2025豬藍(lán)耳病防控及凈化指南（第三版）

豬藍(lán)耳病防控與凈化指南1 豬藍(lán)耳病防控與凈化指南1目 錄引言一、藍(lán)耳病的病原學(xué)病原及分類地位 1重要基因的功能 1病原的理化特性… 5病毒的入侵機(jī)制 6PRRSV的致病機(jī)理 7藍(lán)耳的免疫抑制… 8對(duì)中樞免疫系統(tǒng)的損傷… 9抗體依賴性增強(qiáng)（ADE）… 10炎性反應(yīng)的累加影響… 11PRRSV的體內(nèi)自凈… 12二、藍(lán)耳病的流行病學(xué)藍(lán)耳病感染的臨床規(guī)律 13歐洲型藍(lán)耳的分型方法 16歐洲型藍(lán)耳的流行現(xiàn)狀 16美洲型藍(lán)耳的分型方法… 18美洲型起源及流行現(xiàn)狀 20藍(lán)耳病在我國(guó)的流行史… 21藍(lán)耳病的水平傳播規(guī)律 23藍(lán)耳病的垂直傳播規(guī)律 25藍(lán)耳病豬場(chǎng)內(nèi)波動(dòng)規(guī)律 25PRRSV變異重組的趨勢(shì)… 26三、藍(lán)耳病的監(jiān)測(cè)與評(píng)估藍(lán)耳病的病原學(xué)診斷… 28藍(lán)耳病的血清學(xué)監(jiān)測(cè)… 29毒株溯源和重組分析… 29豬藍(lán)耳病防控與凈化指南2 豬藍(lán)耳病防控與凈化指南2藍(lán)耳病日常風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警 30疫苗免疫效果的評(píng)估 33引種或馴化的檢測(cè)評(píng)估… 34不同狀態(tài)下的豬場(chǎng)的藍(lán)耳監(jiān)測(cè)預(yù)警方案和樣本選擇… 35四、藍(lán)耳病的免疫學(xué)研究固有免疫機(jī)制… 38體液免疫規(guī)律… 38被動(dòng)免疫影響… 39細(xì)胞免疫機(jī)制… 40基因編輯育種… 40五、疫苗及制劑研發(fā)進(jìn)展商品化藍(lán)耳弱毒疫苗… 41商品化藍(lán)耳滅活疫苗 42改進(jìn)型藍(lán)耳滅活疫苗 43藍(lán)耳的鑒別疫苗… 44亞單位和載體類疫苗 44研制中的DNA疫苗 45大環(huán)內(nèi)酯藥物的抑藍(lán)機(jī)理 45中藥防控藍(lán)耳的對(duì)癥機(jī)理 45多糖對(duì)PRRSV的抑制作用 47六、PRRSV的臨床防控豬場(chǎng)藍(lán)耳病等級(jí)評(píng)估 49不同等級(jí)豬場(chǎng)的階段性目標(biāo) 50藍(lán)耳病防控六大關(guān)鍵環(huán)節(jié) 51藍(lán)耳病陰性場(chǎng)防控關(guān)鍵點(diǎn) 53藍(lán)耳病陽性場(chǎng)防控關(guān)鍵點(diǎn) 54妊娠母豬防控關(guān)鍵點(diǎn) 55后備母豬群馴化流程 57適時(shí)免疫和用藥原則 58主動(dòng)感染與封群凈化 59豬藍(lán)耳病防控與凈化指南引 言豬繁殖與呼吸綜合征ReproductiveandRespiratorySyndrome,PRRS），俗稱藍(lán)耳病，是由PRRS病毒（PRRSV）引起的烈性傳染病，其特征性臨床表現(xiàn)為母豬繁殖障礙（流產(chǎn)率可達(dá)20-50%）、仔豬呼吸道綜合征（發(fā)病率30-80%）及繼發(fā)感染風(fēng)險(xiǎn)增高。我國(guó)于1995年在華北地區(qū)首次確PRRS，2006PRRS（HP-PRRSV，Nsp2481）顯示100%40%（Zhou，2009）。病毒持續(xù)演化導(dǎo)2013NADC30-like（RFLP1-7-4）2016NADC34-like（中國(guó)（PRRSV-1）20154.7%20218.3%（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)），形成多毒株共循環(huán)的復(fù)雜流行態(tài)勢(shì)。PRRSV1.15×10-2substitutions/site；②重組事件頻發(fā)（ORF521.7%）；③臨床毒力趨弱但免疫逃逸增強(qiáng)（GP5表位變異率提升37%）。盡管典型臨-PRRSV2（PCV2）共感染率68.9%，2.370-80%。202112月8（農(nóng)牧發(fā)[2021]44PRRS2025（2022-2025PRRS（20224300105%），藍(lán)耳病的防控與凈化已成為行業(yè)提質(zhì)增效的關(guān)鍵路徑。本手冊(cè)（第三版）基于最新研究成果與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)更新：①納入2021-2023年間鑒定的12個(gè)新基因亞型特征；②解析規(guī)?；i場(chǎng)（存欄≥5000頭）病毒傳播動(dòng)力學(xué)參數(shù)（R0=2.3-3.1）；③集成頭部企業(yè)）驗(yàn)證的生物安全強(qiáng)化方案，可使病毒載量降低；④新增雙陰場(chǎng)（抗原/抗體陰性）維持技術(shù)規(guī)范，通過科學(xué)馴化與精準(zhǔn)凈化策略，助力養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)現(xiàn)PRRSV減毒損失向增效生產(chǎn)的戰(zhàn)略轉(zhuǎn)型。豬藍(lán)耳病防控與凈化指南一、藍(lán)耳病的病原學(xué)病原及分類地位藍(lán)耳病在20世紀(jì)80年代末首次被出現(xiàn)，曾被命名為“豬神秘病”，因患病豬耳部發(fā)紺變藍(lán)，又被稱為豬藍(lán)耳病。得益于分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展，上世紀(jì)90年代分別在北美洲和歐洲分別確定了該病的病原毒株，即北美洲毒株的代表株VR2332株和歐洲型毒株代表Lelystadvirus(LV)株。1992年，在國(guó)際豬病學(xué)術(shù)研討會(huì)上正式統(tǒng)一將該疾病更名為“豬繁殖與呼吸綜合征”(PRRS),其致病原命名為"豬繁殖與呼吸綜合征病毒”(PRRSV)。PRRSV在分類學(xué)上屬于尼多病毒目（Nidovirales）、動(dòng)脈炎病毒科（Arteriviridae）、動(dòng)脈炎病毒屬（Arterivirus）。該屬成員具有相似的血管內(nèi)皮細(xì)胞嗜性，可引發(fā)動(dòng)脈血管系統(tǒng)炎癥反應(yīng)。藍(lán)耳病具有導(dǎo)致血液微循環(huán)障礙甚至堵塞的特征，進(jìn)而導(dǎo)致身體發(fā)紺的現(xiàn)象。PRRSV感染導(dǎo)致微循環(huán)障礙的病理機(jī)制與其誘導(dǎo)的強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，病毒可直接損傷肺泡巨噬細(xì)胞，造成免疫抑制。PRRSV為單股正鏈不分節(jié)段的RNA病毒，“正鏈”說明其核苷酸序列即為編碼序列，單股RNA是指其基因組不像DNA是雙鏈的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，這是其變異比較快的一個(gè)原因。"不分節(jié)段"說明其基因組是一個(gè)完整片段，不像禽流感病毒那樣容易發(fā)生不同節(jié)段片段的交換，導(dǎo)致抗原性發(fā)生迅速改變。PRRSV的基因組由約1.55萬個(gè)堿基組成，在美洲型毒株的比較分析上，我們會(huì)以第一個(gè)美洲毒株代表VR2332為參照進(jìn)行序列比對(duì)，因此我們所謂的美洲型藍(lán)耳毒株Nsp2區(qū)缺失或插入核苷酸均是相對(duì)于VR2332株的基因組結(jié)構(gòu)而言的。依據(jù)PRRSV的基因組序列，PRRSV可分為兩個(gè)基因型即以Lelystadvirus(LV)代表的歐洲型PRRSV-I和以VR-2332為代表的北美PRRSV-II。歐洲株和美洲株的基因組有多相似之處，它們的基因組結(jié)構(gòu)幾乎完全相同，但是這些分離株在遺傳學(xué)和抗原性方面確有顯著差異。序列分析顯示，歐洲型和北美型僅有60%的核苷酸同源率，因此其抗原性差異較大。我國(guó)主要的流行毒株是北美洲型毒株，但隨著貿(mào)易加速和歐洲種豬的引進(jìn)，歐洲型藍(lán)耳傳入我國(guó)也已被證實(shí)，2015年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，歐洲型毒株（PRRSV-1）檢出率已達(dá)4.7%，由于現(xiàn)有ELISA檢測(cè)試劑無法區(qū)分血清型，實(shí)際流行情況可能被低估。值得注意的是，2013年發(fā)現(xiàn)的歐洲型重組毒株（PR40）提示存在基因重組風(fēng)險(xiǎn)。重要基因的功能PRRSV的基因組，由一個(gè)5'非翻譯區(qū)(5'UTR),10個(gè)開放閱讀框(ORF):ORFla、ORFIb、ORF2a、ORF2b、ORF3、ORF4、ORF5、ORF5a、ORF6、ORF73'非翻譯區(qū)(3'UTR)和一個(gè)poly(A)1-1圖1-1藍(lán)耳病病毒基因組示意圖豬藍(lán)耳病防控與凈化指南圖1-2PRRSV基因組的轉(zhuǎn)錄和翻譯示意圖2/3ORF1aORF1b和ORF1b首先翻譯成為有兩個(gè)大的多聚蛋白，pp1applab（1-2）。而后在病毒自身蛋白酶14(NSPs)。結(jié)構(gòu)蛋白基因僅占全1/3,4(GP2、GP2a、GP3和GP43(GP5、M和N)(這些蛋白的功能見表1-1和表1-2)。1-1PRRSVORF1基因組編碼蛋白氨基酸數(shù)量特點(diǎn)和功能PRRSV-1PRRSV-2ORF1Nsp1α180180抑制1型干擾素(IFN)的產(chǎn)生；PLPα蛋白酶；調(diào)控sgRNA合成Nsp1β205203Nsp1β介導(dǎo)的干擾素拮抗作用和宿主mRNA核滯留有助于病毒的毒力增強(qiáng)，并且可以與核孔蛋白相互作用，促進(jìn)病毒復(fù)制和免疫逃避Nsp210781196該區(qū)域具有高變性，可用于監(jiān)測(cè)遺傳變異和開發(fā)診斷試劑，是開發(fā)來自感染性克隆的重組標(biāo)記疫苗的理想位點(diǎn)；Nsp2誘導(dǎo)細(xì)胞自噬；Nsp3230230跨膜蛋白，參與了膜修飾Nsp4203204；Nsp4結(jié)構(gòu)域|1-80)PR65αPP2Ac(PP2APRRSV疫的策略。Nsp5170170可以誘導(dǎo)信號(hào)調(diào)節(jié)因子降解Nsp61616高度保守Nsp7α149149是RNA合成和PRRSV病毒蛋白質(zhì)翻譯的關(guān)鍵蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。Nsp7β120110能夠與宿主蛋白相互作用，促進(jìn)病毒增殖；Nsp84545高度保守，Nsp9的N端區(qū)域Nsp9685685RNA依賴的RNA聚合酶，毒力基因Nsp10442441RNANTP酶/裂解酶Nsp11224223Nsp11能拮抗I型干擾素，特別是IFN-β產(chǎn)生；尿苷酸核糖核酸酶Nsp12152153+sgRNA和-sgRNA的合成豬藍(lán)耳病防控與凈化指南非結(jié)構(gòu)蛋白(Nsp毒粒子上。由表1，Nsp1α能調(diào)節(jié)宿主的細(xì)胞因子；Nsp1β在病毒的復(fù)制和免疫逃逸方面有很多重要的功能。Nsp4是病毒最重要的蛋白酶，可以調(diào)節(jié)宿主的體液免疫；Nsp4NF-KB通路調(diào)節(jié)IFN-βNsp9RNARNA(RdRp),TNsp9Nsp7αIFN-г表達(dá)。Nsp10T細(xì)胞表位。Nsp9Nsp10蛋白的共同作用可以提高病毒毒力，替換不同毒力的Nsp9Nsp10蛋白會(huì)導(dǎo)致病毒致病性的改變，這可能是高致PRRSV機(jī)體對(duì)藍(lán)耳病的細(xì)胞免疫能力是必須要有活毒感染為基礎(chǔ)才能建立的，因此滅活疫苗免疫后很難檢測(cè)到非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體。NSP2Nsp2PRRSV蛋白，在疾病診斷和病毒毒力方面有重要的作用。歐洲型和美洲型的Nsp2蛋白長(zhǎng)度略有不同，不同亞型之間的長(zhǎng)度也各不相同，該蛋白具有高度的變異性和免疫原性。Nsp2Nsp9蛋白或Nsp10蛋白相互作用，參與病毒的復(fù)制，同時(shí)還有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，Nsp2蛋白有可能以結(jié)構(gòu)蛋白的身份參與病毒的生命活動(dòng)。歐洲型和美洲型之間Nsp240%Nsp2區(qū)域還存在有自然缺失和插Nsp2基因的部分缺失病毒，依據(jù)NSP2的缺失和插入氨基酸的位置可對(duì)藍(lán)耳病毒進(jìn)行分型，NADC30/34、QYYZ/HP-PRRSV均是依據(jù)此種分型方式得以命名。NSP2基因缺失的現(xiàn)象同樣會(huì)發(fā)生在歐洲型毒株中，不同亞型之間也存在有各式各樣的缺失形式。目前已知PRRSV的Nsp2NSP2131-157aa（1.5-2log10TCID50）。結(jié)構(gòu)蛋白是病毒粒子結(jié)構(gòu)的一部分，最終裝配到病毒粒子表面，是病毒粒子結(jié)構(gòu)的一部分(其拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)如圖1-3所示)。機(jī)體對(duì)病原的體液免疫主要針對(duì)的是病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，在抗體檢測(cè)中常用于檢測(cè)N蛋白抗體(愛德士、金諾等)或GP5抗體(LSI)。在對(duì)基因分析時(shí)，結(jié)構(gòu)蛋白GP5和GP2-GP4也是重點(diǎn)分析區(qū)域，其中GP2、GP3和GP4蛋白(分別由ORF2-4編碼)與受體相關(guān)，影響病原的細(xì)胞噬性。GP5蛋白(由ORF5編碼)是中和位點(diǎn)主要區(qū)域，存在選擇壓力，因此也容易發(fā)生變異，最新研究顯示，ORF5的氨基酸替代（L39H/Q/R）與疫苗逃逸相關(guān)。對(duì)這些容易變異的區(qū)域的分析是對(duì)分析回溯藍(lán)耳病毒傳入途徑的重要依據(jù)。圖1-3PRRSV囊膜結(jié)構(gòu)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)豬藍(lán)耳病防控與凈化指南MNMGP5蛋白形成異源二聚體與唾液酸粘附素結(jié)合。M蛋白與廣泛性中和抗體有密切的關(guān)聯(lián)。N蛋白是一個(gè)有多種功能的磷酸化蛋白，也是PRRSVRNA。編碼MNGP5Nsp2N產(chǎn)生的抗體產(chǎn)生最早，通過序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，N為病毒早期感染診斷的最佳選擇。目前還沒有商品化試劑盒可通過N抗體的鑒別診斷區(qū)分美洲型和歐洲型毒株感染。表1-2PRSSVORF2-7編碼的結(jié)構(gòu)蛋白及基因功能基因組編碼蛋白氨基酸數(shù)量特點(diǎn)和功能PRRSV-1PRRSV-2ORF2aGP2a249256是糖基化的次要結(jié)構(gòu)蛋白，具有兩個(gè)獨(dú)特的疏水峰和兩個(gè)高度保守的GP3、GP4ORF2bE7073EPRRSVEORF2b，EGP2a、GP3、GP4E蛋白的缺失會(huì)導(dǎo)致GP2a、GP3、GP4異種三聚體與病毒顆粒無法結(jié)合ORF3GP3265254是PRRSV蛋白中突變率較高的蛋白之一，蛋白在豬體內(nèi)的抗原性很強(qiáng)，還有報(bào)道表明有一部分的GP3蛋白為可溶性蛋白不以結(jié)構(gòu)蛋白的形式存在。GP3與GP2a、GP4形成的三聚體在病毒入侵過程中至關(guān)重要，無論是否有M-GP5異二聚體的參與，三聚體都可以與細(xì)胞受體CD163相互作用，幫助病毒進(jìn)入細(xì)胞。ORF4GP4183178GP4GP2GP3GP5ORF5GP5201200蛋白具有良好的免疫原性，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，其糖基化與GP5MPRRSVPRRSVORF5aGP5a4351次要非糖基化疏水蛋白；病毒存活必須的蛋白；作為多聚蛋白復(fù)合體參入病毒粒子。ORF6M173174是一種主要非糖基化結(jié)構(gòu)蛋白，在各譜系PRRSV中高度保守。在病毒體中GP5和M蛋白為二硫鍵連接的異二聚體，在病毒組裝和出芽過程中起關(guān)鍵作用；通過增加細(xì)胞免疫反應(yīng)和產(chǎn)生中和性抗體來增加對(duì)GP5的免疫反應(yīng)。ORF7N128123PRRSVNNN成為檢測(cè)病毒特異性抗體和疾病診斷的合適候選蛋白；病毒衣殼的唯一組成部分。病毒的理化特性

豬藍(lán)耳病防控與凈化指南Vm（見圖1-4，ORF725~30nm。圖1-4PRRSV病毒粒子結(jié)構(gòu)圖PRRSVPRRSVPH和表面活性劑的影響。PRRSV在-70℃到-20℃PRRSVpH6.5-7.5PRRSV56℃37℃分別需要20min和24hpH<6.0>7.650.0310min、0.0075%1min、0.0063%季胺化合物經(jīng)1min,即可殺滅病毒。表面活性劑能降低病毒的感染力，像氯仿和乙醚等脂溶劑PRRSV（ASFV23℃112vsPRRSV6）和偽狂犬病毒（PRV37℃7vsPRRSV48）。表1-3四種常見病毒的理化性質(zhì)特征非洲豬瘟病毒藍(lán)耳病病毒流行性腹瀉病毒偽狂犬病毒對(duì)熱敏感性5670，60℃20鐘；80℃3耐低溫56℃6-2060℃下可存活1-7天55-60℃經(jīng)30-5080℃3耐低溫PH適應(yīng)范圍3.9~11.56.5-7.51.5-10.54~9自然界存在時(shí)間30300敏感室溫下3-24小時(shí)后失活室溫下存活超過14天30150消毒劑敏感性對(duì)一般的消毒劑敏感，1%戊二醛有效，過硫酸氫鉀對(duì)常見的消毒劑敏感，對(duì)酸和堿性消毒劑都敏感對(duì)消毒劑特別敏感，季銨鹽即可有效殺滅流行性腹瀉病毒；對(duì)酸不敏感，對(duì)堿性消毒劑特別敏感對(duì)消毒劑敏感，1%1:500的氫氧化鈉有效豬藍(lán)耳病防控與凈化指南藍(lán)耳病毒除了豬以外，沒有其他宿主，在自然界中抵抗力較差，不易通過飼料媒介傳播，通過消毒也可以輕松消滅車輛和物品上的藍(lán)耳病毒。因此其主要的傳播途徑是通過引種過程進(jìn)入豬場(chǎng)的；另一個(gè)PRRSV溫度、濕度等)可以促進(jìn)病毒的傳播，PRRSV4.7Km,這就表明其一旦進(jìn)入生產(chǎn)群，通過空氣傳播可以在豬場(chǎng)內(nèi)的豬群中循環(huán)擴(kuò)散，因此預(yù)防藍(lán)耳病重點(diǎn)在防控引種過程和精液被污染，通過對(duì)后備豬群的抗體檢測(cè)和精液核酸檢測(cè)可預(yù)防此類風(fēng)險(xiǎn)。病毒的入侵機(jī)制圖1-5豬細(xì)胞表面受體病毒是通過受體(如圖病毒可通過6所示)與巨噬細(xì)胞表面的硫酸乙要NPRRSV吸附在細(xì)胞表面后在胞吞的作用下，進(jìn)入細(xì)胞到達(dá)細(xì)胞質(zhì)，病毒的RNA就會(huì)脫殼，并且以自身為模板轉(zhuǎn)錄成兩個(gè)蛋白的多聚蛋白(ppla和pplab)，而后在病毒自身蛋白的作用下，裂解形成至少14個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白。隨后這些非結(jié)構(gòu)蛋白會(huì)形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(RTC)，在轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的作用下基因組復(fù)制，形成具有相同5'端和3'的sgmRNA,而后進(jìn)一步形成病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。新形成的基因組會(huì)與N蛋白結(jié)合形成核衣殼。并且通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體發(fā)芽，包裹上含GP2a、E、GP3和GP4等的囊膜，最后新形成的病毒粒子會(huì)在高爾基體中成熟，并借助胞吐作用從細(xì)胞中釋放。RNA（+ssRNA）mRNApp1a（1,727aa）pp1ab（3,175aa）多聚蛋白。病毒編碼的NSP4（3C樣蛋白酶）NSP2（木瓜蛋白酶樣酶）通過2814（NSP1αNSP12）NSP9（RdRp）與解旋酶5'UTR（103三聚體與GP5/M二聚體在膜表面形成包膜突起，N蛋白（每個(gè)衣殼含180拷貝）以Rab11豬藍(lán)耳病防控與凈化指南（CD163ΔSRCR5）抵抗藍(lán)耳感染是通過基因工程的手段敲除或改變豬細(xì)胞表面的CD163受體，從而降低藍(lán)耳病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合和脫殼概率，從而這樣的基因編輯豬不會(huì)感染藍(lán)耳病毒，基因編輯豬（可完全阻斷PRRSV（攻毒后病毒血癥陰性率100%）。此外一些化學(xué)藥物抑制藍(lán)耳病毒的機(jī)理也與藍(lán)耳病毒復(fù)制過程相關(guān)，如泰萬菌素和替米考星等大環(huán)內(nèi)酯類藥物，通過抑制核衣殼解離（78.3%）NSP9RdRp（IC50=3.2μM）發(fā)揮抗病毒作用。 圖1-6PRRSV囊膜蛋白相互作用圖PRRSV藍(lán)耳病感染后可以引起肺臟損傷、多器官水腫、流產(chǎn)、死胎等多種臨床表現(xiàn)，其致病機(jī)理如下：PRRSV有很強(qiáng)的組織嗜性，可在肺泡巨噬細(xì)胞和肺內(nèi)皮細(xì)胞巨噬細(xì)胞內(nèi)迅速復(fù)制并造成豬肺泡巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞被大量破壞，并引發(fā)細(xì)胞凋亡。進(jìn)而導(dǎo)致豬早期出現(xiàn)呼吸道癥狀，在藍(lán)耳病感染之后，后期也會(huì)發(fā)生呼吸道的問題，但此時(shí)的致病原往往是副豬和鏈球菌等繼發(fā)性感染。(2PRRSV進(jìn)入血液循環(huán)（5104.3copies/mLIL-10（>500pg/mL）引發(fā)免疫抑制）及淋巴循環(huán)，并在血液巨噬度的損傷。PRRSV6-8。多器官水腫：病毒在豬肺泡巨噬細(xì)胞、淋巴結(jié)等處的大量增殖造成肺、淋巴結(jié)的損傷和微循環(huán)障礙，病毒誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）3.8（Evansblue2.4），血液中的部分液體成分外滲，造成血管周圍水腫，特征性表現(xiàn)為心包積液（82%）和腎周水腫（5mm）。V（見表1-4（孕5母豬感染藍(lán)耳后引起發(fā)燒和炎性風(fēng)暴，IL-1β、TNF-α10-15F2α（PGF2α）分3.2（2（分娩機(jī)制見圖1-7）（τ（IFN-τ）分泌減少82（研究顯示感染母豬發(fā)情周期恢復(fù)提前5-7）。由于早期流產(chǎn)很難觀察，藍(lán)耳引起的早期流產(chǎn)常常會(huì)被統(tǒng)計(jì)到空懷和返情指標(biāo)上（5%）。妊娠后期（85-112天）的母豬流產(chǎn)的主要原因病毒突破胎盤屏障，在胎兒體內(nèi)繁殖引起胎兒死亡?？贵w和病毒等大分子物質(zhì)理論上是不能通過胎盤屏障，PRRSV由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞（由CD163+滋養(yǎng)豬藍(lán)耳病防控與凈化指南表1-4藍(lán)耳感染妊娠早期和妊娠后期母豬導(dǎo)致流產(chǎn)的關(guān)鍵差異特征妊娠早期流產(chǎn)妊娠后期流產(chǎn)主要靶點(diǎn)母體黃體/子宮內(nèi)膜胎盤/胎兒器官核心機(jī)制炎性因子風(fēng)暴+黃體溶解胎兒缺氧+免疫攻擊病毒載量分布母體血液/子宮（103-10?）胎盤/胎兒組織（10?-10?）免疫應(yīng)答特征Th1型細(xì)胞因子主導(dǎo)Th17/Treg失衡激素變化孕酮↓（＜2ng/mL）皮質(zhì)醇↑（＞150ng/mL）病理標(biāo)志胚胎吸收（＜5mm）臍動(dòng)脈炎（閉塞率＞70%）??????????106.2copies/g）攜帶穿過胎盤屏障，進(jìn)入胎兒體內(nèi)導(dǎo)致胎兒感染，??????????對(duì)流產(chǎn)胎兒進(jìn)行病理組織學(xué)檢查發(fā)（150介導(dǎo)的宮縮（3-4次/）可能導(dǎo)致流產(chǎn)。當(dāng)死亡胎兒數(shù)≥4而<463.4%2135繁殖障礙：PRRSV可感染公豬生殖系統(tǒng)，

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副?匝 32.5%（正65%）。公豬表現(xiàn)繁殖性能降低，并通過精液將PRRSV傳染給母豬，精液排毒持續(xù)28-35（平均載103.8copies/mL），引起母豬的繁殖障礙。公豬在免疫活疫苗后的一個(gè)月內(nèi)，往往可檢測(cè)到精液藍(lán)耳核酸呈陽性（陽性率可達(dá)47.3%），說明公豬精液是傳播藍(lán)耳病的重要途徑。藍(lán)耳的免疫抑制

????????????????????圖1-7母豬分娩過程中的信號(hào)傳導(dǎo)巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞可以分泌炎性因子和具有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子并將抗原呈遞給T細(xì)胞，這被認(rèn)定為誘導(dǎo)有效的適應(yīng)性免疫應(yīng)答必不可少的部分。PRRSV可通過改變巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞的細(xì)胞MHC-IPRRSVMHC-I抗原呈遞效率降低5.3倍；②樹突狀細(xì)胞（DCs）的CD80/86共刺激分子表達(dá)減少73%，導(dǎo)致初始T細(xì)胞活化率下降至12.4%（對(duì)照85.7%）；③調(diào)控性細(xì)胞因子IL-10mRNA水平升高15倍，同時(shí)IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)量延遲出現(xiàn)（感染后8周內(nèi)檢測(cè)限＜50SFC/106PBMC）。PRRSV體內(nèi)傳播途徑也通過淋巴器官傳播。由于其主要感染淋巴器官，其對(duì)免疫系統(tǒng)的影響依次是：（1）肺泡巨噬細(xì)胞功能耗竭：病毒在PAMs中復(fù)制效率達(dá)106.2TCID50/g組織，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率升至67%（對(duì)照＜5%）。感染后48小時(shí)吞噬指數(shù)下降至正常值的32%（p=0.002），同時(shí)活性氧（ROS）生成能力降低83%（2）T細(xì)胞免疫失調(diào)：PRRSV感染后IL-10基因表達(dá)上調(diào)，抑制宿主免疫系統(tǒng)。引起外周淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞亞群發(fā)生異常改變，外周血CD4+細(xì)胞比例從35.2%降至21.7%（Δ=-38.4%），CD8+細(xì)胞恢復(fù)延遲（需28天）。B細(xì)胞生發(fā)中心形成受阻，高親和力抗體生成率降低6.8倍即體液免疫能力受到抑制?？刹《咎禺愋訡TL應(yīng)答延遲至感染后42天，中和抗體產(chǎn)生滯后（平均21.5天），且抗體親和力指數(shù)（AI）僅為其他病毒感染的1/4。此外豬感染PRRSV后，血液白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)顯著下降，CD4+、CD2+和CD8+等T細(xì)胞亞群也短暫下降，而CD8+細(xì)胞的增殖對(duì)于清除病毒感染的靶細(xì)胞有重要作用，因此也降低了細(xì)胞免疫功能。（3）干擾素信號(hào)抑制：PRRSV通過抑制I型干擾素的產(chǎn)生進(jìn)而達(dá)到逃避免疫監(jiān)視的目的。在病毒入侵宿主細(xì)胞時(shí)NSP1、NSP2、NSP4和NSP11可抑制IFN-1β的產(chǎn)生，其中NSP1抑制效果最明顯，其次為NSP2、NSP11和NSP4。試驗(yàn)證明NSPβ可抑制IRF3和NF-kb激活途徑介導(dǎo)的先天性免疫，有利于病毒的增殖。先天性免疫中I型IFN的信號(hào)通路是宿主細(xì)胞對(duì)抗病毒感染的第一防線，PRRSV感染后宿主先天性免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答不足，導(dǎo)致PRRSV在宿主肺部巨噬細(xì)胞上持續(xù)存在和復(fù)制。PRRSV還可以逃避細(xì)胞介導(dǎo)的免

豬藍(lán)耳病防控與凈化指南疫反應(yīng)。細(xì)胞免疫反應(yīng)的一個(gè)重要標(biāo)志是外周血中的γ-IFN分泌細(xì)胞的數(shù)量。然而PRRSV感染后的8-10周檢測(cè)不到γ-IFN分泌細(xì)胞，48周以后γ-IFN分泌細(xì)胞的數(shù)量才會(huì)增加，到690天維持穩(wěn)定。對(duì)中樞免疫系統(tǒng)的損傷。藍(lán)耳病對(duì)仔豬的影響是更為嚴(yán)重，藍(lán)耳病如在妊娠期或哺乳期感染仔豬，對(duì)中樞免疫器官骨髓和胸腺造成的影響可能是終身的，也降低了這些豬的種用價(jià)值。妊娠期感染可導(dǎo)致仔豬免疫發(fā)育障礙：①骨髓造血祖細(xì)胞（HPCs）數(shù)量減少63%（p<0.001），/（0.78vs正常1.32）；②胸腺皮質(zhì)厚度減少58%（通過CDR3。試驗(yàn)證明經(jīng)胎盤感染藍(lán)耳病的仔豬出生后7-14天，骨髓出現(xiàn)輕微到嚴(yán)重的發(fā)育不全，巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞增多，造成貧血；PRRSV感染骨髓及機(jī)體的單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)后，改變了骨髓的功能，并影響了先天性免疫反應(yīng)；由于產(chǎn)生體液免疫的B細(xì)胞來源于骨髓，PRRSV感染引起骨髓的損傷會(huì)導(dǎo)致前體淋巴細(xì)胞的補(bǔ)給不足，影響了細(xì)胞及體液免疫反應(yīng)。如仔豬在哺乳期感染高致病性藍(lán)耳病病毒，可胸腺內(nèi)成熟的T淋巴細(xì)胞是外周T的單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，該系統(tǒng)是機(jī)體免疫反應(yīng)的第一道防線，在對(duì)外來抗原的識(shí)別、加工并遞呈給T/B淋巴細(xì)胞及產(chǎn)生先天性細(xì)胞免疫因子發(fā)揮重要的作用，PRRSVPRRSV感染誘導(dǎo)了占有胸腺細(xì)胞總數(shù)約90%的CD4+CD8+胸腺細(xì)胞發(fā)生了大量凋亡，使胸腺T1-8)內(nèi)成熟的T淋巴細(xì)胞是外周T淋巴細(xì)胞的重要來源，胸腺內(nèi)T淋巴細(xì)胞的減少可導(dǎo)致外周血TT豬藍(lán)耳病防控與凈化指南抗原的識(shí)別及細(xì)胞免疫相關(guān)細(xì)胞因子分泌的異常，改變機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)；胸腺內(nèi)T淋巴細(xì)胞的減少可引起外周血中與中和抗體的產(chǎn)生相關(guān)的輔助性T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的改變，導(dǎo)致淋巴結(jié)生發(fā)中心中可產(chǎn)生高親和力中和抗體的B細(xì)胞選擇失敗，推遲了PRRSV感染豬中和抗體的產(chǎn)生；PRRSV感染誘導(dǎo)胸腺細(xì)胞的凋亡引起T細(xì)胞庫的缺陷還可影響其對(duì)PRRSV及其他抗原的有效識(shí)別：PRRSV特異性T淋巴細(xì)胞的缺失或產(chǎn)生將PRRSV識(shí)別為自身抗原的T細(xì)胞引起免疫耐受?？傊{(lán)耳病作為“豬的艾滋病”，其不僅能感染成熟的免疫細(xì)胞，也能對(duì)中樞免疫器官造成不可逆的PRRS2PRRS圖1-8藍(lán)耳病引起的胸腺萎縮抗體依賴性增強(qiáng)（ADE）抗體依賴增強(qiáng)作用(antibodydependentenhancement,ADEFcγ（FcγR/）（CR3）介導(dǎo)病毒1-9)，從而增強(qiáng)了病毒的感染能力。在PRRSV感染中，ADE機(jī)制存在以下證據(jù)鏈：①體外實(shí)驗(yàn)：亞中和濃度（1:8-1:32）GP5單抗可使病毒在中的感染效率提升3.2（p<0.01），該效應(yīng)可被Fc段阻斷劑抑制83%；②臨床觀察：滅活疫苗免疫組攻毒后病毒血癥峰值達(dá)106.3copies/mL（對(duì)照組105.1），肺部病變?cè)u(píng)分增加2.4分（0-5分制）；③分子機(jī)制：N蛋白抗體通過FcγRⅢ介導(dǎo)病毒-抗體復(fù)合體內(nèi)化，促進(jìn)病毒RNA釋放效率提升57%PRRSVADE14（1:16）中和

N（7ELISAS/P2.0）。在藍(lán)耳病毒感染后首先產(chǎn)生的抗體為NN抗體檢測(cè)為主，GP5抗體檢測(cè)較少，N抗體是非中和性的抗體，既使GP5抗體也未必與中和抗體成正相即使血清中含有較高滴度的PRRSV中和抗體，也不能清體內(nèi)淋巴系統(tǒng)中的病毒，這也是藍(lán)耳病毒病毒血癥期較長(zhǎng)的一個(gè)原因。此外豬在感染PRRSV2小時(shí)后，的吞噬作用將增強(qiáng)，但是這種作7非公開的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)證明，使用SPF豬免疫藍(lán)耳滅活疫苗，并不能檢測(cè)到中和抗體的產(chǎn)生。這些免疫的豬只在攻毒后，其臨床癥狀比未免疫的對(duì)照組表現(xiàn)更為嚴(yán)重。這表明至少在藍(lán)耳感染早期，非中和抗體的作用是有害的。值得注意的是，通過序貫豬藍(lán)耳病防控與凈化指南免疫策略可降低ADE風(fēng)險(xiǎn)，如活疫苗（MLV）基礎(chǔ)免疫后，滅活疫苗加強(qiáng)組的中和抗體GMT提升4.6倍（1:64vs1:14），病毒血癥持續(xù)時(shí)間縮短至9.3天（對(duì)照組16.5天）。實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，縮短病毒血癥期對(duì)于妊娠母豬防控非常關(guān)鍵，病毒血癥期越短，越不容易形成病毒的胎盤垂直傳播，而乳豬在胎盤內(nèi)的感染將顯著提高仔豬的飼養(yǎng)難度。Fc片段與Fc受體作用 2.C3片段與C3受體作用 3.Clq片段與Clq受體作用ADEFcFc補(bǔ)體通過經(jīng)典途徑激活后，C3ADE；ClqC1q圖1-9ADE作用的機(jī)理炎性反應(yīng)的累加影響L-1β、IL-6、TNF-αIFNsRNANLRP3炎癥是機(jī)體的一種抗病反應(yīng)，是對(duì)機(jī)體有利的，例如炎性充血，能使表面組織得到較多的氧、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和守衛(wèi)物質(zhì)；表面組織代謝和抗擊力增加；滲出液能稀釋毒素，其中所含的抗體能清除帶病菌并中和毒素；滲出物中的中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞能吞噬帶病菌，引起的發(fā)熱反應(yīng)也是機(jī)體抑制病毒復(fù)制的一種途徑。但過強(qiáng)的炎性反應(yīng)對(duì)機(jī)體是一種損傷，如藍(lán)耳病能引起動(dòng)脈炎，造成毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，壞死脫落，引起氣體交換障礙，使機(jī)體還原血紅蛋白增多，引起繼發(fā)性的血液循環(huán)障礙，從而導(dǎo)致出身體發(fā)紺等癥狀。藍(lán)耳病是一種肺臟的門戶病，其感染后會(huì)導(dǎo)致肺臟纖毛的損傷，從而更加有利于副豬和鏈球菌在肺部的定植。細(xì)菌在死亡時(shí)，會(huì)釋放出內(nèi)毒素等物質(zhì)，這種物質(zhì)會(huì)進(jìn)一步刺激機(jī)體加重炎性反應(yīng)，從而造成更嚴(yán)重的發(fā)燒和免疫系統(tǒng)損傷等問題。臨床上我們會(huì)發(fā)現(xiàn)，如果在細(xì)菌病嚴(yán)重時(shí)投入直接針對(duì)細(xì)菌的抗生素可能會(huì)出現(xiàn)高熱和病癥加重的情況。提示我們?cè)谟兴{(lán)耳病感染的前提下，控制細(xì)菌病問題，需要使用能降低炎性反應(yīng)的中藥、卡巴匹林鈣和氟尼辛葡甲胺等解熱鎮(zhèn)靜類藥品或大環(huán)內(nèi)脂類抗生素藥物。圖1-10血管內(nèi)皮損傷亞顯微觀察豬藍(lán)耳病防控與凈化指南圖片來自于蔡雪輝研究員報(bào)告圖1-11藍(lán)耳病毒繼發(fā)感染引起的炎性反應(yīng)（引自哈獸研蔡雪輝研究員報(bào)告）藍(lán)耳病是一種肺臟的門戶病，其感染后會(huì)導(dǎo)致肺臟纖毛的損傷（氣管環(huán)實(shí)驗(yàn)顯示纖毛擺動(dòng)頻率下降1218（（OmpP2）3.810?.2CFU/g）。當(dāng)細(xì)菌在死亡時(shí)，會(huì)釋放出內(nèi)毒素等物質(zhì)，這種物質(zhì)會(huì)進(jìn)一步刺激機(jī)體加重炎性反應(yīng)（主要與促炎性因子白介素等有關(guān)），從而造成更嚴(yán)重的發(fā)燒和免疫系統(tǒng)損傷等問題（1-10）。臨床上我們會(huì)發(fā)現(xiàn)，如果在細(xì)菌病嚴(yán)重時(shí)投入直接針對(duì)細(xì)菌的抗生素可能會(huì)出現(xiàn)高熱和病癥加重的情況。提示我們?cè)谟兴{(lán)耳病感染的前提下，控制細(xì)菌病問題，需要使用能降低炎性反應(yīng)的中藥、卡巴匹林鈣和氟尼辛葡甲胺等解熱鎮(zhèn)靜類藥品或大環(huán)內(nèi)脂類如泰萬菌素抗生素藥物。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，卡巴匹林鈣（50mg/kg）可使PGE272%18（對(duì)36），泰萬菌素（8mg/kg）NF-κBIL-1β65%。藍(lán)耳病毒的體內(nèi)自凈動(dòng)物被病毒感染后，機(jī)體通?？稍趲字軆?nèi)清除病毒。豬感染流感病毒后10-14天即可建立起對(duì)流感病毒的免疫力，而對(duì)口蹄疫病毒具備免疫力的時(shí)期為14-21天。早期的研究表明，與其他的豬源病毒性疾病相比PRRSV28-42PRRSV感染的豬與感染后病毒血癥已經(jīng)消失的豬同居試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，空白豬對(duì)照檢出了PRRSV感染，由此可見PRRSV感染后的排毒期超PRRSV186PRRSVPRRSV251PRRSV（。病毒病毒血癥期（天）病毒病毒血癥期（天）自凈期（天）免疫保護(hù)建立時(shí)間（天）中和抗體閾值PRRSV28-42112±1460-90≥1:32豬流感病毒7-1014-2110-14≥1:16口蹄疫病毒5-721-2814-21≥1:64非洲豬瘟病毒終生攜帶-無有效免疫-豬藍(lán)耳病防控與凈化指南PRRSV感染至少可分為三個(gè)不同的階段：急性感染期、持續(xù)性感染期和恢復(fù)期三個(gè)階段在免疫學(xué)、病毒學(xué)和臨床表現(xiàn)上都是不同的（見表1-5）。表1-6PRRSV感染期病毒載量與免疫學(xué)指標(biāo)關(guān)系指標(biāo)急性期（0-14d）持續(xù)期（14-60d）恢復(fù)期（60-120d）檢測(cè)方法病毒血癥載量104.2-106.1＜102未檢出qRT-PCR（TCID50）103.5-105.7102.3-103.8＜101.5病毒分離（copies/g）105.9-106.8103.2-104.1101.7-102.3ddPCR中和抗體效價(jià)（VN）＜1:41:8-1:161:32-1:128病毒中和試驗(yàn)IFN-γ（SFC）＜50150-300500-800ELISpot（0-14PRRSV6-126-12（（血72。第二階段是持續(xù)性感染期（14-60），PRRSV的復(fù)制會(huì)減弱，病毒復(fù)制主要發(fā)生于包括扁桃體和淋巴結(jié)在內(nèi)的淋巴器官中血液病毒載量降至檢測(cè)限以下（102copies/mL），但扁桃體（103.7copies/g）和腸系膜淋巴結(jié)（104.1copies/g）仍維持活躍復(fù)制。同時(shí)病毒會(huì)在各淋巴結(jié)中持續(xù)復(fù)制，使病毒粒子28-35（42（60-12070.8（病毒完全清除）平均為112±14天。中和抗體效價(jià)≥1:32時(shí)，病毒清除速率提升2.3倍直至病毒在宿主體內(nèi)被消滅。需特別指出的是感染不同毒力的毒株在病毒血癥期、病毒載量、中和抗體等數(shù)據(jù)上也是有很大差異的，與毒株毒力有關(guān)，但又不是絕對(duì)的，表1-7中的數(shù)據(jù)僅供參考。表1-7感染不同毒力毒株后病毒自凈期參考指標(biāo)低致病株（LPC）高致病株（HP）NADC34-like重組株病毒血癥持續(xù)時(shí)間21.3±2.5天35.7±3.1天42.8±4.2天淋巴結(jié)載量峰值104.2copies/g106.5copies/g105.8copies/g中和抗體峰值效價(jià)1:16±121:128±81:28±6繼發(fā)感染率53.2±6.7%78.4±5.9%67.3±7.1%自凈期（95%CI）98（85-112）天127（115-139）天153（138-168）天二、藍(lán)耳病的流行病學(xué)藍(lán)耳病感染的臨床規(guī)律PRRSV8.7±2.1%，20.3±5.4%（n=1,234）；26.8±4.7%PRRSV（JXA1），母豬32.5±6.8%，51.7±9.2%PRRSV17.4±3.1%。豬藍(lán)耳病防控與凈化指南藍(lán)耳病發(fā)病后常見的臨床癥狀可見沉郁、厭食消瘦、四肢發(fā)紺、體溫升高甚至死亡。病理學(xué)和組織病理學(xué)主要表現(xiàn)為肺臟實(shí)變、間質(zhì)性肺炎和淋巴結(jié)的腫大，下頜淋巴結(jié)、腸淋巴結(jié)彌散出血及水腫；肺組織廣泛性出血、肺泡隔增寬、支氣管壞死、淋巴細(xì)胞減少、髓質(zhì)出血等(見圖2-1)。圖2-1藍(lán)耳病毒感染后的臨床表現(xiàn)PRRSV2~7種母豬的繁殖障礙，其中又以妊娠后期母豬為主和斷奶前后的仔豬所表現(xiàn)出的呼吸系統(tǒng)疾病。豬繁殖與呼吸障礙綜合征最常見的臨床表現(xiàn)形式主要有急性、慢性、亞臨床癥狀三種。不同豬群的臨床表現(xiàn)有一定差別。種豬群中若是種公豬被PRRSV難、皮膚變色，還會(huì)表現(xiàn)出性欲的缺乏，精液品質(zhì)降低，畸形精子增多，產(chǎn)量亦有所下降。而種母豬被PRRSV感染，基本上大體癥狀同公豬相似，但還具體表現(xiàn)為整個(gè)發(fā)情周期延長(zhǎng)或假發(fā)情，屢配不孕，懷孕后期(105～107d)則出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、弱仔，分娩率下降，產(chǎn)后無乳，胎衣停滯，嚴(yán)重者響仔豬的感染發(fā)病時(shí)間，總結(jié)如下（2-2，2-1）。陽性懷孕母豬的感染規(guī)律6103~7天為發(fā)病期，期間會(huì)出現(xiàn)精神沉郁，采食量下降，發(fā)燒流產(chǎn)等現(xiàn)象。母豬感染后7天開始產(chǎn)生保護(hù)性抗體，此時(shí)逐漸恢復(fù)健康，采食量恢復(fù)。??????4J??????4J?????4J????0J 1J 2J 3J 4J 5J 6J 7J 8J 9J

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...?????ф??????12J???6N??????????28J??圖2-3仔豬藍(lán)耳病感染規(guī)律不同孕齡段感染藍(lán)耳病規(guī)律（配種-孕1.5）。在分娩時(shí)病毒血癥期早（IgG1:128±32，常乳IgA1:64±162150母豬孕中后期（77d~90d）感染藍(lán)耳病毒，母豬會(huì)出現(xiàn)發(fā)燒流產(chǎn)的癥狀，此時(shí)，胎兒與母體形成完整的連接，胎兒已經(jīng)表達(dá)了較高水平的藍(lán)耳病毒受體，若此時(shí)母豬感染藍(lán)耳病毒或陽性帶毒母豬35母豬孕后期（孕90d~生產(chǎn)）至生產(chǎn)后感染藍(lán)耳病毒，此時(shí)母豬會(huì)發(fā)病排毒，體內(nèi)還未產(chǎn)生抗體，對(duì)于生產(chǎn)成績(jī)的影響很大。表2-1不同孕齡段感染藍(lán)耳病規(guī)律母豬感染孕齡母豬感染癥狀母豬分娩時(shí)乳汁抗體水平分娩仔豬帶毒情況產(chǎn)房發(fā)病情況保育發(fā)病日齡孕1d-孕35d發(fā)燒抗體較高不帶毒不發(fā)病約50d孕36d-孕77d發(fā)燒不食抗體高不帶毒不發(fā)病約45d孕78d-孕90d發(fā)燒流產(chǎn)抗體高帶毒量少有發(fā)燒癥狀約35d孕91d-生產(chǎn)發(fā)燒流產(chǎn)抗體少帶毒量高發(fā)燒嚴(yán)重?cái)嗄毯螽a(chǎn)后發(fā)燒、乳汁減少抗體無帶毒量高發(fā)燒嚴(yán)重?cái)嗄毯筘i藍(lán)耳病防控與凈化指南歐洲型藍(lán)耳的分型方法PRRSV(I(II型)，亦稱PRRSV-1PRRSV-2。雖然I型和Ⅱ型PRRSV幾乎在不同的大陸同時(shí)出現(xiàn)，但是它們的核苷酸同源性和氨基酸同源性只有55~7050~80%應(yīng)用分子鐘模型，基于極大似然法原理對(duì)病毒序列進(jìn)行演化分析，I型和Ⅱ型PRRSV的出現(xiàn)時(shí)間大約為1986±1.8年和1973±1.3年。另一項(xiàng)研究根據(jù)ORF3基因序列分析I型和Ⅱ型PRRSV出現(xiàn)的時(shí)間為1946~1967和1977~1981,與遺傳演化估計(jì)的出現(xiàn)時(shí)間相比，病毒的流行病學(xué)記錄時(shí)間相對(duì)較近。通過PRRSV的抗體檢測(cè)顯示，I型和Ⅱ型PRRSV出現(xiàn)在歐洲的八十年代中期和北美的1979年。歐洲型藍(lán)耳病毒分為三個(gè)亞型，即subtypeI、subtypesubtypeIII(2-2)。subtypeI是主要的流行株，在這個(gè)亞型中又可分為subtypeI(Global;CladeA-Lsubtypel(Russia)兩個(gè)代表群。I的最早分離株Lelystadvirus分離自荷蘭，與比利時(shí)、法國(guó)、德國(guó)、英國(guó)、荷蘭和西班牙的分離Lelystad-like(subtypeICladeA)病毒。然而大量的流行病學(xué)調(diào)查分病毒不能代表IPRRSV1PRRSVClade表2-2歐洲型藍(lán)耳病毒的地理分布及遺傳特征亞型地理分布代表性毒株遺傳特征SubtypeI西歐（荷蘭、德國(guó)等）LelystadLVORF5同源性＞98%（CladeA-L）SubtypeII東歐（俄羅斯、白俄羅斯）Rosya-2007Nsp2375-424aa缺失SubtypeIII巴爾干半島BOR-59ORF3重組熱點(diǎn)（RDP4P=3.2×10-5）歐洲型藍(lán)耳的流行現(xiàn)狀在歐洲西部，subtypeI亞型毒株占主導(dǎo)地位，其他歐洲型PRRSV亞型尚未檢測(cè)到；在東部，歐洲型PRRSV中的1亞型毒株是罕見的，2亞型和3亞型病毒較為常見。結(jié)合1947~1968年歐洲型PRRSV流行情況推測(cè)，歐洲型PRRSV在歐洲的流行可能受限于運(yùn)輸?shù)纫蛩囟纬闪爽F(xiàn)在的地理格局。在歐洲型PRRSV中，只有1亞型已經(jīng)擴(kuò)散到歐洲以外的大陸，而其余的亞型僅限于東歐國(guó)家和俄羅斯。1亞型的跨越大陸傳播可能由于西歐養(yǎng)豬公司種源貿(mào)易，而這些公司分布在1亞型毒株最流行的地區(qū)，也是世界上其他養(yǎng)豬地區(qū)的種源。野豬可能在PRRSV傳播中起作用，德國(guó)不同地區(qū)約16%的野豬檢測(cè)為PRRSV陽性，意大利坎帕尼亞地區(qū)38%的野豬的血清是PRRSV陽性。2008~2012年，在立陶宛收集的1511份野豬血清中發(fā)現(xiàn)6%的血清為PRRSV陽性。立陶宛的野豬感染的PRRSV與白俄羅斯的家豬分離株具有較近的親緣關(guān)系。歐洲國(guó)家以外，中國(guó)、韓國(guó)、日本等亞洲國(guó)家也相繼報(bào)道了歐洲型PRRSV。1999年，我國(guó)發(fā)現(xiàn)了歐洲型PRRSV毒株B13，ORF5序列遺傳演化分析表明B13毒株與LV高度一致，僅含有2個(gè)核苷酸的差異。中國(guó)歐洲型PRRSVNingbo-42，Ningbo-45，Ningbo-57，N-34和SS-6的ORF7序列也與疫苗株密切相關(guān)（2-3）。F0602和在Nsp2和ORF5上與歐洲型PRRSVSHE和歐洲型弱毒疫苗株AmervacPRRSV具有較高的核苷酸序列同源性。自2011年來，中國(guó)廣州等相繼有6個(gè)省有關(guān)于歐洲型PRRSV的報(bào)道，至2021年我國(guó)共報(bào)道了72株歐洲型藍(lán)耳病病毒(見圖2-4)，均屬于西歐I亞型。

豬藍(lán)耳病防控與凈化指南圖2-4我國(guó)近年來檢測(cè)到的歐洲型藍(lán)耳病毒數(shù)量表2-3中國(guó)歐洲型PRRSV主要毒株特征毒株分離年份基因特征致病性指標(biāo)傳播途徑B131999ORF599.7%LV同源流產(chǎn)率9.2%引種傳播Ningbo-572012Nsp4D168G突變病毒血癥期18.3天精液傳播HLJB12015Nsp2481-489aa缺失肺載量102.3TCID50/g氣溶膠傳播GZ11-G12016ORF3重組（RDPP=0.003）仔豬死亡率21.7%跨胎盤傳播國(guó)內(nèi)出現(xiàn)的歐洲型PRRSV毒株GZ11-G1可引起仔豬發(fā)熱、病毒血癥等癥狀，在一定程度上顯示歐洲型PRRSV對(duì)仔豬的致病性。I型PRRSV分離株HLJB1可誘導(dǎo)典型的PRRSV病變，由于與其他經(jīng)典I型分離株相比，它引起的病毒血癥較低，因此HLJB1的毒力低于其他I型毒株。盡管已經(jīng)報(bào)道的國(guó)內(nèi)歐洲型PRRSV有較低的致病力，但是感染PRRSV會(huì)增加動(dòng)物機(jī)體繼發(fā)感染的機(jī)會(huì)。同時(shí)歐洲型PRRSV毒株逐漸增多，說明加大對(duì)歐洲型PRRSV的流行病學(xué)調(diào)查具有重要的意義。通過哈獸研對(duì)臨床樣本的調(diào)研，我國(guó)豬場(chǎng)感染歐洲型藍(lán)耳病毒的比例為30.77%。圖2-5我國(guó)歐洲型藍(lán)耳病流行趨勢(shì)簡(jiǎn)史豬藍(lán)耳病防控與凈化指南美洲型藍(lán)耳的分型方法全球范圍內(nèi)，北美洲的藍(lán)耳病毒PRRS-II比歐洲型藍(lán)耳病毒更加活躍，因此其分類更加復(fù)雜，目前有三種分類體系：(1)Nsp2氨基酸缺失或插入的分子特征作為分子標(biāo)記；(2)ORF52-4)。表2-4不同毒株對(duì)應(yīng)的不同分型方法PRRSV類型進(jìn)化樹分析NSP2缺失模式ORF5RELP模式美國(guó)（ORF5RELP）中國(guó)（ORF5RELP）NADC30lineage1.8111+1+19共131氨基酸不連續(xù)缺失1-8-4或1-4-41-8-4或1-4-3NADC34lineage1.5100個(gè)氨基酸缺失1-7-4或1-4-41-7-4HP-PRRSVlineage8.71+29個(gè)氨基酸缺失無1-4-3CH-1alineage8.7/無/VR2332lineage5.1///QYYZlineage3.536個(gè)氨基酸插入無/Nsp2氨基酸缺失或插入的特征作為分子標(biāo)記Nsp2是主要的基因高變區(qū)域，歐洲型和美洲型之間Nsp2基因的同源性僅有40%左右。此外在高致病藍(lán)耳、NADC30、NADC34、QYYZ的代表株相較于VR2332和CH-1a等，NSP2蛋白上都存在著明顯的分子標(biāo)記（見表2-5），區(qū)別如下：表2-5以NSP2為特征的毒株分型特點(diǎn)毒株Nsp2分子特征CH-1a其他毒株比對(duì)的參照毒株VR2332其他毒株比對(duì)的參照毒株HP-PRRSNsp2蛋白上(1+29）個(gè)氨基酸缺失NADC30Nsp2蛋白131個(gè)氨基酸不連續(xù)缺失Qyyz/GM2Nsp2蛋白上36個(gè)氨基酸插入NADC34Nsp2蛋白上100個(gè)氨基酸缺失如圖2-6所示，在氨基酸序列上HP-PRRS代表株JXA1和HuN4株比VR2332株在482位缺失一個(gè)氨基酸在556-585位缺失了29個(gè)氨基酸，而NADC30在322-432位、483位和504-522位分別缺失(111+1+19)共計(jì)131個(gè)氨基酸。豬藍(lán)耳病防控與凈化指南圖2-6不同類型毒株的氨基酸缺失位置如圖2-7所示，NADC30的共連續(xù)缺失了100個(gè)氨基酸，由圖可見，其缺失位點(diǎn)是位于NADC30的前111個(gè)氨基酸缺失內(nèi)部的。圖2-7NADC34的氨基酸缺失位置雖然有明顯的分子特征，但針對(duì)NSP2的分類并不一定能完全概括。如我們把與NSP2上具有131個(gè)不連續(xù)氨基酸缺失的毒株稱為類NADC30毒株。但對(duì)15株類NADC30全基因組進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)，其基因組的最大差異超過了10%。因此按照NSP2分類方法雖然不同豬場(chǎng)的毒株都稱作是類NADC30,但不同毒株間的差異仍然是很大的（類NADC30全基因組同源率為88%-99%）。ORF5限制性片段多態(tài)性(RFLP)是用于Ⅱ型PRRSV分型的方法之一，基于ORF5基因在3個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶(Mlul、Hincll和Sacll)中的酶切模式，根據(jù)酶切片段的大小將其命名。2001年美國(guó)發(fā)現(xiàn)的MN184毒株，其Nsp2基因的典型特征就是存在111+1+19共131個(gè)氨基酸不連續(xù)缺失。而2021年來廣泛報(bào)道的1-8-4或1-4-4毒株其Nsp2基因的典型特征就是存在100個(gè)氨基酸的連續(xù)缺失。由于ORF基因變異比較快，其限制性酶切位點(diǎn)會(huì)因?yàn)閱蝹€(gè)核苷酸的突變發(fā)生改變，且酶切位點(diǎn)的變化與毒株的抗原性變化沒有直接關(guān)聯(lián)，限制性片段多態(tài)性(RFLP)這種分型方法也并不能將豬場(chǎng)的毒株進(jìn)行有效的追溯和分析。（3）基于對(duì)病毒基因組的系統(tǒng)發(fā)育樹的分析GP5DORF58500ORF5PRRSV9個(gè)譜系(Lineage),包含5Lineage(n>1000)4Lineage,每一個(gè)亞譜系(Sublineage)10%由于譜系分析法是基于基因的同源率的數(shù)據(jù)，因此其出現(xiàn)頻次更多呈現(xiàn)地域性。7個(gè)Lineage豬藍(lán)耳病防控與凈化指南PRRSV2Lineage3PRRSV病毒最早報(bào)道于我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)，直到2010年，我國(guó)大陸才首次分離了該類PRRSV。Lineage3PRRSV的分子標(biāo)記同樣主要存在于Nsp236aaLineage3PRRSV的溯源分析將我國(guó)所有該類病毒5sublineage,其中sublineage3.1-3.3，sublineage3.4分布在我國(guó)香港地區(qū)，而我國(guó)大陸目前的主要流行毒株是sublineage3.5。我國(guó)目前分離到的代表毒株QYYZ、GM2等病毒的主要骨架成分均屬于sublineage3.5。而以VR2332Lineage5在我國(guó)大多以類疫苗毒株存在。以CH-1a和HP-PRRSV為代表的Lineage8美洲型起源及流行現(xiàn)狀美洲型PRRSV的出現(xiàn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)早于八十年代晚期，其代表毒株VR2332也是在這次大流行中分離到的。一直到九十年代早期，所有的分離株均與VR2332PRRSVPRRSV不再在北美流行，相反這個(gè)地區(qū)流行大量的疫苗衍生毒株。1996年夏天，美國(guó)多個(gè)PRRSPRRSV類型為譜系Lineage89(IngelvacPRRS和PrimePacPRRS;Lineage57)，但由于遺傳變異較大，當(dāng)前使用的疫苗無法提供有效的保護(hù)。2001ORF51-8-4RFLPII1+1+19aaMN184ORF51-8-4RFLPPRRSV?？紤]到大量的斷奶仔豬從加拿大輸入MN1842006年，中國(guó)出現(xiàn)以高熱、高發(fā)病率、高致死率為特征的疾病，后經(jīng)證實(shí)該病病原為HP-PRRSV。遺傳演化分析證實(shí)，HP-PRRSV可能由中國(guó)的本地毒株演化而來。該類毒株的Nsp2區(qū)存在1+29aa的缺失特征，然而該缺失與PRRSV的致病性沒有關(guān)系。在研究HP-PRRSV致病性增強(qiáng)的過程中發(fā)現(xiàn)，Nsp9和Nsp10基因與HP-PRRSV的致病性增強(qiáng)有關(guān)。2006HP-PRRSVlineage8.7CH-1aNsp230個(gè)aa(1+29)20064CH-1a2-8)圖2-8HP-PRRSV其起源可能是我國(guó)的CH-1a-likePRRSV豬藍(lán)耳病防控與凈化指南2013NADC3O-likePRRSVlineage1。此外，中國(guó)還存在lineage3lineage5.1譜系的毒株。疫苗株RespPRRSMLVVR2332Lineage5.1，中國(guó)流行的lineage5.1的毒株可能由RespPRRSMLV1996~2015PRRSVORF5PRRSV3~4近年來在全球PRRSV分類中，以NADC30NADC34為代表的Lineage1PRRSV占據(jù)了約4900(37Lineage1PRRSV又進(jìn)一步劃分為sublineage1.1-1.9，在這樣的分類體系下，sublineage1.5(NADC30-likePRRSV)sublineage1.8(NADC34-likePRRSV)成為研究的主要對(duì)象。Sublineage1.5(NADC30-likePRRSV)盛行于北美地區(qū)，20122016年該類毒株大量出現(xiàn)在我國(guó)各地，在這期間HENAN-XINX(KF416327到(KF416333)，F(xiàn)J1405(KM453701)等毒株是我國(guó)出現(xiàn)最早的該類毒株，這些毒株在Nsp2區(qū)域均有131aa的不連續(xù)缺失，這也是NADC30-likePRRSV的主要分子特征。隨后出現(xiàn)的JL580毒株表明我國(guó)NADC30-likePRRSVsublineage8.7PRRSVNADC30-likePRRSV點(diǎn)也成為研究的重要問題?？偟膩碚f，整個(gè)Lineage3PRRSV藍(lán)耳病在我國(guó)的流行史藍(lán)耳病在我國(guó)的流行史目前可分為三個(gè)階段，其代表株出現(xiàn)的時(shí)間見圖2-9：圖2-9PRRSV代表株在我國(guó)發(fā)現(xiàn)的時(shí)間軸（1995-2005）1995PRRSV-2毒株CH-1a（Lineage8）BJ-4（LineageNsp21998-2005臨床發(fā)病率為8.3±2.1VR2332（Lineage5）為代表的野毒，我國(guó)檢VR2332高致病性暴發(fā)期（2006-2015）：2006PRRSV(Lineage8)引起的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征，該毒株可感染各個(gè)年齡階段的豬只，發(fā)病率可達(dá)50%-100%,20%-100%,給國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成毀滅性的破壞。HP-PRRSVNsp2基因中存在30個(gè)氨基酸的不連續(xù)缺失。HP-PRRSV代表毒株主要為2006年分離毒株如JXA1、豬藍(lán)耳病防控與凈化指南HuN4,它們分別是減毒疫苗株JXA1-R、TJM-F92和HuN4-F112的親本。隨后HP-PRRSV成為優(yōu)勢(shì)流行毒株，至2015年我國(guó)主要的流行毒株是8.7譜系的高致病性藍(lán)耳毒株(見圖2-10)。圖2-10我國(guó)近年來不同譜系藍(lán)耳病毒的檢出率重組毒株流行期（2016-）隨著我國(guó)養(yǎng)殖規(guī)模的加速，國(guó)外毒株在我國(guó)的傳入也越來越頻繁，也越來越跟國(guó)際同軌。MN184毒株(類NADC30)是2001年從美國(guó)分離的，我國(guó)在2012年首次報(bào)告了該毒株，稱之為NADC30-like毒株，隨后2014年至今，NADC30-like毒株在中國(guó)很多省份的田間檢出率增多，至2020年占比達(dá)54.7%（n=1,214）。進(jìn)化分析表明，NADC30-like毒株可能從北美傳入，通過與國(guó)內(nèi)毒株重組，繼而發(fā)生廣泛的變異。該類毒株復(fù)制保真性差，更容易重組，更易適應(yīng)環(huán)境逃避免疫篩選壓力，這也是傳入后有大量重組毒株出現(xiàn)的原因之一。2017年我國(guó)報(bào)道了了NADC341-4-41-8-4的時(shí)間很接近。通過張洪亮等的最新統(tǒng)計(jì)研究發(fā)現(xiàn)，2021NADC34PRRS2006HP-PRRSVNADC30-likeNADC34-likeHP-PRRSV野毒株之間或與減毒活疫苗之間發(fā)生重組的頻率越來越高。隨著非洲豬瘟爆發(fā)后大規(guī)模種豬的跨區(qū)域流動(dòng)和混群，加速了優(yōu)勢(shì)毒株稱為主流毒株。張洪亮等為研究2014-2019年P(guān)RRSV在我國(guó)的流行變化情況，就2014-2019年全國(guó)17個(gè)省、市和自治區(qū)及某大型養(yǎng)豬集團(tuán)檢出的650份PRRSV陽性病料進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析。結(jié)果顯示，2014-2019年共檢測(cè)到6種基因亞型的PRRSV，分別是I型PRRSV、HP-PRRSV(Lineage8.7)、NADC30-likePRRSV(Lineage1.8)、NADC34-likePRRSV(Lineage1.5)、QYYZ-likePRRSV(Lineage3.5)和RespPRRSMLV-likePRRSV(Lineage5.1)。如按NSP2分子特征區(qū)分，2019年后超過60%的分離株是Lineage1系的NADC30-like或NADC34-like。而VR2332-like占比很低，能檢測(cè)到的大多是疫苗株。藍(lán)耳病毒毒力總體呈弱化趨勢(shì)，這是自然法則，病毒需要與宿主，如致病力過強(qiáng)，反而不利于病毒的生存。高致病性藍(lán)耳病也呈弱化趨勢(shì)，弱化的策略是與弱毒間的重組，弱毒在重組高致病性藍(lán)耳病毒后往往呈現(xiàn)毒力增強(qiáng)的趨勢(shì)(表2-6)。豬藍(lán)耳病防控與凈化指南表2-6弱毒株與高藍(lán)毒株重組出現(xiàn)的毒力增強(qiáng)趨勢(shì)毒株名稱致病力重組毒株豬只死亡參考文獻(xiàn)SC-d中等HP+NADC30（與L1重組）無WangHMetal.,2018HBap4-2018高NADC30（與L1重組）是ChenPetal.,2021SD-YL1712中等JXAI+NADC30（與L1重組）無LiYetal.,2021GDZS2016中等FJFS,HK15（與L3重組）無SunYKetal.,2019FJNP2017高QYYZ,HK15（與L3重組）是SunYKetal.,201910FUJ-2高JXA1+09JS（與L8.7重組）是ChenNetal.,2013SY0909高JXA1+NT0801(與L8.7重組)是ChenNetal.,201314LY01-FJ高JXA1+NADC30（與L1重組）是LiuJKetal.,201715LY01-FJ高JXA1+NADC30（與L1重組）是LiuJKetal.,2017藍(lán)耳病的水平傳播規(guī)律PRRSV傳入豬場(chǎng)的途徑非常明確，即通38（IQR25-511-2個(gè)月內(nèi)豬場(chǎng)爆發(fā)新毒株引起的藍(lán)耳病。PRRSV在豬群內(nèi)，PRRSV通過多種方式交叉感染，主要可以分為通過分泌物排毒進(jìn)行水平傳播和通過生殖道等途徑進(jìn)行垂直傳播。研究表明20%的傳播事件是通過含毒精液傳播，21%的傳播事件通過污染物/糞尿傳播，56%的傳播事件通過帶毒豬傳播；與急性感染的病豬接觸60min后的人員體表可以檢測(cè)到PRRSV。感染PRRSV的豬只在一定時(shí)間后會(huì)通過眼鼻分泌物、糞便、流產(chǎn)胎兒和公豬精液向周圍環(huán)境排毒，即便在耐過后的數(shù)周之間依然會(huì)向周圍排毒(排毒周期見表2-7)。風(fēng)媒在PRRSV傳播的作用是不可忽視的，PRRSV在一定范圍內(nèi)可借助風(fēng)力進(jìn)行傳播，如中高致病株（如MN184）氣溶膠載量達(dá)103.5TCID50/m3，順風(fēng)傳播距離120m時(shí)感染率仍達(dá)23%。豬藍(lán)耳病防控與凈化指南

表2-7不同途徑的排毒時(shí)間來源持續(xù)時(shí)間參考文獻(xiàn)鼻拭子21天Benfieldetal.1994唾液42天Willsetal.1997血液28-63天/尿液28天Rossowetal.1994精液92天Christopher-Henningsetal.1995扁桃體157天Willsetal.1997糞便<35天/乳汁哺乳期/公豬附睪中存在PRRSV可能是經(jīng)感染的生殖細(xì)胞或感染的巨噬細(xì)胞攜帶的。雖然PRRSV是如何到達(dá)公豬精液的尚未知，但多數(shù)證據(jù)表明這很可能是因?yàn)閱魏思?xì)胞或巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的。研究者已證實(shí)即使公豬病毒血癥已消失，且體內(nèi)已存在中和抗體情況下，公豬精液仍可間歇性帶毒，試驗(yàn)感染PRRSV的公豬精液排毒持續(xù)時(shí)間為2~29天。PRRSVPRRSV母體出現(xiàn)病毒血癥和PRRS臨床癥狀；②后備母豬管理不嚴(yán)格，隔離飼養(yǎng)馴化時(shí)間不足，處于病毒血癥PRRSVPRRSPRRSV還可以通過不同的方式進(jìn)行水平和接觸式傳播，不同媒介傳播效率見表2-8：表2-8關(guān)鍵傳播媒介的傳播效率媒介類型病毒存活時(shí)間傳播效率（R0）干預(yù)措施有效性氣溶膠1.5小時(shí)（直徑≤5μm）2.3-3.1空氣過濾（降低89%）針頭污染≤24小時(shí)1.8一豬一針（阻斷率100%）工作服48小時(shí)（棉質(zhì)）0.7分區(qū)管理（降低71%）(AIAO)一旦豬只感染，一般情況下PRRSV在其血液中的含量會(huì)達(dá)到很高的水平。使用受污染的針頭對(duì)豬群進(jìn)行連續(xù)注射會(huì)導(dǎo)致病毒的血源性傳播，在免疫治療時(shí)要做到一豬一針頭；豬藍(lán)耳病防控與凈化指南人員，員工的手、工作服和鞋都可能作為PRRSV的機(jī)動(dòng)傳播載體，做到人員、鞋靴、工具等分區(qū)管理；氣溶膠，PRRSVMN1841182毒株相對(duì)于早期的PRRSV120m,PRRSV3.3km藍(lán)耳病的垂直傳播規(guī)律P714PRRSVPRRSV14dPRRSV等(1996)表明，在母豬妊娠90d時(shí)進(jìn)行接種，高毒力和低毒力的PRRSV可以相同的效率穿過胎盤感染胎兒?！边@表明如果母豬妊娠前中期感染藍(lán)耳病毒時(shí)，較少可能會(huì)引起病毒的垂直傳播（病毒跨胎盤傳播率僅7.3±2.1%，與病毒血癥期有關(guān)，如果反復(fù)交叉感染可能造成垂直傳播），3030-77PRRSV在母豬妊娠后期的危害表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、弱仔豬、早產(chǎn)、延遲分娩。由于妊娠母豬和胎兒血液之間有6層組織相隔，包括母體血管網(wǎng)、母體內(nèi)皮層、子宮內(nèi)膜結(jié)締組織、子宮上皮、6PRRSV(55nm)PRRSVPRRSVPRRSVPRRSV毒力無關(guān)，但與病毒血癥持續(xù)的PRRSV母體感染藍(lán)耳和胎兒感染藍(lán)耳往往處于不同的時(shí)間和空間，接種病毒的后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬主要在懷孕后期發(fā)生垂直傳播/先天感染和繁殖障礙癥狀，這就是很多豬場(chǎng)在發(fā)生流產(chǎn)時(shí)通過檢測(cè)母豬的血清無法檢測(cè)到病原的關(guān)鍵原因。PRRSV可在胎兒淋巴組織中復(fù)制3周，胎兒胸腺、扁桃體、淋巴結(jié)是蓄積PRRSV最多的場(chǎng)所，此外，肺臟、肝臟、脾臟、心臟和腎臟也可分離到PRRSV。因此如通過流產(chǎn)胎兒檢測(cè)到藍(lán)耳病原可確定病因。但并不是所有藍(lán)耳的流產(chǎn)都是因?yàn)椴《镜母腥咎簩?dǎo)致的，研究結(jié)果表明，PRRSV導(dǎo)致母豬繁殖障礙和胚胎死亡有部分原因是因其在著床位點(diǎn)的復(fù)制和對(duì)母體子宮/胎盤的損傷，PRRSV在懷孕后期母豬的子宮內(nèi)膜/藍(lán)耳病豬場(chǎng)內(nèi)的循環(huán)鏈先天感染的仔豬在胚胎發(fā)育過程中已經(jīng)感染PRRSV，不僅在死胎和木乃伊胎內(nèi)臟中可檢測(cè)到豬藍(lán)耳病防控與凈化指南PRRSV，弱仔豬一般出生即有病毒血癥。即使仔豬病毒血癥已經(jīng)消失，病毒復(fù)制水平也很低，但持續(xù)感PRRSV112250PRRSVPRRSV鏈球菌、沙門氏菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌、波氏桿菌和副豬嗜血桿菌等，繼發(fā)細(xì)菌性感染增加了仔豬發(fā)病率和死亡率。?????????????О?????1?2????О????????????????2?3З????О??????????????????????/??????????働?藍(lán)耳病陽性場(chǎng)基礎(chǔ)母豬群往往會(huì)存在周期性波動(dòng)，波動(dòng)主要原因是豬場(chǎng)中存在病毒的循環(huán)鏈，并且母豬群體也存在不同的健康狀態(tài)。一般而言，陽性場(chǎng)中會(huì)存在活躍群、穩(wěn)定群和陰性群三類群體。所謂陰性群是已經(jīng)轉(zhuǎn)陰但還未被感染的群體。三類群體是可以互相轉(zhuǎn)換的，陰性群會(huì)因接觸活躍群的散毒變成活躍群（感染率6.3%/周），活躍群恢復(fù)后會(huì)轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定群（恢復(fù)率4.2%/周），而穩(wěn)定群隨著時(shí)間的的推移也會(huì)變成易感的陰性群（年轉(zhuǎn)化率12.4%）（2-11）。豬場(chǎng)規(guī)模越大，越容易形成三個(gè)群體間的不同步狀態(tài)，當(dāng)陰性群比例過高接觸上活躍群時(shí)，豬場(chǎng)即發(fā)生較大的生產(chǎn)波動(dòng)。胎次母豬或散毒的后備豬接觸時(shí)，往往容易發(fā)生波動(dòng)，因此在豬場(chǎng)中設(shè)置頭胎線單獨(dú)飼養(yǎng)一胎豬，并制定科學(xué)的免疫保健程序可降低波動(dòng)的影響。藍(lán)耳的循環(huán)感染也較容易發(fā)生在一條龍豬場(chǎng)中，育肥群病毒的放大效應(yīng)，也最終會(huì)影響到種豬群，因此多點(diǎn)式分段式飼養(yǎng)是非常重要的切斷感染途徑的手段。規(guī)模化豬場(chǎng)通過封群管理同期感染，可以讓豬群盡快恢復(fù)至穩(wěn)定狀態(tài)，其技術(shù)核心是讓所有的豬同期感染，同期散毒，同期康復(fù)，從而實(shí)現(xiàn)豬場(chǎng)自凈，從而打破豬場(chǎng)中不同狀態(tài)豬群的循環(huán)感染。經(jīng)過實(shí)踐，可在半年內(nèi)讓5000頭規(guī)模的種豬場(chǎng)實(shí)現(xiàn)藍(lán)耳凈化。但要長(zhǎng)期維持豬場(chǎng)陰性還需要生物安全措施和豬場(chǎng)硬件設(shè)備的支持。PRRSVIPRRSV4個(gè)亞型，I亞型又進(jìn)一步分為12clade，它們之間的遺傳距離超過11%。Ⅱ型PRRSV9Lineage,2000，PRRSV10%2008-2010，PRRSV傳距離遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過10%。大家認(rèn)為變異比較快的豬流行性腹瀉病毒(PEDV),雖然其有四個(gè)型，但其毒株之8%S195豬藍(lán)耳病防控與凈化指南就像物種的演化過程，新個(gè)體總會(huì)比上一代有一些差異，這些差異經(jīng)過漫長(zhǎng)的累積，就形成了種屬PRRSV基因組卻具有更高變異率，有報(bào)道稱：PRRSV4.7-9.8×10-2//RNA病毒中速率最高的病毒。藍(lán)耳變異速RNARdRp)3'-5'這些突變體有不同的突變方向，符合生存法則的就存活下來了，并且由于存在競(jìng)爭(zhēng)，優(yōu)勢(shì)的個(gè)體就會(huì)成為流行毒株。導(dǎo)致藍(lán)耳病的變異速度加速的另一個(gè)原因是藍(lán)耳病毒的重組。PRRSV重組傾向于模板轉(zhuǎn)換機(jī)制，即RNARdRp一起轉(zhuǎn)移到受體模版繼續(xù)合成新鏈(見圖2-12)。藍(lán)耳病毒的重組或重排可導(dǎo)致病毒基因組大片段的替換，加速病毒進(jìn)化，可擴(kuò)大宿主范圍，增強(qiáng)對(duì)宿主細(xì)胞的嗜性，如最新逃逸現(xiàn)有疫苗保護(hù)，降低宿主RNAiPRRSV7900-8100nt(Nsp9)12400-13500nt(GP2-GP3)。關(guān)于重組機(jī)制方面的研究，在其他RNA病毒上推進(jìn)較快，重組主要影響RNA(RdRp)圖2-12藍(lán)耳病毒重組的模板轉(zhuǎn)換機(jī)制重組的發(fā)生有幾個(gè)限定條件，即兩種以上的病毒同時(shí)去感染同一個(gè)宿主細(xì)胞，并在該細(xì)胞能啟動(dòng)病毒的復(fù)制。因此重組更容易發(fā)生在毒力較弱的毒株之間，或其中有一個(gè)弱毒先感染，因?yàn)槿绻叨际?0PRRSV中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所的數(shù)據(jù)表明，PRRSV重組的形式：19912013141518；豬藍(lán)耳病防控與凈化指南20142018142014201818PRRSV重組毒株也可以發(fā)生在PRRSV弱毒疫苗株之間，導(dǎo)致更強(qiáng)致病力毒株出現(xiàn)；混群時(shí)也可發(fā)生PRRSV毒株重組；環(huán)境中長(zhǎng)期存在重組弱毒株，有可能發(fā)生潛在的二次重組。因此建議同一豬舍內(nèi)不同時(shí)使用兩種PRRSV弱毒苗，不宜研發(fā)和使用PRRS二價(jià)弱毒疫苗。PRRSV2PRRSV三、藍(lán)耳病的監(jiān)測(cè)與評(píng)估PRRSV10~30；30天后，最早可檢測(cè)到中和抗體；60天左右，血液中和抗體達(dá)到頂峰；100~150天，檢測(cè)扁桃體/淋巴結(jié)NS/P<0.4),血清中和抗體陽性；至150/藍(lán)耳病的病原學(xué)診斷藍(lán)耳病原的診斷常用的是病原分離、核酸診斷和膠體金免疫層析檢測(cè)。膠體金免疫層析法檢測(cè)敏感性較差，只能輔助判斷，并不適用于確診。病原分離需要能進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室條件，且耗時(shí)較長(zhǎng)，RT-PCR光定量PCR檢測(cè)技術(shù)，熒光定量PCR除了通過Ct值能反映感染豬的病毒載量外，還可以去區(qū)分毒株的3-1。表3-1藍(lán)耳病原學(xué)診斷方法的優(yōu)劣勢(shì)分析病原檢測(cè)方法檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)檢測(cè)方法的局限性應(yīng)用價(jià)值常規(guī)RT-PCR靈敏度高，可進(jìn)一步進(jìn)行測(cè)序分析不能進(jìn)行定量分析和區(qū)分基因型日常監(jiān)測(cè)，測(cè)序分析熒光定量PCR靈敏性高，快速，高通量可通過Ct值反饋病毒載量，判定發(fā)病標(biāo)準(zhǔn)不能用于測(cè)序藍(lán)耳病的定量分析，病毒載量評(píng)估；可用于平行數(shù)據(jù)比對(duì)膠體金免疫層析快速，現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)靈敏度低，非特異性差家庭農(nóng)場(chǎng)的快速確診病毒分離可對(duì)毒株進(jìn)行分離、鑒定開展進(jìn)一步研究，如中和試驗(yàn)需要具備細(xì)胞培養(yǎng)條件病毒分離、毒價(jià)測(cè)定、交叉中和試驗(yàn)病理切片確診致病原因周期長(zhǎng)，判讀需要經(jīng)驗(yàn)確診發(fā)病的主要原因由表3-2所示對(duì)于急性感染期的豬只，選用血清、肺臟作為送檢材料較為敏感；持續(xù)感染期的豬只選用扁桃體、支氣管肺泡灌洗液；而哺乳前的弱仔可以作為晚期流產(chǎn)或早產(chǎn)豬病原檢測(cè)的材料。流產(chǎn)的胎兒和流產(chǎn)母豬的血清是分析流產(chǎn)病因的材料。除此之外，通過對(duì)臍帶血和睪丸浸出液的核酸檢測(cè)有利于監(jiān)測(cè)母豬豬場(chǎng)藍(lán)耳病的活躍狀態(tài)。公豬可通過精液傳播病原，也是日常檢測(cè)的重點(diǎn)；但在提取精液中的核酸時(shí)，需要采用一些特殊的試劑去處理。唾液和咽拭子中也可以檢測(cè)到藍(lán)耳病毒，但由于唾液中的豬藍(lán)耳病防控與凈化指南核酸酶對(duì)核酸的降解作用和RNA自身穩(wěn)定性較差，在唾液的保存上需要采取特殊的方法避免核酸降解，如使用核酸保護(hù)液。表3-2用于病原檢測(cè)的病料病料類型優(yōu)勢(shì)局限性應(yīng)用價(jià)值血清藍(lán)耳的病毒血癥時(shí)間長(zhǎng)，方便采集不同階段豬只的樣本血清中的病原載量在持續(xù)感染期和轉(zhuǎn)歸期載量低適用于對(duì)病豬、弱仔的檢測(cè)；評(píng)價(jià)疫苗的病毒血癥期。肺臟病毒載量高，野毒占比高采集不便野毒的分離，測(cè)序分析扁桃體病毒持續(xù)期長(zhǎng)，敏感采集不便持續(xù)感染期的病原分離公豬精液方便采集核酸提取難度大傳播途徑監(jiān)測(cè)，降低母豬配種感染的風(fēng)險(xiǎn)流產(chǎn)胎兒/胎衣采集方便，便于判定流產(chǎn)原因部分流產(chǎn)非病原垂直傳播