073 0.032 0.079 0.087 0.108 0.048 0.115 0.122 0.146

12、0.064 0.152 0.161 0.183 0.080 0.190 0.197 0.220 線性方程A=2.3143C+0.0044A=2.3321C+0.011A=2.3000C+0.0357R20.99990.99980.9999注：加入氯化鈉為4g，加入碘酸鉀量相當(dāng)于32g/g的碘鹽中碘酸鉀的量。圖3. 氯化鈉、碘酸鉀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的影響在加碘食用鹽樣品測(cè)試過程中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)取的量增加到一定程度時(shí)，其顏色會(huì)發(fā)生根本的變化，見表6。試驗(yàn)中，取10g不加碘食鹽隨著亞硝酸鹽標(biāo)液量的增加無此現(xiàn)象發(fā)生，如加入一定量的KIO3，也會(huì)產(chǎn)生上述變色現(xiàn)象，氯化鈉的存在會(huì)加劇這一現(xiàn)象的發(fā)生，但如改加KI溶液，則

13、不出現(xiàn)此現(xiàn)象。表6.不同量加碘食鹽顏色的變化情況樣品所取的量（g）加標(biāo)液量顏色變化情況描述50著色劑加入搖勻，顏色慢慢變成淡紫色，顏色變化正常；0.30.97.50著色劑加入搖勻，馬上出現(xiàn)粉紫色，隨即消失變淺暗略帶黃色；0.30.9著色劑加入搖勻，馬上出現(xiàn)深紫色，隨即消失變淺紫中略帶黃色；100著色劑加入搖勻，馬上由深紫變暗淡黃漸變淺，幾乎沒有顏色。0.30.92.3.4 碘酸鉀用量與鹽酸濃度、放置時(shí)間對(duì)吸光度的影響為了研究加碘食鹽中不同含碘量樣品，由于碘酸鉀含量不一致是否會(huì)對(duì)亞硝酸鹽結(jié)果產(chǎn)生影響，同時(shí)確定標(biāo)線中加入碘酸鉀的量，以及合適的放置時(shí)間。對(duì)此對(duì)碘酸鉀、鹽酸濃度（配制對(duì)氨基苯磺酸時(shí)的鹽

14、酸濃度）、放置時(shí)間三因素進(jìn)行了正交試驗(yàn)，結(jié)果如表7、圖4。從圖中可以直觀的看出，當(dāng)加入碘酸鉀（0.04mol/L）量為0.1ml（相當(dāng)于碘鹽含碘量為20g/g）時(shí)，酸度大小不影響其吸光度，隨著碘酸鉀加入量增加到0.2、0.3ml（相當(dāng)于碘鹽含碘量為40、60g/g）時(shí)，酸度大小對(duì)吸光度的影響越來越大，當(dāng)酸度達(dá)到30%時(shí)加入碘酸鉀0.20.3ml時(shí)，其吸光度不受影響；放置時(shí)間基本上需30min以后達(dá)到平衡，不管是測(cè)定數(shù)據(jù)還是從肉眼觀察，加入氯化鈉和碘酸鉀后其顏色達(dá)到平衡時(shí)間比不加要慢。時(shí)間(min)05101530456075圖表系列號(hào)HCl濃度(%)KIO3量(ml)吸光度(A)100.10.

15、0870.0980.0990.1010.1120.1180.1190.11910.20.0950.1060.1100.1150.130.1360.1380.1420.30.1510.1620.1640.1660.1770.1790.1820.1833200.10.0820.0980.1010.1030.1150.1190.1210.12140.20.0940.1150.1240.1320.1380.1390.140.14150.30.1250.1390.1410.1440.1530.1550.1560.1566300.10.0750.0970.1010.1040.1140.1190.1210.

16、12270.20.0920.1190.1300.1310.1410.140.1410.1480.30.1150.1290.1320.1320.140.1390.140.1399表7. 鹽酸濃度、放置時(shí)間、碘酸鉀用量對(duì)吸光度的影響圖4. 鹽酸濃度、放置時(shí)間、碘酸鉀用量對(duì)吸光度的影響的比較圖不加碘食用鹽樣品精密度與回收率試驗(yàn) 精密度試驗(yàn)：稱取50克鹽樣溶解于250ml容量瓶中，加水至刻度搖勻，用定量濾紙干過濾，吸取25ml濾液，置于50ml比色管中，加入2ml對(duì)氨基苯磺酸（20%鹽酸）溶液，混勻后放置5min，再加入1ml鹽酸萘乙二胺溶液，加水定容，混勻，放置10 min后，在549nm波長(zhǎng)下測(cè)定

17、。同一樣品測(cè)定6次。標(biāo)準(zhǔn)曲線為不加氯化鈉的標(biāo)液。結(jié)果見表8。回收率試驗(yàn)：同上述鹽樣液一樣的處理辦法，吸取25ml過濾液若干份于50ml比色管中，分別加入0.4、0.8ml 2g/ml標(biāo)液；稱取上述相同樣品50克2份溶解于250ml容量瓶中，分別再加入5、10ml 2g/ml的亞硝酸鈉工作標(biāo)液，加水定容，余下操作同精密度試驗(yàn)。結(jié)果見表8。表8. 不加碘食用鹽精密度、回收率試驗(yàn)結(jié)果表加碘食用鹽樣品精密度及回收率試驗(yàn)所取樣品為含碘量34g/g日曬鹽（樣液1）及含碘量為28g/g的日曬自然鹽（樣液2），所加對(duì)氨基苯磺酸溶液為30%的鹽酸溶液作溶劑，標(biāo)線溶液中加5gNaCl和與樣品相當(dāng)量的碘酸鉀溶液，放

18、置時(shí)間為30min。其余操作同不加碘食用鹽，結(jié)果見表9。表9. 加碘食用鹽精密度與回收率試驗(yàn)結(jié)果序號(hào)樣液1（g/g）樣液2（g/g）樣液 濃度加標(biāo)0.4g/g加標(biāo)0.8g/g樣品濃度加標(biāo)0.3g/g加標(biāo)1.0g/g10.5340.9721.356-0.0210.2870.96020.5330.9511.3120.0050.3070.96330.5490.8901.277-0.0090.3070.92140.5660.9141.3090.0100.2920.92450.5451.2860.0010.2650.92960.5291.341-0.0110.2980.961平均值0.5430.9321

19、.313-0.0040.2930.943標(biāo)準(zhǔn)偏差0.0140.0370.0300.0110.0160.020CV%2.583.972.285.462.12回收率%97.2596.2597.6794.30注所用標(biāo)線加氯化鈉及碘酸鉀所用標(biāo)線不加氯化鈉及碘酸鉀三、討論1、不加碘食用鹽測(cè)定時(shí)從表8結(jié)果可看出不加碘食用鹽采用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線法測(cè)定是可行的，其變異系數(shù)在1.115.43%，回收率在100105%之間，說明該方法有較好的精密度和準(zhǔn)確度。用重氮偶合分光光度法測(cè)定不加碘食鹽其亞硝酸鹽含量時(shí)，只需要對(duì)樣品溶解后的樣液進(jìn)行過濾處理，不需要其它處理，即可直接測(cè)定，方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，樣品中亞硝酸鈉含量在5g/g之內(nèi)，氯化鈉對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大。但試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)氯化鈉會(huì)影響亞硝酸根離子與對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)速度，試驗(yàn)中要注意在加入對(duì)氨基苯磺酸后必須放置5min以上，時(shí)間太短會(huì)影響其最終結(jié)果。2、加碘食用鹽測(cè)定時(shí)表9結(jié)果顯示，加碘食用鹽采用在標(biāo)準(zhǔn)工作液中加與樣品同樣量的氯化鈉和碘酸鉀溶液制作標(biāo)線，或通過減空白（與樣品相當(dāng)量的氯化鈉和碘酸鉀溶液），然后測(cè)定其結(jié)果有較好的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和較好的回收率，表明方法可行。